電子煙煙油中尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇含量測(cè)定非標(biāo)方法確認(rèn)報(bào)告

/32電子煙煙油中尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇含量測(cè)定

方法驗(yàn)證報(bào)告概述目前，國(guó)內(nèi)外尚未有正式用于檢測(cè)電子煙油中的尼古丁、1,2-丙二醇和丙三醇含量的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。但與其最相關(guān)的參考標(biāo)準(zhǔn)主要有以下幾個(gè)：1、中國(guó)電子商會(huì)電子煙行業(yè)委員會(huì)在2017年12月20日發(fā)布并于2018年1月10日正式實(shí)施的中國(guó)電子商會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CECC1-2017《電子煙霧化類器具產(chǎn)品通用規(guī)范》和T/CECC2-2017《電子煙霧化液規(guī)范》，其中T/CECC2-2017《電子煙霧化液規(guī)范》中指出電子煙霧化液中1,2-丙二醇和丙三醇含量按YC/T242-2008《煙用香精乙醇、12-丙二醇、丙三醇含量測(cè)定氣相色譜法》檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)采用GC-FID法測(cè)定。YC/T242-2008采用氣相色譜儀聯(lián)用氫火焰離子化檢測(cè)器，以30mx0.25mmi.d.，膜厚1m，固定相為35%聯(lián)苯-65%聚二甲基硅氧烷作為分離柱，1,4-丁二醇做為內(nèi)標(biāo)，正丙醇做為萃取劑，氦氣作為載氣，測(cè)定稀釋后樣品中乙醇、1,2-丙二醇和丙三醇含量。但該檢測(cè)方法主要適用于煙用香精中的乙醇、1,2-丙二醇和丙三醇含量測(cè)定，不涉及尼古丁含量測(cè)定，而電子煙煙油是否屬于煙用香精類別，尚未明確，且此方法發(fā)布時(shí)間年久，對(duì)于新生的電子煙煙液物質(zhì)檢測(cè)有局限性，如線性范圍不適合測(cè)定高含量的丙三醇等。2、法國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（AFNOR）于2015年和2016年出版了電子煙和煙油（e-liquide）的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，含3部分，分別為：XPD90-300-1:2015《電子煙相關(guān)測(cè)試方法及要求》；XPD90-300-2:2015《電子煙煙液要求及測(cè)試方法》；XPD90-300-3:2016《釋放物要求及測(cè)試方法》。其中，第2部分XPD90-300-2:2015《電子煙煙液要求及測(cè)試方法》，在其附件中，共推薦四個(gè)檢測(cè)方法，分別為GC-FID、GC-MS、HPLC-UV、GC-TCD法，其中GC-MS、HPLC-UV法可測(cè)定尼古丁，GC-TCD法測(cè)定水份，GC-FID法可測(cè)尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇和薄荷醇。XPD90-300-2:2015GC-FID法采用異丙醇為萃取劑、正十七烷做為內(nèi)標(biāo)物，采用氣相色譜儀聯(lián)用氫火焰離子化檢測(cè)器，以ZBWAX（3mx0.18mmi.d，膜厚18m，從長(zhǎng)20m的ZBWax毛細(xì)柱截取獲得）作為分離柱，氦氣作為載氣，分析尼古丁、1,2-丙二醇和丙三醇，薄荷醇目標(biāo)物含量。該檢測(cè)方法是以附件形式出現(xiàn)在法國(guó)電子煙標(biāo)準(zhǔn)中，為標(biāo)準(zhǔn)方法節(jié)選部分。3、其他如：國(guó)內(nèi)國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T23355-2009《卷煙總粒相物中煙堿的測(cè)定氣相色譜法》、國(guó)內(nèi)煙草行業(yè)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T154-2001《卷煙濾嘴中煙堿的測(cè)定氣相色譜法》、YC/T156-2001《卷煙總粒相物中煙堿的測(cè)定氣相色譜法》、YC/T185-2004《卷煙側(cè)流煙氣中焦油和煙堿的測(cè)定》均含有采用氣相色譜儀聯(lián)用氫火焰離子化檢測(cè)器（GC-FID）法測(cè)定煙堿成分，但屬于傳統(tǒng)卷煙檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)；國(guó)際煙草研究合作中4（CORESTA）于2017年發(fā)布了電子煙氣溶膠中煙堿、1,2-丙二醇和丙三醇測(cè)試推薦方法《CORESTARECOMMENDEDMETHODN°84》。采用氣相色譜儀聯(lián)用氫火焰離子化檢測(cè)器（GC-FID）法測(cè)定電子煙氣溶膠中煙堿、1,2-丙二醇和丙三醇，但其目標(biāo)定向于電子煙霧化產(chǎn)生的氣溶膠中的煙堿、1,2-丙二醇和丙三醇含量測(cè)定，與我們的檢測(cè)目標(biāo)主體是市售的電子煙煙油中煙堿、1,2-丙二醇和丙三醇含量，在結(jié)果表述上有很大的差別。綜上所述，本分析測(cè)試中心借鑒和參考上述國(guó)內(nèi)外有關(guān)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，主要參考上述的1、2條，制定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的非標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，采用氣相色譜儀聯(lián)用氫火焰離子化檢測(cè)器（GC-FID），無(wú)水乙醇為萃取劑，喹啉做為內(nèi)標(biāo)物測(cè)定煙油中尼古丁含量、外標(biāo)法測(cè)定1,2-丙二醇和丙三醇含量；其中，選用無(wú)水乙醇做為萃取劑，安全環(huán)保，選用的喹啉是國(guó)內(nèi)外相關(guān)參考文獻(xiàn)中的一種；且兩個(gè)方法合二為一，操作簡(jiǎn)單準(zhǔn)確可靠，極大減少了工作量；該方法通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，滿足本中心的檢測(cè)需求，可適用于檢測(cè)電子煙油中的尼古丁、1,2-丙二醇和丙三醇含量。檢測(cè)方法詳細(xì)內(nèi)容請(qǐng)參閱附件3：HXX/CS-SOP/B-2018-001《電子煙煙油中尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇含量測(cè)定》，其中1,2-丙二醇簡(jiǎn)稱PG,丙三醇簡(jiǎn)稱VG，下文的PG、VG分別代表1,2-丙二醇、丙三醇。參考GB/T27417-2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》中實(shí)驗(yàn)室對(duì)化學(xué)分析方法進(jìn)行方法確認(rèn)和方法驗(yàn)證一般性原則，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際運(yùn)行情況，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定的方法進(jìn)行方法確認(rèn)。