培養(yǎng)基灌裝課件

無菌工藝模擬試驗諾華疫苗王董明內(nèi)容培養(yǎng)基灌裝的技術(shù)要求培養(yǎng)基灌裝實施要點結(jié)果解釋和偏差調(diào)查無菌工藝模擬試驗定義無菌工藝模擬試驗Process

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Testing（PST）培養(yǎng)基灌裝Media

Fill采用培養(yǎng)基代替藥品進行無菌灌裝對無菌工藝進行驗證。此模擬工藝稱之為“培養(yǎng)基灌裝”進行培養(yǎng)基灌裝的目的驗證一個無菌工藝對無菌工藝過程無菌保證水平的綜合評估（設(shè)備、人員、操作、滅菌過程、環(huán)境…）對無菌操作人員進行資格確認確認進行重大變更后對無菌工藝的影響作為問題調(diào)查的手段綜合反映生產(chǎn)線整體的無菌保證情況，無法體現(xiàn)具體某批產(chǎn)品或某個產(chǎn)品的無菌性培養(yǎng)基灌裝測試的頻率初始驗證：每班次連續(xù)做3批驗證隨后每半年針對不同班次/工藝進行一次再驗證所有日常操作人員每年都必須參加一次培養(yǎng)基灌裝驗證空氣凈化系統(tǒng)、設(shè)備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應(yīng)當重復(fù)進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗偏差調(diào)查的手段培養(yǎng)基灌裝批量培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應(yīng)當足以保證評價的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應(yīng)當至少等于產(chǎn)品的批量批次量<5000瓶，全批量批次量>5000瓶，通常5000~10000瓶手工灌裝VS隔離器無菌生產(chǎn)工藝跨班次生產(chǎn)，大批量生產(chǎn)灌裝數(shù)量例1：某凍干產(chǎn)品，凍干機容量為30,000瓶，分布在九個層板上，請問：較合理的一次培養(yǎng)基灌裝數(shù)量為多少？如是初始驗證，如何考慮不同層板的分布？例2：某凍干產(chǎn)品為人工灌裝，共有三個操作人員具有無菌灌裝資格，批量為3000瓶，請問：此種情況較為合理的一次培養(yǎng)基灌裝數(shù)量為多少？生產(chǎn)線運行速度高速運行比較適用于評估需要頻繁干擾操作的生產(chǎn)工藝或手工操作多的生產(chǎn)工藝，低速運行則一般適用于評估無菌產(chǎn)品、容器/膠塞在無菌區(qū)暴露時間比較長的工藝。灌裝速度、瓶子尺寸、灌裝量原則速度慢，產(chǎn)品暴露時間長；速度快，有時造成較多的干擾瓶子大（包括敞口大?。?，灌裝速度慢盡量按產(chǎn)品實際灌裝體積，如不可行，體積應(yīng)能充分接觸所有表面、并足夠支持微生物生長舉例：多規(guī)格的瓶子共線生產(chǎn)：最慢的速度，最大的瓶子規(guī)格;最小的瓶子規(guī)格，最快的速度單一規(guī)格的瓶子–正?；蚵月俣忍厥夤に嚨呐囵B(yǎng)基灌裝凍干工藝無菌轉(zhuǎn)移凍干過程真空模擬無菌粉末乳糖，聚乙二醇，甘露醇（抑菌性確認）模擬無菌原料生產(chǎn)過程必要時伽馬射線滅菌額外添加設(shè)備，或啟用液體灌裝功能12最長允許的灌裝時間（如考察操作人員疲勞操作風險）有代表性的正常性操作活動的數(shù)量、種類和復(fù)雜性，非常規(guī)的干擾和各類突發(fā)事件（如維修、灌裝中斷等）凍干過程生產(chǎn)線速度和模具的規(guī)格（換模具）最差條件挑戰(zhàn)13人員數(shù)量及其活動，換班，休息，更衣等具有代表性數(shù)量的無菌操作（如添加容器，密封件，無菌原料成分）或者轉(zhuǎn)移無菌連接和拆卸取樣操作各個工藝步驟的最長持續(xù)時間挑戰(zhàn)：過濾，滅菌后物品的儲存期最差條件挑戰(zhàn)14應(yīng)當根據(jù)產(chǎn)品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養(yǎng)基TSB或FTM（澄清）某些情況下應(yīng)該考慮使用厭氧性培養(yǎng)基應(yīng)該進行促菌生長實驗標準菌株環(huán)境分離菌支持革蘭氏陽性、革蘭氏陰性、酵母菌和霉菌的生長培養(yǎng)基選擇15在20-25℃條件下培養(yǎng)7天(培養(yǎng)真菌)，30-35℃下7天(培養(yǎng)細菌)確保其內(nèi)壁和瓶塞充分接觸培養(yǎng)基無密封缺陷的瓶均應(yīng)該培養(yǎng)，任何不作培養(yǎng)的瓶子都應(yīng)說明不作培養(yǎng)的原因如果有書面規(guī)程規(guī)定，灌裝過程由于進行干擾操作而丟棄的培養(yǎng)基可以不培養(yǎng)灌裝過程丟棄程序必須與實際生產(chǎn)一致培養(yǎng)及讀數(shù)16培養(yǎng)后進行促生長試驗設(shè)計密封性微生物挑戰(zhàn)試驗應(yīng)由有資質(zhì)的人員進行檢查（QC參與）要進行物料平衡計算培養(yǎng)及讀數(shù)過程的丟棄應(yīng)有很明確的理由（應(yīng)盡量避免）培養(yǎng)及讀數(shù)2.