實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作課件

考試時(shí)間：11月12日考試地點(diǎn)：圖書(shū)館電子閱覽室時(shí)間三樓二樓8:301002-12611263-13129:301314-14721474-154110:301542-17511752-1904

一、盡量選擇與人類(lèi)相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1．結(jié)構(gòu)和功能的相似性皮膚結(jié)構(gòu)人類(lèi)小豬皮膚2.0（0.5～3.0）1.3～1.5表皮0.07～0.170.06～0.07真皮1.7～2.00.93·1.7基底細(xì)胞層所處的深度0.070.03~0.07表皮和真皮厚度的比例1：241：24實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的基本原則2．時(shí)象或年齡狀態(tài)的相似性3．群體分布的相似性與人群具有相似的自然群體基因的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物類(lèi)別為封閉群動(dòng)物。二、選用解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟮膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物

家兔頸部的交感神經(jīng)、迷走神經(jīng)和主動(dòng)脈減壓神經(jīng)是獨(dú)立行走的，如要觀察減壓神經(jīng)對(duì)心臟等作用時(shí)，須選用家兔；家兔對(duì)體溫變化十分靈敏，適于發(fā)熱、解熱和檢查致熱原等實(shí)驗(yàn)研究；

三、根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同品種、品系的特點(diǎn)選擇1、嗎啡對(duì)兔、犬、猴起中樞抑制，而小鼠和貓是中樞興奮。2、津白1號(hào)為低癌系而津白2號(hào)為高癌系。四、根據(jù)課題研究的目的、內(nèi)容、水平，選用相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物近交系動(dòng)物遺傳的均質(zhì)性及實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的穩(wěn)定性較封閉群動(dòng)物好，但生存抵抗力差；封閉群動(dòng)物能較好地代表自然群體；F1雜交群動(dòng)物在一定程度上兼有近交系及封閉群的特點(diǎn)。

教學(xué)示范選用普通級(jí)動(dòng)物，清潔級(jí)動(dòng)物是國(guó)內(nèi)科研工作要求的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物，適合于大多數(shù)科研課題，而SPF動(dòng)物則是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)于一些具有國(guó)際交流意義的重大課題，最好選用SPF動(dòng)物，但無(wú)菌及悉生動(dòng)物為非常規(guī)動(dòng)物，僅在特殊課題需要時(shí)才選用。七、經(jīng)濟(jì)性原則

八、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的外推

九、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和應(yīng)用應(yīng)注意有關(guān)國(guó)際規(guī)范

第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定一、小鼠的抓取與固定二、大鼠的抓取與固定四、兔的抓取與固定五、犬的抓取與固定第二節(jié)性別鑒定和標(biāo)記一、性別鑒定

1、嚙齒目

二、動(dòng)物的標(biāo)記1、染色法3%-5%苦味酸溶液，可染成黃色。0.5%中性紅或品紅溶液,可染成紅色。2、耳號(hào)鉗標(biāo)記法3、掛牌法4、斷趾編號(hào)

5、籠子編號(hào)