主要進(jìn)行的方法確認(rèn)的特性參數(shù)內(nèi)容如下：a方法的選擇性；c線性范圍；b檢出限和定量限;d精密度（重復(fù)性和再現(xiàn)性）；e正確度；f準(zhǔn)確度；g稱樣量考量；h溶液穩(wěn)定性；儀器與試劑儀器與試劑：島津氣相色譜儀（GC-2010plus，帶氫火焰離子化檢測(cè)器，內(nèi)部編號(hào)HSY-SP-005）；毛細(xì)管柱SHIMADZU-SH-Rtx-Wax，30m0.25mmID,0.25m；語(yǔ)路超聲波清洗機(jī)超聲波清洗儀；電子天平（梅特勒十萬(wàn)分之一，精度0.00001g）常用玻璃儀器；無(wú)水乙醇（色譜純，天津科密歐科技有限公司）；尼古丁標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）130356，四川中測(cè)標(biāo)物科技有限公司；喹啉標(biāo)準(zhǔn)品，98.7%,德國(guó)DrEhrenstorfer公司；1,2-丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品，純度99.6%，湖南省藥用輔料工程技術(shù)研究中心；丙三醇標(biāo)準(zhǔn)品，純度99.5%，湖南省藥用輔料工程技術(shù)研究中心。驗(yàn)證項(xiàng)目?jī)?nèi)容方法選擇性溶劑、目標(biāo)物質(zhì)與內(nèi)標(biāo)物分離情況由于電子煙煙油主要成分由1,2-丙二醇、丙三醇、乙醇、尼古丁及香精香料組成，其中1,2-丙二醇、丙三醇占絕對(duì)比例（90%），則主要考察1,2-丙二醇、丙三醇、乙醇、尼古丁及喹啉內(nèi)標(biāo)物內(nèi)在聯(lián)系，分別取乙醇空白液和1,2-丙二醇、尼古丁、喹啉內(nèi)標(biāo)物質(zhì)及丙三醇各單標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液，同等濃度的1,2-丙二醇、尼古丁、喹啉內(nèi)標(biāo)物質(zhì)及丙三醇標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇混合液，進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)試，考察各待測(cè)檢測(cè)物、內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的分離情況。其中，在SHIMADZU-SH-Rtx-Wax，30m0.25mmID,0.25m色譜柱及方法規(guī)定的色譜條件下，乙醇空白液在保留時(shí)間為2.0min處出現(xiàn)乙醇峰；1,2-丙二醇、尼古丁、喹啉內(nèi)標(biāo)物質(zhì)及丙三醇各單標(biāo)準(zhǔn)品的除乙醇峰外，分別在4.0min、6.2min、6.5min、10.5min處出峰，色譜峰峰型尖銳對(duì)稱；1,2-丙二醇、尼古丁、喹啉內(nèi)標(biāo)物質(zhì)及丙三醇標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇混合液，在2.0min、4.0min、6.2min、6.5min、10.5min處都有出峰，分離度均大于1.5，色譜峰完全分離，其各峰與空白液、各物質(zhì)單標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)出峰時(shí)間一致，其面積與各物質(zhì)單標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)出峰面積基本一致，其典型色譜圖見(jiàn)附件一。結(jié)果表明，采用方法中的色譜柱及色譜條件能有效分離被測(cè)化合物，出峰時(shí)間，峰型，峰與峰分離度能滿足定性和定量分析。干攏物質(zhì)分析樣品中可能存在的干攏物質(zhì)主要來(lái)源于添加的香精香料提取物中的不明化合物，由于香精香料提取物種類繁多、成分復(fù)雜，分析所有香精香料顯然不具備可行性，故選取常用于調(diào)制電子煙油口味、口感的常見(jiàn)香精香料進(jìn)行分析，以查看可能干擾1,2-丙二醇、丙三醇、尼古丁、內(nèi)標(biāo)喹啉的物質(zhì)。取60組常用于調(diào)制電子煙油口味、口感的香精香料，采用最大化法，稱取與檢測(cè)煙油一致的稱樣量，分析香精香料中的的可能存在的干攏峰，則稱取0.2g香精香料至10mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解后，進(jìn)行色譜分析。結(jié)果在選取60組香精香料中大部分香精香料含有丙二醇、丙三醇，少部分含有尼古丁（已用GC-MS定性，確定是丙二醇、丙三醇、尼古丁物質(zhì)，非其他干擾物），其不影響最終電子煙液中的丙二醇、丙三醇，尼古丁總量的測(cè)定；除上述峰外，還存有在各個(gè)保留時(shí)間點(diǎn)的峰，其峰位置、數(shù)目、大小因香精香料種類而異，在60組測(cè)試樣品中，大部分香精香料的色譜峰不干擾丙二醇、丙三醇、尼古丁和喹啉內(nèi)標(biāo)峰，僅有3組香精的峰與喹啉內(nèi)標(biāo)峰發(fā)生重疊，比例僅為5%，影響到用喹啉作內(nèi)標(biāo)對(duì)尼古丁的測(cè)定。由于香精香料在電子煙液的添加配比一般為5-35%，最常見(jiàn)添加配比為5-20%，而在煙用香精香料中其溶劑（丙二醇、丙三醇等）又占主要成分，而上述香精香料測(cè)試濃度遠(yuǎn)大于電子煙液中香精香料的濃度（10倍以上），因此，存在共流峰的幾率很小，其共流峰對(duì)喹啉內(nèi)標(biāo)峰的貢獻(xiàn)也很少、對(duì)尼古丁測(cè)定影響可忽略不計(jì)。對(duì)于可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生較大影響的，可以軟件積分扣除，也可以通過(guò)改用正十七烷做為內(nèi)標(biāo)校正。表160組常用電子煙液香精香料序號(hào)樣品序號(hào)樣品序號(hào)樣品1香芋21紅牛41哈密瓜2生姜22綠箭42玫瑰3奇異果23藍(lán)莓43薄荷4橙汁24可口可樂(lè)44櫻桃5榛子25青蘋(píng)果45桂花6百香果26香蕉46留蘭香7墨西哥肉桂米水27杏仁47牛奶8肉桂28葡萄48獼猴桃9啤酒29草莓49丁香10李子30桔子50綠茶

uV-25：0：J燕琳疑池才甘--I3面lien.7E：0：-25：0：-TiiDr11.131ikn.：\C：-圖:c:c:-7E：0：-25：uV-25：0：J燕琳疑池才甘--I3面lien.7E：0：-25：0：-TiiDr11.131ikn.：\C：-圖:c:c:-7E：0：-25：心m圖2標(biāo)準(zhǔn)品與電子煙液對(duì)比色譜11黑櫻桃31烏梅51紅茶12蘿越莓32菠蘿52薄荷腦13板栗33人參53如煙414蘆薈34檸檬54王子香煙15黑加侖35巧克力5555516米香36水蜜桃56如煙617麥香37咖啡57萬(wàn)寶路18木瓜38煙草絕無(wú)58駱駝19甜瓜39香草59煙草20黃瓜40橙子60甜薄荷

