細(xì)菌檢查與防治

課程名稱：醫(yī)學(xué)微生物學(xué)教學(xué)內(nèi)容：細(xì)菌感染的檢查方法及防治原則學(xué)時(shí)：學(xué)時(shí)第一頁，共一百六十一頁。教學(xué)目的：

掌握臨床細(xì)菌標(biāo)本的采集、送檢原則,革蘭染色法的步驟熟悉病原菌的檢驗(yàn)程序、常用血清學(xué)試驗(yàn)的原理

了解細(xì)菌學(xué)檢查在臨床診斷中的重要性第二頁，共一百六十一頁。教學(xué)方法：理論教學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)、關(guān)鍵：

病原菌的檢驗(yàn)程序第三頁，共一百六十一頁。細(xì)菌學(xué)診斷(bacteriologicaldiagnosis)示蹤性檢測形態(tài)學(xué)檢查分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定致病力和藥敏測定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)毒力檢測藥物敏感試驗(yàn)病原微生物感染的檢查法第四頁，共一百六十一頁。臨床細(xì)菌標(biāo)本的采集、送檢原則1.無菌操作:避免人為污染

2.選準(zhǔn)部位:根據(jù)疾病種類和病程不同,采集不同標(biāo)本(specimens)

如:傷寒第一周取血第二、三周取大、小便、骨髓第五頁，共一百六十一頁。3.早期取材

(1)疾病早期(2)使用抗菌藥物之前,如已用抗生素,應(yīng)停用1—2天(3)機(jī)體免疫因素形成之前(4)未出現(xiàn)合并或繼發(fā)感染之前第六頁，共一百六十一頁。4.快速送檢:

大多數(shù)細(xì)菌低溫送檢,但奈瑟球菌須30--40℃保溫送檢

標(biāo)本采集的準(zhǔn)確性是檢查結(jié)果可靠性的保證第七頁，共一百六十一頁。1、直接涂片鏡檢形態(tài)與染色性具有特征的病原菌可直接染色鏡檢，根據(jù)典型形態(tài)、排列、染色性做初步診斷(一)、病原菌分離鑒定的一般程序：

一、形態(tài)學(xué)檢查第八頁，共一百六十一頁。(1)不染色標(biāo)本的檢查

主要用于觀察病原菌的某些形態(tài)特點(diǎn)及運(yùn)動(dòng)性

?常用的方法有壓滴法和懸滴法如:用壓滴法觀察霍亂弧菌的“魚群樣運(yùn)動(dòng)”暗視野檢查用于檢查活菌、螺旋體及其動(dòng)力第九頁，共一百六十一頁。(2)染色標(biāo)本的檢查染色單染復(fù)染正染負(fù)染(negativestaining)革蘭染色法抗酸染色法熒光染色第十頁，共一百六十一頁。單染色:只用一種染料進(jìn)行染色.

可分為:正染:標(biāo)本著色,背景不著色負(fù)染:標(biāo)本不著色,背景著色用于形態(tài)的觀察,不能鑒別染色性第十一頁，共一百六十一頁。復(fù)染色:用兩種或兩種以上的染料進(jìn)行染色目前常用的有:革蘭染色法、抗酸染色法、熒光染色、特殊染色法既可觀察形態(tài)結(jié)構(gòu),又可鑒別染色性第十二頁，共一百六十一頁。革蘭染色法步驟:制片:涂片染色:結(jié)晶紫初染1分鐘水沖洗碘液媒染1分鐘水沖洗95%乙醇脫色30秒左右水沖洗稀釋復(fù)紅復(fù)染30秒水沖洗干后油鏡下觀察干燥固定第十三頁，共一百六十一頁。

涂片

干燥固定

染色鏡檢第十四頁，共一百六十一頁。結(jié)果:

染成紫色稱革蘭染色陽性G+

染成紅色稱革蘭染色陰性G-

原理:(1)等電點(diǎn)學(xué)說結(jié)晶紫為堿性染料(2)化學(xué)學(xué)說

G+含有核糖核酸鎂鹽,能與結(jié)晶紫形成牢固的復(fù)合物(3)通透性學(xué)說第十五頁，共一百六十一頁。G+

G-PI2～34～6核糖核酸鎂鹽+-通透性小大脂質(zhì)少多第十六頁，共一百六十一頁。意義:

(1)鑒別細(xì)菌(2)指導(dǎo)臨床用藥(3)了解細(xì)菌的致病性第十七頁，共一百六十一頁。第十八頁，共一百六十一頁。第十九頁，共一百六十一頁。第二十頁，共一百六十一頁。第二十一頁，共一百六十一頁。二、分離培養(yǎng)→純培養(yǎng)：

根據(jù)不同標(biāo)本采取不同培養(yǎng)基。

分離化膿性球菌如鏈球菌、肺炎球菌可采用血平板；分離腦膜炎球菌可采用巧克力平板

菌落形態(tài)觀察:大小、表面、透明度、邊緣、高度、色素、溶血等第二十二頁，共一百六十一頁。第二十三頁，共一百六十一頁。三、生化反應(yīng)：

通過檢測細(xì)菌代謝產(chǎn)物的生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌的種類

乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)等。

第二十四頁，共一百六十一頁。四、血清學(xué)鑒定:(serologicalidentification)：

用已知抗體檢測標(biāo)本中分離得到的病原菌的血清型別，采用玻片凝集法。

第二十五頁，共一百六十一頁。原理：將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周圍擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測試菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)。紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauer法）