第三節(jié)常規(guī)采血方法一、小鼠采血1．剪尾采血2．摘除眼球采血3．眼眶采血4、心臟采血

二、大鼠采血1、眼眶采血2、股靜脈或股動(dòng)脈采血3、腹主動(dòng)脈采血

三、家兔采血1、耳靜脈采血2、心臟采血四、犬采血1、前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈采血2、頸動(dòng)脈采血第四節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉方法1、呼入法：多選用乙醚作麻醉藥。本法最適合于大、小鼠的短期操作試驗(yàn)的麻醉。2、腹腔或靜脈給藥麻醉法：硫噴妥鈉、戊巴比妥鈉、氯胺酮、水合氯醛第五節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥方法1、小鼠灌胃給藥將喂管順咽后壁輕輕往下推，喂管會(huì)順著食管滑入小鼠的胃，插入深度約3cm。2．注射給藥（1）皮下注射給藥作皮下注射常選項(xiàng)背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。將皮膚提起，注射針頭取一鈍角角度刺入皮下，把針頭輕輕向左右擺動(dòng)，易擺動(dòng)則表示已刺入皮下，再輕輕抽吸。注射量約為0.1-0.3ml/10g體重。（2）皮內(nèi)注射給藥接種、過(guò)敏實(shí)驗(yàn)等一般作皮內(nèi)注射。先將注射部位的被毛剪掉，局部常規(guī)消毒，左手拇指和食指按住皮膚使之繃緊，用4.5針頭穿刺，針頭進(jìn)入皮膚淺層，再向上挑起并梢刺入，將藥液注入皮內(nèi)。注射后皮膚出現(xiàn)一白色小皮丘，而皮膚上的毛孔極為明顯。注射量為0.1ml/次。（3）肌肉注射給藥小鼠體積小，肌肉少，很少采用肌肉注射。當(dāng)給小鼠注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí)，采用肌肉注射。用藥量不超過(guò)0.1ml/10g體重。(4)靜脈注射給藥用75%酒精棉球反復(fù)擦拭尾部,以達(dá)到消毒和使尾部血管擴(kuò)張的目的.以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè),使靜脈更為充盈,右手持4號(hào)針頭注射器,使針頭與靜脈平行(小于30°角),從尾巴的下1/4處進(jìn)針,注射量為0.05-0.1ml/10g體重。

（5）腹腔注射使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部，在下腹部靠近腹白線(xiàn)的兩側(cè)進(jìn)行穿刺，保持針尖不動(dòng)，回抽針?biāo)?，如無(wú)回血、腸液和尿液后即可注射藥液。注射量為0.1-0.2ml/10g體重。家兔給藥1、灌胃給藥使用開(kāi)口器和導(dǎo)尿管灌胃。2、靜脈給藥先拔去注射部位的被毛，用手指彈動(dòng)或輕揉兔耳，使靜脈充盈，右手持注射器連6號(hào)針頭盡量從靜脈的遠(yuǎn)端刺入，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。3、涂布法給藥犬給藥灌胃給藥?kù)o脈注射靜脈注射多選前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射。人與動(dòng)物及各種動(dòng)物間藥物劑量的換算方法Meeh-Rubner氏公式：

A（體表面積，m2）=K×W(體重，g)

2／3÷1000K為常數(shù)，隨動(dòng)物不同而不同：小鼠和大鼠9.1豚鼠9.8家兔10.1狗11.2猴11.8人10.6

某利尿藥大鼠灌胃給藥時(shí)的劑量為250mg/kg,試粗略估計(jì)狗灌胃給藥可以試用的劑量。大鼠體表面積A=9.1×2002／3÷1000=0.0311m2250×0.2÷0.0311=1608mg/m2狗體表面積A=11.2×100002／3÷1000=0.5198m21608×0.5198÷10=84mg/kg動(dòng)物種類(lèi)Meeh-Rubner氏公式K值mg/kg-mg/m2轉(zhuǎn)換因子每kg體重占有體表相對(duì)比值小鼠9.131.0（0.02kg）大鼠9.160.47（0.20kg）豚鼠9.880.40（0.40kg）兔10.1120.24（2.0kg）狗11.2190.16（10.0kg）猴11.8120.24（3.0kg）人10.6350.08（50.0kg）250×6（大鼠轉(zhuǎn)換因子）÷19（犬轉(zhuǎn)換因子）=79mg/kg250

