《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》學(xué)習(xí)指南

第29頁共29頁《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》學(xué)習(xí)指南項(xiàng)目一：血液標(biāo)本采集一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)采集血液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)是微生物檢驗(yàn)常用的技術(shù)之一，適用于臨床菌血癥、敗血癥、膿毒血癥等的病原學(xué)檢查，嚴(yán)格無菌操作是獲得真實(shí)病原體的必要保證。微生物檢驗(yàn)人員在接收到醫(yī)生開出的檢驗(yàn)申請單后，多數(shù)情況下是同時接受護(hù)理人員送來的血培養(yǎng)標(biāo)本，直接進(jìn)行驗(yàn)收、登記、培養(yǎng)即可。門診病人、臨床血液采集困難病人則由檢驗(yàn)科人員采集，首先選擇適宜的培養(yǎng)基，一般情況下選擇普通和厭氧增菌培養(yǎng)基，然后進(jìn)行抽血，最常用抽血部位是肘正中靜脈，特殊情況下可用股靜脈和頸靜脈，新生兒可用后囟采血。抽血前在采血部位先用碘酒再用酒精由內(nèi)向外擦拭消毒，待消毒部位干燥后用一次性注射器刺入血管抽取血液，抽血量與培養(yǎng)基量之比約1：10，成人一般采集5～10ml，嬰幼兒一般采集1～5ml，迅速注入培養(yǎng)基內(nèi)，輕輕混勻，將培養(yǎng)瓶上的條形碼撕下貼于申請單上，送入細(xì)菌室再行編號、登記、培養(yǎng)。

項(xiàng)目二：膿液、痰液標(biāo)本采集項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)膿液、痰液細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本一般由臨床醫(yī)護(hù)人員采集送往微生物檢驗(yàn)室。門診病人的標(biāo)本采集則由微生物檢驗(yàn)工作人員負(fù)責(zé)。首先接收到醫(yī)生開出的申請單后依據(jù)申請內(nèi)容采集標(biāo)本。封閉性膿腫用注射器抽取膿液送檢標(biāo)本；開放性膿腫用棉簽或無菌紗布采集膿液放置無菌器皿中送檢標(biāo)本。痰液標(biāo)本一般需要采集晨痰，采集前囑咐病人用清水漱口三次，然后用力咳出氣管深部痰液，置于無菌容器內(nèi)送檢。接收或采集的痰液標(biāo)本需做性合格評價，一般低倍鏡下每個視野上皮細(xì)胞數(shù)＜25個，白細(xì)胞數(shù)＞10個為合格，可進(jìn)行微生物的分離培養(yǎng)，反之則拒收或重新采集。對接收和拒收的標(biāo)本均應(yīng)進(jìn)行處理意見和基本信息的登記。

項(xiàng)目三：尿液、糞便標(biāo)本采集一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)尿液為無菌體液標(biāo)本的一種，泌尿系統(tǒng)感染時尿液培養(yǎng)可確定病原菌，有利于臨床針對性治療。據(jù)培養(yǎng)目的不同可以采集中段尿、腎盂尿、膀胱穿刺尿、24h尿標(biāo)本，細(xì)菌培養(yǎng)最常用中段尿標(biāo)本。中斷尿采集時首先清洗外陰，然后排除陰唇、包皮干擾連續(xù)排尿，接取中段尿10～20ml于無菌容器內(nèi)快速送檢。糞便標(biāo)本為含豐富正常菌群的材料，但是腸道致病菌也可以出現(xiàn)在腸道感染的患者糞便中，選擇培養(yǎng)病原菌是診斷腸道感染的常用技術(shù)。糞便標(biāo)本采集方法有自然排便采集法和直腸拭子采集法。自然排便采集法是在自然排便后，挑取有膿血、粘液部分的糞便2～3g或液狀糞便中的絮狀物1～2ml盛于無菌的容器內(nèi)快速送檢，不能及時送檢的標(biāo)本可以選擇適當(dāng)?shù)谋４嬉海?0%甘油鹽水）或增菌培養(yǎng)基中送檢；直腸拭子采集后置于無菌試管中快速送檢，不能及時送檢應(yīng)放入卡-布運(yùn)送培養(yǎng)基或pH7.0的磷酸鹽甘油緩沖液中運(yùn)送或保存。接收到標(biāo)本后，應(yīng)該及時對標(biāo)本進(jìn)行評價，尿沉渣涂片染色鏡檢無雜菌（2種以上），即尿標(biāo)本采集質(zhì)量合格，檢出單種細(xì)菌對臨床有初步診斷價值。合格糞便標(biāo)本應(yīng)該新鮮、不干燥，帶有病理成分的標(biāo)本為好。最后登記病人信息和處理意見。