五、藥敏試驗(yàn)：第二十六頁，共一百六十一頁。抑菌圈或抑菌環(huán)紙片擴(kuò)散法第二十七頁，共一百六十一頁。原理：聚乙烯板內(nèi)含有各種稀釋度的抗菌藥物，實(shí)驗(yàn)時(shí)加入100μl濃度為105CFU/ml的菌液，蓋上蓋板，35℃16～20h觀察結(jié)果?？椎撞壳逦怀霈F(xiàn)細(xì)菌沉淀的最低抗菌藥物濃度即為該抗菌藥物對細(xì)菌的最小抑菌濃度，通過CLSI標(biāo)準(zhǔn)判斷其敏感和耐藥。再取0.01ml容量接種環(huán)取肉眼觀察無菌生長的液體接種于血瓊脂平板作次代培養(yǎng)，經(jīng)35℃過夜培養(yǎng)后觀察最低抗菌藥物濃度能殺死99.9％原始種入的細(xì)菌即為該菌的最低殺菌濃度(MBC)。微量液體稀釋法(microdilutiontest)

第二十八頁，共一百六十一頁。用微量加樣器接種100μl到96孔中，蓋上蓋板。同時(shí)作陽性、陰性對照。手工看濁度或儀器自動(dòng)判讀。按照CLSI標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告細(xì)菌對某抗菌藥物為敏感、耐藥和中介。

第二十九頁，共一百六十一頁。原理：

E試條是一條5mm×50mm無孔試劑載體，一面固定有一系列預(yù)先制備的濃度呈連續(xù)指數(shù)增長稀釋抗菌藥物，另一面有讀數(shù)和判別的刻度?？咕幬锏奶荻瓤筛采w有20個(gè)MIC對倍稀釋濃度的寬度范圍。將E試條放在細(xì)菌接種過的瓊脂平板上，經(jīng)孵育過夜，圍繞試條明顯可見橢圓形抑菌圈，圈的邊緣與試條交點(diǎn)的刻度濃度即為抗菌藥物抑制細(xì)菌的最小抑菌濃度，對照CLSI標(biāo)準(zhǔn)判斷其敏感、耐藥、中介。E-TEST第三十頁，共一百六十一頁。孵育后形成一橢圓形抑菌圈，抑菌圈和試條的相交處的刻度即為抗菌藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC)。第三十一頁，共一百六十一頁。六、細(xì)菌成分的檢測(detectionofbacterialantigens)：

目前應(yīng)用最為廣泛的是細(xì)菌抗原的檢測

如:協(xié)同凝集試驗(yàn)、間接凝集試驗(yàn)、熒光抗體法、酶免疫法、核酸雜交、聚合酶鏈反應(yīng)等

第三十二頁，共一百六十一頁。七、檢測細(xì)菌相應(yīng)抗體

均為免疫學(xué)方法經(jīng)典方法如:凝集試驗(yàn)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

現(xiàn)代快速方法主要是免疫標(biāo)記技術(shù)通常采用取雙份血清，其間間隔1～2周。后一份血清抗體效價(jià)比前一份升高4倍以上有診斷意義。

第三十三頁，共一百六十一頁。第三十四頁，共一百六十一頁。第三十五頁，共一百六十一頁。細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診斷第三十六頁，共一百六十一頁。病原微生物感染的防治原則

微生物感染所導(dǎo)致的感染性疾病的控制由預(yù)防和治療兩方面組成預(yù)防:對病原微生物傳播的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行控制治療:是通過抗微生物藥物和新醫(yī)療技術(shù)來控制傳染病的擴(kuò)散和發(fā)展第三十七頁，共一百六十一頁。病原微生物感染的防治原則特異性免疫的分類自然免疫人工免疫自然主動(dòng)免疫：隱性或顯性感染自然被動(dòng)免疫：通過胎盤或初乳獲得母體抗體人工主動(dòng)免疫：接種疫苗或類毒素等人工被動(dòng)免疫：注射抗毒素或丙種球蛋白等第三十八頁，共一百六十一頁。第6章細(xì)菌耐藥性

第一節(jié)

抗菌藥物的種類及其作用機(jī)制一、抗菌藥物概念

1.抗菌藥物（antibacterialagents）指對病原菌具有抑制或殺滅作用、用于預(yù)防和治療細(xì)菌性感染的藥物，包括抗生素（antibiotics）和化學(xué)合成的藥物。第三十九頁，共一百六十一頁。2.抗生素（antibioticagents）：

微生物在其代謝過程中產(chǎn)生的能殺滅或抑制其它特異病原微生物的產(chǎn)物?？股胤肿恿啃?，低濃度就能發(fā)揮其生物活性，有天然和人工半合成兩類。

第四十頁，共一百六十一頁。二、抗菌藥物的種類

（一）按抗菌藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)分類：

1.β-內(nèi)酰胺類（β-lactam）?青霉素（penicillin）類：青霉素G、甲氧西林等。?頭孢菌素（cephalosporin）類：頭孢唑啉等。?頭霉素：如頭孢西丁。?單環(huán)β-內(nèi)酰胺類：如氨曲南。?碳青霉素烯類：亞胺培南與西司他丁合用稱泰能。?β-內(nèi)酰胺酶抑制劑：如舒巴坦棒酸使酶失活。

