鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制課件

鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制1（優(yōu)選）鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制（優(yōu)選）鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制2實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的定義實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的定義3實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的定義質(zhì)量控制(QualityContro,lQ.C)是監(jiān)視全過(guò)程,排除誤差,防止變化,維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過(guò)程。

鑒于鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的重要性,有必要對(duì)其進(jìn)行規(guī)范化管理。鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)控(QualityControloftestYersiniaPestis)是鼠疫微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室為了保證檢驗(yàn)結(jié)果實(shí)事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的定義質(zhì)量控制(QualityContro,l4鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法5室內(nèi)質(zhì)控(InternalQualityControlIQC)是指一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部對(duì)所有影響質(zhì)量的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定并實(shí)施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)。目的是控制本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。室間質(zhì)控(ExternalQualityAssessment簡(jiǎn)稱EQA)簡(jiǎn)稱室間質(zhì)評(píng)。室間質(zhì)控由上級(jí)業(yè)務(wù)單位采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性，這種評(píng)價(jià)是一種回顧性評(píng)價(jià)。室內(nèi)質(zhì)控主要監(jiān)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果的精密度，而室間質(zhì)控主要控制實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度，不互相替代，參與室間質(zhì)控的試驗(yàn)室應(yīng)先做好室內(nèi)質(zhì)控。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法室內(nèi)質(zhì)控(InternalQualityControl6鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法人員與組織管理儀器設(shè)備的質(zhì)控疑似鼠疫材料的采取、保存和運(yùn)輸培養(yǎng)基、染色液、試劑盒等的質(zhì)量控制鼠疫細(xì)菌檢驗(yàn)程序及結(jié)果判定報(bào)告卡的書(shū)寫、疫情上報(bào)及交換室內(nèi)質(zhì)控鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法人員與組織管理儀器設(shè)備的質(zhì)控疑似7室內(nèi)質(zhì)控扎實(shí)的基礎(chǔ)教育和專業(yè)知識(shí)職業(yè)道德和高度的責(zé)任心質(zhì)量管理體系各實(shí)驗(yàn)室制定SOP專業(yè)化的技能培訓(xùn)繼續(xù)教育人員與組織管理室內(nèi)質(zhì)控扎實(shí)的基礎(chǔ)教育和專業(yè)知識(shí)職業(yè)道德和高度的責(zé)任心質(zhì)量管8室內(nèi)質(zhì)控性能試驗(yàn)正確貯存無(wú)菌試驗(yàn)診斷試劑盒(噬菌體等)培養(yǎng)基量pH值試劑的質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)控性能試驗(yàn)正確貯存無(wú)菌試驗(yàn)診斷試劑盒(噬菌體等)培養(yǎng)9室內(nèi)質(zhì)控生物安全柜顯微鏡高壓鍋離心機(jī)培養(yǎng)箱冰箱儀器設(shè)備室內(nèi)質(zhì)控生物安全柜顯微鏡高壓鍋離心機(jī)培養(yǎng)箱冰箱儀器設(shè)備10鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法設(shè)立參比實(shí)驗(yàn)室發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行檢查評(píng)價(jià)定期舉辦各級(jí)培訓(xùn)班派觀察員到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查指導(dǎo)室間質(zhì)控方法鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法設(shè)立參比實(shí)驗(yàn)室發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行檢查評(píng)11室間質(zhì)控的一般檢查項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室的布局SOP制訂及執(zhí)行情況實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)和污染物處理室內(nèi)質(zhì)控執(zhí)行情況及各種紀(jì)錄發(fā)放模擬標(biāo)本(菌種)，規(guī)定時(shí)間內(nèi)反饋至上級(jí)業(yè)務(wù)單位以pH值、軟硬度、鼠疫菌生長(zhǎng)數(shù)量(活菌數(shù))等為綜合指標(biāo)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)控和用已知菌對(duì)噬菌體進(jìn)行質(zhì)控盲點(diǎn)試驗(yàn)，模擬標(biāo)本混入監(jiān)測(cè)標(biāo)本常規(guī)測(cè)定對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，分析錯(cuò)誤原因室間質(zhì)控的一般檢查項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室的布局12鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法13鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法染色鏡檢培養(yǎng)特性噬菌體裂解動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基因檢測(cè)鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法染色鏡檢14鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法鼠疫病原體發(fā)現(xiàn)：1894年，在香港，日本學(xué)者北里柴三郎和法國(guó)學(xué)者亞力山大耶爾森二氏。分類位置：腸桿菌科耶爾森菌屬。生物學(xué)特性分子生物學(xué)特性：6MD、45MD、65MD三種質(zhì)粒；目前已知IS100、IS285、IS1541、IS1661四種插入序列，分布于鼠疫菌質(zhì)粒的染色體基因組中。毒力決定因子:F1抗原，VWa抗原，Pstl，Pgm分型:古典、中世紀(jì)、東方、田鼠變種四個(gè)生物變種；5個(gè)群（A、B、C、D、E群），21個(gè)生態(tài)型。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法鼠疫病原體15