項(xiàng)目四：細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)辨認(rèn)一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)學(xué)會使用顯微鏡油鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)是微生物檢驗(yàn)的基本技術(shù)，顯微鏡油鏡是微生物檢驗(yàn)不可缺少的工具。。細(xì)菌個體微小（幾個微米），只有放大一千倍才能看到，因此必須使用油鏡才能觀察到細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。顯微鏡油鏡頭由于焦距短、孔徑小，總透光量少，為了減少折射光損失而使用密度與玻片密度相近的香柏油做介質(zhì)。觀察標(biāo)本時先用低倍鏡調(diào)節(jié)光路、調(diào)節(jié)焦距找到物象，再將香柏油滴在標(biāo)本片上，轉(zhuǎn)換油鏡頭，聚光器調(diào)至高點(diǎn)，光圈完全打開，緩慢調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器直到物象清晰為止。細(xì)菌基本形態(tài)有球形、桿形和螺旋形。染色標(biāo)本可見革蘭陽性葡萄球菌、鏈球菌、雙球菌，革蘭陰性桿菌、弧菌、雙球菌。特殊結(jié)構(gòu)可見莢膜、鞭毛、芽胞等。

項(xiàng)目五：細(xì)菌革蘭染色一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)革蘭染色是微生物檢驗(yàn)中最常用的染色技術(shù)，是病原學(xué)檢查不可缺少的基本技術(shù)。該技術(shù)包含三個階段：制片、染色、鏡檢。制片是染色前的標(biāo)本準(zhǔn)備，包括涂片、干燥、固定三個步驟，每個步驟的實(shí)施都直接影響染色結(jié)果，正確進(jìn)行涂片、干燥、固定是染色技術(shù)的質(zhì)量保障。一般取被檢材料少許，涂成1～1.5cm的涂膜，自然干燥或置于酒精燈上方

項(xiàng)目六：細(xì)菌抗酸染色一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)抗酸染色技術(shù)是檢查分枝桿菌屬細(xì)菌的基本技術(shù)，也是臨床結(jié)核病病原學(xué)檢查的最常用方法。該技術(shù)包含制片、染色、鏡檢三個階段。制片材料可以是痰液、尿液、糞便、腦脊液、胸腹水等標(biāo)本。制片包含三個步驟：涂片、干燥、固定。取處理后的待檢標(biāo)本三環(huán)涂成厚涂片，在火焰上方溫?zé)岘h(huán)境中緩慢干燥，連續(xù)三次通過火焰外焰進(jìn)行固定，然后進(jìn)行染色。染色方法有加熱助染法和冷染法，學(xué)生學(xué)習(xí)時常用冷染技術(shù)。染色包括初染、脫色、復(fù)染三個步驟，首先用石碳酸復(fù)紅對標(biāo)本進(jìn)行初染，加染液后放置20分鐘，用流動的清水沖去染液，其次用鹽酸酒精脫色，直到無紅色液體流下為止，用清水沖洗標(biāo)本片后再用堿性美蘭復(fù)染1分鐘，用流動的清水沖去染液待干鏡檢。鏡檢階段重點(diǎn)掌握認(rèn)識標(biāo)本中的抗酸菌形態(tài)和報(bào)告方式，抗酸菌為細(xì)長略彎的紅色細(xì)菌，其他細(xì)菌和細(xì)胞均被染成藍(lán)色。報(bào)告方式：不低于4分鐘觀察時間，鏡下計(jì)數(shù)100個視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸菌，繼續(xù)觀察300個視野未發(fā)現(xiàn)抗酸菌者，報(bào)告（—），計(jì)數(shù)100～300個視野找到抗酸菌1～2條，報(bào)告（±），100個視野內(nèi)找到抗酸菌3～9條，報(bào)告（＋），10個視野內(nèi)找到抗酸菌1～9條，報(bào)告（＋＋），每個視野內(nèi)找到抗酸菌1～9條，報(bào)告（＋＋＋），每個視野內(nèi)找到抗酸菌9條以上，報(bào)告（＋＋＋＋）。