5(0(0-5(0(0-3(0(0-2(0(0-2.2良時(shí)工忙的CPU性范圍Ire117E1暗客2.2.1線性標(biāo)準(zhǔn)品與香精基液235(0(0-5(0(0-3(0(0-2(0(0-2.2良時(shí)工忙的CPU性范圍Ire117E1暗客2.2.1線性標(biāo)準(zhǔn)品與香精基液23對(duì)比色譜圖J青密稱取尼古丁標(biāo)準(zhǔn)品(純度99.9%)0.10'丙三醇標(biāo)準(zhǔn)品2.0001g，至100mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，IIIIIIIIIIIIII搖勻，作為混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，’其中含尼古丁1.0040mg/mL、、1',2必二醇20.0880mg/mL、丙三醇20.0010mg/mL。精密稱取喹琳標(biāo)準(zhǔn)品(純度96%)0.2611g，至250mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為喹琳內(nèi)標(biāo)液，其中喹琳濃度為1.0026mg/mL。準(zhǔn)確移取0.05、3.00、4.00、5.00、8.00、9.00mL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液至10mL容量瓶，加入1.0mL上述喹琳內(nèi)標(biāo)液，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，依次從低濃度到高濃度進(jìn)行色譜進(jìn)樣，計(jì)算各級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液中尼古丁與喹琳內(nèi)標(biāo)的濃度比、峰面積比，做出尼古丁與內(nèi)標(biāo)濃度比與峰面積比的擬合曲線、相關(guān)系數(shù)R2及做出1,2-丙二醇、丙三醇濃度與峰面積的的擬合曲線、相關(guān)系數(shù)R2,考察在其系列濃度值下的線性，結(jié)果如下：表2線性范圍移液體積(mL)尼古丁濃度(mg/mL)PG濃度(mg/mL)VG濃度(mg/mL)內(nèi)標(biāo)面積尼古丁面積PG面積VG面積尼古丁與內(nèi)標(biāo)濃度比尼古丁與內(nèi)標(biāo)面積比0.050.00500.20040.10103169913562554373670.05000.04280.10.01000.40080.201932151269251899158580.10000.08370.20.02010.80160.4038319775200105245323700.20010.16260.50.05012.00411.00963226313281275143866150.50020.411610.10034.00822.019132487271095690201866561.00040.834520.20068.01644.0382323895394811485243810962.00071.665630.300912.02466.0573322718052017275305866433.00112.495150.501520.041010.09553300913874329702279842885.00194.203280.802432.065616.152832704223778475781416432758.00306.842590.902736.073818.171932098248200527757918204519.00337.7326尼古丁y=0.8569x-0.0257R2=0.9999PGy=147,724.1858x-17,379.4147R2=0.9999VGy=101,136.3286x-14,667.6820R2=0.9996其中，尼古丁、PG、VG在上述系列濃度成線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。檢測(cè)樣品范圍根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)濃度值范圍，分別以0.1g和0.2g稱樣量換算，可得到檢測(cè)樣品中的目標(biāo)物濃度范圍如下：表3檢測(cè)樣品濃度范圍尼古丁1,2-丙二醇丙三醇標(biāo)曲濃度范圍0.005-0.9mg/mL0.2-36mg/mL0.1-18mg/mL稱樣量為0.1g0.5-90mg/g20-3600mg/g10-1800mg/g稱樣量為0.2g0.25-45mg/g10-1800mg/g5-900mg/g中國(guó)電子商會(huì)電子煙行業(yè)委員于2017年12月20日發(fā)布了中國(guó)首個(gè)電子煙團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CECC2-2017《電子煙霧化液規(guī)范》做出了限度要求，及歐盟TPD法規(guī)規(guī)定，市場(chǎng)上流通的電子煙煙液中尼古丁濃度不超過(guò)20mg/mL。表4T/CECC2-2017《電子煙霧化液規(guī)范》限度要求項(xiàng)目限度煙堿（尼古?。?biāo)示量的95%?105%，且濃度不得超過(guò)24mg/mL丙二醇標(biāo)示量的95%?105%丙三醇標(biāo)示量的95%?105%目前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上電子煙尼古丁濃度主要集中在24mg/mL以下，最常見(jiàn)的產(chǎn)品規(guī)格煙堿（尼古?。?biāo)示濃度有3mg/mL，6mg/mL，9mg/mL，11mg/mL，12mg/mL，16mg/mL，18mg/mL和24mg/mL（電子煙油密度1.037~1.288）。而在電子煙煙液中1,2-丙二醇、丙三醇成份占電子煙液的主要部分，兩者和一般不少于電子煙煙液總質(zhì)量的90%，其中的丙三醇（俗稱蔬菜甘油）是電子煙煙液是產(chǎn)生霧化效果的主要成份，為了達(dá)到與傳統(tǒng)卷煙一樣的煙霧效果，其含量一般不少于電子煙煙液總含量的30%，而最常見(jiàn)的電子煙液中的1,2-丙二醇：丙三醇質(zhì)量配比為70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、0:100。結(jié)合上述，為了使樣品在合理稱樣量下目標(biāo)物質(zhì)響應(yīng)值均在各自曲線范圍內(nèi)，且只需稱量一次，本分析測(cè)試中心在測(cè)定電子煙煙油中尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇含量時(shí)，選取的尼古丁線性范圍濃度為0.05-0.8mg/mL，1,2-丙二醇線性范圍濃度為2-32mg/mL,丙三醇線性范圍濃度為1-16mg/mL，則以0.1g稱樣量計(jì)算，可檢測(cè)樣品中尼古丁濃度為5-80mg/g，1,2-丙二醇濃度為200-3200mg/g，丙三醇濃度為100-1600mg/g；以0.2g稱樣量計(jì)算，可檢測(cè)樣品中尼古丁濃度為2.5-40mg/g，1,2-丙二醇濃度為100-1600mg/g,丙三醇濃度為50-800mg/g，但實(shí)際上丙二醇，丙三醇質(zhì)量濃度不可能超過(guò)100%，所以實(shí)際上可以檢測(cè)濃度為表:表5本中心標(biāo)曲檢測(cè)樣品濃度范圍尼古丁1,2-丙二醇丙三醇標(biāo)曲線性范圍0.05-0.8mg/mL2-32mg/mL1-16mg/mL稱樣量為0.1g5.0-80mg/g200-1000mg/g（20-100%）100-1000mg/g（10-100%）稱樣量為0.2g2.5-40mg/g100-1000mg/g（10-100%）50-800mg/g（5-80%）即已基本覆蓋市售電子煙煙液中1,2-丙二醇、丙三醇含量范圍，對(duì)于樣品中尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇含量極低的情況，可以通過(guò)加大稱樣量或選取低濃度范圍重新做另一標(biāo)準(zhǔn)曲線等方式加以解決。工作曲線線性工作曲線a標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A：稱取尼古丁標(biāo)品(純度99.9%)0.1002g，1,2-丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品4.00048、丙三醇標(biāo)準(zhǔn)品2.0163g，至100mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A，其中含尼古丁1.001mg/m!、1,2-丙二醇40.004mg/mL丙三醇20.163mg/mL。喹琳內(nèi)標(biāo)溶液：稱取喹琳標(biāo)準(zhǔn)品(純度96%)0.2615g，至250mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為喹琳溶液，其中喹琳濃度為1.004mg/mL分別精密量題.0mL上述喹琳內(nèi)標(biāo)液至6個(gè)不同的10mL容量瓶中，再精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、8.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至上述6個(gè)10mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，從低到高濃度依次進(jìn)樣，做出尼古丁與內(nèi)標(biāo)濃度比與峰面積比的擬合曲線、相關(guān)系數(shù)及做出1,2-丙二醇、丙三醇濃度與峰面積的的擬合曲線、相關(guān)系數(shù)，結(jié)果如下表所示：表6標(biāo)準(zhǔn)曲線a線性范圍移液尼古丁PGVG-T口…尼古丁尼古丁內(nèi)標(biāo)尼古丁PGVG八？芨？芨？芨面積面積面積面積j右壬j(mL)(mg/mL)(mg/mL)(mg/mL)濃度比面積比0.50.05002.00021.00823184412265249422773970.49840.3852

