糖類新抗原CA199方法學驗證報告

糖類抗原CA199檢測系統(tǒng)/方法的分析性能驗證評價驗證內(nèi)容：正確度、精密度、線性范圍、臨床可報告范圍的驗證、干擾物質(zhì)及參考區(qū)間的確認驗證人員：王愛林馬力張衛(wèi)李琳一、檢測系統(tǒng)信息項目：CA199儀器名稱全自動電化學發(fā)光免疫分析儀儀器型號Cobase601試劑及廠商：羅氏診斷有限公司檢測方法：雙抗體夾心法二、廠商提供的相關參數(shù)需驗證參數(shù)廠商參數(shù)驗證結(jié)果分析靈敏度<0.60U/ml沿用廠家說明書線性范圍0.600-1000U/ml1.865?982.9U/ml臨床可報告范圍0.600-10000U/ml0.600-964.45U/ml參考區(qū)間0-27U/ml已驗證三、驗證過程1、正確度目的：評價儀器測量結(jié)果與真值的一致程度。通過實驗室檢測數(shù)據(jù)的偏倚從而評價和驗證實驗室檢測結(jié)果的正確度評價方法：參加衛(wèi)生部臨檢中心的室間質(zhì)評，本組參加室間質(zhì)評的項目一律用回報結(jié)果作為評價標

正確度驗證試驗數(shù)據(jù)記錄表項目名稱/單位腫瘤抗原199(CA199)/U/ml檢測設備/編號RocheE601/103檢測試劑/批號Roche試劑/160704校準品/批號Roche校準品/158967質(zhì)控品/批號Roche質(zhì)控品(PCTM)/158274檢測方法雙抗體夾心法最近一次參加的衛(wèi)生部室間質(zhì)評回報日期：2011-07-15樣本編號我室結(jié)果靶值PT允許范圍PT得分與靶值偏倚(%)VIS允許范圍VIS得分20111128.629.121.8-36.4100%-1.72--20111274.877.758.3-97.1100%-3.73--20111381.083.162.3-103.9100%-2.53--20111431.732.724.5-40.9100%-3.06--201115202.5211.9158-264.9100%-4.44--判斷標準：〈1/2CV總誤差12.5%。正確度驗證結(jié)果： ■滿足要求 □不滿足要求結(jié)論：Cobase601分析檢測系統(tǒng)所檢測的項目CA199正確度在允許范圍內(nèi)，保證檢驗結(jié)果準確可靠，可以滿足臨床需求。統(tǒng)計者：李琳王愛林 統(tǒng)計日期：2011-08-01審核者： 審核日期：2精密度(Precision)重復性精密度目的：考察儀器檢測方法的隨機誤差原理：在檢測系統(tǒng)處于優(yōu)良的條件下，連續(xù)測定20個結(jié)果，判斷這20個獨立結(jié)果間的一致程度方法：選擇新鮮混合血清標本(病人高值、低值)20份，測量前先定標，再做質(zhì)控，質(zhì)控結(jié)果在控制范圍內(nèi)，連續(xù)重復測定20次，質(zhì)控結(jié)果在控制范圍內(nèi)，計算SD,CV,得到重復性精密度標本來源：高低值標本均為混合血結(jié)果：本室CA199重復性精密度低值CV為：1.7%、高值CV為：2.2%結(jié)果判斷方式：重復性精密度CV值V1/4CV總誤差重復性精密度驗證試驗數(shù)據(jù)記錄表項目名稱/單位腫瘤抗原199(CA199)/U/ml檢測設備/編號RocheE601/103檢測試劑/批號Roche試劑/160704校準品/批號Roche校準品/158967質(zhì)控品/批號Roche質(zhì)控品(PCTM)/158274檢測方法雙抗體夾心法低值樣本條碼號：混合樣本高值樣本條碼號：混合樣本測定次數(shù)測定結(jié)果測定次數(shù)測定結(jié)果測定次數(shù)測定結(jié)果測定次數(shù)測定結(jié)果117.011117.121205.511212.4217.251217.28220512211.2316.841317.153204.213210.7

