當(dāng)前國(guó)際水產(chǎn)品藥殘限量與檢測(cè)方法課件

當(dāng)前國(guó)際市場(chǎng)水產(chǎn)品藥殘限量標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)技術(shù)要求主要內(nèi)容一、國(guó)際市場(chǎng)水產(chǎn)品藥殘限量標(biāo)準(zhǔn)二、獸藥殘留檢驗(yàn)技術(shù)一、國(guó)際市場(chǎng)水產(chǎn)品藥殘限量標(biāo)準(zhǔn)1、日本“肯定列表制度”及其限量標(biāo)準(zhǔn)2、歐盟國(guó)家水產(chǎn)品藥殘限量3、美國(guó)水產(chǎn)品獸藥殘留限量日本“肯定列表制度”限量標(biāo)準(zhǔn)肯定列表制度”是日本為加強(qiáng)食品中農(nóng)業(yè)化學(xué)品殘留管理而采取的一項(xiàng)新舉措。在該制度下，日本對(duì)所有農(nóng)業(yè)化學(xué)品（個(gè)別豁免物質(zhì)除外）在所有食品中的殘留均制定了嚴(yán)格的限量要求：對(duì)于日本認(rèn)為有科學(xué)依據(jù)的則制定限量要求，對(duì)于無科學(xué)依據(jù)的物質(zhì)則采用0.01mg/kg的一律標(biāo)準(zhǔn)。日本“肯定列表制度”限量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于日本認(rèn)為有科學(xué)依據(jù)的具體限量指標(biāo)，共有數(shù)據(jù)67140條。其中現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)10118條；暫定標(biāo)準(zhǔn)56752條；其他標(biāo)準(zhǔn)為270條。日本已制定“暫行標(biāo)準(zhǔn)”而我國(guó)沒有限量標(biāo)準(zhǔn)的農(nóng)業(yè)化學(xué)品492種，33418項(xiàng)，涉及食品626種。日本“肯定列表制度”限量標(biāo)準(zhǔn)目前，海南出口的水產(chǎn)品主要包括了羅非魚、凍蝦仁、巴町魚、金槍魚等等。所涉及到的檢測(cè)項(xiàng)目包括了氯霉素、硝基呋喃類、喹諾酮類、磺胺類、四環(huán)素以及孔雀石綠等。其中，在日本“肯定列表制度”中，氯霉素和硝基呋喃類為不得檢出；恩諾沙星的限量殘留是0.1ppm；磺胺類藥物異惡唑的殘留限量同樣為0.1ppm；四環(huán)素為0.2ppm；孔雀石綠則是1.0ppb。歐盟國(guó)家水產(chǎn)品藥殘限量歐盟發(fā)布《食品法律綠皮書》，于2001年發(fā)布《食品安全白皮書》。歐盟發(fā)布《關(guān)于制定動(dòng)物源性食品中獸藥最高殘留限量的共同程序》，現(xiàn)行2005年版限量標(biāo)準(zhǔn)有較大修改，指標(biāo)更嚴(yán)格。歐盟理事會(huì)令2004/41/EC指令和2004/852EC、2004/8523EC、2004/854EC、

2004/882EC等四個(gè)新規(guī)章，強(qiáng)調(diào)了食品安全生產(chǎn)和管理鏈條的全過程管理歐盟國(guó)家水產(chǎn)品藥殘限量2002年6月10日歐盟修訂2002/69/EC決議（2002/441/EC決議），恢復(fù)我國(guó)大西洋捕撈的甲殼類、三種進(jìn)口后來料/進(jìn)料加工的魚片、腸衣等進(jìn)口，但要進(jìn)行嚴(yán)格的檢驗(yàn)，抽檢20%至2002年9月歐盟采取的上述措施已經(jīng)使我國(guó)動(dòng)物源食品面臨著全部退出歐盟市場(chǎng)的危險(xiǎn)。此外，韓國(guó)、捷克、阿根廷等國(guó)也對(duì)我國(guó)提出了類似的要求歐盟水產(chǎn)品獸藥殘留限量指標(biāo)