10.10014.00042.016333317278055780441859790.99690.834620.20028.00084.0326325875453211458643761811.99371.673430.300312.00126.0489332438354717593935845102.99062.513250.500520.002010.08153245613680528832029719814.98434.215180.800832.003216.130432523220763464209915879257.97486.7879尼古丁y=0.8544x-0.0332R2=1.0000PGy=145,671.2385x-17,578.1400R2=0.9999VGy=99,452.3132x-21,046.3553R2=0.9999工作曲線b標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備B：稱取尼古丁標(biāo)品(純度99.9%)0.1021g，1,2-丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品4.0044g、丙三醇標(biāo)準(zhǔn)品2.0093g，至100mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B，其中含尼古丁1.020mg/mL、1,2-丙二醇40.044mg/mL、丙三醇20.093mg/mL。喹啉內(nèi)標(biāo)液：稱取喹啉標(biāo)準(zhǔn)品(純度96%)0.2605g，至250mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為喹啉溶液，其中喹啉濃度為1.000mg/mL。分別精密量取1.0mL上述喹啉內(nèi)標(biāo)液B至6個(gè)不同的10mL容量瓶中，再精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、8.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至上述6個(gè)10mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，從低到高濃度依次進(jìn)樣，做出尼古丁與內(nèi)標(biāo)濃度比與峰面積比的擬合曲線、相關(guān)系數(shù)及做出1,2-丙二醇、丙三醇濃度與峰面積的的擬合曲線、相關(guān)系數(shù)，結(jié)果如下表所示：表7標(biāo)準(zhǔn)曲線b線性范圍移液體積(mL)尼古丁濃度(mg/mL)PG濃度(mg/mL)VG濃度(mg/mL)內(nèi)標(biāo)面積尼古丁面積PG面積VG面積尼古丁與內(nèi)標(biāo)濃度比尼古丁與內(nèi)標(biāo)面積比0.50.05102.00221.004732993128282559001.004650.50980.388810.10204.00442.009332508276945650302.00931.01970.851920.20408.00884.0186322235503911400014.01862.03931.708130.306012.01326.0279328648363217376676.02793.05902.544850.510020.022010.046532537140255291207510.04655.09834.310680.816032.035216.074433269232566479902316.07448.15726.9905尼古丁y=0.8606x-0.0528R2=0.9999PGy=150,662.0460x-59,145.0658R2=0.9997VGy=103,253.6480x-37,513.7200R2=0.9992結(jié)論：兩組不同的標(biāo)準(zhǔn)液系列中尼古丁、PG、VG含量曲線成線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999,滿足分析要求。2.3方法的檢出限、定量限參考GB/T27417-2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》5.4.2.2確定檢出限的方法，采用空白加標(biāo)評(píng)估方法的檢出限。尼古丁的方法檢出限、定量限空白樣品：樣品中不含尼古丁的基液（PG:VG=30:70）。線性范圍的選?。涸O(shè)定尼古丁濃度為1?30g/mL。精密稱取0.2g空白樣品至10mL容量瓶中，精密移取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL、3mL的濃度為100g/mL的尼古丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加1mL內(nèi)標(biāo)溶液，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻。進(jìn)樣檢測(cè)。選取兩個(gè)低濃度點(diǎn)（加標(biāo)濃度為1g/mL、2g/mL）重復(fù)操作7次（n=7）。以面積比對(duì)濃度比進(jìn)行線性回歸，在1?30g/mL濃度范圍內(nèi)，線性方程為y=0.8163x+0.0012,R2=0.9998。表8尼古丁方法加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)加標(biāo)濃度實(shí)測(cè)濃度平均測(cè)得量SDRSD%LLL平均回收率％0.8450.8660.9040.0769.183.2510.030.7240.9310.7580.8000.83320.061.8411.7502.0101.7141.8270.0965.391.351.8031.8691.802由上表可知，加標(biāo)濃度為1g/mL、2g/mL平均回收率分別為83.25%、91.35%,故選取加標(biāo)濃度為2g/mL計(jì)算方法的檢出限，對(duì)應(yīng)的濃度為=3.143xSD=3.143x0.096=0.30g/mL；以0.2g稱樣量計(jì)算，則該方法的檢出限為=0.30g/mLx10mL：0.2g：1000=0.015mg/g,百分比表示為0.0015%。為增加數(shù)據(jù)的可信性，以10倍的檢出限作為方法的定量限，該方法的定量限為0.15mg/g,百分比表示為0.015%。表9尼古丁方法檢出限及定量限MDL&MQL對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣濃度L電子煙液樣品中的檢測(cè)限度％MDL0.300.0015MQL3.000.015PG、VG的方法檢出限、定量限由于電子煙液的主要成分為丙二醇、丙三醇、尼古丁及香精香料，且丙二醇和丙三醇總量占90%以上。線性范圍的選?。涸O(shè)定丙二醇、丙三醇濃度為3?