項(xiàng)目七：痰液洗凈與液化一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)痰液標(biāo)本合格性評價（涂片低倍鏡下每視野：上皮細(xì)胞＜25，白細(xì)胞＞10）通過后，接種前需對標(biāo)本進(jìn)行處理，其目的一是為了減少口腔正常菌，二是為了去除粘液的干擾，提高致病菌的檢出率。痰標(biāo)本的處理方法有洗凈和液化兩種。對一般痰標(biāo)本做洗凈處理即可，用大試管裝10～20ml的無菌生理鹽水備用，將評價合格的痰液標(biāo)本轉(zhuǎn)入大試管中，塞緊管塞劇烈震蕩5～10秒后，取底部膿痰再移入新的大試管中，如此反復(fù)洗2次，用第三管底部的膿痰接種。也可將膿痰置于無菌平皿內(nèi)，用20～30ml的無菌生理鹽水充分?jǐn)噭酉礈旌笕∧撎到臃N痰液的液化通常用于粘稠性很高的標(biāo)本處理，用洗凈法無法得到可用的痰片時使用。在裝有痰標(biāo)本的盛器內(nèi)，加入等量的pH7.6的10%胰酶溶液，37℃

項(xiàng)目八：常用培養(yǎng)基制備一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)培養(yǎng)基是人工配制供細(xì)菌生長繁殖所需的營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基按物理性狀分固體、液體、半固體培養(yǎng)基三種，按用途可分基礎(chǔ)、營養(yǎng)、選擇、鑒別、厭氧培養(yǎng)基。不同的培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不同，故配制培養(yǎng)基需依據(jù)不同的要求進(jìn)行。培養(yǎng)基的制備程序一般是：稱量→溶化→校正pH→分裝→滅菌→檢定→保存等步驟。稱量就是按照所配制培養(yǎng)基的要求稱量營養(yǎng)物質(zhì)，通常使用普通天平即可。溶化可用電爐加熱溶化混合營養(yǎng)物質(zhì)，但要注意不能焦糊，以免營養(yǎng)水平下降，影響培養(yǎng)基質(zhì)量。溶化好的培養(yǎng)基需要矯正pH值，測pH值可用石蕊試紙法和酸度計(jì)法。石蕊試紙適用于小量培養(yǎng)基的pH校正，酸度計(jì)法用于大批量培養(yǎng)基pH校正，一般校正培養(yǎng)基pH值到7.4～7.6即可。校正好的培養(yǎng)基按要求進(jìn)行分裝，增菌培養(yǎng)基分裝到小三角燒瓶中，生化試驗(yàn)用培養(yǎng)基分裝到小試管中，斜面固體培養(yǎng)基分裝到大試管中，包扎后高壓滅菌。根據(jù)培養(yǎng)基營養(yǎng)成分不同選擇不同條件進(jìn)行高壓滅菌。eq\o\ac(○,1)常用培養(yǎng)基選擇103.4kPa，121.3℃，15～30min的滅菌條件。eq\o\ac(○,2)含糖、明膠的培養(yǎng)基選擇68.45kPa，15min的滅菌條件。滅菌完畢的培養(yǎng)基檢定后方可保存使用。無菌試驗(yàn)是將滅菌后的培養(yǎng)基放入35℃18～24h，無菌生長為合格。合格培養(yǎng)基一般用保鮮袋包裝，注明日期、名稱，放4℃冰箱保存。

