臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量管理體系的建立第1頁，共32頁。From福建省臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化培訓(xùn)暨技術(shù)人員培訓(xùn)班衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心李金明第2頁，共32頁。ContentsPCR技術(shù)介紹；質(zhì)量管理體系的建立；質(zhì)量保證；質(zhì)控規(guī)則；第3頁，共32頁。PCR技術(shù)高溫TargetSequenceTargetSequence較低溫度Primer1Primer2TargetSequence最適溫度123第4頁，共32頁。實(shí)時(shí)熒光定量PCR模板起始濃度越高，熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到域值所需的循環(huán)數(shù)越少，即Ct值越小。熒光值未知濃度樣本循環(huán)數(shù)n循環(huán)數(shù)n熒光值已知濃度系列標(biāo)準(zhǔn)品模板起始濃度的常用對數(shù)與Ct值呈負(fù)線性關(guān)系。log起始濃度Ct值標(biāo)準(zhǔn)曲線第5頁，共32頁。無基因無核酸的重要性嚴(yán)格分區(qū)（一區(qū)→二區(qū)→三區(qū)）；開窗通風(fēng)；用次氯酸鈉擦洗地面和臺(tái)面，甚至墻面；增長紫外照射的時(shí)間；用75%乙醇空中噴霧；實(shí)驗(yàn)前的處理程序和實(shí)驗(yàn)后的處理程序；第6頁，共32頁。核酸污染的來源臨床標(biāo)本中存在的大量待測微生物科研中得到的質(zhì)粒克隆以前分析研究的特定微生物大量存在于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的特定微生物以前擴(kuò)增產(chǎn)物的殘留污染。這也是PCR實(shí)驗(yàn)室最容易產(chǎn)生的，將造成假陽性的“污染”。Next第7頁，共32頁。質(zhì)量體系文件的編寫基本原則：最有效+符合實(shí)際；三大特性：①法規(guī)性：一旦批準(zhǔn)必須認(rèn)真執(zhí)行；②唯一性：一個(gè)檢驗(yàn)活動(dòng)只能有唯一的操作程序；③適用性：要符合實(shí)際，具有可操作性；SOP包含的內(nèi)容：5W+1H；SOP呈現(xiàn)方式：圖片+文字；第8頁，共32頁。PCR實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量體系文件檢測項(xiàng)目的性能驗(yàn)證；項(xiàng)目檢測的SOP;儀器和設(shè)備的操作SOP；儀器和設(shè)備的維護(hù)SOP；

人員的技術(shù)檔案；各種記錄表格；第9頁，共32頁。表格記錄第10頁，共32頁。第11頁，共32頁。第12頁，共32頁。第13頁，共32頁。儀器設(shè)備的維護(hù)校準(zhǔn)SOP日維護(hù)周維護(hù)定期維護(hù)劑量單位校準(zhǔn)廠家校準(zhǔn)第14頁，共32頁。人員的技術(shù)檔案記錄一人一個(gè)檔案；個(gè)人基本情況；培訓(xùn)證和上崗證；論文、著作、成果等；培訓(xùn)考核記錄等；第15頁，共32頁。儀器設(shè)備的技術(shù)檔案一臺(tái)儀器一個(gè)檔案；儀器的基本情況；儀器的使用說明書；儀器校準(zhǔn)的記錄；維修維護(hù)的記錄等；Next第16頁，共32頁。室內(nèi)質(zhì)量控制由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度；旨在監(jiān)測和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批內(nèi)和批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測定工作的結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作；改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，即對試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出并嚴(yán)格執(zhí)行“標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）”。第17頁，共32頁。室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存中的關(guān)鍵點(diǎn):容器——密閉、一次性、無菌、無核酸酶及擴(kuò)增抑制物；采集方法——人員訓(xùn)練有素、防污染、保存時(shí)間和溫度；合格標(biāo)本——容器完整、量夠、時(shí)間符合要求、外觀符合要求、要猜到病原體等；第18頁，共32頁。第49-51頁第19頁，共32頁。第20頁，共32頁。第21頁，共32頁。為客觀比較一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)和客觀地評價(jià)實(shí)驗(yàn)室的測定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性，這是對實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性評價(jià)，而不是用來決定在實(shí)時(shí)的測定結(jié)果的可接受性。室間質(zhì)量評價(jià)第22頁，共32頁。第23頁，共32頁。第24頁，共32頁。室間質(zhì)評的檔案袋申請表；接收記錄；保存記錄；實(shí)驗(yàn)記錄；結(jié)果上報(bào)表；結(jié)果匯報(bào)表；分析和改進(jìn)內(nèi)容；Next第25頁，共32頁。質(zhì)控規(guī)則質(zhì)控規(guī)則的功能：判斷測定批的失控還是在控；失控處理：查出原因；采取措施；保證消除；不再出現(xiàn)；納入標(biāo)準(zhǔn)；防止同樣的問題出現(xiàn)第二次是質(zhì)量管理的“精髓”。第26頁，共32頁。符號(hào)

定義12S

一個(gè)質(zhì)控測定值超出±2s控制限。13S

一個(gè)質(zhì)控測定值超出±3s控制限。22S

兩個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超出+2s或－2s控制限。R4S

同一批測定中，兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測定值之間的差值超出4s控制限。41S

四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)超出+1s或－1s控制限。7T

七個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值呈現(xiàn)一個(gè)向上或向下的趨勢變化。10X

十個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測定值同時(shí)處于均值的同一側(cè)。質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及其定義第27頁，共32頁。“即刻法”和Levey-Jennings質(zhì)控圖法“即刻法”的實(shí)質(zhì)是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，即Grubs異常值取舍法；只要有3個(gè)以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。Levey-Jennings質(zhì)控圖法：穩(wěn)定條件下，20個(gè)室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果不應(yīng)有多于1個(gè)結(jié)果超過2SD限度；在1000個(gè)測定結(jié)果中超過3SD的結(jié)果不多于3個(gè)。質(zhì)控方法第28頁，共32頁?！凹纯谭ā痹趧傞_始進(jìn)行質(zhì)控時(shí)，可以采用“即刻法”進(jìn)行質(zhì)控，當(dāng)日常有效測定次數(shù)超過20次時(shí)，轉(zhuǎn)入使用Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控的方法進(jìn)行質(zhì)控。第29頁，共32頁。Levey-Jennings質(zhì)控圖第30頁，共32頁。Thankyou！Theend.第31頁，共32頁。內(nèi)容梗概臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量管理體系的建立。衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心李金明。模板起始濃度越高，熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到域值所需的循環(huán)數(shù)越少，即Ct值越小。無基因無核酸的重要性。實(shí)驗(yàn)前的處理程序和實(shí)驗(yàn)后的處理程序。這也是PCR實(shí)驗(yàn)室最容易產(chǎn)生的，將造成假陽性的“污染”。論文、著作、成果等。由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度。旨在監(jiān)測和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批內(nèi)和批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測定工作的結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，即對試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出并嚴(yán)格執(zhí)行“標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）”。容器——密閉、一次性、無菌、無核酸酶及擴(kuò)增抑制物。采集方法——人員訓(xùn)練有素、防污染、保存時(shí)間和溫度。合格標(biāo)