×0.16（犬體表面積比值）÷0.47（大鼠體表面積比值）=85mg/kg安樂(lè)死藥物與方法吸入性藥劑非吸入性(化學(xué)性）藥劑物理性方法

首選使用過(guò)量的化學(xué)性麻醉劑?？蒲兴锜o(wú)法使用麻醉藥時(shí)，使用物理性安樂(lè)死方法。吸入性藥劑

常用藥物：乙醚、氮?dú)?、一氧化碳、二氧化碳等；注意?duì)人體有害，須在通風(fēng)良好場(chǎng)所進(jìn)行；二氧化碳常用于嚙齒類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，兔子以上中大型動(dòng)物較不建議使用。吸入40%二氧化碳很快達(dá)到麻醉效果，長(zhǎng)時(shí)間吸入則動(dòng)物死亡。非吸入性(化學(xué)性）藥劑靜脈注射是最佳選擇。腹腔注射需較高劑量且可能使動(dòng)物死亡時(shí)間延長(zhǎng)及死前掙扎。巴比妥鹽及衍生物是首選藥物。深度麻醉中的動(dòng)物可以快速靜脈注射KCl(2mmol/kg)來(lái)完成安樂(lè)死。物理性方法

包括頸椎脫臼、放血、電擊等；頸椎脫臼法常用于體重低于200克的嚙齒類(lèi)動(dòng)物、禽類(lèi)及體重低于一公斤的仔兔；實(shí)驗(yàn)需要無(wú)法使用化學(xué)性藥物或二氧化碳時(shí)，可利用斷頭臺(tái)（嚙齒類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及仔兔）；如需放血時(shí)，動(dòng)物需麻醉后進(jìn)行。Definition:TransgenicAnimalAnimalinwhichasegmentofDNAhasbeenphysicallyinsertedintothegenome.ThegenomeofallcellsoftheorganismcontainstheDNAsegment.TheDNAsegmentispresentinthegermlinesoitcanbetransmittedtoprogenyasaMendeliantrait.1.Testgenefunction2.Providemodelsofspecificdiseases(progressionofdisease,alterationsinotherpathwaysrelatedtodisease,testtherapies)

DeterminefunctionofgenesinembryogenesisandinadultlifeDrugvalidationPurposes/ApplicationsTwoGeneralClasses:1.Transgenic(overexpressing)2.KnockoutortargetedgenedisruptionTechniques:1.Pronucleartransfers:Additionofnewgeneticmaterial MicroinjectionofDNAintoembryo

2.HomologousrecombinationbetweenexogenousandgenomicDNA(thespecificreplacementofasubsetofgeneticmaterialwithothergeneticmaterial)3.Inducible/ConditionalKnockoutTransgenesisinMice

RetroviralVector

TransgenesisinMice

Microinjection

TransgenesisinMice

StemCellMethod10%-90%eggsurvivalaftermicroinjection20-60%ofeggssurvivingmicroinjectionwill

developtoterm5-20%ofanimalsbornwillcarrythetransgeneAFewFactsaboutTransgenicMouseProductionAdvantages:

1.Canuseheterologouspromoterstodrivetissueorcell-specificgeneexpression2.Canproduceanimalsthatexpressthetransgeneatseveraldifferentlevels3.Cancrossspeciesboundaries;nospeciesspecificityofthetransgenesConcerns:1.Transgeneincorporatesrandomlyintothegenome2.Multiplecopiesofthetransgeneincorporate3.Possibletohavemorethanonesiteofinsertion4.TransgeneissubjecttotheinfluencesofregulatorysequencesflankingthesiteofinsertionConsiderationsinmakingTgmiceHomologousrecombinationbetweenexogenousandgenomicDNAThisisperformedinpluripotentembryonicstemcells(EScells)KnockoutorTargetedGeneDisruptionIsolationofESCellsMateChimeraMicetoGenerateGeneKnockoutMiceAdvantages:

1.Ratherthanrandominsertionofatransgene,defined,specificmodificationsaremadeintheendogenousgeneandstablyexpressedinthegermlineofamouse.Geneticmodificationsaremadedirectlytotheendogenous

gene.3.EliminateproblemswithabnormalregulationbyflankingregulatoryelementsConcerns:1.Phenotypicva