藥物分析復習總結

藥物分析復習總結巴比妥類藥物巴比妥類藥物基本性質：弱酸性，易水解易與重金屬離子反應，具有紫外特征吸收（5,5-取代巴比妥類藥物在酸性溶液中無紫外吸收，而硫代巴比妥在酸性和堿性溶液中都有明顯的紫外吸收）。

丙二酰脲類反應：與銀鹽的反應。巴比妥藥物在碳酸鈉溶液中振搖使溶，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即生成白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解，前者的白色沉淀為硝酸銀溶液局部過濃，呆滯出現局部巴比妥二銀鹽渾濁，但振搖后，溶液中為可溶性的一銀鹽，繼續(xù)滴加硝酸銀過量，則產生難溶性的巴比妥二銀鹽沉淀，不再溶解。

與銅鹽的反應。巴比妥類藥物在吡啶溶液中與銅吡啶試液作用，生成配位化合物，顯紫色或生成紫色沉淀；硫噴妥鈉藥物顯綠色。

熔點測定：苯巴比妥鈉的鑒別。溶于水加稍過量稀鹽酸可析出苯巴比妥結晶，105℃干燥后測定熔點應為174～178℃。

司可巴比妥鈉的鑒別。加水溶解后加稀醋酸煮沸，放冷，析出結晶，濾過，70℃干燥后測定熔點約為97℃。

巴比妥類藥物鈉鹽的鑒別：焰色反應?；鹧骢r黃色。

與醋酸氧鈾鋅反應。取巴比妥類鈉鹽藥物的重型溶液，加入醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色沉淀。

取代基或元素的反應：1.芳環(huán)取代基的反應

與亞硝酸鈉-硫酸的反應。苯巴比妥含有苯環(huán)取代基，可與亞硝酸鈉-硫酸反應，生成橙黃色產物，并隨即轉成橙紅色。

與甲醛-硫酸的反應。苯巴比妥與甲醛-硫酸反應，生成玫瑰紅色環(huán)。其它無苯基取代的巴比妥類藥物無此反應。

2.不飽和烴取代基的反應。司可巴比妥鈉結構中含丙烯基，可與碘試液發(fā)生加成反應，使碘試液棕黃色消失。

3.硫元素的反應。硫噴妥鈉分子結構中含有硫元素，在氫氧化鈉試液中可與鉛離子反應，生成白色沉淀；加熱后，沉淀轉變?yōu)楹谏蚧U。

苯巴比妥中特殊雜質：酸度，乙醇溶液的澄清度，中性或堿性物質。

苯巴比妥片溶出度測定用槳法，異戊巴比妥片溶出度測定用轉籃法。

苯巴比妥的含量測定：銀量法，采用銀-玻璃電極系統(tǒng)，硝酸銀電位滴定法，每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當于23.22mg的C12H12N2O3。

司可巴比妥鈉含量測定：溴量法。分子結構中的丙烯基可與溴發(fā)生加成反應。測定原料和膠囊。過量的溴與碘化鉀作用生成碘，用硫代硫酸鈉液滴定。

每1ml溴滴定液（0.1mol/L）相當于13.01mg的C12H17N2NaO3。

注射用硫噴妥鈉的含量測定：紫外分光光度法。用對照品比較。每1mg的硫噴妥相當于1.091mg的C11H19N2NaO2S（硫噴妥鈉）。胺類藥物鹽酸普魯卡因的化學性質：

⑴芳伯胺基特性，可顯重氮化-偶合反應，與芳醛縮合反應，易氧化變色等。

⑵酯鍵易水解特性。水解產物主要為對氨基苯甲酸（PABA）。

⑶游離堿難溶于水且堿性弱。

對乙酰氨基酚的化學性質：

⑴水解產物呈芳伯氨基特性。藥物結構中有酰胺基，在酸性溶液中易水解得具有芳伯氨基的產物。因此藥物的水解產物可具有芳伯氨基特性反應。

⑵水解產物易酯化。對乙酰氨基酚水解后產生醋酸，可在硫酸介質中與乙醇反應，發(fā)出醋酸乙酯的香味。

⑶與三氯化鐵發(fā)生呈色反應。對乙酰氨基酚具酚羥基，可與三氯化鐵發(fā)生呈色反應。

鹽酸普魯卡因的鑒別：重氮化-偶合反應。顏色：橙紅色到猩紅色。

水解產物的反應。鹽酸普魯卡因具對氨基苯甲酸酯的結構，遇氫氧化鈉試液即析出白色沉淀，加熱變?yōu)橛蜖钗铮ㄆ蒸斂ㄒ颍^續(xù)加熱可水解，產生揮發(fā)性二乙氨基乙醇，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變?yōu)樗{色，同時可生成可溶于水的對氨基苯甲酸鈉，放冷，加鹽酸酸化，即生成對氨基苯甲酸的白色沉淀。