30g/mL。精密移取0.3mL、0.5mL、1mL、2mL、3mL的濃度為100g/mL的丙二醇和丙三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加1mL內(nèi)標(biāo)溶液，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，進(jìn)樣檢測(cè)。選取最低濃度點(diǎn)（加標(biāo)濃度為3g/mL）重復(fù)操作7次（n=7）。以面積比對(duì)濃度比進(jìn)行線性回歸，在3?30g/mL濃度范圍內(nèi)，丙二醇線性方程為y=123.98x+27.754,R2=0.9998；丙三醇線性方程為y=63.624x+29.916,R2=0.9996。表10PG、VG的方法加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)測(cè)試項(xiàng)目加標(biāo)濃度L實(shí)測(cè)濃度L平均測(cè)得量LSDRSD%平均回收率％3.173.382.97丙二醇3.013.313.1700.1795.6%105.32%3.022.983.352.943.713.00內(nèi)三醇3.013.303.2410.2818.7%107.67%3.003.303.44由上表可知，加標(biāo)濃度為3.01g/mL，丙二醇、丙三醇平均回收率分別為105.32、107.67%,丙二醇、丙三醇檢出限對(duì)應(yīng)的濃度分別為0.56g/mL、0.88g/mL;以0.2g稱樣量計(jì)算，則該方法的1,2-丙二醇檢出限=0.56g/mL10mL：0.2g：1000=0.028mg/g,百分比表示為0.003%,丙三醇檢出限=0.88g/mL10mL：0.2g：1000=0.044mg/g,百分比表示為0.004%。為增力口數(shù)據(jù)的可信性，以10倍的檢出限作為方法的定量限，該方法的丙二醇、丙三醇定量限分別為0.28mg/g、0.44mg/g,百分比表示0.03%、0.04%。表11PG、VG的方法檢出限及定量限測(cè)試項(xiàng)目MDL&MDL對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣濃度L電子煙液樣品中的檢測(cè)限度%丙二醇MDL0.560.003MQL5.60.03丙三醇MDL0.880.004MQL8.80.04精密度儀器重復(fù)性以3級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)11次進(jìn)樣測(cè)試，計(jì)算內(nèi)標(biāo)物、尼古丁、PG、VG響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，如下表所示：表12儀器重復(fù)性序號(hào)內(nèi)標(biāo)物面積尼古丁面積PG面積VG面積13246154245114118237293823276654747114946337676633328555562116845338418843359056210118044538610653375456287118253339024263272554544114666037659473358056135117766138687483268854510114677937595793321255442116488938266110329135495011538683794971132587545321145864376181AVERAGE33097.455263.21161193.3381182.3SD448.5768.215543.05662.8RSD%1.36%1.39%1.34%1.49%結(jié)論：3級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)11次進(jìn)樣測(cè)試，其內(nèi)標(biāo)物、尼古丁、PG、VG面積響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1.5%，方法儀器精密度良好。方法重復(fù)性以公司現(xiàn)有不同口味樣品為例，平行稱取樣品6個(gè)，分析結(jié)果的RSD%;表13方法重復(fù)性芒果口味序號(hào)稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼^古丁含量(mg/g)10.19847291.80718.572.58720.20980287.74706.492.56530.21339278.16684.212.49640.20472265.66651.482.43150.20109276.02673.912.49060.20669270.99662.462.443AVERAGE278.40682.852.502SD9.9025.750.063RSD%3.563.772.52表14方法重復(fù)性西瓜口味序號(hào)稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)10.20282636.27375.885.46520.20700602.83354.795.41930.19833621.92367.955.44440.20365612.03360.355.43550.20590625.78370.475.46760.20329621.06367.075.450AVERAGE619.98366.095.447SD11.507.480.018RSD%1.852.040.33

表15方法重復(fù)性藍(lán)莓口味序號(hào)稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)10.14941664.03301.7117.33520.15121666.00303.7117.38730.14975652.66297.6417.33140.15462645.53294.7617.42650.15154664.72302.0717.39660.14948654.03297.8917.328AVERAGE657.8299.617.367SD8.33.40.042RSD%1.261.130.24結(jié)論：3個(gè)不同口味，不同尼古丁濃度(3、6、18mg/g)，不同PG/VG比例樣品分別稱取樣品6個(gè)，平行進(jìn)樣分析；其各自的尼古T，PG、VG含量結(jié)果RSD%均小于4%，小于分析要求5%，平行樣分析滿足分析要求。正確度表表樣品加標(biāo)回收率以公司現(xiàn)有不同口味不同濃度樣品為例，以尼古丁標(biāo)準(zhǔn)液(20.051mg/mL)、PG標(biāo)準(zhǔn)液(600.025mg/mL)、VG標(biāo)準(zhǔn)液(600.095mg/mL)添加40L和100L(相當(dāng)于樣品該物質(zhì)含量1倍、3倍)加標(biāo)量的進(jìn)行加標(biāo)測(cè)試，計(jì)算加標(biāo)回收率，如下所示：尼古丁回收率表16尼古丁加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)1序號(hào)口味名樣品中尼古丁稱樣量(g)1倍加標(biāo)內(nèi)標(biāo)面積尼古丁面積稱樣量(g)3倍加標(biāo)內(nèi)標(biāo)面積尼古丁面積稱樣量(g)內(nèi)標(biāo)面積尼古丁面積1糖稀0.204732938165360.2048932758404200.2029132088747932奶油甜甜圈0.2080632986175340.2036933318398300.2075932541759083蔓越橘藍(lán)莓0.204433477221350.2056233332451010.2039733171796384肉桂0.2060132962223680.20433210458040.2093332754808995鐵樹(shù)0.1094932387178330.1049232642411580.1124332402742346草莓酸乳0.1062333893172090.1084432819398640.1027933829736887肉桂0.1035433032223770.104331871463640.1139832387779348香草0.1002733042214830.1019532894442410.101593250279557表17尼古丁加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)2樣品中尼古丁1倍加標(biāo)回收率3倍加標(biāo)回收率序號(hào)尼古丁換算加標(biāo)量(mg/g)加標(biāo)換算加加標(biāo)口味名含量總含量回收率平均值標(biāo)量總含量回收率平均值(mg/g)(mg/g)(mg/g)(mg/g)1糖稀3.0733.9537.488111.71%9.78613.287104.37%2奶油甜甜圈3.193.8647.118101.65%9.84413.337103.08%3蔓越橘藍(lán)莓3.9933.9328.026102.56%103.32%9.75113.846101.05%102.73%4肉桂4.0613.8318.038103.80%9.82914.225103.42%5鐵樹(shù)6.2677.13413.625103.15%19.11125.847102.45%