染色鏡檢革蘭氏染色美蘭染色典型的鼠疫菌是短而粗、兩端鈍圓、兩極濃染的橢圓形小桿菌，革蘭氏染色陰性。染色鏡檢革蘭氏染色典型的鼠疫菌16細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)17

病原學(xué)在普通培養(yǎng)基上28－30℃經(jīng)24h，肉眼可見(jiàn)形成薄薄一層淡灰色小菌落,圓形，有光澤，中心稍突起。透過(guò)光線呈灰白色或淡青色，菌落較干燥，鏡下：中央隆起中心發(fā)暗，有粗糙顆粒（黃褐色）周圍有薄而透明的花邊，呈鋸齒狀。培養(yǎng)特性病原學(xué)在普通培養(yǎng)基上28－30℃經(jīng)18Y.PEVY.E耶爾森菌屬三個(gè)致病菌形態(tài)比較Y.PEVY.E耶爾森菌屬三個(gè)致病菌形態(tài)比較19噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)28－30℃24h噬菌帶明顯噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)28－30℃24h噬菌帶明顯20發(fā)放模擬標(biāo)本(菌種)，規(guī)定時(shí)間內(nèi)反饋至上級(jí)業(yè)務(wù)單位觀察1-9天，可以從感染動(dòng)物體內(nèi)檢出鼠疫菌為陽(yáng)性。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法C)是監(jiān)視全過(guò)程,排除誤差,防止變化,維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過(guò)程。鑒于鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的重要性,有必要對(duì)其進(jìn)行規(guī)范化管理。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法引物（2對(duì)各1ul）室間質(zhì)控(ExternalQualityAssessment簡(jiǎn)稱EQA)簡(jiǎn)稱室間質(zhì)評(píng)。室內(nèi)質(zhì)控(InternalQualityControlIQC)是指一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部對(duì)所有影響質(zhì)量的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定并實(shí)施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法分型:古典、中世紀(jì)、東方、田鼠變種四個(gè)生物變種；質(zhì)量控制(QualityContro,lQ.觀察1-9天，可以從感染動(dòng)物體內(nèi)檢出鼠疫菌為陽(yáng)性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)放模擬標(biāo)本(菌種)，規(guī)定時(shí)間內(nèi)反饋至上級(jí)業(yè)務(wù)單位觀察1-921鼠疫菌的基因檢測(cè)病原學(xué)的檢測(cè)鼠疫菌的基因檢測(cè)病22DNA提取水煮法提取可疑鼠疫菌DNA對(duì)于臟器標(biāo)本，在強(qiáng)毒實(shí)驗(yàn)室以無(wú)菌手續(xù)取動(dòng)物的各種臟器(心、肝、脾、肺)約1g，加入到等量生理鹽水中，研碎，100℃水浴中煮沸10min，離心，取上清直接用作PCR模板對(duì)于培養(yǎng)可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于裝有500ul蒸餾水（生理鹽水）的1.5ml離心管中，于沸水浴中煮10min，離心上清液中含有可疑鼠疫菌DNA作為PCR模板。細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取鼠疫菌基因組DNA操作方法可根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。鼠疫菌的基因檢測(cè)DNA提取鼠疫菌的基因檢測(cè)23體系配制PCR-bufferdNTP引物（2對(duì)各1ul）TaqDNA聚合酶模板純水總體積25ul2.5ul2ul4ul1ul（2.5U)1ul14.5ul鼠疫菌的基因檢測(cè)體系配制PCR-bufferdNTP引物（2對(duì)各1ul）T24PCR擴(kuò)增93℃5min90℃1min60℃1min72℃1min30cycle72℃10min4℃保存鼠疫菌的基因檢測(cè)PCR擴(kuò)增93℃5min90℃1min60℃25瓊脂糖凝膠鼠疫菌的基因檢測(cè)瓊脂糖凝膠鼠疫菌的基因檢測(cè)26拍照鼠疫菌的基因檢測(cè)拍照鼠疫菌的基因檢測(cè)27臟器懸液基因檢測(cè)：FI特異性片249bp，Pla特異性片456bp臟器懸液基因檢測(cè)：FI特異性片249bp，Pla特異性片4528菌懸液基因檢測(cè)：FI特異性片249bp，Pla特異性片456bp菌懸液基因檢測(cè)：FI特異性片249bp，Pla特異性片45629身體健康，學(xué)習(xí)進(jìn)步！身體健康，學(xué)習(xí)進(jìn)步！鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制31（優(yōu)選）鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制（優(yōu)選）鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制32實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的定義實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的定義33實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的定義質(zhì)量控制(QualityContro,lQ.C)是監(jiān)視全過(guò)程,排除誤差,防止變化,維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過(guò)程。