紅外吸收光譜。

對乙酰氨基酚鑒別：重氮化-偶合反應。水解后反應，顏色：紅色。

三氯化鐵反應。對乙酰氨基酚的水溶液加三氯化鐵試液，即顯藍紫色。

對乙酰氨基酚的雜質檢查：除了檢查酸度、氯化物、硫酸鹽、重金屬、水分和熾灼殘渣外，還需檢查以下項目：

1.乙醇溶液的澄清度與顏色。

2.有關物質。薄層色譜檢查對氯乙酰苯胺。

3.對氨基酚。為芳香第一胺，能與亞硝基鐵氰化鈉在堿性條件下生成藍色配位化合物，而藥物對乙酰氨基酚無此呈色反。

（對氨基酚對照溶液不穩(wěn)定，應臨用前新鮮配制）

鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸的檢查

采用硅膠H-CMC薄層色譜法檢查。對氨基苯甲酸的最低檢出量為0.01μg。

除主斑點鹽酸普魯卡因和分解產物對氨基苯甲酸外，還有一個雜質斑點，確證為苯胺，最低檢出量為0.01μg。

含量測定方法：亞硝酸鈉滴定法。具有芳伯氨基的藥物（如鹽酸普魯卡因及其片劑）乙基水解后又芳伯氨基的藥物（如對乙酰氨基酚）均可用亞硝酸鈉滴定法測定含量。

1.原理：芳伯氨基藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量反應，生成重氮鹽。永停法指示終點。2.主要測定條件：

加入適量溴化鉀加速反應（加快重氮化反應速度）。

加入強酸加速反應（使重氮化反應速度加快；重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定；防止偶氮氨基化合物的生成）。一般加入鹽酸的量按芳胺與酸的摩爾比1：2.5～6。

室溫（10～30℃）條件下滴定。

滴定管尖端插入液面下滴定。為了避免滴定過程中亞硝酸揮發(fā)和分解，滴定時將滴定管尖端插入液面下約2/3處，一次將大部分亞硝酸鈉滴定液在攪拌下迅速加入，使其盡快反應，任何將滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再緩緩滴定。在最后一滴加入后，攪拌1～5min，再確定終點是否真正到達。這樣可以縮短滴定時間，也不影響結果。

3.終點指示方法：永停法。

苯駢二氮卓類藥物結構：氮原子具有堿性，可以和某些有機堿沉淀劑反應產生沉淀，還可用非水溶液滴定法測定含量。氯氮卓和地西泮C7上均有氯離子取代。

鑒別：沉淀反應。氯氮卓和地西泮的二氮雜卓環(huán)上氮原子有堿性，在鹽酸酸性溶液中與碘化鉍鉀試液反應產生橙色沉淀。藥典采用此方法鑒別氯氮卓。

水解后的重氮化-偶合反應。在酸性條件下加熱，氯氮卓C2上的甲氨基水解為羰基，進一步水解，生成二苯甲酮衍生物，具有芳伯氨基，與亞硝酸鈉溶液和堿性β-萘酚試液發(fā)生重氮化-偶合反應，產生橙紅色沉淀。藥典采用此法鑒別氯氮卓。地西泮無此反應。

硫酸-熒光反應。苯駢二氮卓類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，呈現出不同顏色的熒光，地西泮：黃綠色熒光；氯氮卓：黃色熒光。

紫外分光光度法。

氯元素的鑒別。氯氮卓和地西泮C7上均有氯原子取代。首先用氧瓶燃燒法破壞，使有機結合的氯氣轉化為Cl-，用5%的氫氧化鈉溶液吸收，加硝酸酸化后，顯氯化物的鑒別反應。

地西泮的有關物質：薄層色譜，檢查原料藥和片劑中的有關物質，主要雜質為去甲基安定和2-甲氨基-5-氯二苯酮。

注射劑主要檢查2-甲氨基-5-氯二苯酮等分解產物。高效液相色譜法。

含量測定：非水溶液滴定法。地西泮：溶劑：冰醋酸和醋酐，指示劑：結晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液顯綠色。