第四十一頁，共一百六十一頁。2.大環(huán)內(nèi)酯類（macrolides）

紅霉素、螺旋霉素等。3.氨基糖苷類（aminoglycosides）

鏈霉素、慶大霉素4.四環(huán)素類（tetracycline）

四環(huán)素、強(qiáng)力霉素等。5.氯霉素類（chloramphenic）

包括氯霉素、甲砜霉素。第四十二頁，共一百六十一頁。6.化學(xué)合成的抗菌藥物

磺胺類：磺胺嘧啶（SD）、復(fù)方新諾明（SMZco）等。喹諾酮（fluroqinolone）類：包括氟哌酸、環(huán)丙沙星等。7.其他

抗結(jié)核藥物：利福平、異煙肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺等。多肽類抗生素：多粘菌素類、萬古霉素、桿菌肽、林可霉素和克林霉素等。第四十三頁，共一百六十一頁。（二）按生物來源分類

1.細(xì)菌產(chǎn)生的抗生素

如多粘菌素和桿菌肽。

2.真菌產(chǎn)生的抗生素

如青霉素及頭孢菌素，現(xiàn)在多用其半合成產(chǎn)物。

3.放線菌產(chǎn)生的抗生素

放線菌是生產(chǎn)抗生素的主要來源。其中鏈霉菌和小單孢菌產(chǎn)生的抗生素最多。常見的抗生素包括鏈霉素、卡那霉素、四環(huán)素、紅霉素、兩性霉素B等。第四十四頁，共一百六十一頁。

根據(jù)對病原菌的作用靶位，將抗生素的作用機(jī)制分為四類（表6-1）。1.抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成2.影響胞漿膜通透性（多粘菌素）3.抑制蛋白質(zhì)合成（大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖甙類）4.抑制核酸代謝：葉酸代謝；核酸合成（喹諾酮、磺胺類）三、抗菌藥物的作用機(jī)制第四十五頁，共一百六十一頁。表6-1抗菌藥物的主要作用部位喹諾酮類林可霉素類氨基糖苷類酮康唑環(huán)絲氨酸利福平紅霉素制霉菌素桿菌肽甲氧芐胺嘧啶四環(huán)素類兩性霉素B萬古霉素磺胺藥氯霉素多粘菌素類β-內(nèi)酰胺類核酸合成細(xì)胞蛋白合成細(xì)胞膜滲透性細(xì)胞壁第四十六頁，共一百六十一頁。一、細(xì)菌的耐藥性（一）細(xì)菌耐藥性（drugresistance）

亦稱抗藥性，是指細(xì)菌對某抗菌藥物（抗生素或消毒劑）的相對抵抗性。指病原體或腫瘤細(xì)胞對反復(fù)應(yīng)用的化學(xué)治療藥物敏感性降低或消失的現(xiàn)象。（二）耐藥性的程度

用某藥物對細(xì)菌的最小抑菌濃度（MIC）表示。臨床上有效藥物治療劑量在血清中濃度大于最小抑菌濃度稱為敏感，反之稱為耐藥。第四十七頁，共一百六十一頁。(三)耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制1.產(chǎn)生水解酶和鈍化酶2.改變細(xì)胞膜的通透性3.改變藥物作用位點(diǎn)4.主動(dòng)外排泵的作用5.生物膜形成第四十八頁，共一百六十一頁。(四)控制耐藥性的策略1.合理用藥2.嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離制度3.研制新的抗菌藥物4.破壞耐藥基因藥敏實(shí)驗(yàn)等指導(dǎo)第四十九頁，共一百六十一頁。(四)控制耐藥性的策略

1.合理使用抗菌藥物①制定抗生素用藥常規(guī)，教育醫(yī)務(wù)工作者和病人規(guī)范化用藥，供臨床選用抗菌藥物參考。②嚴(yán)格根據(jù)適應(yīng)證選用藥物第五十頁，共一百六十一頁。③病人用藥前應(yīng)盡可能進(jìn)行病原學(xué)檢測，并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，作為調(diào)整用藥的參考。④按藥物的藥動(dòng)學(xué)特性，制定合理的用藥方案。⑤用藥療程應(yīng)盡量縮短，一種抗菌藥物可以控制的感染則不任意采用多種藥物聯(lián)合。⑥嚴(yán)格掌握抗菌藥物的局部應(yīng)用、預(yù)防應(yīng)用和聯(lián)合用藥，避免濫用。第五十一頁，共一百六十一頁。2.嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離制度3.加強(qiáng)藥政管理4.研發(fā)新抗菌藥物

5.破壞耐藥基因

第五十二頁，共一百六十一頁。傳染病控制三大原則:1.查明和控制傳染源2.切斷傳播途徑3.提高健康人群的免疫力消毒與滅菌是控制傳染源的重要手段第五十三頁，共一百六十一頁。消毒與滅菌

消毒（disinfection）：

殺死物體上病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽孢的細(xì)菌或非病原微生物。滅菌（sterilization）:

殺死物體上所有微生物的方法。

包括致病菌、非致病菌、繁殖體和芽胞。

第五十四頁，共一百六十一頁。抑菌：

抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長。

防腐：

防止或抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法

無菌（asepsis）：

沒有活菌的意思。無菌狀態(tài)是滅菌的結(jié)果。

無菌操作（antiseptictechnique）：

防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)。

第五十五頁，共一百六十一頁。物理消毒滅菌法一、熱力滅菌法熱力滅菌法有干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類

在同一溫度下，后者比前者的效力大。這是因?yàn)椋旱谖迨摚惨话倭豁摗?/p>

*濕熱中菌體蛋白較易凝固。*濕熱的穿透力比干熱大。*濕熱的蒸汽有潛熱存在。為什么濕熱滅菌比干熱滅菌效力大第五十七頁，共一百六十一頁。干熱滅菌：

干熱的殺菌作用是通過脫水干燥和大分子變性。

1.焚燒法：直接點(diǎn)燃或在焚燒爐內(nèi)焚燒。是一種徹底的滅菌方法。

適用于廢棄物品或動(dòng)物尸體。第五十八頁，共一百六十一頁。

2.燒灼法：直接用火焰滅菌。

適用于接種環(huán)，試管口等的滅菌。

3.干烤法：將物品置干烤箱內(nèi)，加熱至

160~1700C2h。

適用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品。第五十九頁，共一百六十一頁。

4.紅外線：利用電磁波的熱效應(yīng)滅菌。1~10m波長的熱效應(yīng)最強(qiáng)。

適用于醫(yī)療器械的滅菌。

第六十頁，共一百六十一頁。濕熱滅菌：

利用熱蒸汽的高溫使微生物的蛋白質(zhì)變性。

1.巴氏消毒法：

用較低溫度61.1~62.80c，30min;71.70c,15~30s殺滅液體中的病原微生物或特定的微生物，而仍保持物品中所需的不耐熱成分不被破壞的消毒方法。

用于牛乳制品、酒類等的消毒

第六十一頁，共一百六十一頁。

2.煮沸法:

1000c,水浴，30min。食具、一般外科器械消毒。殺死芽胞需1～3小時(shí)。

3.流動(dòng)蒸氣消毒法：

1000c,汽浴，30min

可殺死細(xì)菌繁殖體，但不能殺死芽胞。第六十二頁，共一百六十一頁。4.間歇蒸汽滅菌法：

1000c,汽浴,30min/次

流通蒸汽消毒法重復(fù)三次，每次間歇期置37℃溫箱過夜，促使芽胞發(fā)芽變?yōu)榉敝丑w，被下一次蒸汽滅菌時(shí)殺滅。主要用于營養(yǎng)培養(yǎng)基的滅菌，可殺死芽胞。

第六十三頁，共一百六十一頁。5.高壓蒸汽滅菌法：

121.30c

汽?。?03.4kPa），15~20min可殺滅包括細(xì)菌芽孢在內(nèi)的所有微生物

用于培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等耐高溫、耐濕物品的滅菌。

滅菌效果最好、應(yīng)用最廣泛的滅菌方法。

第六十四頁，共一百六十一頁。二、輻射殺菌法（一）紫外線（ultravioletray，UV）殺菌

波長200~300nm的紫外線有殺菌作用，其中以260~266nm最強(qiáng)。*殺菌機(jī)制：干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄。

*殺菌作用特點(diǎn)：殺菌作用強(qiáng),穿透力弱。第六十五頁，共一百六十一頁。

*適用范圍：

手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒,或不耐熱物品的表面消毒。（二）電離輻射

：高速電子、Ｘ射線、r射線等。應(yīng)用范圍：一次性醫(yī)用塑料制品；食品。

第六十六頁，共一百六十一頁。三、過濾除菌法（filtration）

用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去，以達(dá)到無菌的目的。

血清、抗生素、抗毒素等除菌。

四、干燥與低溫抑菌法保存菌種:冷凍真空干燥法

lyophilization五、超聲波殺菌法第六十七頁，共一百六十一頁。第二節(jié)化學(xué)消毒滅菌法一、化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制二、消毒劑的主要種類

醇類---乙醇（70~75%）

碘酒2%～2.5%

、新潔爾滅0.05%～0.1%第六十八頁，共一百六十一頁。第三節(jié)影響消毒滅菌效果的因素一、消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間二、微生物的種類與數(shù)量三、溫度

四、酸堿度五、有機(jī)物第六十九頁，共一百六十一頁。病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全

生物安全（biosafety）是生物技術(shù)安全（safetyofbiotechnology）的簡稱。狹義地指現(xiàn)代生物技術(shù)的研究、開發(fā)、應(yīng)用及轉(zhuǎn)基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產(chǎn)生潛在的危害。廣義地指與生物有關(guān)的各種因素對社會、經(jīng)濟(jì)、人類健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風(fēng)險(xiǎn)。第七十頁，共一百六十一頁。一、病原微生物的分類

根據(jù)傳染性、感染后對個(gè)體或者群體的危害程度，病原微生物分為四類：

第一類是指能夠引起人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

第二類是指能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物。

第七十一頁，共一百六十一頁。

第三類是指能夠引起人或動(dòng)物疾病，但一般情況下對人、動(dòng)物或環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。