鑒于鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的重要性,有必要對(duì)其進(jìn)行規(guī)范化管理。鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)控(QualityControloftestYersiniaPestis)是鼠疫微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室為了保證檢驗(yàn)結(jié)果實(shí)事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的定義質(zhì)量控制(QualityContro,l34鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法35室內(nèi)質(zhì)控(InternalQualityControlIQC)是指一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部對(duì)所有影響質(zhì)量的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定并實(shí)施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)。目的是控制本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。室間質(zhì)控(ExternalQualityAssessment簡(jiǎn)稱EQA)簡(jiǎn)稱室間質(zhì)評(píng)。室間質(zhì)控由上級(jí)業(yè)務(wù)單位采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性，這種評(píng)價(jià)是一種回顧性評(píng)價(jià)。室內(nèi)質(zhì)控主要監(jiān)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果的精密度，而室間質(zhì)控主要控制實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度，不互相替代，參與室間質(zhì)控的試驗(yàn)室應(yīng)先做好室內(nèi)質(zhì)控。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法室內(nèi)質(zhì)控(InternalQualityControl36鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法人員與組織管理儀器設(shè)備的質(zhì)控疑似鼠疫材料的采取、保存和運(yùn)輸培養(yǎng)基、染色液、試劑盒等的質(zhì)量控制鼠疫細(xì)菌檢驗(yàn)程序及結(jié)果判定報(bào)告卡的書(shū)寫、疫情上報(bào)及交換室內(nèi)質(zhì)控鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法人員與組織管理儀器設(shè)備的質(zhì)控疑似37室內(nèi)質(zhì)控扎實(shí)的基礎(chǔ)教育和專業(yè)知識(shí)職業(yè)道德和高度的責(zé)任心質(zhì)量管理體系各實(shí)驗(yàn)室制定SOP專業(yè)化的技能培訓(xùn)繼續(xù)教育人員與組織管理室內(nèi)質(zhì)控扎實(shí)的基礎(chǔ)教育和專業(yè)知識(shí)職業(yè)道德和高度的責(zé)任心質(zhì)量管38室內(nèi)質(zhì)控性能試驗(yàn)正確貯存無(wú)菌試驗(yàn)診斷試劑盒(噬菌體等)培養(yǎng)基量pH值試劑的質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)控性能試驗(yàn)正確貯存無(wú)菌試驗(yàn)診斷試劑盒(噬菌體等)培養(yǎng)39室內(nèi)質(zhì)控生物安全柜顯微鏡高壓鍋離心機(jī)培養(yǎng)箱冰箱儀器設(shè)備室內(nèi)質(zhì)控生物安全柜顯微鏡高壓鍋離心機(jī)培養(yǎng)箱冰箱儀器設(shè)備40鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法設(shè)立參比實(shí)驗(yàn)室發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行檢查評(píng)價(jià)定期舉辦各級(jí)培訓(xùn)班派觀察員到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查指導(dǎo)室間質(zhì)控方法鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法設(shè)立參比實(shí)驗(yàn)室發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行檢查評(píng)41室間質(zhì)控的一般檢查項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室的布局SOP制訂及執(zhí)行情況實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)和污染物處理室內(nèi)質(zhì)控執(zhí)行情況及各種紀(jì)錄發(fā)放模擬標(biāo)本(菌種)，規(guī)定時(shí)間內(nèi)反饋至上級(jí)業(yè)務(wù)單位以pH值、軟硬度、鼠疫菌生長(zhǎng)數(shù)量(活菌數(shù))等為綜合指標(biāo)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)控和用已知菌對(duì)噬菌體進(jìn)行質(zhì)控盲點(diǎn)試驗(yàn)，模擬標(biāo)本混入監(jiān)測(cè)標(biāo)本常規(guī)測(cè)定對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，分析錯(cuò)誤原因室間質(zhì)控的一般檢查項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室的布局42鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法43鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法染色鏡檢培養(yǎng)特性噬菌體裂解動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基因檢測(cè)鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法染色鏡檢44鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法鼠疫病原體發(fā)現(xiàn)：1894年，在香港，日本學(xué)者北里柴三郎和法國(guó)學(xué)者亞力山大耶爾森二氏。分類位置：腸桿菌科耶爾森菌屬。生物學(xué)特性分子生物學(xué)特性：6MD、45MD、65MD三種質(zhì)粒；目前已知IS100、IS285、IS1541、IS1661四種插入序列，分布于鼠疫菌質(zhì)粒的染色體基因組中。毒力決定因子:F1抗原，VWa抗原，Pstl，Pgm分型:古典、中世紀(jì)、東方、田鼠變種四個(gè)生物變種；5個(gè)群（A、B、C、D、E群），21個(gè)生態(tài)型。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)方法鼠疫病原體45