氯氮卓：溶劑：冰醋酸。至溶液顯藍色為終點。

紫外分光光度法。地西泮片和氯氮卓片均采用紫外分光光度法測定含量。

溶出度：紫外分光光度法。

高效液相色譜法。地西泮注射劑中含有苯甲酸、苯甲酸鈉等附加劑，干擾紫外分光光度法測定，所以采用高效液相色譜法。內標為萘。醇醛醚酮乙醇的鑒別：碘仿反應。

甘油的鑒別：丙烯醛反應。甘油數滴與硫酸氫鉀0.5g共熱，即發(fā)生丙烯醛的刺激性臭氣。

二巰丙醇的鑒別：丙烯醛反應。二巰丙醇與碳酸鈉共熱，發(fā)生丙烯醛的刺激性臭氣。

沉淀反應。二巰丙醇與醋酸鉛試液作用，生成硫醇鉛鹽黃色沉淀。

二巰丙醇的含量測定：二巰丙醇結構中巰基具有強還原性，可采用碘量法直接測定含量。

每1ml的碘滴定液（0.1mol/L）相當于6.211mg的二巰丙醇。

山梨醇的含量測定：高碘酸鈉（鉀）法。對具有n個相鄰羥基的化合物，當以HIO4氧化時，將消耗n-1個摩爾的HIO4。

麻醉乙醚的檢查項目：酸度：主要控制乙醚氧化產物醋酸的量。

醛類

過氧化物

異臭

不揮發(fā)物

甲醛的鑒別：甲醛能還原氨制硝酸銀溶液，使析出金屬銀。

水合氯醛的鑒別：水合氯醛加水溶解后，加入堿試液，溶液顯渾濁，加溫后形成澄明的兩液

層，并產生氯仿的臭氣。

烏洛托品的鑒別：本品加稀酸，即分解生成甲醛和銨鹽，放出甲醛的特臭，遇氨制硝酸銀試紙生成金屬銀，顯黑色；溶液加堿試液堿化后產生氨臭，能使?jié)櫇竦募t色石蕊試紙變?yōu)樗{色。

甲醛的含量測定：氧化后剩余滴定法。

水合氯醛的含量測定：堿水解后銀量法（Mohr法）

取本品約4g，精密稱定，加水10ml溶解后，精密加氫氧化鈉滴定液（1mol/L）30ml，搖勻，靜置2min，加酚酞指示液數滴，用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定至紅色消失，再加鉻酸鉀指示液6滴，用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定。自氫氧化鈉滴定液（1mol/L）的體積（ml）中減去消耗硫酸滴定液（0.5mol/L）的體積（ml），再減去消耗硝酸銀滴定液（0.1mol/L）體積（ml）的2/15。

每1ml的氫氧化鈉滴定液（1mol/L）相當于165.4mg的C2H3Cl3O2。

（30ml-VH2SO4-2/15VAgNO3）×0.1654×100

烏洛托品的含量測定：酸水解后剩余滴定法。

烏洛托品的定量分析是利用本品在過量酸中加熱水解后銨鹽和甲醛，繼續(xù)加熱將甲醛驅盡后，剩余的酸再以堿滴定的方法。

撲米酮的鑒別：分解產物的反應。本品遇酸分解，生成甲醛，再與變色酸于水浴共熱，使溶液顯紫色。后者為甲醛專屬性較高的顯色反應。

本品與無水碳酸鈉混合后，加熱灼燒，即分解生產氨氣，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變?yōu)樗{色。

紅外吸收光譜。

富馬酸酮替芬的含量測定：非水溶液滴定法。溶劑：冰醋酸。指示液：結晶紫。滴定液：高氯酸。滴定至顯藍色。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于42.55mg的C19H19NOS.C4H4O4。

吡喹酮的含量測定：高效液相色譜法。內標：α-細辛醚。復習總結：芳酸及其酯類.酚羥基的鑒別試驗：三氯化鐵反應。具有酚羥基的藥物與三氯化鐵試液反應，生成紫堇色鐵配位化合物。

芳伯氨基的鑒別試驗：重氮化-偶合反應。在酸性溶液中，與亞硝酸鈉試液進行重氮化反應，生成的重氮鹽與堿性β-萘酚偶合產生橙紅色沉淀。

阿司匹林的鑒別：三氯化鐵反應。加熱水解后與三氯化鐵反應，顯紫色堇色。

水解反應。阿司匹林與碳酸鈉試液加熱水解，得水楊酸鈉及醋酸鈉，加過量的稀硫酸酸化后，水楊酸白色沉淀析出，并產生醋酸的臭氣。

紅外吸收光譜。

對氨基水楊酸的鑒別：三氯化鐵反應。加稀鹽酸呈酸性后反應，呈紫紅色。

重氮化-偶合反應。見上面。

紅外吸收光譜。

阿司匹林的檢查項目：除“熾灼殘渣”和“重金屬”外，還有以下特殊檢查項目。

溶液的澄清度：檢查碳酸鈉試液中不溶物。雜質不溶于碳酸鈉溶液，而阿司匹林可溶，可控制雜質。

水楊酸：原料限量0.1%，片劑限量0.3%，腸溶片限量1.5%，栓劑限量1.0%（高效液相色譜法）。

易炭化物

阿司匹林的含量測定：

原料藥：直接滴定法。以水為溶劑。指示劑：酚酞。

片劑和腸溶片：兩步滴定法。第一步：中和。第二步：水解與測定。

計算：供試品中阿司匹林的含量，由水解時消耗的堿量計算。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當于18.02mg的C9H8O4。