6草莓酸乳5.9857.80313.853100.84%18.4924.694101.19%7肉桂8.0667.03715.104100.01%19.22427.928103.32%8香草8.017.89516.131102.87%19.66728.264102.98%結(jié)論：在不同口味、不同尼古丁濃度（3、4、6、8mg/g），不同基質(zhì)（PG/VG比例不同），尼古丁在1倍和3倍加入標(biāo)準(zhǔn)量的回收率在100?112%之間，滿足分析要求。PG回“攵率表18PG加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)1序號(hào)口味名樣品中PG1倍加標(biāo)稱樣量（g）面積3倍加標(biāo)稱樣量（g）面積稱稱樣量（g）面積1七星0.199223583080.185816982090.1960712546702登喜路0.199551481650.201035094290.212410683123登喜路0.199631527980.214445112130.2052510726404煙草0.20351762220.207965457610.208551080454■19PG加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)2樣品中PG1倍加標(biāo)3倍加標(biāo)PG含量(mg/g)換算加標(biāo)換算加加標(biāo)序號(hào)口味名加標(biāo)量總含量回收率平均值標(biāo)量總含量回收率平均值(mg/g)(mg/g)(mg/g)(mg/g)1七星129.524129.17264.448104.46%306.026445.438103.23%23登喜路登喜路57.01858.588119.39111.924179.962169.28102.98%102.71%98.90%282.498292.339350.96364.633104.05%104.69%103.72%4煙草65.376115.412185.959104.48%287.713361.436102.90%結(jié)論：在不同口味不同濃度樣品中，PG在1倍和3倍加入標(biāo)準(zhǔn)量回收率在98?105%之間，滿足分析要求。VG回收率表20VG加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)1序號(hào)口味名樣品中VG1倍加標(biāo)3倍加標(biāo)稱樣量（g）面積稱樣量（g）面積稱樣量（g）面積1紅茶0.204461497540.201253962010.201157651512百樂(lè)門(mén)0.200462667070.211935364620.198048956103駱駝0.21607642810.208792999860.245886939254特醇煙草0.209974350600.2119210849760.226252406494表21VG加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)2樣品中VG1倍加標(biāo)3倍加標(biāo)VG含量(mg/g)換算加標(biāo)換算加加標(biāo)序號(hào)口味名加標(biāo)量總含量回收率平均值標(biāo)量總含量回收率平均值(mg/g)(mg/g)(mg/g)(mg/g)1紅茶83.997119.274208.47104.36%104.65%298.332393.004103.58%103.59%

2百樂(lè)門(mén)144.337113.263264.511106.10%303.017465.413105.96%3駱駝39.708114.966154.60599.94%244.06292.382103.53%4特醇煙218.421283.171524.78108.19%849.5121078.855101.29%草注：4號(hào)特醇煙樣品由于本身VG含量高，加入1倍和3倍標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)實(shí)際為100L、300L以滿足1倍，3倍關(guān)系。結(jié)論：在不同口味不同濃度樣品中，VG在1倍和3倍標(biāo)準(zhǔn)加入量回收率在99?110%之間，滿足分析要求。方法準(zhǔn)確度對(duì)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制合理稀釋后進(jìn)樣檢測(cè)，所得結(jié)果與理論值比對(duì)，其中：尼古?。阂迫?00g/mL尼古丁標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5.0mL于10mL容量瓶，加入1.0mL喹啉內(nèi)標(biāo)溶液A(喹啉濃度為1004.16g/mL),用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，待測(cè)；PG:稱取1,2-丙二醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(純度0.996)0.10269g于10mL容量瓶，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，待測(cè)；VG:稱取甘油(丙三醇)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(純度0.995)0.10055g于10mL容量瓶，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，待測(cè)；表22方法準(zhǔn)確度數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱證書(shū)批次濃度或純度相對(duì)不確定度(％)*=2測(cè)量值相對(duì)誤差異丙醇中尼古丁標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)13035616071801200g/mL3194.88g/mL-2.56%1,2-丙二醇純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)06528099.60%0.799.90%0.30%甘油(丙三醇)純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)06195099.50%0.399.57%0.07%結(jié)論：3個(gè)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)量值相對(duì)誤差均在各自的相對(duì)不確定度范圍內(nèi)，該方法準(zhǔn)確度分析滿足分析要求。稱樣量考量以公司現(xiàn)有8個(gè)不同口味不同濃度比例樣品為例，分別稱取0.1g、0.15g、0.20g3個(gè)樣品量按方法操作進(jìn)樣，考量不同稱樣量對(duì)結(jié)果的影響，結(jié)論如下：表23稱樣量考量鐵樹(shù)稱量規(guī)格實(shí)際稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)[0.10]0.10949373.18605.306.267[0.15]0.15328380.76611.976.350[0.20]0.20735387.19621.256.166AVERAGE380.37612.846.261SD7.0138.0100.092RSD%1.84%1.31%1.47%表24稱樣量考量醇和煙草稱量規(guī)格實(shí)際稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)[0.10]0.11500295.61624.856.065[0.15]0.15123305.47645.066.113

[0.20]0.21846306.05658.776.123AVERAGE302.38642.896.100SD5.86817.0650.031RSD%1.94%2.65%0.50%表25稱樣量考量萬(wàn)寶路稱量規(guī)格實(shí)際稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)[0.10]0.10348681.86302.738.042[0.15]0.15995677.23300.207.927[0.20]0.20482683.48301.337.953AVERAGE680.86301.427.974SD3.2441.2670.060RSD%0.48%0.42%0.76%表26稱樣量考量肉桂1稱量規(guī)格實(shí)際稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)[0.10]0.10354451.769424.2848.066[0.15]0.15111450.136423.2247.936[0.20]0.20066455.323429.9587.898AVERAGE452.409425.8227.967SD2.6523.6210.088RSD%0.59%0.85%1.11%表27稱樣量考量紅萬(wàn)寶路稱量規(guī)格實(shí)際稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)[0.10]0.11681257.107666.46916.811[0.15]0.16694256.047660.12816.609[0.20]0.20572258.712666.46916.414AVERAGE257.289664.35516.611SD1.3423.6610.199RSD%0.52%0.55%1.20%表28稱樣量考量肉桂2稱量規(guī)格實(shí)際稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