培養(yǎng)基灌裝實施要點培養(yǎng)基灌裝的先決條件潔凈室/設(shè)備的驗證狀態(tài)確認經(jīng)過重大維修或變更后進行了生產(chǎn)線的運行確認或性能確認參與培養(yǎng)基灌裝的人員接受了培訓無菌操作潔凈室行為培養(yǎng)基灌裝方案明文規(guī)定的工藝過程及最差條件培養(yǎng)基灌裝方案設(shè)計分析工藝流程，確定風險因素繪制流程圖通過分析確定可能造成產(chǎn)品污染的風險因素灌裝時間干擾活動（時間、次數(shù)、種類包括停機、維修、調(diào)整）凍干過程設(shè)備裝配（如灌裝前的裝機）人員數(shù)量及其活動無菌操作（如各種無菌部件操作、產(chǎn)品轉(zhuǎn)移）不同班次輪換，著裝更換生產(chǎn)中出現(xiàn)的無菌管道連接無菌樣品取樣灌裝速度重量檢查容器密閉性（大小、種類、與設(shè)備匹配程度）某些特殊操作（如進行清潔前的操作）灌裝過程流程圖灌裝部件裝配管道排液正式灌裝灌裝量檢查添加膠塞處理倒瓶人員進出班次輪換設(shè)置灌裝參數(shù)停機維修環(huán)境監(jiān)測收集轉(zhuǎn)移凍干壓塞暫存壓蓋人員操作人員操作時間時間風險因素灌裝速度灌裝時間長短干擾操作及次數(shù)人員數(shù)量停機操作……轉(zhuǎn)移操作時間暫存位置時間干擾操作種類：任何進入百級層流的操作都為干擾操作，應(yīng)包括所有類型的干擾操作，常規(guī)的（灌裝線裝配，稱量調(diào)節(jié)，加膠塞，處理倒瓶，取樣，環(huán)境監(jiān)測）非常規(guī)的（設(shè)備故障，灌裝線堵塞，軌道調(diào)節(jié)，拆卸/替換破損的部件）數(shù)量：干擾的次數(shù)應(yīng)該不少于正常生產(chǎn)時發(fā)生的次數(shù)人員人數(shù)：模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數(shù)無菌裝機/A級區(qū)內(nèi)干擾模擬，上崗前權(quán)限控制活動：最多換班次數(shù)，不同時間段（日班和中夜班），進行正常操作頻率：無菌區(qū)工作人員至少每年參與一次成功的培養(yǎng)基灌裝環(huán)境監(jiān)控和微生物限度控制制定環(huán)境監(jiān)測計劃，綜合形成書面方案如何制定環(huán)境監(jiān)測計劃其他一些因素的考慮方案的批準制定培養(yǎng)基灌裝過程的微生物負荷的監(jiān)控計劃,便于偏差調(diào)查環(huán)境監(jiān)控方案應(yīng)用風險評估的方法確定關(guān)鍵監(jiān)控點給產(chǎn)品構(gòu)成最大風險的位置，如產(chǎn)品暴露位置、直接接觸表面人員按實際需要選擇合適的監(jiān)測方法空氣浮游菌沉降菌接觸碟/棉簽法合理制定控制標準體現(xiàn)全面監(jiān)控、動態(tài)監(jiān)控干熱隧道膠塞漏斗灌裝站風險點-產(chǎn)品暴露區(qū)域瓶子裸露區(qū)灌裝站區(qū)域膠塞裸露區(qū)至凍干機干熱隧道膠塞漏斗灌裝站例如：在左、中、右各設(shè)置一個連續(xù)粒子監(jiān)測點在灌裝站左右設(shè)置兩個浮游菌取樣點在左、中、右各設(shè)置一個沉降菌取樣點在軌道、灌裝針頭、膠塞盤各處設(shè)置多個表面取樣點可以參考ISO1464427文件記錄：過程控制檢測和實驗室檢測結(jié)果環(huán)境和人員監(jiān)測結(jié)果設(shè)備功能（批報警記錄，過濾器完整性測試）人員干擾操作、偏差、中斷等--發(fā)生時間和持續(xù)時間培養(yǎng)基報廢記錄生產(chǎn)線清場記錄培養(yǎng)基灌裝過程記錄28QA觀察：整個培養(yǎng)基灌裝過程應(yīng)該有QA部門的全程觀察所有培養(yǎng)基應(yīng)按時間順序進行標記，便于一旦有污染時追逐發(fā)生時間段灌裝過程任何的干擾行為，QA觀察員需要進行詳細記錄，以便識別可能的污染來源培養(yǎng)基灌裝過程記錄29過程錄像不是強制要求有助于記錄和偏差回顧需要包括整個過程需要有規(guī)程明確對錄像內(nèi)容的回顧有助于無菌操作培訓需要規(guī)定保存方式和時間培養(yǎng)基灌裝過程記錄30無菌生產(chǎn)區(qū)域管道系統(tǒng)凍干機過程中的培養(yǎng)基泄漏培養(yǎng)基的撤出和報廢培養(yǎng)基灌裝過程/灌裝前不得故意設(shè)計不具代表性的大清場，消毒應(yīng)當采取措施保證驗證不能對生產(chǎn)造成不良影響培養(yǎng)基灌裝結(jié)束后的清場和清洗風險點解釋控制方法配制溶液的注射用水溫度高于7０℃高溫會抑制微生物生長將配制培養(yǎng)基的注射用水冷卻到室溫，在室溫下（20-25℃）配制正常生產(chǎn)溶液ｐＨ值偏高或偏低酸性或堿性環(huán)境不利于微生物生長培養(yǎng)基的pH調(diào)整到適合微生物生長的范圍配制好的溶液在低溫下保存低溫會抑制微生物生長培養(yǎng)基在儲存容器中常溫保存抑菌影響分析---物料準備，儲存過程抑菌因素影響分析風險點解釋控制方法生產(chǎn)過程中使用惰性氣體（如氮氣）保護產(chǎn)品大多數(shù)需氧微生物，惰性氣體有一定的抑菌作用用壓縮空氣或空氣來代替惰性氣體培養(yǎng)基灌裝量偏少西林瓶內(nèi)壁不能被完全接觸，微生物不能生長