栓劑：高效液相色譜法。

對氨基水楊酸鈉中的特殊雜質：間氨基酚。

含量測定：亞硝酸鈉滴定法（重氮化法）。永停法指示終點。

苯甲酸鈉的鑒別：三氯化鐵反應。苯甲酸的堿性水溶液或苯甲酸鈉的中性溶液，與三氯化鐵試液生成堿式苯甲酸鐵鹽的赭色沉淀。

分解產物的反應。苯甲酸鹽可分解成苯甲酸升華物，分解產物可用于鑒別。

苯甲酸鈉的含量測定：雙相滴定法。指示劑：甲基橙。滴定液：鹽酸（0.5mol/L）。有機溶劑：乙醚。

每1ml的鹽酸滴定液（0.5mol/L）相當于72.06mg的C7H5NaO2。

氯貝丁酯的鑒別：羥肟酸鐵反應。氯貝丁酯分子中具有酯結構，與鹽酸羥胺及三氯化鐵作用，形成有色的異羥肟酸鐵，顯紫色。

氯貝丁酯的雜質檢查：酸度、對氯酚（限度為0.0025%）、揮發(fā)性雜質。

氯貝丁酯的含量測定：兩步滴定法。加入過量的氫氧化鈉滴定液（0.5mol/L），加熱回流水解，生成對氯苯氧異丁酸鈉和乙醇，成語的氫氧化鈉用鹽酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并將滴定的結構用空白試驗校正。吩噻嗪類藥物結構：抗精神病藥，具有硫氮雜蒽母核。

鑒別：紫外分光光度法。

氧化反應。鹽酸氯丙嗪鑒別：加硝酸顯紅色，漸變淡黃色。

鹽酸異丙嗪鑒別：加硫酸，顯櫻桃紅色，放置，色漸變深。

加硝酸生成紅色沉淀，加熱，沉淀溶解，變?yōu)槌赛S色。

Cl-的反應。加硝酸使成酸性后，加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀，分離，沉淀加氨試液即溶解，再加硝酸，沉淀復出現。

加等量二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤，緩緩加熱，發(fā)生的氯氣能使?jié)駶櫟牡饣浀矸墼嚰堬@藍色。

含量測定：非水溶液滴定法。吩噻嗪類藥物母核上氮原子的堿性極弱，不能被滴定，側鏈上脂氨基堿性較強，可以用非水溶液滴定法滴定。一般用冰醋酸或醋酐為溶劑，用高氯酸滴定液滴定，由于為鹽酸鹽，所以滴定前應加入一定量醋酸汞試液，使生成難離解的氯氣化汞，將鹽酸鹽轉化為醋酸鹽，再進行滴定。

鹽酸異丙嗪用冰醋酸作溶劑，每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于32.09mg的C17H20N2S.HCl。

鹽酸氯丙嗪采用醋酐作溶劑，橙黃Ⅳ作指示劑，用高氯酸滴定液滴定。

紫外分光光度法。本類藥物的制劑（如片劑、注射劑）由于輔料有干擾，不能采用非水溶液滴定法滴定，所有一般用紫外分光光度法測定含量。

兩個藥物的注射劑均加有維生素C作用抗氧化劑，維生素C在243nm處有最大吸收，若在249nm處測定藥物含量，則維生素C有干擾。所以鹽酸氯丙嗪和鹽酸異丙嗪注射液分別在第三個吸收峰，即306nm和299nm的波長處測定，雖然吸收系數略低，但避開了抗氧化劑維生素C的干擾?；前奉愃幬锝Y構：具有芳氨基和磺酰胺基，多為兩性化合物，藥物具有一定酸性?；前粪奏ず突前芳讎f唑的N4上無取代基，為芳伯氨基?；前粪奏ず突前芳讎f唑N1上的含氮雜環(huán)，具有堿性，可以和有機堿沉淀劑反應生成沉淀。

鑒別：1.芳伯氨基的反應

重氮化-偶合反應?；前粪奏ず突前芳讎f唑都有此反應。

與芳醛的縮合反應。本類藥物的芳伯氨基可和芳醛（如對二甲氨基苯甲醛、香草醛、水楊醛等）在酸性溶液中縮合為有色的希夫氏堿。

如與對二甲氨基苯甲醛在酸性溶液中生成黃色希夫氏堿。

2.與硫酸銅的成鹽反應。本類藥物磺酰胺基上的氫原子比較活潑，具有酸性，可以和金屬離子（如Cu2+、Ag+、Co2+等）生成難溶性沉淀。

磺胺甲噁唑：草綠色?；前粪奏ぃ狐S綠色→紫色。

3.N1取代基的反應?；前粪奏ず突前芳讎f唑N1上均為含氮雜環(huán)取代，有一定堿性，可以和有機堿沉淀劑生成沉淀。如磺胺嘧啶可和碘化鉍鉀試液、碘-碘化鉀試液生成紅棕色沉淀。

4.紅外光光光度法。

磺胺甲噁唑的含量測定：亞硝酸鈉滴定法。滴定前加溴化鉀2g作為催化劑，可加快滴定反應速度。為避免亞硝酸鈉在酸性條件下形成的亞硝酸揮發(fā)和分解，滴定時應將滴定管尖端插入液面下2/3處。永停法指示終點。

磺胺嘧啶片、磺胺二甲嘧啶片的片劑要檢查溶出度，用紫外分光光度法。

復方磺胺甲噁唑片的含量測定：雙波長分光光度法。關鍵是選擇測定波長（λ2）和參比波長（λ1）。波長選擇的原則是：干擾組分在λ2和λ1處的吸收度應相等。測定組分在兩波長的ΔA盡量大。.