)[0.10]0.10944146.772747.05516.885[0.15]0.14898141.158722.60416.355[0.20]0.20059140.613729.22416.422AVERAGE142.848732.96116.554SD3.41012.6470.289RSD%2.39%1.73%1.74%表29稱樣量考量駱駝稱量規(guī)格實(shí)際稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)[0.10]0.10558640.32296.6723.542[0.15]0.15302656.07306.0623.590[0.20]0.22073656.70304.2823.707AVERAGE651.03302.3323.613SD9.284.990.085RSD%1.43%1.65%0.36%表30稱樣量考量稱煙草稱量規(guī)格實(shí)際稱樣量(g)PG含量(mg/g)VG含量(mg/g)尼古丁含量(mg/g)[0.10]0.11459673.83302.8923.493[0.15]0.15364670.83301.9423.487[0.20]672.92674.10302.4723.639AVERAGE672.92672.92302.43SD1.821.820.47RSD%0.27%0.27%0.16%結(jié)論：8個(gè)不同口味，不同尼古丁濃度(6、8、16、24mg/g)，不同PG/VG比例樣品按0.10、0.15、0.20g三種稱樣量稱取樣品的尼古丁，PG、VG含量結(jié)果RSD%均小于3%,小于分析要求5%,稱樣量在0.1?0.2g范圍內(nèi)無(wú)明顯差異，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，可跟據(jù)樣品檢測(cè)物質(zhì)的含量，靈活地安排稱樣量，使物質(zhì)響應(yīng)值在工作曲線合理區(qū)間范圍上。溶液穩(wěn)定性分析選取一樣品(尼古丁含量約8mg/g、PG約45%、VG約43%)按方法操作制備樣品，分別在0h、0.5h、1h、2h、3h、4h、8h、16h、24h、2day、3day、4day、5day、6day、7day時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣，分析結(jié)果差異判斷溶液穩(wěn)定性。表31溶液穩(wěn)定性分析進(jìn)樣時(shí)間PG(mg/g)VG(mg/g)尼古丁含量(mg/g)0h452.52425.798.0410.5h460.42437.447.9041h461.54441.457.9082h452.86425.337.8984h452.48426.617.9088h447.88423.117.90912h460.97438.007.91916h452.59427.117.88724h448.14418.627.9412d447.12424.437.9173d451.34428.617.9384d458.86431.547.9295d461.02432.757.9416d453.81435.507.9187d457.90439.017.909平均值454.40429.737.924SD5.096.760.036RSD%1.12%1.57%0.45%結(jié)論：同一樣品在7天內(nèi)放進(jìn)樣分析尼古丁、PG、VG含量結(jié)果差異小于2%,溶液穩(wěn)定在7天內(nèi)呈穩(wěn)定狀態(tài)，且滿足實(shí)驗(yàn)室分析要求。3方法驗(yàn)證結(jié)論以HXX/CS-SOP/B-2018-001方法測(cè)得尼古丁的檢出限為0.3/，測(cè)定下限為3/；方法的精密度為1.39%；對(duì)國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分析的相對(duì)誤差在3%以下；對(duì)實(shí)際樣品的加標(biāo)回收率在均為100-112%，滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要求，本次驗(yàn)證結(jié)果有效，方法可行。以HXX/CS-SOP/B-2018-001方法測(cè)得PG的檢出限為0.56/，測(cè)定下限為5.6/；方法的精密度為1.34%；對(duì)國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分析的相對(duì)誤差在0.5%以下；對(duì)實(shí)際樣品的加標(biāo)回收率在均為98-105%，滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要求，本次驗(yàn)證結(jié)果有效，方法可行。以HXX/CS-SOP/B-2018-001方法測(cè)得VG的檢出限為0.88/，測(cè)定下限為8.8/；方法的精密度為1.49%；對(duì)國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分析的相對(duì)誤差在0.1%以下；對(duì)實(shí)際樣品的加標(biāo)回收率在均為99-110%，滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要求，本次驗(yàn)證結(jié)果有效，方法可行。附件1乙醇溶劑、內(nèi)標(biāo)物及標(biāo)準(zhǔn)品典型色譜圖醇/1/

21L1L11.1_一―附件2幾種常見(jiàn)樣品色譜圖A：尼古丁含量6mg/mL，30%PG70%VG，水密桃口味樣品色譜圖B:尼古丁含量6mg/mL，30%PG70%VG，菠蘿口味樣品色譜圖，1/11M-1[C：尼古丁含量18mg/mL，50%PG50%VG，草莓口味樣品色譜圖D：尼古丁含量12mg/mL，70%PG30%VG，薄荷腦口味樣品色譜圖附件3《HXX/CS-SOP/B-2018-001》作業(yè)指導(dǎo)書(shū)深圳瀚星翔科技有限公司分析測(cè)試中心作業(yè)指導(dǎo)書(shū)《HXX/CS-SOP/B-2018-001》電子煙煙油中尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇含量測(cè)定.范圍此方法規(guī)定了電子煙煙油中尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇的氣相色譜測(cè)定方法。此方法適用于電子煙煙油中尼古丁、1,2-丙二醇、丙三醇的測(cè)定。.原理本方法采用內(nèi)標(biāo)法分析尼古丁含量，外標(biāo)法測(cè)定1,2-丙二醇、丙三醇濃度。.儀器與設(shè)備島津氣相色譜-氫火焰離子化檢測(cè)儀（GC-2010plus）SHIMADZU-SH-Rtx-Wax，300.25ID,0.25電子天平（=0.0001g）一般玻璃器皿.試劑和消耗品無(wú)水乙醇（色譜級(jí)）尼古?。?biāo)準(zhǔn)品C10H14N2，CAS：54-11-5）：純度98%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)喹啉（標(biāo)準(zhǔn)品C9H7N，CAS：91-22-5）：純度95%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1,2-丙二醇（標(biāo)準(zhǔn)品C3H8O2，CAS：57-55-6）：純度98%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)丙三醇（標(biāo)準(zhǔn)品C3H8O3，CAS：56-81-5）：純度98%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì).分析步驟溶液配置溶液A精密稱定尼古丁標(biāo)準(zhǔn)品0.1g，1,2-丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品4.08、丙三醇標(biāo)準(zhǔn)品2.0g，至100mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溶液A，其中含尼古丁1.0mg/mL、1,2-丙二醇40mg/mL、丙三醇20mg/mL。喹啉溶液精密稱定喹啉標(biāo)準(zhǔn)品0.25g，至250mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為喹啉溶液，其中喹啉濃度為1.0mg/mL。標(biāo)準(zhǔn)溶液配置分別精密量取1.0mL喹啉溶液至6個(gè)不同的10mL容量瓶中，再精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、8.0mL溶液A至上述6個(gè)10mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為1級(jí)?6級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中喹啉濃度均為0.1mg/mL，尼古丁濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、0.8mg/mL,1,2-丙二醇濃度分別為2.0、4.0、8.0、12.0、20.0、32.0mg/mL、丙三醇濃度分別為1.0、2.0、4.0、6.0、10.0、16.0mg/mL。