β珠蛋白生成障礙貧血診斷方法

β珠蛋白生成障礙性貧血診斷分子生物學討論課第一頁，共十五頁。第三部分|發(fā)病機理β-珠蛋白合成減少，α-珠蛋白合成正?！呓Y合后，α-珠蛋白過?！?珠蛋白包涵體→粘附于紅細胞膜上→紅細胞變形性下降→無法通過脾竇壁孔→停留在脾索→α-珠蛋白不穩(wěn)定→自由基產(chǎn)生增加→氧化紅細胞膜蛋白脂質→紅細胞膜結構破壞→溶血第二頁，共十五頁。第三部分|β鏈減少α鏈過剩α鏈聚集幼紅細胞異常大多數(shù)幼紅細胞在骨髓中死亡少數(shù)異常紅細胞存活食物鐵鐵吸收增加鐵負荷增加繼發(fā)性血色病低色素性紅細胞含包涵體的紅細胞在脾破壞骨髓膨脹骨骼變化溶血第三頁，共十五頁。第三部分|診斷方法PCR-RFLPPCR-ASOAS-PCRRDB限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應技術等位基因特異性寡核苷酸雜交法等位基因特異性PCR反向印記雜交第四頁，共十五頁。第三部分|PCR-RFLP基本原理第五頁，共十五頁。第三部分|PCR-RFLP突變型基因限制酶切位點消失，限制酶無法對其進行切割，電泳得到片段較大的結果，由此可以與野生型進行區(qū)分。第六頁，共十五頁。第三部分|PCR-RFLP445373突變情況：β17A→T（CAAG→C↓TAG）使用酶：

MaeⅠ結果區(qū)別：①正常：產(chǎn)生455bp片段②突變：

產(chǎn)生72bp和373bp兩個片段第七頁，共十五頁。第三部分|

PCR-ASOASO技術：又稱探針斑點雜交技術，是基于核酸雜交的一種基因檢測方法。第八頁，共十五頁。第三部分|PCR-ASOPCR-ASO檢測結果第九頁，共十五頁。第三部分|PCR-ASO第十頁，共十五頁。第三部分|AS-PCRAS-PCR介紹設計原理如果引物的3’端堿基與模板不互補，PCR不能正常進行。操作過程設計3’端堿基分別只能與正常模板或突變模板配對的特異PCR引物，并進行PCR，觀察是否有產(chǎn)物。結果分析如果PCR產(chǎn)物有突變引物特異性擴增帶，表明模板DNA有該種突變，反之則表明沒有這種突變。技術特點無需標記探針即可檢出固定點突變。第十一頁，共十五頁。第三部分|反向印跡雜交反向印跡雜交一般的斑點雜交基因樣品基因樣品探針探針硝酸纖維素膜或尼龍膜第十二頁，共十五頁。第三部分|反向印跡雜交制作ASO探針（正常、突變）顯示正常人RDB結果父母RDB結果患兒RDB結果后代可能突變類型患者家系RDB結果第十三頁，共十五頁。謝謝觀看第十四頁，共十五頁。內容梗概β珠蛋白生成障礙性貧血診斷。β-珠蛋白合成減少，α-珠蛋白合成正?！呓Y合后，α-珠蛋白過?！?珠蛋白包涵體→粘附于紅細胞膜上→紅細胞變形性下降→無法通過脾竇壁孔→停留在脾索→α-珠蛋白不穩(wěn)定→自由基產(chǎn)生增加→氧化紅細胞膜蛋白脂質→紅細胞膜結構破壞→溶血。β鏈減少。α鏈過剩。α鏈聚集。骨骼變化。第三部分|PCR-RFLP。突變型基因限制酶切位點消失，限制酶無法對其進行切割，電泳得到片段較大的結果，由此可以與野生型進行區(qū)分。突變情況：β17A→T（CAAG→C↓TAG）。ASO技術：又稱探針斑點雜交技術，是基于核酸雜交的一種基因檢測方法。第三部分|A