復方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑的含量測定：測

定波長（λ2）：257nm，在304nm波長附近（每間隔0.5nm）選擇等吸收點波長作為參比波長（λ1），要求

ΔA=Aλ1—Aλ2=0。

含量測定結果的計算公式為：

TMP的測定是以鹽酸-氯化鉀溶液為溶劑，以239nm作為測定波長（λ2），用SMZ對照液的稀釋液在295nm附近選擇等吸收波長作為參比波長（λ1）。

復方磺胺嘧啶片的含量測定：磺胺嘧啶(SD)的最大吸收波長為308nm，此波長處TMP無吸收，所以可直接測定SD的含量。

SD對TMP的測定有干擾，所以采用雙波長分光光度法測定TMP含量。

美國藥典用高效液相色譜法測定。生物堿類藥物（重點在鑒別，N的位置，有哪些電效應）

苯烴胺類（鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿）

氮原子在側鏈上，堿性較一般生物堿強，易與酸成鹽。

托烷類（硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿）

阿托品和山莨菪堿是由托烷衍生的醇（莨菪醇）和莨菪酸縮合而成，具有酯結構。分子結構中，氮原子位于五元酯環(huán)上，故堿性也較強，易與酸成鹽。

喹啉類（硫酸奎寧和硫酸奎尼?。?/p>

奎寧和奎尼丁為喹啉衍生物，其結構分為喹啉環(huán)和喹啉堿兩個部分，各含一個氮原子，喹啉環(huán)含芳香族氮，堿性較弱；喹啉堿微脂環(huán)氮，堿性強。

異喹啉類（鹽酸嗎啡和磷酸可待因）

嗎啡分子中含有酚羥基和叔胺基團，故屬兩性化合物，但堿性略強；可待因分子中無酚羥基，僅存在叔胺基團，堿性較嗎啡強。

吲哚類（硝酸士的寧和利血平）

士的寧和利血平分子中含有兩個堿性強弱不同的氮原子，N1處于脂肪族碳鏈上，堿性較N2強，故士的寧堿基與一分子硝酸成鹽。

黃嘌呤類（咖啡因和茶堿）

咖啡因和茶堿分子結構中含有四和氮原子，但受鄰位羰基吸電子的影響，堿性弱，不易與酸結合成鹽，其游離堿即供藥用。

鑒別試驗：特征鑒別反應。

1.雙縮脲反應

系芳環(huán)側鏈具有氨基醇結構的特征反應。

鹽酸麻黃堿和偽麻黃堿在堿性溶液中與硫酸銅反應，Cu2+與仲胺基形成紫堇色配位化合物，加入乙醚后，無水銅配位化合物及其有2個結晶水的銅配位化合物進入醚層，呈紫紅色，具有4個結晶水的銅配位化合物則溶于水層呈藍色。

2.Vitali反應

系托烷生物堿的特征反應。

硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿等托烷類藥物均顯莨菪酸結構反應，與發(fā)煙硝酸共熱，即得黃色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷后，加醇制氫氧化鉀少許，即顯深紫色。

3.綠奎寧反應

系含氧喹啉（喹啉環(huán)上含氧）衍生物的特征反應

硫酸奎寧和硫酸奎尼丁都顯綠奎寧反應，在藥物微酸性水溶液中，滴加微過量的溴水或氯水，再加入過量的氨水溶液，即顯翠綠色。

4.Marquis反應

系嗎啡生物堿的特征反應。

取得鹽酸嗎啡，加甲醛試液，即顯紫堇色。靈敏度為0.05μg。

5.Frohde反應

系嗎啡生物堿的特征反應。

鹽酸嗎啡加鉬硫酸試液0.5ml,即顯紫色,繼變?yōu)樗{色,最后變?yōu)樽鼐G色.靈敏度為0.05μg。

6.官能團反應

系吲哚生物堿的特征反應。

利血平結構中吲哚環(huán)上的β位氫原子較活潑，能與芳醛縮合顯色。

與香草醛反應。利血平與香草醛試液反應，顯玫瑰紅色。

與對-二甲氨基苯甲醛反應。利血平加對-二氨基苯甲醛，冰醋酸與硫酸，顯綠色，再加冰醋酸，轉變?yōu)榧t色。

7.紫脲酸反應

系黃嘌呤類生物堿的特征反應。

咖啡因和茶堿中加鹽酸與氯酸鉀，在水浴上蒸干，遇氨氣即生成四甲基紫脲酸銨，顯紫色，加氫氧化鈉試液，紫色即消失。

8.還原反應

系鹽酸嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反應。

嗎啡具弱還原性。本品水溶液加稀鐵氰化鉀試液，嗎啡被氧化生成偽嗎啡，而鐵氰化鉀被還原為亞鐵氰化鉀，再與試液中的三氯化鐵反應生成普魯士藍。

可待因無還原性，不能還原鐵氰化鉀，故此反應為嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反應。

特殊雜質檢查：

利用藥物和雜質在物理性質上的差異。

硫酸奎寧中“氯仿-乙醇中不溶物”的檢查

鹽酸嗎啡中“其它生物堿”的檢查

旋光性的差異：用于硫酸阿托品中“莨菪堿”的檢查

對光選擇性吸收的差異：利血平生產或儲存過程中，光照和有氧存在下均易氧化變質，氧化產物發(fā)出熒光。因此規(guī)定：供試品置紫外光燈（365nm）下檢視，不得顯明顯熒光。