10ml西林瓶灌裝至少2-4ml培養(yǎng)基，以保證足夠量培養(yǎng)基用于培養(yǎng)抑菌影響分析---灌裝抑菌因素影響分析風險點解釋控制方法對設(shè)備的清洗、消毒和滅菌消毒劑會殺滅或微生物避免設(shè)備上的消毒劑殘留正常生產(chǎn)時消毒劑（如噴灑消毒酒精，對操作人員手部消毒）的使用，消毒劑會殺滅微生物對于模擬試驗過程中消毒劑（如噴灑消毒酒精）的使用，應(yīng)該注意不能超出正常生產(chǎn)時的使用頻率，不能將消毒劑直接接觸到培養(yǎng)基上。班次輪換，清場消毒消毒劑會殺滅微生物對于兩班次灌裝輪換期間不進行消毒清場抑菌影響分析---中間過程抑菌因素影響分析風險點解釋控制方法抽真空過低真空度有抑菌作用。過低真空度還會導(dǎo)致培養(yǎng)基失水。灌裝好的西林瓶放入凍干機，放置數(shù)小時以上模擬凍干過程。使用輕微真空（500mbar以上），模擬氣流流動低溫冷凍低溫會抑制微生物生長不進行冷凍操作，保持常溫抑菌影響分析---凍干抑菌因素影響分析培養(yǎng)基灌裝方案設(shè)計總結(jié)設(shè)計的方案需要具有代表性建立書面的規(guī)程，SOP指定如何進行方案設(shè)計必要時設(shè)計多次培養(yǎng)基灌裝可以考慮穿插在生產(chǎn)過程中進行，挑戰(zhàn)整個生產(chǎn)時限3.結(jié)果解釋和偏差調(diào)查培養(yǎng)基灌裝的接受標準培養(yǎng)基模擬試驗的目標是不出現(xiàn)長菌，且遵循以下原則：灌裝少于5000支時，不應(yīng)檢出污染品；2.灌裝在5000至10000時：(1)有1支污染需進行調(diào)查，并考慮重復(fù)培養(yǎng)基灌裝試驗(2)2支污染需進行調(diào)查，并可即視作再驗證的理由3.灌裝超過10000支時：(1)1支污染需進行調(diào)查(2)2支污染需進行調(diào)查，并可即視作再驗證的理由4.發(fā)生任何微生物污染時，均應(yīng)進行調(diào)查。培養(yǎng)結(jié)果陽性調(diào)查當培養(yǎng)基灌裝出現(xiàn)陽性結(jié)果時，不管是否符合合格標準，都必須進行調(diào)查制定的CAPA需要針對污染的原因或不良無菌操作行為分離到的微生物應(yīng)鑒別到種。調(diào)查過程中應(yīng)詳細分析可能的產(chǎn)生陽性結(jié)果的原因?？茖W評估工藝的可靠性以及上市產(chǎn)品可能存在的風險對于超出標準的結(jié)果，應(yīng)當在調(diào)查清楚原因后再次進行培養(yǎng)基灌裝。培養(yǎng)結(jié)果陽性調(diào)查如果未達到接受標準:

在明確糾偏行動前，需考慮暫停生產(chǎn)。在工藝重新確認前的產(chǎn)品不得放行。在本次培養(yǎng)基灌裝之后生產(chǎn)的到下一次成功的培養(yǎng)基灌裝之間的產(chǎn)品都需要被進行回顧，評估其無菌失敗的風險。（培養(yǎng)基灌裝結(jié)果出來之前就進行風險生產(chǎn)）在該次培養(yǎng)基灌裝和上一次成功的培養(yǎng)基灌裝之間的產(chǎn)品也需要被進行回顧，評估其無菌失敗的風險。必要時，需制定糾偏和預(yù)防性措施，并進行工藝的重新確認。污染調(diào)查舉例

發(fā)現(xiàn)污染瓶的調(diào)查應(yīng)該從人、機、料、法、環(huán)各個方面進行調(diào)查。（1）生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)（粒子、浮游菌、沉降碟等）（2）對人員的監(jiān)測結(jié)果（3）高效過濾器的完整性檢測數(shù)據(jù)（4）層流臺性能數(shù)據(jù)（氣流流速、壓差記錄等）（5）生產(chǎn)房間監(jiān)控數(shù)據(jù)（空氣流向、工作臺面氣流方向速度）（6）人員培訓情況，操作資質(zhì)和能力（7）干擾模擬的執(zhí)行情況（8）無菌室生產(chǎn)用具和其他相關(guān)物品的滅菌儲存情況污染調(diào)查舉例

（9）微生物鑒定結(jié)果，以幫助確定來源（10）清潔消毒流程的執(zhí)行情況（11）設(shè)備儀器的校驗結(jié)果（12）生產(chǎn)前后產(chǎn)品過濾器的完整性測試數(shù)據(jù)（13）生產(chǎn)過程發(fā)生的偏差（14）設(shè)備的CIP/SIP的情況（15）培養(yǎng)基的培養(yǎng)能力研究（16）生產(chǎn)線和培養(yǎng)基灌裝的歷史數(shù)據(jù)分析污染調(diào)查舉例根據(jù)調(diào)查分析確定可能引起污染的原因，針對性制定有效措施。所有調(diào)查行動、改進措施和結(jié)果都應(yīng)當形成正式文件記錄。培養(yǎng)基灌裝失效培養(yǎng)基灌裝試驗結(jié)果被認作無效的情況不應(yīng)該頻繁發(fā)生，更不能直接將失敗的培養(yǎng)基灌裝結(jié)果視為無效在符合明確的書面規(guī)程要求的情況下才能做出試驗無效的判定，此時，應(yīng)給出支持文件并