蛋白與核酸作用檢測1-luciferase報(bào)告基因系統(tǒng)_第1頁
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文檔簡介

：3-：Luciferase報(bào) 系概述Luciferase報(bào)告 (fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成然后可以通過熒光測定儀也稱化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可 啟動(dòng)子區(qū)DNA 粒，如pGL3-basic等。將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞或其它相關(guān)的細(xì)胞系。如果此轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動(dòng)子，則熒光素酶就會(huì)表達(dá)，熒光目的檢測轉(zhuǎn)錄因子與目 啟動(dòng)子區(qū)DNA相互作步驟使用PromegaDual-luciferaseReporterAssaySystem行檢測2416~24h,待細(xì)胞匯片至70~80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染；將Luciferase報(bào)告 質(zhì)粒、Renilla對(duì)照質(zhì)粒及其它質(zhì)粒（根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定）共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。每組設(shè)3個(gè)平行孔，37°C，5%CO2條件下培養(yǎng)24h；μl1XPassiveLysisBuffer，輕微振蕩，室溫15min；打幵MolsM微孔板型多功能光度計(jì)，預(yù)熱后，設(shè)置相應(yīng)參數(shù)。自動(dòng)注射器進(jìn)樣體積25μl；注射后在讀數(shù)前的延

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