項(xiàng)目九：細(xì)菌接種技術(shù)一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)細(xì)菌接種技術(shù)是微生物檢驗(yàn)的關(guān)鍵技術(shù)，直接關(guān)系到微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量，正確掌握細(xì)菌接種技術(shù)是微生物檢驗(yàn)工作的基本保障。常用細(xì)菌接種技術(shù)包括：穿刺接種技術(shù)、液體接種技術(shù)、斜面接種技術(shù)、分段劃線接種技術(shù)等。液體培養(yǎng)基接種常用于增菌、生化培養(yǎng)，接種工具為接種環(huán)或接種針。半固體培養(yǎng)基接種常用于檢查細(xì)菌動力和保存菌種，接種工具為接種針。斜面培養(yǎng)基接種常用于大量增菌或鑒別培養(yǎng)基接種，接種工具為接種環(huán)或接種針。平板分段劃線主要用于從臨床標(biāo)本中或增菌陽性標(biāo)本中分離純種菌，接種工具為接種環(huán)，接種時首先用酒精燈外焰滅菌接種環(huán)，待冷卻后挑取標(biāo)本少許，左手掌托住平板皿底，拇指推開皿蓋約450角，將標(biāo)本均勻涂布接種于培養(yǎng)基邊緣部分，約占培養(yǎng)基表面的1/4，即第一區(qū)，灼燒滅菌接種環(huán)后，將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)動一定角度從第一區(qū)通過3～4次連續(xù)劃線不重疊占培養(yǎng)基面積1/4，即第二區(qū)，依次劃3、4區(qū)。蓋好皿蓋，做好標(biāo)記，滅菌接種環(huán)放回原處，即完成接種。

項(xiàng)目十：細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)依據(jù)檢測目的不同選擇不同的培養(yǎng)方法，是微生物檢驗(yàn)工作人員應(yīng)該具備的職業(yè)素質(zhì)，是準(zhǔn)確分離出病原體的前提。常用細(xì)菌培養(yǎng)方法有：普通培養(yǎng)、二氧化碳培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)等。普通培養(yǎng)是最常用的方法，一般欲從臨床標(biāo)本中分離病原菌均行此法培養(yǎng)，常用培養(yǎng)基有血平板、選擇培養(yǎng)基、生化鑒別培養(yǎng)基等，常用工具為普通35℃孵育箱，通常孵育18～24二氧化碳培養(yǎng)臨床應(yīng)用也較頻繁，一般從生殖道分泌物、尿液、腦脊液中分離奈瑟菌和從痰液中分離嗜血桿菌、肺炎鏈球菌時使用此培養(yǎng)方法。常用培養(yǎng)基為血平板、普通或萬古巧克力平板。常用工具為：二氧化碳培養(yǎng)箱、燭缸、重碳酸鹽—鹽酸反應(yīng)皿等。厭氧培養(yǎng)是從臨床腦脊液、膿、痰、尿標(biāo)本、創(chuàng)傷分泌物、穿刺尿、牙周分泌物、穿刺膿液等標(biāo)本中分離厭氧菌的方法。所用培養(yǎng)基有強(qiáng)化血平板、各種選擇培養(yǎng)基和培養(yǎng)厭氧芽胞梭菌的皰肉培養(yǎng)基。厭氧培養(yǎng)工具有：厭氧手套箱、厭氧罐、厭氧氣袋等。