吸附性質的差異：硫酸奎寧制備過程中可能存在“其它金雞納堿”。利用吸附性質的差異，采用硅膠G薄層進行檢查。規(guī)定限度為0.5%。

利用藥物和雜質和化學性質上的差異。

與一定試劑反應產生沉淀

硫酸阿托品制備過程中可能帶入（如莨菪堿、顛茄堿）雜質，因此需要檢查“其它生物堿”。利用其它生物堿堿性弱于阿托品的性質，取供試品的鹽酸水溶液，加入氨試液，立即游離，發(fā)生渾濁。規(guī)定0.25g藥物中不得發(fā)生渾濁。

與一定試劑產生顏色反應

①鹽酸嗎啡中阿撲嗎啡的檢查

②鹽酸嗎啡中罌粟堿的檢查

③磷酸可待因中嗎啡的檢查

④硝酸士的寧中馬錢子堿的檢查

含量測定

非水溶液滴定法：

生物堿類藥物一般具有弱堿性，通?？稍诒姿峄虼佐人嵝匀芤褐校酶呗人岬味ㄒ褐苯拥味?，以指示劑或電位法確定終點。

⑴氫鹵酸鹽的滴定

在滴定生物堿的氫鹵酸鹽時，一般均預先在冰醋酸中加入醋酸汞的冰醋酸溶液，使氫鹵酸生成在冰醋酸中難解離的鹵化汞，從而消除氫鹵酸對滴定反應的不良影響。

加入的醋酸汞量不足時，可影響滴定終點而使結果偏低，過量的醋酸汞（理論量的1～3倍）并不影響測定的結果。

⑵硫酸鹽的測定

硫酸為二元酸，在水溶液中能完成二級電離，生成SO42-，但在冰醋酸介質中，只能離解為HSO4-，不再發(fā)生二級離解。因此，生物堿的硫酸鹽，在冰醋酸的介質中只能被滴定至生物堿的硫酸氫鹽。

硫酸阿托品的含量測定。溶劑：冰醋酸和醋酐，指示劑：結晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液顯純藍色。

硫酸奎寧的含量測定。1摩爾的硫酸奎寧可消耗3摩爾的高氯酸。

硫酸奎寧片的含量測定。硫酸奎寧經強堿溶液堿化，生成奎寧游離堿，在與高氯酸反應，因此1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸。

⑶硝酸鹽的測定：

硝酸在冰醋酸介質中雖為弱酸，但是他具有氧化性，可以使指示劑變色，所有采用非水溶液滴定法測定生物堿硝酸鹽時，一般不用指示劑而用電位法指示終點。

如硝酸士的寧。

⑷磷酸鹽的測定：

磷酸在冰醋酸介質中的酸性極弱，不影響滴定反應的定量完成，可按常法測定。

磷酸可待因。

提取中和法

提取中和法是根據生物堿鹽類能溶于水而生物堿不溶于水的特性，可以采用有機溶劑提取后測定。

堿化、提取、滴定。按下列任何一種方法處理后測定：

①將有機溶劑蒸干，于殘渣中加定量過量的酸滴定液使溶解，再用堿滴定液回滴剩余的酸；若生物堿易揮發(fā)或分解，應在蒸至近干時，先加入酸滴定液“固定”生物堿，再繼續(xù)加熱除去殘余的有機溶劑，放冷后完成滴定。

②將有機溶劑蒸干，于殘渣中加少量中性乙醇使溶解，任何用酸滴定液直接滴定。

③不蒸去有機溶劑，而直接于其中加定量過量的酸滴定液，振搖，將生物堿轉提入酸液中，分出酸液置另一錐形瓶中，有機溶劑層再用水分次振搖提取，合并水提取液和酸液，最后用堿滴定液回滴定。

測定條件的選擇

能使生物堿游離的堿化試劑有氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣和氧化鎂等。但強堿不適用于下列生物堿類藥物的游離：

①含酯結構的藥物，如阿托品和利血平等，與強堿接觸，易引起分解。

②含酚結構的藥物，如嗎啡，可與強堿形成酚鹽而溶于水，難以被有機溶劑提取。

③含脂肪性共存物的藥物，當有脂肪性物質與生物堿共存時，堿化后易發(fā)生乳化，使提取不完全。因此氨水為最常用的堿化試劑。

提取溶劑

應具備下列條件：

①與水不相混溶，沸點低，對生物堿的溶解度大，而對其它物質的溶解度應盡可能最小。

②與生物堿或堿化試劑不起任何反應。

常用者為乙醚和氯仿，其中氯仿應用更為廣泛。

提取溶劑的用量

通常應提取4次，第一次用量至少應為水液體積的一半，以后幾次所用溶劑的體積應各為第一次的一半。如果水液體積很小時，第一次提取溶劑的用量則應與水液相等。

提取終點的確定

取最后一次的提取液約0.5ml，置小試管中，加鹽酸或硫酸（0.1mol/L）1ml，放水浴上將有機溶劑蒸去，放冷，滴加生物堿沉淀劑（如碘化鉍鉀試液等）1滴，無沉淀產生，即為提取已完全。

