溶血性鏈球菌的檢驗課件

（一）形態(tài)與染色1、呈球形或卵圓形，直徑0.5um-1um鏈狀排列（長短不一）。2、革蘭氏染色陽性，衰老培養(yǎng)物常成陰性。3、無芽孢、無鞭毛、多數(shù)無夾膜。一、生物學特性（一）形態(tài)與染色一、生物學特性1、多數(shù)為需氧或兼性厭氧，少數(shù)為微需氧或專性厭氧。2、對營養(yǎng)要求高，普通培養(yǎng)基不能良好生長，（需加血清液、腹水等）。3、最適溫度37℃，pH7.4-7.64、在液體培養(yǎng)基中，溶血菌株,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長（上清下濁）；不溶血菌球，均勻渾濁生長，如糞鏈菌。5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有乳光圓形突起的細小菌落，直徑0.5-0.75mm，針尖大小，菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)。（二）培養(yǎng)特性1、多數(shù)為需氧或兼性厭氧，少數(shù)為微需氧或專性厭氧。（二）培養(yǎng)（三）生化特性1、均分解葡萄糖產(chǎn)酸。2、對乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。3、能使牛奶產(chǎn)酸而不凝固，不液化明膠、不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）。4、A群菌對桿菌肽敏感。（三）生化特性1、均分解葡萄糖產(chǎn)酸。二、流行病學與致病性溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會對人類進行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。二、流行病學與致病性溶血性鏈球菌在自然界中分一般而言，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：1、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時造成食品的污染；2、食品在加工前就已帶菌、奶?；蓟撔匀橄傺谆蛐笄菥植炕摃r，其奶和肉尸某些部位污染。3、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。溶血性鏈球菌常可引起皮膚、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細菌性心內膜炎、猩紅熱和風濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應。一般而言，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵襲性酶有關，主要有以下幾種：1、溶血素2、致熱外毒素3、透明質酸酶4、鏈激酶5、鏈道酶6、殺白細胞素抵抗力：60℃30min即被殺死，對常用消毒劑敏感。乙型鏈球菌對青霉素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵襲性三、溶血性鏈球菌的的檢驗GB/T4789.11-2003三、溶血性鏈球菌的的檢驗GB/T4789.11-2003（一）實驗內容樣品處理→增菌培養(yǎng)→分離培養(yǎng)→純化培養(yǎng)→生化鑒定→報告（二）實驗過程（一）實驗內容樣品處理→增菌培養(yǎng)→分離培養(yǎng)→（二）實驗過程第一天前半天預先準備并滅菌的器材規(guī)格名稱 數(shù)量 1、500mL廣口瓶 2個 2、13×100mm試管 7支 3、10mL移液管1支4、5mL移液管3支5、1mL移液管12支6、直徑為90mm平皿28套 7、250mL量筒 1支第一天樣品處理和增菌培養(yǎng)第一天前半天預先準備并滅菌第一天后半天1、樣品處理無菌操作稱取檢樣25g（mL)，加入裝有225mL滅菌生理鹽水的500mL廣口瓶內，固體食品用均質器以8000-10000r/min打碎1min，制成混懸液。2、增菌培養(yǎng)吸取5mL混懸液接種至50mL葡萄糖肉浸液肉湯（如檢樣污染嚴重，可同時接種5mL至匹克氏肉湯），36±1℃培養(yǎng)24h。3、分離培養(yǎng)混懸液直接劃線于血平板36±1℃培養(yǎng)24h。