染色鏡檢革蘭氏染色美蘭染色典型的鼠疫菌是短而粗、兩端鈍圓、兩極濃染的橢圓形小桿菌，革蘭氏染色陰性。染色鏡檢革蘭氏染色典型的鼠疫菌46細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)47

病原學(xué)在普通培養(yǎng)基上28－30℃經(jīng)24h，肉眼可見(jiàn)形成薄薄一層淡灰色小菌落,圓形，有光澤，中心稍突起。透過(guò)光線呈灰白色或淡青色，菌落較干燥，鏡下：中央隆起中心發(fā)暗，有粗糙顆粒（黃褐色）周圍有薄而透明的花邊，呈鋸齒狀。培養(yǎng)特性病原學(xué)在普通培養(yǎng)基上28－30℃經(jīng)48Y.PEVY.E耶爾森菌屬三個(gè)致病菌形態(tài)比較Y.PEVY.E耶爾森菌屬三個(gè)致病菌形態(tài)比較49噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)28－30℃24h噬菌帶明顯噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)28－30℃24h噬菌帶明顯50發(fā)放模擬標(biāo)本(菌種)，規(guī)定時(shí)間內(nèi)反饋至上級(jí)業(yè)務(wù)單位觀察1-9天，可以從感染動(dòng)物體內(nèi)檢出鼠疫菌為陽(yáng)性。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法C)是監(jiān)視全過(guò)程,排除誤差,防止變化,維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過(guò)程。鑒于鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的重要性,有必要對(duì)其進(jìn)行規(guī)范化管理。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法引物（2對(duì)各1ul）室間質(zhì)控(ExternalQualityAssessment簡(jiǎn)稱EQA)簡(jiǎn)稱室間質(zhì)評(píng)。室內(nèi)質(zhì)控(InternalQualityControlIQC)是指一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部對(duì)所有影響質(zhì)量的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定并實(shí)施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)。鼠疫病原學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制方法分型:古典、中世紀(jì)、東方、田鼠變種四個(gè)生物變種；質(zhì)量控制(QualityContro,lQ.觀察1-9天，可以從感染動(dòng)物體內(nèi)檢出鼠疫菌為陽(yáng)性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)放模擬標(biāo)本(菌種)，規(guī)定時(shí)間內(nèi)反饋至上級(jí)業(yè)務(wù)單位觀察1-951鼠疫菌的基因檢測(cè)病原學(xué)的檢測(cè)鼠疫菌的基因檢測(cè)病52DNA提取水煮法提取可疑鼠疫菌DNA對(duì)于臟器標(biāo)本，在強(qiáng)毒實(shí)驗(yàn)室以無(wú)菌手續(xù)取動(dòng)物的各種臟器(心、肝、脾、肺)約1g，加入到等量生理鹽水中，研碎，100℃水浴中煮