序號(hào)獸藥中文名稱最高限量法規(guī)編號(hào)/標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物中文名稱1屬于磺胺類的所有藥物100（μg/kg）（EC）No508-1999所有用于生產(chǎn)食品的動(dòng)物類2氯霉素0（μg/kg）（EC）No508-1999所有食品動(dòng)物3硝基呋喃0（μg/kg）（EC）No508-1999所有食品動(dòng)物4四環(huán)素300（μg/kg）（EC）No508-1999所有用于生產(chǎn)食品的動(dòng)物類5青霉素50（μg/kg）（EC）No508-1999所有用于生產(chǎn)食品的動(dòng)物類6恩諾沙星5（μg/kg）（EC）No508-1999所有用于生產(chǎn)食品的動(dòng)物類7孔雀石綠1（μg/kg）（EC）No508-1999所有用于生產(chǎn)食品的動(dòng)物類8氟甲喹200（μg/kg）（EC）No1181-2002美國(guó)水產(chǎn)品獸藥殘留限量2005年我國(guó)對(duì)美出口達(dá)28.38億，近年來，因輸美產(chǎn)品屢次出現(xiàn)藥殘超標(biāo)問題，美官方對(duì)我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品采用嚴(yán)格的檢測(cè)措施，并數(shù)次考察我國(guó)動(dòng)物疫病及藥物殘留狀況。2006年上半年，我輸美水產(chǎn)品蝦、羅非魚、鰻魚等產(chǎn)品數(shù)次被美方檢出有氯霉素、呋喃唑酮、孔雀石綠等禁用藥物。二、獸藥殘留技術(shù)分析方法要求靈敏度——檢測(cè)低限準(zhǔn)確度精密度回收率抗干擾——避免假陽性和假陰性分析速度二、獸藥殘留技術(shù)常用分析方法1、試劑盒方法優(yōu)點(diǎn):分析速度快，靈敏度高缺點(diǎn):不能準(zhǔn)確定性，常有假陽性干擾，難以排除適用范圍:篩選方法2、液相方法優(yōu)點(diǎn):分析范圍廣缺點(diǎn):定性能力還有欠缺適用范圍:確證方法3、液質(zhì)聯(lián)用方法優(yōu)點(diǎn):分析范圍廣，可同時(shí)分析多組分，定性準(zhǔn)確缺點(diǎn):昂貴適用范圍:確證方法獸藥殘留技術(shù)1、氯霉素2、硝基呋喃類3、孔雀石綠和結(jié)晶紫4、喹喏酮類抗生素5、四環(huán)素族抗生素重要的獸藥1、氯霉素作用用途氯霉素Chloramphenicol作用機(jī)理：影響蛋白質(zhì)的合成?？股仡愃?。有廣譜抑菌作用，尤其對(duì)傷寒，副傷寒感菌作用更強(qiáng)臨床主要用于傷寒，副傷寒，也用于其它敏感菌的感染。飼料添加劑，動(dòng)物疾病治療。1、氯霉素有關(guān)規(guī)定FAO/WHO在1994年的第四十二屆食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)會(huì)議上作出“由氯霉素引起的再生障礙性貧血與劑量無關(guān)，因此不可能通過制定最高殘留限量來加以限制?！币虼耸恰安辉O(shè)定”美國(guó)和加拿大不容許氯霉素用于最終為人類食用的動(dòng)物身上；僅批準(zhǔn)用于寵養(yǎng)動(dòng)物疾病的治療，如貓、狗和馬歐盟的96/23(EEC)指令中把氯霉素列入禁用藥日本規(guī)定所有最終為人類所食用的動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留的容許量必須為零。中國(guó)在2000版的獸藥典中已將氯霉素撤銷，并于2002年5月15日起全面禁止作為獸藥使用1、氯霉素分析方法篩選方法

ELISA

GC/MS,LC/MS確證方法

GC/MS

LC/MS-MS測(cè)定低限至少要達(dá)到:0.3μg/kgorL1、氯霉素LC-MS/MS標(biāo)準(zhǔn)譜圖2、硝基呋喃類相關(guān)情況2002年3月:泰國(guó)、越南、印尼、印度、孟加拉，77個(gè)樣品中有16個(gè)含量超標(biāo)。荷蘭和英國(guó)水產(chǎn)品中檢出。牛、豬和雞飼養(yǎng)中，作為飼料添加劑廣泛使用，用于治療腸和胃的傳染病。歐盟指令96/23/EC:

硝基呋喃類藥物是A類禁用藥。中國(guó):2002.5起禁止使用。海南:呋喃西林和呋喃唑酮常檢出。

2、硝基呋喃類毒理學(xué)呋喃唑酮、硝呋氨氧腙

-誘導(dǎo)有機(jī)體突變的物質(zhì)

-致癌物質(zhì)代謝物:AOZ致突變其他硝基呋喃類

-缺少數(shù)據(jù)

-被EMEA(歐洲藥品評(píng)估局）分類在AnnexIV(Juy1993)

2、硝基呋喃類藥物(代謝)動(dòng)力學(xué)迅速代謝,半衰期不超過幾個(gè)小時(shí)。以母體形式迅速排泄。用14C-標(biāo)記呋喃唑酮研究，殘留物是以同蛋白質(zhì)結(jié)合狀態(tài)存在。2、硝基呋喃類測(cè)定方法飼料測(cè)定原藥:HPLCLC-MS/MS組織中測(cè)定代謝物L(fēng)C-MS/MS

-呋喃唑酮(AOZ)

-呋喃西林

(SEM)

-呋喃它酮

(AMOZ)

-呋喃妥因

(AHD)

測(cè)定低限至少要達(dá)到:0.5μg/kgorL2、硝基呋喃類標(biāo)準(zhǔn)譜圖3、孔雀石綠和結(jié)晶紫孔雀石綠的基本性質(zhì)

用途預(yù)防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等為了延長(zhǎng)魚生存的時(shí)間、魚死亡后顏色較為鮮亮毒性高毒素、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用

法規(guī)許多國(guó)家都將孔雀石綠列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物我國(guó)于2002年5月將孔雀石綠列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》中，禁止用于所有食品動(dòng)物3、孔雀石綠和結(jié)晶紫檢測(cè)方法代謝孔雀石綠和結(jié)晶紫在體內(nèi)內(nèi)會(huì)代謝成不溶于水的隱性孔雀石綠和隱性結(jié)晶紫，因此，在檢測(cè)時(shí)要同時(shí)檢測(cè)母體和代謝產(chǎn)物?？兹甘G和結(jié)晶紫及其代謝產(chǎn)物均容易氧化，在強(qiáng)光環(huán)境中降解很快，因此，檢測(cè)時(shí)要避光，加入抗氧化劑來防止降解。

分析方法HPLC

LOD0.5~2ppb；母體，紫外；代謝物，熒光。HPLC/MS/MSLOD0.5ppb；試劑盒方法。

3、孔雀石綠和結(jié)晶紫液相檢測(cè)方法/液質(zhì)確證方法

稱樣：稱取5.000g樣品提?。?5mL乙腈提取酸化：加2mL檸檬酸/鹽酸羥胺混合溶液凈化：過MCX小柱，甲醇洗滌定容：乙酸銨甲醇溶液1.5mL洗脫，鹽酸羥胺溶液定容至2.0mL檢測(cè)：LC-FLD/UV檢測(cè)，外標(biāo)法定量確證：對(duì)陽性樣品，以LC-MS/MS確證3、孔雀石綠和結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)譜圖4、喹諾酮類抗生素性質(zhì)

相對(duì)新的合成抗生素

治療尿路感染 廣譜性第一代:萘啶酸,惡喹酸(人口服較多)第二代:氟喹喏酮類(更有效)監(jiān)控藥物惡喹酸恩諾沙星、環(huán)丙沙星、丹諾沙星、沙拉沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、氟甲喹分析:HPLC+紫外/熒光檢測(cè)器；LC-MS/MSLOD：5μg/kg4、喹諾酮類抗生素液相檢測(cè)方法/液質(zhì)確證方法稱樣稱取5.000克樣品提取10mL乙腈提取凈化10mL正己烷除酯濃縮加1mL異丙醇，氮?dú)獯蹈啥ㄈ輽幟仕嵋宜徜@緩沖鹽定容測(cè)定LC-FLD測(cè)定，外標(biāo)法定量確證對(duì)陽性樣品，進(jìn)行LC-MS/MS確證4、喹諾酮類抗生素標(biāo)準(zhǔn)譜圖5、四環(huán)素族抗生素四環(huán)素族Tetracyclines獸醫(yī)上>65%使用的抗生素治療呼吸道疾病廣譜性靶組織:骨骼(給藥后數(shù)月乃可發(fā)現(xiàn))監(jiān)控藥物:土霉素，金霉素，四環(huán)