生物藥物的微生物限檢查NO

第一節(jié)生物藥物被微生物污染后引起的質量變化藥物質量變化原因內因----沉淀,水解,氧化等外因----被微生物污染污染源：制藥原料,廠房設備,空氣,操作人員,包裝材料等生產環(huán)節(jié)第1頁/共17頁一、生物藥物染菌的范圍與原因1.范圍涉及全部劑型，各種藥物2.原因

@

微生物的特征個體小，種類多，繁殖快

@生產過程和設備

“死角”

@制藥原料和藥物本身的性質植物性原料：土壤微生物，植物病原菌，人獸糞便動物性原料：寄生微生物，病原微生物第2頁/共17頁二生物藥物被微生物污染后引起的質量變化藥品理化性質改變表現(xiàn)為外觀、氣味、染色、稠度、PH、產生氣體等藥品含微生物毒性代謝物黃曲霉藥效的變化藥物失活第3頁/共17頁三意義保證藥品質量檢測藥物生產工藝的科學性,合理性和管理水平第4頁/共17頁第二節(jié)微生物限度檢查法

微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項目包括細菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵菌數(shù)及控制菌(致病菌)檢查。第5頁/共17頁滅菌制劑：系指采用某一物理、化學方法殺滅或除去所有活的微生物繁殖體和芽孢的一類藥物制劑。①注射用制劑②眼用制劑③植入型制劑④創(chuàng)面用制劑⑤手術用制劑

無菌檢查第6頁/共17頁第7頁/共17頁操作環(huán)境

微生物限度檢查應在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內進行。檢查全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標準進行潔凈驗證。培養(yǎng)溫度和時間

本檢查法中細菌培養(yǎng)溫度為30~35oC；時間為48小時。霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為23~28oC；時間為72小時。控制菌培養(yǎng)溫度為35~37oC；時間為48小時。眼用制劑微生物限度檢查用薄膜過濾法，培養(yǎng)時間為7天。第8頁/共17頁三微生物限度檢查步驟1.供試品的制備2.限度檢查方法

①、常規(guī)法②、稀釋法③、離心沉淀集菌法④、薄膜過濾法⑤、中和法⑥、離心和培養(yǎng)基稀釋法⑦、離心和薄膜過濾法

第9頁/共17頁微生物限度檢查常用檢驗設備及器材

恒溫培養(yǎng)箱30～35℃36±1℃霉菌培養(yǎng)箱25～28℃恒溫水浴箱45±1℃凈化工作臺生物顯微鏡1500X體視顯微鏡或放大鏡電冰箱電熱干燥箱250～300℃高壓蒸汽消毒器電子天平或藥物天平感量0.1g勻漿儀或研缽錐形瓶100ml，250ml，500ml，1000ml第10頁/共17頁直形吸管1ml，10ml量杯10ml試管18x180mm，13x200mm，30x200mm試管筒培養(yǎng)皿9cm培養(yǎng)皿筒陶瓦蓋12cm量筒100ml，500ml，1000ml濾器及微孔濾膜孔徑0.45±0.02um注射器1ml，5ml，10ml，30ml載玻片及蓋玻片接種針及接種環(huán)試管架第11頁/共17頁乙醇燈康氏振蕩器離心機500～4000／min紫外燈365nm玻璃或搪瓷消毒缸（帶蓋）大、小橡皮乳頭乙醇棉球或碘伏棉球滅菌剪刀、鑷子、鋼錐滅菌稱樣紙滅菌不銹鋼藥匙火柴、記號筆（玻璃鉛筆）白瓷盤、洗手盆實驗記錄紙第12頁/共17頁1、含抑菌藥物為什么會染菌？2、如何確定含抑菌成分？3、含抑菌成分供試液的制備方法有那些？第13頁/共17頁

4．含抑菌成分供試品凡含防腐劑或抑菌成分且影響檢驗（供試品按常規(guī)檢查法，加入規(guī)定量的對照菌，不能檢出時）的供試品，可根據(jù)供試品的性質，控制菌的特性及檢驗條件等按以下方法之一或兩種以上方法聯(lián)合應用處理后，依法檢查。同時做陽性和陰性對照。①稀釋法：將供試品種入較大量的培養(yǎng)基中，使該供試液稀釋至不具抑菌作用的濃度（使該供試液稀釋至陽性對照菌能生長的濃度）。此法用作控制菌檢查和限度檢查。本法適用于抑菌作用不強的中藥、化學藥品的檢驗。第14頁/共17頁②離心沉淀集菌法：取規(guī)定量的供試液于無菌刻度離心管中，離心（每分鐘3000轉）30分鐘，棄去上清液，留底部集菌液約2ml，再稀釋成原規(guī)定的供試液。如有不溶性藥渣，可先離心（每分鐘500轉）5分鐘，取全部上層液，再行集菌處理。本法適用于一些抑菌作用不強的中、西藥品，如蜜丸、水丸、片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑及液體制劑。③薄膜過濾法：取規(guī)定量的供試液，置稀釋劑100ml中，搖勻，以無菌操作加入裝有直徑約50mm、孔徑不大于0.45um±0.02um的微孔濾膜過濾器中，減壓抽干后，用稀釋劑沖洗濾膜3次，每次50～100ml，取出濾膜備檢。沖洗時每次最好不少于100ml，可以將培養(yǎng)基加入濾器或取出濾膜，加入增菌培養(yǎng)基中，可以用加入濾器中供試品的量來控制檢驗量，也可以把濾膜取出來剪成2～4片，使每片相當于供試品1g或1ml，放入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗。第15頁/共17頁本法適用于水溶性抑菌成分的中、西藥品和滴眼劑等制劑的“滅活”處理。安放濾膜時，注意濾膜與濾器應密合，防止濾膜破損、漏液。本法所用濾膜孔徑0.45um±0.02um。④（鈍化）中和法：凡含磺胺、汞、砷類或防腐劑的供試品，可用相應的試劑鈍化活性因子，中和毒性后制成供試液?；前奉愃幬镏泻头ㄈ∫?guī)定量含磺胺類的供試品，于100ml增菌液中加入含1％對氨基苯甲酸約1～