第四類是指在通常情況下不會引起人或動(dòng)物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。

第一類、第二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。

第七十二頁，共一百六十一頁。二、病原微生物實(shí)驗(yàn)室的分級級別處理對象一級對人體、動(dòng)植物或環(huán)境危害較低，不具有對健康成人、動(dòng)植物致病的致病因子。二級對人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險(xiǎn)的致病因子，對健康成人、動(dòng)植物和環(huán)境不會造成嚴(yán)重危害，具有有效的預(yù)防和治療措施。三級對人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有高度危險(xiǎn)性，主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴(yán)重的甚至是致命的疾病，或?qū)?dòng)植物和環(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預(yù)防治療措施。四級對人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有高度危險(xiǎn)性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險(xiǎn)的致病因子。沒有預(yù)防治療措施。第七十三頁，共一百六十一頁。

一、二級實(shí)驗(yàn)室不得從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。三級、四級實(shí)驗(yàn)室從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。

從事高致病性病原微生物相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)應(yīng)當(dāng)有２名以上的工作人員共同進(jìn)行。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的同一個(gè)獨(dú)立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時(shí)從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。應(yīng)有健全安全保衛(wèi)制度。

第七十四頁，共一百六十一頁。生物安全第七十五頁，共一百六十一頁。三、實(shí)驗(yàn)室感染的控制以及監(jiān)督和法律責(zé)任

實(shí)驗(yàn)室感染控制工作包括定期檢查實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)、病原微生物菌（毒）種和樣本保存與使用、安全操作、實(shí)驗(yàn)室排放的廢水和廢氣以及其他廢物處置等實(shí)施情況。

第七十六頁，共一百六十一頁。實(shí)驗(yàn)室發(fā)生高致病性病原微生物泄漏時(shí)，預(yù)防、控制措施包括：①封閉被病原微生物污染的實(shí)驗(yàn)室或可能造成病原微生物擴(kuò)散的場所；②開展流行病學(xué)調(diào)查；③對病人進(jìn)行隔離治療，對相關(guān)人員進(jìn)行醫(yī)學(xué)檢查；④對密切接觸者進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察；⑤進(jìn)行現(xiàn)場消毒；⑥對染疫或者疑似染疫的動(dòng)物采取隔離、撲殺等措施。第七十七頁，共一百六十一頁。第十六章螺旋體要求掌握：1、掌握鉤端螺旋體的致病性及防治原則；2、熟悉梅毒螺旋體的致病性，檢驗(yàn)方法及防治原則；3、了解螺旋體的概念，對人類有致病性的螺旋體屬。第七十八頁，共一百六十一頁。一、概念

螺旋體（spirochete）是一類細(xì)長、柔軟、呈螺旋形彎曲，運(yùn)動(dòng)活潑的原核細(xì)胞型微生物。第七十九頁，共一百六十一頁。二、種屬：螺旋體屬名螺旋特征代表株致病疏螺旋體屬(Borrelia)3-10不規(guī)則伯氏螺旋體回歸熱螺旋體流行性回歸熱密螺旋體屬(Treponema)8-14規(guī)則細(xì)密，兩端尖直蒼白螺旋體雅司螺旋體梅毒鉤端螺旋體屬(Leptospira)規(guī)則更多更細(xì)密，一端或兩端鉤狀問號鉤端螺旋體鉤端螺旋體病第八十頁，共一百六十一頁。一、生物學(xué)性狀

1、形態(tài)、結(jié)構(gòu)及染色

※

細(xì)長，螺旋密而規(guī)則

※一端或兩端彎曲呈鉤狀，呈C、S形

※外膜與肽聚糖層之間有兩根軸絲（與運(yùn)動(dòng)有關(guān)）

※革蘭陰性，著色難，常用于Fontana鍍銀染色（棕褐色）第一節(jié)鉤端螺旋體（鉤體）

第八十一頁，共一百六十一頁。黃疸出血熱群鉤端螺旋體第八十二頁，共一百六十一頁。第八十三頁，共一百六十一頁。2、培養(yǎng)特性

※

鉤體是目前唯一能人工培養(yǎng)的螺旋體

※常用Korthof（柯索夫）培養(yǎng)基

※生長最適溫度為28~30℃，2周后出現(xiàn)云霧狀

※動(dòng)物培養(yǎng)（小鼠）第八十四頁，共一百六十一頁。3、抵抗力

※

對熱敏感，56℃，10分鐘即死亡

※

對消毒劑敏感

※

對青霉素、金霉素敏感，治療首選第八十五頁，共一百六十一頁。二、致病性

1、致病物質(zhì)

※

溶血毒素

※

細(xì)胞毒性因子CTF

※

內(nèi)毒素樣物質(zhì)（脂多糖樣物質(zhì)）

※細(xì)胞致病作用（CPE）物質(zhì)

※其他酶類（脂酶，脫氫酶）第八十六頁，共一百六十一頁。2、所致疾病——鉤端螺旋體?。ㄣ^體?。┧追Q打谷黃，屬自然疫源性疾病。

傳染源：鼠、豬（我國是幼豬）

傳播途徑：經(jīng)健康或破損皮膚粘膜第八十七頁，共一百六十一頁。3、致病機(jī)制：鉤體經(jīng)皮膚粘膜進(jìn)入人體在局部迅速繁殖引起鉤體血癥、敗血癥向全身毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞擴(kuò)散至肝、腎、心肺、腦、肌肉損害第八十八頁，共一百六十一頁。