417.921416.724209.214194.45171517.03520515214.4617.361616.566212.216208.7716.971716.9720517209.3816.741816.898207.718213.6917.091917.089203.919206.91016.92016.9710208.520207.1低濃度均值：17.04SD：o.28CV：1.7%咼濃度均值：208.28SD：3.34CV：2.2%判斷標準：〈1/4CV :總誤差6.25%重復性精密度驗證結(jié)果：■滿足要求□不滿足要求結(jié)論：本室所檢測項目CA199低值、咼值重復性精密度均在允許范圍內(nèi)，可接受。檢測者:王愛林、李琳檢測日期：2011-08-01日間精密度：目的：考察目前實驗室檢測方法批間精密度原理：在檢測系統(tǒng)處于優(yōu)良的條件下，連續(xù)測定20天，取得20個結(jié)果，判斷這20個獨立結(jié)果間的一致程度。方法：新鮮混合血清（高值、低值）分裝20份冷凍，每天取兩份混合血清隨標本連續(xù)測定10天，測定前定標做質(zhì)控且結(jié)果在控制范圍內(nèi)，計算CV,SD,得到日間精密度結(jié)果：本室CA199日間精密度平均低值CV：3.9%平均高值CV：3.4%結(jié)果判斷方式：日間精密度CV值V1/3CV日間精密度驗證試驗數(shù)據(jù)記錄表項目名稱/單位腫瘤抗原199(CA199)/U/ml檢測設備/編號RocheE601/103檢測試劑/批號Roche試劑/160704校準品/批號Roche校準品/158967質(zhì)控品/批號Roche質(zhì)控品(PCTM)/158274檢測方法雙抗體夾心法低值質(zhì)控品批號：混合樣本咼值質(zhì)控品批號：混合樣本測定天數(shù)測定結(jié)果測定天數(shù)測定結(jié)果測定天數(shù)測定結(jié)果測定天數(shù)測定結(jié)果18.77118.211372.511377.428.62128.722359.612376.938.15138.103383.61338548.28148.024354.41436558.32158.395376.415383.268.45167.696377.116373.178.63178.837388.017374.288.35187.878355.418399.798.59197.97939119370.1108.32207.871040220390.8低濃度均值：8.31SD: 0.32CV：3.9%咼濃度均值：377.77SD:13.17CV"%判斷標準：〈1/3CV總誤差8.33%中間精密度驗證結(jié)果： ■滿足要求□不滿足要求結(jié)論：本室所檢測項目CA199低值、咼值中間精密度均在允許范圍內(nèi)。檢測者:王愛林、李琳檢測日期：2011-08-01審核者?審核日期：線性范圍(Linearityrange, AMR)目的：在確定某項目檢測上限的同時檢測其上下限是否呈線性關系，從而保證該濃度范圍檢測結(jié)果的準確性。標本要求：高值標本可使用病人混合血清。一般地樣本的高值推薦在AMR上限的90%,低值推薦在AMR下限的10%,但這不是絕對的規(guī)則。最好有5個或以上的系列濃度的實驗樣品，數(shù)據(jù)點數(shù)不得低于4個,濃度范圍遍布整個預期可報告范圍。方法：以50ul為一個體積單位，將高值標本與低值標本以3：1、2：2、1：3的體積比例混合,加上高低值標本共5個標本按照由低到高測定,記錄結(jié)果。線性統(tǒng)計：以直接測定結(jié)果計算得出的相應濃度為X,以通過稀釋測定結(jié)果為Y,回歸方法學統(tǒng)計，得到a、b及r值。結(jié)果判斷：若b在0.97-1.03范圍內(nèi)，r2>0.95，作a與0有無顯著性差異的t檢驗，如果P>0.05，則可直接判斷線性范圍在實驗已涉及濃度。若b不在0.97-1.03范圍內(nèi)，a較大，舍去高值或低值組數(shù)據(jù)，另做回歸統(tǒng)計，直至縮小的分析范圍其回歸方程的a和b的判斷符合要求，則該范圍為線性范圍。線性范圍確認：已驗證CA199的測定結(jié)果是否在范圍內(nèi)呈線性，如小于廠家申明的線性范圍，將驗證的上限擴展為上限+上限＊10%驗證下限擴展為下限-下限＊90%，擴展后的線性范圍：1.68-1081.19

U/ml線性范圍驗證試驗數(shù)據(jù)記錄表項目名稱/單位糖類抗原199(CA199)/U/ml檢測設備/編號RocheE601/103檢測試劑/批號Roche試劑/160704校準品/批號Roche校準品/158967質(zhì)控品/批號Roche質(zhì)控品(PCTM)/158274檢測方法雙抗體夾心法廠家聲明線性范圍：0.600-1000U/ml，線性方程：Y=bX+a,R2>0.95樣本編號配制比例測定值1測定值2測定均值預期值差值14L1.751.981.8651.865023L+1H237.7244.5241.1247.106.032L+2H475.5491.6483.55492.388.834L+3H722.6733.2727.9737.649.7454H978.8987982.9982.90平均斜率b0.9985采用線性回歸，以預期值為X,以按比例稀釋的實測均值為Y,得線性方程：Y=0.9985X-4.1632線性回歸散點圖：線性回歸線性回歸y=0.9985x-4.1632