項(xiàng)目十一：標(biāo)本的分離培養(yǎng)一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)從不同的臨床標(biāo)本中分離病原菌，選擇合適的培養(yǎng)基和使用恰當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)方法，是正確保證微生物檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的重要保障。臨床血液標(biāo)本一般需要先增菌，故抽取的標(biāo)本直接注入血培養(yǎng)瓶，包括普通增菌培養(yǎng)瓶和厭氧增菌培養(yǎng)瓶，進(jìn)行普通和厭氧培養(yǎng)。膿液標(biāo)本首先需要分離細(xì)菌，一般用血平板進(jìn)行普通培養(yǎng)。封閉膿腫或申請厭氧培養(yǎng)的標(biāo)本行厭氧培養(yǎng)。痰液標(biāo)本處理后首先進(jìn)分離培養(yǎng)，一般用血平板和萬古巧克力平板各一個，接種標(biāo)本后，血平板行普通培養(yǎng)，巧克力平板行二氧化碳培養(yǎng)。尿液標(biāo)本直接分離接種血平板、MAC平板、巧克力平板，血平板、MAC平板行普通培養(yǎng)，巧克力平板行二氧化碳培養(yǎng)。膀胱穿刺尿標(biāo)本接種強(qiáng)化血平板行厭氧培養(yǎng)。糞便標(biāo)本直接分離接種SS、MAC平板進(jìn)行普通培養(yǎng)。

項(xiàng)目十二：形態(tài)學(xué)檢查一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查是微生物檢驗(yàn)中經(jīng)常運(yùn)用的技術(shù)，常用細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查方法包括：不染色標(biāo)本檢查和染色標(biāo)本檢查。不染色標(biāo)本的檢查主要用于細(xì)菌的動力檢查，包括壓滴法和懸滴法。壓滴法是將待檢菌液一環(huán)涂在潔凈的玻片中央，覆蓋一潔凈的蓋玻片后置顯微鏡下觀察細(xì)菌的動力。懸滴法是將待檢菌液一環(huán)涂在潔凈的蓋玻片中央，用一潔凈的凹玻片在凹陷周圍涂上凡士林，凹面對準(zhǔn)菌液覆蓋在蓋玻片上，迅速翻轉(zhuǎn)后使菌液懸掛在蓋玻片上，置顯微鏡下觀察細(xì)菌的動力，有鞭毛的細(xì)菌會在鏡下看到運(yùn)動現(xiàn)象。染色標(biāo)本檢查法是用于臨床細(xì)菌檢查必不可少的方法，依據(jù)使用染液的種類多少分單染和復(fù)染色法。單染法就是用一種染料對標(biāo)本進(jìn)行染色的方法，復(fù)染色方法就是用兩種以上的染料對標(biāo)本進(jìn)行染色的方法，臨床最常用的復(fù)染色法有革蘭染色和抗酸染色兩種方法。

項(xiàng)目十三：生物化學(xué)試驗(yàn)一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)細(xì)菌因含有不同的酶故表現(xiàn)出不同的生化特點(diǎn)，依據(jù)其生化反應(yīng)不同可以鑒定細(xì)菌。細(xì)菌生化反應(yīng)種類眾多，歸納起來有：糖類代謝試驗(yàn)、蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)、呼吸酶類試驗(yàn)和其他生化試驗(yàn)。這些試驗(yàn)可以鑒別出不同種類的細(xì)菌。糖類代謝試驗(yàn)包括O/F試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、VP試驗(yàn)等，如：腸桿菌科細(xì)菌O/F試驗(yàn)均為陽性，而非發(fā)酵菌只能氧化分解葡萄糖，不能發(fā)酵葡萄糖。蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)包括吲哚試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)等，如吲哚試驗(yàn)就能鑒別大腸埃希菌和沙門氏菌。呼吸酶類試驗(yàn)包括氧化酶試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)等，如氧化酶試驗(yàn)?zāi)荑b別奈瑟菌和不動桿菌。另外有些細(xì)菌可以在組合生化培養(yǎng)基上表現(xiàn)出不同的生化反應(yīng)現(xiàn)象，幫助臨床鑒定細(xì)菌如KIA試驗(yàn)、MIU試驗(yàn)等，如大腸埃希菌KIA試驗(yàn)結(jié)果為：+/eq\o\ac(○,+)，志賀氏菌KIA試驗(yàn)結(jié)果為：－/+。根據(jù)細(xì)菌的結(jié)構(gòu)不同表現(xiàn)特點(diǎn)不同，也可以進(jìn)行特殊的生化試驗(yàn)，如拉絲試驗(yàn)。G+菌陰性，G—菌陽性。