4、表現(xiàn)：

起病急、高熱、乏力、頭痛、全身酸痛、眼結(jié)膜充血、腓腸肌觸痛、淺表淋巴結(jié)腫大，嚴(yán)重者、有出血、黃疸、休克、DIC、伴心、腎功能不全。

寒熱酸痛一身乏眼紅腿痛淋巴大第八十九頁，共一百六十一頁。5、臨床類型：

※

黃疸出血型----最常見

※流感傷寒型

※肺出血型----最嚴(yán)重

※腦膜腦炎型

※腎功能衰竭型第九十頁，共一百六十一頁。三、微生物學(xué)檢查

1、病原體檢查

※

直接鏡檢：暗視野觀察活體、鍍銀染色片

※

分離培養(yǎng)：標(biāo)本接種于Korthof培養(yǎng)基

※

動(dòng)物接種：

※

核酸檢測：PCR、DNA探針

第九十一頁，共一百六十一頁。2、血清學(xué)診斷

※

顯微凝集試驗(yàn)（凝集溶解）：已知鉤體+血清小蜘蛛樣凝集血清中補(bǔ)體含量高凝集稍后溶解1:400，4倍

※

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：1:20第九十二頁，共一百六十一頁。四、防治原則

（一）控制傳染源（1）滅鼠（2）加強(qiáng)家畜管理保護(hù)水源

（二）接種疫苗（三）治療青霉素首選第九十三頁，共一百六十一頁。第二節(jié)密螺旋體屬一、生物學(xué)特性

1、形態(tài)結(jié)構(gòu)（同前、略）

2、培養(yǎng)特性：不能進(jìn)行人工培養(yǎng)

3、抵抗力：極弱，對溫度、干燥、化學(xué)消毒劑、抗生素等均敏感與人類疾病密切相關(guān)的代表株是引起梅毒的蒼白螺旋體蒼白亞種。第九十四頁，共一百六十一頁。二、致病性

1、梅毒螺旋體在自然情況下只感染人，人是梅毒螺旋體的唯一宿主，也是梅毒的唯一傳染源。2、梅毒按傳播途徑分先天梅毒（胎傳梅毒）和后天梅毒（獲得性梅毒）。3、獲得性梅毒，經(jīng)性接觸傳播，以反復(fù)隱伏和再發(fā)為特征，臨床分為三期。第九十五頁，共一百六十一頁。Ⅰ期梅毒（初期）又稱初瘡

※

破壞性小，感染性極強(qiáng)

※

感染后3周左右，局部出現(xiàn)，無痛性硬結(jié)稱“硬下疳”

※

多見于外生殖器

※4~8周后，不治自愈第九十六頁，共一百六十一頁。第九十七頁，共一百六十一頁。Ⅱ期梅毒

※

硬下疳自愈后，經(jīng)過2~3個(gè)月無癥狀潛伏期后進(jìn)入Ⅱ期

※

破壞性小，感染性強(qiáng)

※出現(xiàn)蒼白亞種螺旋體血癥

※全身皮膚粘膜梅毒疹

※全身淋巴結(jié)腫大，并向骨、關(guān)節(jié)、眼和其他臟器擴(kuò)散第九十八頁，共一百六十一頁。第九十九頁，共一百六十一頁。第一百頁，共一百六十一頁。Ⅲ期梅毒

※

發(fā)性于感染后2年左右，也有長達(dá)10~15年之久

※

感染性小，破壞性大

※病變播及全身組織器官（皮膚、肝、脾、骨骼）

※慢性肉芽腫，損害進(jìn)展和消退常交替出現(xiàn)

※嚴(yán)重者危及生命第一百零一頁，共一百六十一頁。第一百零二頁，共一百六十一頁。4、先天梅毒（胎傳梅毒）

※

多發(fā)于在妊娠4個(gè)月之后

※

引起胎兒全身感染導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)和死胎

※

出生梅毒嬰兒，可表現(xiàn)為馬鞍鼻、鋸齒形牙，間質(zhì)性角膜炎、先天性耳聾等。第一百零三頁，共一百六十一頁。三、微生物學(xué)檢查（一）標(biāo)本

Ⅰ期梅毒硬下疳滲出物

Ⅱ期梅毒梅毒疹滲出物，淋巴結(jié)抽取液（二）方法

１、顯微鏡檢查第一百零四頁，共一百六十一頁。2、血清學(xué)診斷

①非特異性血清學(xué)試驗(yàn)

※

抗原為（正常牛心肌的心脂質(zhì)）

※

血清中的反應(yīng)素為抗脂質(zhì)抗體。

※

方法有VDRL（性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)）VeneralDiseaseResearchLaboratoryRPR（快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)）RapidPlasmaReagin

※適用于大量篩選第一百零五頁，共一百六十一頁。②特異性血清學(xué)試驗(yàn)