指示劑的選擇

磷酸可待因片劑分析：

酸性染料比色法

原理：在適當的pH介質中，生物堿類藥物（B）可與氫離子結合成鹽（BH+），一些酸性染料（如磺酸酞類的指示劑：溴麝香草酚藍、溴甲酚綠等）在此介質中能解離為陰離子（In-），同時，陽離子和陰離子又能定量地結合成有色的離子對化合物，即離子對。

離子對被合適的有機溶劑提取后，形成有色溶液，可供比色測定。

影響定量分析的因素

1.水相的最適pH值

2.酸性染料的影響

提取完全是提取常數和酸性染料陰離子的濃度密切相關的，而提取常數的大小由是與B-的種類和有機溶劑的選擇密切相關的。一般用的有甲基橙、溴麝香草酚藍（BTB）和溴甲酚綠等。

3.有機溶劑的影響

離子對提取常數的大小還與有機溶劑的性質有關。通常有機溶劑與離子對形成氫鍵的能力強，則提取效率高，如氯仿和二氯甲烷等具有中等程度的提取率，并且提取的選擇性也較好，為最常用的有機溶劑。

4.水分的影響

有有機溶劑提取有色的離子對時，應嚴防水分的混入。

5.共存物的影響：一般賦形劑，重型、酸性乙基弱堿性的物質均不干擾測定，強酸可改變染料溶液或緩沖液的pH，因而對測定有干擾。

以上五種影響因素中，水相的最適pH和有機溶劑對離子對的提取完全是酸性染料比色法的試驗關鍵。

應用與實例

硫酸阿托品片劑

紫外分光光度法

利血平含量測定，注意避光操作。

糖類和苷類藥物

單糖和雙糖分子中有不對稱碳原子，均具有一定的比旋度。

鑒別試驗

1.灼燒試驗：糖類用直火加熱，先熔融膨脹，后燃燒并發(fā)生焦糖臭，遺留多量的炭。蔗糖的鑒別可應用本試驗。

2.Fehling反應

單糖或含有半縮醛基的雙糖分子結構中，均有醛基或酮基，都具有還原性。Fehling反應是在堿性酒石酸銅試液（Fehling試液）中，糖將銅離子還原，生成紅色的氧化亞銅沉淀。

葡萄糖的鑒別可用此反應（無水葡萄糖、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液和莪術油葡萄糖均用Fehling反應）

蔗糖的鑒別：加硫酸煮沸，用氫氧化鈉中和，再加堿性酒石酸銅試液，加熱，生成氧化亞銅的紅色沉淀。

葡萄糖和乳糖的雜質檢查

葡萄糖的一般檢查項目：酸度、氯化物和硫酸鹽；溶液的澄清度與顏色；乙醇溶液的澄清度；亞硫酸鹽與可溶性淀粉。

葡萄糖注射液中5-羥基糠醛的測定：紫外分光光度法。

乳糖的雜質檢查：利用蛋白質類雜質遇硝酸汞試液產生的白色絮狀沉淀，進行特殊雜質“蛋白質”的檢查。

原料藥的含量測定：葡萄糖、乳糖和蔗糖不規(guī)定含量測定，規(guī)定比旋度的范圍。

制劑：葡萄糖注射液的含量測定：旋光度法。

測定中加入氨試液的作用：由于藥用葡萄糖是D-葡萄糖，而D-葡萄糖有α和β兩種互變異構體，因而藥用葡萄糖是他們的混合物，比旋度相差甚遠，而在水溶液中逐漸平衡，稱作變旋。加熱、加酸或加弱堿可加速平衡。

計算因素1.0426的由來：

換算為含稅葡萄糖濃度（c’）時，則應為：

葡萄糖氯化鈉注射液含量測定：硝酸銀滴定法，每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當于5.844mg的NaCl。

加糊精溶液以形成保護，使氯化銀沉淀呈膠體狀態(tài)，則具有較大的表面，有利于對指示劑的吸附，有利于滴定終點的觀察。

加硼砂溶液是為了增加pH值，因為本品pH值過低，而pH值低于3.5時，則五沉淀出現。加入2.5%硼砂溶液2ml后，溶液pH值為7,可促使熒光黃電離，以增大熒光黃陰離子的有效濃度，使重點變化敏銳。