樣品溶液配置精密稱取樣品0.1?0.2g,至10mL容量瓶中，再精密量取喹啉溶液1.0mL至該容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液。注：若溶液呈非澄清狀，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)處理（如過(guò)濾）后分析。氣相色譜條件進(jìn)樣口溫度220℃檢測(cè)器溫度250℃載氣氮?dú)猓?mL/min氫氣30mL/min空氣400mL/min進(jìn)樣體積1L分流比50:1程序升溫速率/℃/min溫度/℃保持時(shí)間/min100020170052100302403運(yùn)行時(shí)間15.50min工作曲線繪制對(duì)1?6級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜測(cè)定，進(jìn)樣量為1L。計(jì)算各級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液中尼古丁與內(nèi)標(biāo)（喹啉）的濃度比、峰面積比，做出尼古丁與內(nèi)標(biāo)濃度比與峰面積比的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得出回歸方程，工作曲線應(yīng)為線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2應(yīng)大于0.999。做出1,2-丙二醇、丙三醇濃度與峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得出回歸方程，工作曲線應(yīng)為線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2應(yīng)大于0.999。樣品測(cè)定測(cè)定樣品溶液，計(jì)算尼古丁與內(nèi)標(biāo)物的濃度比與峰面積比，由工作曲線回歸方程計(jì)算得出樣品溶液中尼古丁的含量。記錄樣品溶液圖譜中1,2-丙二醇、丙三醇的峰面積，由工作曲線回歸方程計(jì)算得出溶液中1,2-丙二醇、丙三醇的含量。每個(gè)試樣測(cè)定一次，測(cè)定值與標(biāo)示值的偏差應(yīng)小于±5%。.結(jié)果計(jì)算與表述尼古丁含量計(jì)算樣品中尼古丁的含量w1以mg/g計(jì)，按式（1）計(jì)算：w1=m*C內(nèi)*10/M（1）式中：m從工作曲線上讀取的樣品溶液中尼古丁與內(nèi)標(biāo)的濃度比C內(nèi)內(nèi)標(biāo)濃度，mg/mLM樣品的稱樣量，g1,2-丙二醇、丙三醇含量計(jì)算樣品中1,2-丙二醇、丙三醇的含量w2以mg/g計(jì)，按式（1）計(jì)算：W2=m*10/M⑵百分比換算：％=w2/1000*100%式中：m從工作曲線上讀取的樣品溶液中1,2-丙二醇、丙三醇的濃度，mg/mLM樣品的稱樣量，g.質(zhì)量保證與控制干擾因素溫濕度變化使工作環(huán)境溫度保持在20-30℃，濕度保持在20-80%氣壓變化使載氣輔助氣氣壓保持在一定條件下恒定不變。系統(tǒng)污染由于樣品組分較多，多次分析后需老化；進(jìn)樣墊和襯管周期性更換，更換后需老化。外部污染長(zhǎng)時(shí)間不進(jìn)行分析再分析前需老化。每次進(jìn)樣需對(duì)進(jìn)樣器進(jìn)行清洗和潤(rùn)洗防止交叉污染。質(zhì)控取3級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液作為質(zhì)控溶液，每天進(jìn)行樣品檢測(cè)前對(duì)質(zhì)控溶液進(jìn)行測(cè)定，確保回收率在95%-105%，若回收率超出限定值，則需要重新配置標(biāo)準(zhǔn)溶液?？瞻兹o(wú)水乙醇溶液作為空白溶液，計(jì)算結(jié)果需扣除空白含量。（完）附件4內(nèi)部，2丙二醇、丙三醇檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品選擇對(duì)比實(shí)驗(yàn).概述由于1,2-丙二醇、丙三醇沒(méi)有國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，只有二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，而在企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中，每天有大量日常樣品需要檢測(cè)，而每次建立方法中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線時(shí)，消耗標(biāo)準(zhǔn)品的量比較大，如果均采用二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)做為標(biāo)準(zhǔn)品，其采購(gòu)量是非常大的，鑒于其價(jià)格不菲，必然會(huì)增加企業(yè)內(nèi)部檢測(cè)的經(jīng)濟(jì)成本負(fù)擔(dān)；而公司的進(jìn)口生產(chǎn)原料食品級(jí)的1,2-丙二醇、丙三醇化學(xué)品，且來(lái)源充分，價(jià)格實(shí)惠，其純度上已經(jīng)達(dá)到20.995,甚至達(dá)到0.999,已經(jīng)超國(guó)內(nèi)一些二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)商品的純度，并且其有國(guó)外檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供的純度分析檢測(cè)報(bào)告，如果其滿足分析檢測(cè)的準(zhǔn)確性要求，那么對(duì)于采用食品級(jí)的1,2-丙二醇、丙三醇化學(xué)品配制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，具有非常大的經(jīng)濟(jì)效益。那么通過(guò)其與二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行樣品測(cè)量結(jié)果比對(duì)，如測(cè)量結(jié)果無(wú)明顯差異，則證明可選用作為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的檢測(cè)1,2-丙二醇、丙三醇含量的標(biāo)準(zhǔn)品，其檢測(cè)數(shù)據(jù)對(duì)公司內(nèi)部生產(chǎn)活動(dòng)起指導(dǎo)作用。2儀器與試劑.氣相色譜儀20Q帶氫火焰離子化檢測(cè)器，內(nèi)部編號(hào)005毛細(xì)管柱IDh30mX0.25mmID,0.25^m）.2電子天平（梅特勒十萬(wàn)分之一，精度0.0000）；.3無(wú)水乙醇（色譜純，天津科密歐科技有限公司）；.,2丙二醇二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品，純度.6湖南省藥用輔料工程技術(shù)研究中心；證書(shū)編號(hào)Q定值的期205年明，有效期限20年（月；.5丙三醇二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品，純度.5湖南省藥用輔料工程技術(shù)研究中心；證書(shū)編號(hào)0定值日期205年明，有效期限20年明；.食品級(jí),2丙二醇化學(xué)品，純度.,m批號(hào)，，生產(chǎn)日期：20年5月23日。.食品級(jí)丙三醇化學(xué)品，純度.,m批號(hào)，0038生產(chǎn)日期：20年5月20日。.對(duì)比實(shí)驗(yàn)采用有證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)部食品級(jí)化學(xué)品分別配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用所獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算檢測(cè)樣品含量，比較兩種方式獲得結(jié)果的差異。按方法規(guī)定，精密稱定1,2-丙二醇2.08、丙三醇1.0g，至50mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，其中1,2-丙二醇40mg/mL、丙三醇20mg/mL，分別配制二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液和食品級(jí)化學(xué)品儲(chǔ)備液。表1二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液丙二醇二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品丙三醇二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品稱樣量（純度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稱樣量（純度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液表2食品級(jí)化學(xué)品儲(chǔ)備液（一）丙二醇化學(xué)品丙三