抗原為（Nichols株螺旋體）

抗體為螺旋體特異性抗體

方法有FTA-ABS試驗(yàn)（熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)）

優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，可用于梅毒螺旋體證實(shí)試驗(yàn)第一百零六頁，共一百六十一頁。第十七章支原體要求掌握：1、掌握支原體的概念、形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及培養(yǎng)特性；2、掌握主要病原性支原體的傳播途徑及所致疾??；3、熟悉支原體與L－型細(xì)菌的區(qū)別。第一百零七頁，共一百六十一頁。第一節(jié)支原體的概念及種類一、概念：

支原體（Mycoplasma）是一類無細(xì)胞壁、形態(tài)上呈多形性、可通過除菌濾器、能在無生命的培養(yǎng)基中生長繁殖的最小的原核細(xì)胞型微生物。第一百零八頁，共一百六十一頁。支原體屬于柔膜體綱中的支原體目，下分三個(gè)科：支原體科Mycoplasmataceae螺原體科Spiroplasmataceae無膽甾原體科Acholeplasmataceae支原體科支原體屬64個(gè)種脲原體屬2個(gè)種第一百零九頁，共一百六十一頁。

對人類主要致病性支原體包括：

支原體致病性肺炎支原體M·pneumoniae肺炎、支氣管炎人型支原體M·hominis泌尿生殖道感染生殖支原體M·genitalium泌尿生殖道感染穿透支原體M·penetraus多繼發(fā)于艾滋病溶脲脲原體U·urealyticum泌尿生殖道感染第一百一十頁，共一百六十一頁。二、生物學(xué)性狀（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)※

體積：最小0.2~0.3μm，能通過除菌濾器※

形態(tài)：球形、絲狀等

第一百一十一頁，共一百六十一頁。肺炎支原體第一百一十二頁，共一百六十一頁?！?/p>

結(jié)構(gòu)：細(xì)胞膜由三層含蛋白質(zhì)和脂質(zhì)成分構(gòu)成，內(nèi)外兩層為蛋白質(zhì)，中層為脂質(zhì)（含固醇）細(xì)胞膜外有莢膜（致病因素），還有特殊的頂端結(jié)構(gòu)（具有粘附細(xì)胞），微絲—網(wǎng)（與運(yùn)動(dòng)有關(guān)）

沒有細(xì)胞壁※

染色性：革蘭染色陰性，Giemsa染色呈淡紫色。第一百一十三頁，共一百六十一頁。（二）培養(yǎng)特性

※

營養(yǎng)要求比細(xì)菌高（人和動(dòng)物血漿）

※

生長緩慢，數(shù)日至數(shù)周后出現(xiàn)菌落

※

油煎荷包蛋樣菌落、“T”株第一百一十四頁，共一百六十一頁。（三）生化反應(yīng)支原體名稱葡萄糖精氨酸尿素肺炎支原體+－－人型支原體－+－生殖支原體+－－穿透支原體++－溶脲脲原體－－+第一百一十五頁，共一百六十一頁。（四）抵抗力對理化因素的抵抗力較細(xì)菌弱※對抑制細(xì)胞壁合成的抗生素耐受※對干擾蛋白質(zhì)合成的抗生素敏感第一百一十六頁，共一百六十一頁。（五）支原體與L型細(xì)菌的區(qū)別性狀支原體L-型細(xì)菌細(xì)胞壁沒有缺少分布自然界廣泛多在誘導(dǎo)因素下形成膽固醇生長時(shí)需要不需要遺傳性與細(xì)菌無關(guān)與原細(xì)菌有關(guān)變異性不能變異可回復(fù)為原菌第一百一十七頁，共一百六十一頁。第二節(jié)主要致病性支原體一、肺炎支原體---所致疾病支原體肺炎傳播途徑----經(jīng)飛沫傳播發(fā)病年齡----兒童及青少年多見潛伏期----2－3W臨床表現(xiàn)----發(fā)熱（約39℃）、頭痛、持續(xù)性頑固咳嗽、胸痛等。一般經(jīng)3－10d主要癥狀消失，但咳嗽可以持續(xù)1個(gè)月之久。第一百一十八頁，共一百六十一頁。二、脲原體屬解脲脲原體（U.urealyticum）亦稱溶脲脲原體非淋菌性尿道炎（nongonococcalurethritisNGU）現(xiàn)已被列為性傳播疾病的病原體。第一百一十九頁，共一百六十一頁。第十八章立克次體重點(diǎn)要求：1、掌握立克次體的概念，主要種類及致病特點(diǎn)2、熟悉立克次體的共同特點(diǎn)第一百二十頁，共一百六十一頁。一、概念

立克次體（Rickettsia）是一類嚴(yán)格活細(xì)胞內(nèi)寄生，以節(jié)肢動(dòng)物為傳播媒介的原核細(xì)胞型微生物。第十八章立克次體第一百二十一頁，共一百六十一頁。二、特點(diǎn)