項(xiàng)目十四：病原性球菌鑒定一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)病原性球菌是臨床標(biāo)本分離培養(yǎng)中常見細(xì)菌，包括葡萄球菌屬、鏈球菌屬、奈瑟菌屬等細(xì)菌。對其鑒定因素包括生長現(xiàn)象、形態(tài)染色和生化反應(yīng)。葡萄球菌屬的細(xì)菌在血平板上可形成圓形、光滑、濕潤、凸起、有色素、有的有溶血現(xiàn)象的菌落。鏈球菌屬的細(xì)菌在血平板上可形成圓形、光滑、濕潤、凸起、灰白色、有α、β、γ溶血現(xiàn)象的小菌落。奈瑟菌屬的細(xì)菌在巧克力培養(yǎng)基上形成光滑、濕潤、扁平、半透明菌落。具有相應(yīng)的生長現(xiàn)象，染色形態(tài)檢查為G+菌的細(xì)菌，繼續(xù)做觸酶試驗(yàn)，觸酶試驗(yàn)（+）為葡萄球菌，觸酶試驗(yàn)（—）為鏈球菌。染色形態(tài)檢查為G-球菌的繼續(xù)做氧化酶試驗(yàn)，氧化酶試驗(yàn)（+）為奈瑟菌，氧化酶試驗(yàn)（-）為不動桿菌。不動桿菌雖不是球菌，但其形態(tài)染色與奈瑟菌易混淆，故需鑒別。鑒定到屬的細(xì)菌再做相應(yīng)生化試驗(yàn)鑒定到種。如金葡菌鑒定除了分屬試驗(yàn)外，還需觀察生長現(xiàn)象，血平板上應(yīng)該具有溶血的生長現(xiàn)象，菌落特征符合，另需要做甘露醇試驗(yàn)（+）、血漿凝固酶試驗(yàn)（+）等生化試驗(yàn)進(jìn)行鑒別。

項(xiàng)目十五：腸桿菌科細(xì)菌鑒定一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)腸桿菌科的細(xì)菌是臨床標(biāo)本分離培養(yǎng)中常見細(xì)菌，包含30多個菌屬，120多個菌種，生物學(xué)性狀相近，因普通染色鏡檢均為革蘭陰性桿菌，所以不能通過染色形態(tài)學(xué)檢查鑒別。對其鑒別的主要手段為生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗(yàn)。從糞便標(biāo)本中分離的腸道桿菌，主要進(jìn)行致病性的鑒別，腸道致病菌與非致病菌的鑒別要點(diǎn)是乳糖分解試驗(yàn)，乳糖分解試驗(yàn)陽性的是腸道非致病菌；乳糖分解試驗(yàn)陰性的是腸道致病菌。從其他臨床標(biāo)本中分離出的腸道桿菌有致病意義。對其鑒別程序一般為分科鑒定，腸桿菌科的細(xì)菌生化特征為OX：—；O/F：+。分屬鑒定包括苯丙氨酸脫氨酶、葡萄糖酸鹽、H2S、鳥氨酸、枸櫞酸鹽利用、動力試驗(yàn)、山梨醇發(fā)酵試驗(yàn)、棉子糖發(fā)酵試驗(yàn)、DNA酶試驗(yàn)、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)等。種的鑒定則有多種生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)。