第二天接種平板進行分離培養(yǎng)從肉湯中接種血平板，36±1℃培養(yǎng)24h。第三天分純培養(yǎng)從分離培養(yǎng)的血平板上，挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純，36±1℃培養(yǎng)24h。血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約0.5mm~0.75mm，為圓形突起的細小菌落，乙型溶血鏈球菌。周圍有2mm~4mm界限分明，無色透明的溶血圈。第二天接種平板進行分離培養(yǎng)從肉湯中接種血平板，36±1溶血性鏈球菌的檢驗課件第四天鑒定1、革蘭氏染色，陽性，G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。2、生化鑒定（1）鏈激酶試驗（溶纖維蛋白酶試驗）吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36±1℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，混勻，置于36±1℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，如24h后不溶解即為陰性。同時用肉浸液肉湯做陰性對照，用已知的鏈激酶陽性的菌株做陽性對照。第四天鑒定1、革蘭氏染色，陽性，G+鏈狀排列，符合者（2）桿菌肽敏感試驗將分純的乙型溶血性鏈球菌接種血平板，在劃線處貼附桿菌肽紙片，36℃，18h，出現(xiàn)抑菌帶為陽性，（可推測為乙型溶血性鏈球菌）。四、報告根據(jù)培養(yǎng)后的形態(tài)，菌落特征及生化試驗結果進行報告。（2）桿菌肽敏感試驗將分純的乙型溶血性鏈球菌接種血平（一）形態(tài)與染色1、呈球形或卵圓形，直徑0.5um-1um鏈狀排列（長短不一）。2、革蘭氏染色陽性，衰老培養(yǎng)物常成陰性。3、無芽孢、無鞭毛、多數(shù)無夾膜。一、生物學特性（一）形態(tài)與染色一、生物學特性1、多數(shù)為需氧或兼性厭氧，少數(shù)為微需氧或專性厭氧。2、對營養(yǎng)要求高，普通培養(yǎng)基不能良好生長，（需加血清液、腹水等）。3、最適溫度37℃，pH7.4-7.64、在液體培養(yǎng)基中，溶血菌株,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長（上清下濁）；不溶血菌球，均勻渾濁生長，如糞鏈菌。5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有乳光圓形突起的細小菌落，直徑0.5-0.75mm，針尖大小，菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)。（二）培養(yǎng)特性1、多數(shù)為需氧或兼性厭氧，少數(shù)為微需氧或專性厭氧。（二）培養(yǎng)（三）生化特性1、均分解葡萄糖產(chǎn)酸。2、對乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。3、能使牛奶產(chǎn)酸而不凝固，不液化明膠、不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）。4、A群菌對桿菌肽敏感。（三）生化特性1、均分解葡萄糖產(chǎn)酸。二、流行病學與致病性溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會對人類進行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。二、流行病學與致病性溶血性鏈球菌在自然界中分一般而言，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：1、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時造成食品的污染；2、食品在加工前就已帶菌、奶?；蓟撔匀橄傺谆蛐笄菥植炕摃r，其奶和肉尸某些部位污染。3、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。溶血性鏈球菌常可引起皮膚、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細菌性心內膜炎、猩紅熱和風濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應。一般而言，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品：溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵襲性酶有關，主要有以下幾種：1、溶血素2、致熱外毒素3、透明質酸酶4、鏈激酶5、鏈道酶6、殺白細胞素抵抗力：60℃30min即被殺死，對常用消毒劑敏感。乙型鏈球菌對青霉素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。溶血性鏈球菌的致病性與其產(chǎn)生的毒素及其侵襲性三、溶血性鏈球菌的的檢驗GB/T4789.11-2003三、溶血性鏈球菌的的檢驗GB/T4789.11-2003（一）實驗內容樣品處理→增菌培養(yǎng)→分離培養(yǎng)→純化培養(yǎng)→生化鑒定→報告（二）實驗過程（一）實驗內容樣品處理→增菌培養(yǎng)→分離培養(yǎng)→（二）實驗過程第一天前半天預先準備并滅菌的器材規(guī)格名稱 數(shù)量 1、500mL廣口瓶 2個 2、13×100mm試管 7支 3、10mL移液管1支4、5mL移液管3支5、1mL移液管12支6、直徑為90mm平皿28套 7、250mL量筒 1支第一天樣品處理和增菌培養(yǎng)第一天前半天預先準備并滅菌第一天后半天1、樣品處理無菌操作稱取檢樣25g（mL)，加入裝有225mL滅菌生理鹽水的500mL廣口瓶內，固體食品用均質器以8000-10000r/min打碎1min，制成混懸液。2、增菌培養(yǎng)吸取5mL混懸液接種至50mL葡萄糖肉浸液肉湯（如檢樣污染嚴重，可同時接種5mL至匹克氏肉湯），36±1℃培養(yǎng)24h。3、分離培養(yǎng)混懸液直接劃線于血平板36±1℃培養(yǎng)24h。

第二天接種平板進行分離培養(yǎng)從肉湯中接種血平板，36±1℃培養(yǎng)24h。第三天分純培養(yǎng)從分離培養(yǎng)的血平板上，挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純，36±1℃培養(yǎng)24h。血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約0.5mm~0.75mm，為圓形突起的細小菌落，乙型溶血鏈球菌。周圍有2mm~4mm界限分明，無色透明的溶血圈。第二天接種平板進行分離培養(yǎng)從肉湯中接種血平板，36±1溶血性鏈球菌的檢驗課件第四天鑒定1、革蘭氏染色，陽性，G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。2、生化鑒定（1）鏈激酶試驗（溶纖維蛋白酶試驗）吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36±1℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，混勻，置于36±1℃水浴10