R2=0.9999oO

oO201X1X值均測實oO20200oO

oO201X1X值均測實oO20200400600800預期值10001200計算每一稀釋度測定均值和預期值的差值。以預期值為橫軸，差值為縱軸，制作線性差異圖。線性差異圖00X預期值2值00X預期值2值1差0-1-2200 400 600 800 1000 12回歸方程：y=0.9985X-4.1632?b在0.97-1.03范圍內(nèi)□b不在0.97-1.03范圍內(nèi)a的P值：0.392 ■a與0無顯著性差異Da與0有顯著性差異R2：0.9999 ?R2±0.95 DR2<0.95直線回歸方程是否可接受 ■可接受 □不可接受線性范圍延伸：?在直線回歸方程可接受基礎上，如果驗證的線性范圍小于廠家申明的線性范圍，將驗證的上限擴展為（上限+上限*10%）,驗證下限擴展為（下限-下限*90%）；?若驗證上限超出廠家聲明上限，以廠家線性范圍為準，若沒有超出廠家聲明上限，以自行驗證為準；擴展后的線性范圍：1.68-1081.19U/ml。結(jié)論：在標本狀態(tài)良好無干擾的情況下，已驗證CA199測定結(jié)果在1.865?982.9U/ml范圍內(nèi)呈線性，進行線性范圍延伸后，可使用的線性范圍為1.68-1081.19U/ml。檢測者：李琳王愛林 檢測日期：審核者： 審核日期：臨床可報告范圍(Clinicalreportablerange,CRR)目的：分析各稀釋濃度的線性關系，確定最高稀釋倍數(shù)，從而確保高值樣本報告的準確性。原理：未經(jīng)過任何處理的病人檢驗標本，通過檢測系統(tǒng)檢測得到的可靠結(jié)果范圍。方法;結(jié)合本實驗室制定的CA199的可報告范圍(CRR)及該項目的檢測范圍，從而確定該項目的最大稀釋倍數(shù)，予以驗證過程描述：1、10倍稀釋驗證：測定標本為病人血清，測定原值為910U/m1，將高值的標本稀釋10倍上機測定兩次，結(jié)果分別為906U/m1，914U/m1.判斷標準：R值應在100%土允許總誤差之間。符合上述條件的最大稀釋度為該項目的最大稀釋倍數(shù)。臨床可報告范圍試驗數(shù)據(jù)記錄表項目名稱糖類抗原199(CA199)/U/ml檢測設備RocheE601/103檢測試劑/批號Roche試劑/160704校準品/批號Roche校準品/158967

質(zhì)控品/批號Roche質(zhì)控品(PCTM)/158274分析測量范圍0.600-1000U/ml 最大稀釋倍數(shù)：10高值標本條碼號：1004292279臨床可報告范圍高限數(shù)據(jù)記錄理論值1/51/10實測值1906983.1971.3實測值2914945.8969.5實測均值910964.45970.4預期值910910910回收率R(%)105.984%106.64%R(%)_實測均值預期值結(jié)果判斷：R(%)在75%-125%之間的最大稀釋倍數(shù)10倍結(jié)論：我室所檢測項CA199的最大稀釋倍數(shù)為也倍，臨床可報告范圍咼限10*1000=10000ng/ml,如果10倍仍超出，報告〉10000ng/ml。檢測者：李琳王愛林 檢測日期：2011-08-01審核者： 審核日期：結(jié)論：CA199臨床可報告范圍0.600-10000U/ml,最大稀釋倍數(shù)10倍，當結(jié)果>1000U/ml時，用腫瘤標志物稀釋液進行10倍稀釋,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù),若10倍稀釋結(jié)果仍超出報告>10000U/ml.分析靈敏度(AnalyticalSensitivity):直接引用羅氏試劑說明書上提供的分析靈敏度：0.600U/ml6干擾物質(zhì)干擾物質(zhì)對本項目的影響大小沿用廠商參數(shù)，詳細內(nèi)容見本項目SOP。7參考區(qū)間(Referenceintervals):目的：選擇20份體檢合格的健康人標本，在檢測系統(tǒng)上進行測定，對結(jié)果進行統(tǒng)計并與儀器說明書提供的參考區(qū)間進行比較。原理：收集20例正常健康人血清標本進行檢測，要求其年齡，性別等均勻分布，對參考范圍進行驗證，只允許10%的數(shù)據(jù)超過所驗證的參考范圍，否則需建立參考范圍。驗證范圍：0-27U/ml方法：將20份標本按所需項目上機檢測，CA199標本的要求1、體檢合格健康的篩選者2、脂血、溶血均勿用，標本新鮮R=測定的結(jié)果在參考范圍例數(shù)$90%即合格總測定例數(shù)只允許10%的數(shù)據(jù)超過所驗證的參考區(qū)間，否則另外在用20份標本驗證，如果在范圍內(nèi)則驗證通過。如仍超出范圍，則需建立參考區(qū)間生物參考區(qū)間數(shù)據(jù)及驗證記錄表項目名稱/單位糖類抗原199(CA199)/U/ml檢測設備/編號RocheE601/103檢測試劑/批號Roche試劑/159299校準品/批號Roche校準品/161204

質(zhì)控品/批號Roche質(zhì)控品(PCTM)/158274檢測方法雙抗體夾心法試劑說明書提供參考范圍：0-27U/ml各編號樣本測定情況序號條形碼號性別年齡（歲）測定結(jié)果11004139105女37