項(xiàng)目十六：非發(fā)酵菌的鑒定一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)非發(fā)酵菌是指不能發(fā)酵葡萄糖的一大群革蘭陰性桿菌，其普通染色形態(tài)不易與腸道桿菌區(qū)別，但其主要生化反應(yīng)明顯與腸道桿菌不同。非發(fā)酵菌臨床標(biāo)本分離培養(yǎng)中常見細(xì)菌種類有假單胞菌屬、不動桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬等。假單胞菌屬的代表菌種為銅綠假單胞菌，其典型特征是產(chǎn)生水溶性綠色色素并有生姜味，生化反應(yīng)典型：OX:＋,O/F:O/－,精氨酸雙水解酶：＋。不動桿菌的代表菌種是醋酸鈣不動桿菌，典型生化反應(yīng)為：OX:—,O/F:O/－,精氨酸雙水解酶：＋。產(chǎn)堿桿菌屬的代表菌種是糞產(chǎn)堿桿菌，典型生化反應(yīng)為：OX:＋,O/F:K/K。其他非發(fā)酵菌的鑒定一般選擇生化編碼鑒定系統(tǒng)，該系統(tǒng)是將不同的生化試驗(yàn)分組進(jìn)行組合，每個組合不同的結(jié)果將由不同的數(shù)據(jù)表示。在規(guī)定的組合試驗(yàn)中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)，通過編碼本查出相應(yīng)的菌種名稱，臨床使用的主要有API微量快速鑒定系統(tǒng)、非發(fā)酵菌編碼鑒定系統(tǒng)等。

項(xiàng)目十七：厭氧菌的鑒定一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)厭氧菌分為厭氧芽胞梭菌和無芽胞厭氧菌，厭氧芽胞梭菌主要引起創(chuàng)傷感染，無芽胞厭氧菌多數(shù)是人體正常菌群。厭氧芽胞梭菌的感染，臨床主要通過癥狀診斷，需要查找病原菌時主要通過形態(tài)學(xué)檢查，芽胞的位置是鑒定的主要依據(jù)。破傷風(fēng)芽胞位于菌體的頂端，呈球形，菌體細(xì)長，形似火柴棒。產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌芽胞位于菌體中央，并不寬于菌體，繁殖體可見莢膜。肉毒梭菌芽胞位于菌體次級端寬于菌體，菌體形似湯勺。分離厭氧芽胞梭菌常用皰肉培養(yǎng)基，在此培養(yǎng)基上破傷風(fēng)梭菌和肉毒梭菌消化肉渣產(chǎn)生黑色，并有腐敗惡臭。產(chǎn)氣莢膜梭菌在此培養(yǎng)基上不消化肉渣，肉渣為粉紅色，但在牛乳培養(yǎng)基上有“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象，此為其主要特征。血平板上破傷風(fēng)梭菌能形成典型的羽毛狀菌落，產(chǎn)氣莢膜梭菌則能形成雙溶血環(huán)現(xiàn)象。無芽胞厭氧菌的鑒定依據(jù)包括在選擇培養(yǎng)基上的生長情況、菌落形態(tài)、色素、溶血現(xiàn)象，菌落多為單個，革蘭染色配合拉絲試驗(yàn)，結(jié)合抗生素敏感試驗(yàn)，生化試驗(yàn)，氣相色譜分析等進(jìn)行鑒別。