1、大小介于細(xì)菌與病毒之間，多形態(tài)，革蘭陰性；2、含RNA和DNA兩種核酸；3、缺乏酶系統(tǒng)，嚴(yán)格活細(xì)胞內(nèi)寄生；4、以二分裂方式繁殖；5、以節(jié)肢動(dòng)物為媒介；6、多為自然疫源性疾??；7、對多種抗生素敏感。第一百二十二頁，共一百六十一頁。致病機(jī)制致病物質(zhì)：致病機(jī)制：病理部位：內(nèi)毒素、磷脂酶A節(jié)肢動(dòng)物叮咬或糞便局部（淋巴組織、小血管）全身小血管內(nèi)皮細(xì)胞高熱、頭痛、皮疹血管第一次菌血癥第二次菌血癥第一百二十三頁，共一百六十一頁。普氏立克次體（R.prowazekii）傳染源：病人傳播媒介：體虱人虱人虱人虱人人流行性斑疹傷寒傳播方式第一百二十四頁，共一百六十一頁。恙蟲病立克次體（R.tsutsugamushi）恙蟲病的傳播方式傳播媒介，儲存宿主：恙螨鼠等幼蟲卵成蟲稚蟲稚蟲成蟲卵稚蟲(第二代)人等第一百二十五頁，共一百六十一頁。莫氏立克次體（R.typhi）地方性斑疹傷寒（鼠型斑疹傷寒）傳播方式鼠鼠虱鼠鼠蚤鼠蚤人第一百二十六頁，共一百六十一頁。

種類 傳染源

媒介昆蟲

主要臨床表現(xiàn)

免疫力

普氏立克次體

人人體虱發(fā)熱、頭痛、皮疹持久（流行性斑疹傷寒）神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)損傷莫氏立克氏體

鼠等鼠蚤發(fā)熱、頭痛、皮疹持久（地方性斑疹傷寒）恙蟲病立克次體鼠等恙螨局部黑色焦痂持久（恙蟲熱）發(fā)熱、頭痛、皮疹內(nèi)臟損害主要病原性立克次體第一百二十七頁，共一百六十一頁。外斐反應(yīng)（Weil-Felixreaction）立克次體變形桿菌菌株OX19OX2OXK普氏立克次體++++-斑疹傷寒立克次體++++-恙蟲病立克次體--+++第一百二十八頁，共一百六十一頁。外斐反應(yīng)（Weil-Felixreaction）部分立克次體的脂多糖與變形菌OX19、OX2、Oxk等的菌體抗原有共同成分。由于變形菌抗原易于制備，其凝集反應(yīng)結(jié)果又便于觀察，因此常用這類變形菌抗原代替立克次體抗原進(jìn)行非特異性凝集反應(yīng)。用于檢測血清中有無相應(yīng)抗體，供立克次體病的輔助診斷。此試驗(yàn)稱為外斐試驗(yàn)第一百二十九頁，共一百六十一頁。第十九章衣原體要求掌握：1、衣原體的概念2、沙眼衣原體亞種和所致疾病3、衣原體的獨(dú)特繁殖周期第一百三十頁，共一百六十一頁。一、概念衣原體（Chlamydia）是一類嚴(yán)格真核細(xì)胞內(nèi)寄生，具有獨(dú)特發(fā)育周期，能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生物。衣原體屬分為四個(gè)種沙眼衣原體肺炎衣原體鸚鵡熱衣原體獸類衣原體第一百三十一頁，共一百六十一頁。對多種抗生素敏感衣原體的共同特征革蘭陰性，圓形或橢圓形體具有細(xì)胞壁，其組成與革蘭陰性菌相似含有DNA和RNA兩類核酸有核糖體和較復(fù)雜的酶類，能進(jìn)行多種代謝專性細(xì)胞內(nèi)寄生，二分裂方式繁殖有獨(dú)特的發(fā)育周期第一百三十二頁，共一百六十一頁。

始體（initialbody,IB）或

網(wǎng)狀體（reticulatebody,RB）：二、生物學(xué)特性（一）形態(tài)染色：原體（elementarybody,EB）:形態(tài)小而致密者形態(tài)大而疏松者第一百三十三頁，共一百六十一頁。包涵體易感細(xì)胞內(nèi)含繁殖的始體和子代原體的空泡第一百三十四頁，共一百六十一頁。原體與始體的比較原體始體大小較小0.2~0.4較大0.5~1.0結(jié)構(gòu)有致密類核結(jié)構(gòu)密度較低有細(xì)胞壁無細(xì)胞壁染色性Giemsa染色呈紫紅色深蘭色

Macchiavello染色呈紅色蘭色繁殖能力無代謝活躍，二分裂繁殖胞外穩(wěn)定性強(qiáng)弱感染性有毒力，感染性強(qiáng)無毒力，無感染性第一百三十五頁，共一百六十一頁。（二）培養(yǎng)特性

※專性細(xì)胞內(nèi)寄生，常用雞胚、小鼠和細(xì)胞培養(yǎng)（三）抵抗力對熱、消毒劑敏感耐低溫：-70度保存數(shù)年抗生素：紅霉素，強(qiáng)力霉素，四環(huán)素敏感第一百三十六頁，共一百六十一頁。四種衣原體性狀比較第一百三十七頁，共一百六十一頁。第一節(jié)沙眼衣原體

沙眼衣原體(chlamydiatrachomatis)是引起人類沙眼的病原體。一、致病特點(diǎn)：

1、傳播方式：眼—眼，眼—手—眼；

2、傳播媒介：毛巾、玩具、扶手等。第一百三十八頁，共一百六十一頁。3、感染方式：原體眼結(jié)膜上皮細(xì)胞形成包涵體局部炎癥反應(yīng)