項(xiàng)目十八：分枝桿菌鑒定一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)分枝桿菌屬的細(xì)菌因細(xì)菌分裂有分支趨勢而得名，這一菌屬的細(xì)菌普通染色著色不均，因其含有分枝菌酸故對酸性脫色劑有較強(qiáng)的抵抗力，故抗酸染色為陽性，也稱抗酸菌。臨床最常見的抗酸菌是結(jié)核分枝桿菌，此菌致病性、傳染性均較強(qiáng)，臨床常見疾病是肺結(jié)核，故鑒定環(huán)境生物安全要求較高，從接到標(biāo)本開始到鑒定結(jié)束，都要按具有較強(qiáng)傳染性的過程防范，一般實(shí)驗(yàn)室不做分離培養(yǎng)，某些專門實(shí)驗(yàn)室可以進(jìn)行分離培養(yǎng)。細(xì)菌的生長現(xiàn)象就是該菌的鑒定依據(jù)之一，結(jié)核分枝桿菌生長速度慢，其他分枝桿菌生長速度快。菌落特征各種分枝桿菌差異不大，多為顆粒狀、粗糙型菌落，光產(chǎn)色現(xiàn)象多為陰性，37℃、24℃、42℃培養(yǎng)溫度生長情況也是鑒定依據(jù)。另外尚可做煙酸試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、冷熱觸媒試驗(yàn)等生化試驗(yàn)鑒定分枝桿菌。一般實(shí)驗(yàn)室常做的是標(biāo)本直接染色鏡檢。故該菌痰涂片染色鏡檢是最常用鑒定方法。無論是進(jìn)行分離培養(yǎng)還是染色鏡檢，均需對標(biāo)本進(jìn)行前處理，因該菌對強(qiáng)酸堿有抵抗力，故可用40g/L的

項(xiàng)目十九：病原性真菌鑒定一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)從臨床標(biāo)本中檢出真菌的幾率逐年增高。真菌的鑒定包括生長現(xiàn)象、形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和一些特異性的試驗(yàn)方法。臨床常見真菌包括引起皮膚感染的皮膚癬真菌和引起組織感染的條件致病性真菌。真菌分多細(xì)胞真菌和單細(xì)胞真菌兩種。多細(xì)胞真菌由菌絲和孢子組成，不同形態(tài)的菌絲或孢子是鑒定真菌的主要依據(jù)。單細(xì)胞真菌只有孢子而無菌絲。皮膚癬真菌是引起皮膚、毛發(fā)、指甲病變的感染菌，一般都是多細(xì)胞真菌，對此類疾病診斷通常直接采集皮屑標(biāo)本透明鏡檢，查到菌絲或孢子均可診斷真菌感染。引起組織感染的條件致病性真菌多為白假絲酵母菌和新型隱球菌，可從臨床標(biāo)本中分離出來，對此類真菌可以用生化試驗(yàn)、芽管形成試驗(yàn)、厚膜孢子形成試驗(yàn)、墨汁負(fù)染色檢查鑒定。生化試驗(yàn)的糖同化試驗(yàn)可以鑒定酵母菌，芽管形成試驗(yàn)、厚膜孢子形成試驗(yàn)是白假絲酵母菌的鑒定試驗(yàn)，墨汁負(fù)染色有利于觀察新型隱球菌的典型莢膜形態(tài)，為其主要鑒定試驗(yàn)。

項(xiàng)目二十：擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)一、項(xiàng)目分析二、學(xué)習(xí)指導(dǎo)藥敏試驗(yàn)是測定分離出的病原菌抗菌譜，為臨床抗菌治療疾病提供指導(dǎo)性意見的重要試驗(yàn)。臨床常用藥敏試驗(yàn)的方法有擴(kuò)散法（K-B法）和稀釋法。擴(kuò)散法是一種半定量的方法，此法簡便、易掌握，被臨床廣泛使用，我國以NCCLS標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范此試驗(yàn)。K-B法試驗(yàn)步驟首先配制合格的菌液，將分離好的細(xì)菌以接種環(huán)挑取4～5個菌落接種于3～5mlM-H肉湯中，制備成0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木海詿o菌棉拭蘸取菌液，在管壁上擠去多余的液體，均勻涂布接種到M-H瓊脂平板表面，共三次每次轉(zhuǎn)動60°角，最后沿內(nèi)緣涂抹一周，M-H瓊脂為4mm厚，90mm直徑的平板。3～5分鐘后用無菌鑷子或紙片分配器將藥敏紙片貼于瓊脂平板表面，各紙片中心距離不小于24mm，紙片