苷類藥物

苷類為糖的衍生物（如氨基糖、糖醛酸等）與另一非糖有機化合物通過糖的端基碳原子連接而成的化合物。

鑒別試驗：

1.Keller-Kiliani反應

α-去氧甲基五碳糖的反應

α-去氧糖類，如洋地黃毒糖和磁麻糖，是由糖類分子中與羰基相鄰近的“CHOH”基失去氧，轉變?yōu)椤癈H2”后的結構。具有較大的活潑性，由α-去氧糖與苷元結合的生成物（即苷類）容易水解。

將甾體強心苷溶于含有微量FeCl3（1滴9%FeCl3）的冰醋酸1～2ml中，沿管壁緩緩加入濃硫酸1～2ml，使成兩液層。兩液層交界面處顯棕色（甲地高辛顯紫色）；醋酸層顯藍色或藍綠色，放置1h后顯靛藍色。

2.Kedde反應

苷元的不飽和內酯側鏈反應。

甾體強心苷元的C17上常有α-β或β-γ的不飽和內酯，即丁烯內酯，在堿性水溶液中易與芳香硝基化合物形成有色的絡合陰離子。

Kedde反應用于去乙酰毛花苷的鑒別。

加乙醇溶解后加二硝基苯甲酸試液與乙醇制氫氧化鉀試液各10滴，搖勻后，溶液即顯紅紫色。

3.色譜法

①紙色譜法：用于地高辛的鑒別

②薄層色譜法：用于去乙酰毛花苷及其注射液的鑒別，采用硅藻土G薄層板.

③高效液相色譜法：用于甲地高辛及其片劑的鑒別

特殊雜質的檢查

藥物特殊雜質允許限量檢查方法

洋地黃毒苷洋地黃皂苷本品10mg溶于2ml乙醇后，加膽甾醇的醇溶液，10min內，不得發(fā)生沉淀

地高辛洋地黃毒苷6%紙色譜法

甲地高辛有關物質5%高效液相色譜法

去乙酰毛花苷有關物質10%薄層色譜法

含量測定

1.比色法：甾體強心苷元C17上的丁烯內酯部分是非?；顫姷?，很容易和芳香硝基化合物（如堿性三硝基苯酚試液）形成絡合陰離子。所得絡合物在可見光去具有特征的最大吸收峰（λmax為485～495nm）。

本法用于地高辛、去乙酰毛花苷及其注射液的含量測定

2.熒光法：利用L-抗壞血酸與過氧化氫等實際可使地高辛或洋地黃毒苷產生熒光的原理，提高了定量分析的靈敏度，從而可用于每片含主藥量分別僅為0.25mg和0.1mg的片劑的含量測定。

地高辛片含量，含量均勻度（限度為20%），溶出度（限度為65%，轉籃，100r/min,60min）

甲地高辛溶出度測定與地高辛一樣，限度規(guī)定相同。

3.色譜法：

①柱色譜法：用于洋地黃毒苷原料藥測定的純化處理

②腎上腺素類藥物的結構特點本類藥物具烴氨基側鏈，顯弱酸性，游離堿溶于有機溶劑，其鹽可溶于水；分子中具有鄰苯二酚（或苯酚）結構的藥物可與重金屬離子絡合呈色，露置空氣中或遇光易氧化，色漸變深，在堿性溶液中更易變色；多數藥物分子中有手性碳原子，具有光學活性；苯環(huán)上的取代基也各具特性均可供分析用。有紫外及紅外吸收特性。

鑒別：三氯化鐵反應。腎上腺素：翠綠色，加氨試液，顯紫色→紫紅色。

重酒石酸去甲腎上腺素：翠綠色，加碳酸氫鈉試液，顯藍色→紅色。

鹽酸去氧腎上腺素：紫色。

鹽酸異丙腎上腺素：深綠色，滴加新制的5%碳酸氫鈉試液，顯藍色→紅色。

氧化反應：鹽酸異丙腎上腺素：在偏酸性條件下被碘迅速氧化，生成異丙基腎上腺素紅，加硫代硫酸鈉使碘的棕色消退，溶液顯淡紅色。

重酒石酸去甲腎上腺素：在上述條件下比較穩(wěn)定，幾乎不被碘氧化，需在酒石酸氫鉀的飽和溶液（pH為3.56）中被碘氧化，溶液為五色或僅顯微紅色或淡紫色。

腎上腺素：在酸性條件下，被過氧化氫氧化后，溶液顯血紅色。

甲醛-硫酸反應：重酒石酸去甲腎上腺素：橙色→暗紫色。

異丙腎上腺素：污紫色。

去氧腎上腺素：污紫色。

紫外特征吸收與紅外吸收光譜。

腎上腺素、重酒石酸去甲腎上腺素、鹽酸去氧腎上腺素和鹽酸異丙腎上腺素均需檢查酮體。紫外吸收分光光度法。酮體在310nm處有最大吸收，而藥物本身在此波長處幾乎沒有吸收。規(guī)定：在310nm波長處測定吸收度不得大于0.05，即相當于含酮體的量低于0.06%。

含量測定：非水溶液滴定法。冰醋酸為溶劑，加入醋酸汞試液消除氫鹵酸的干擾，結晶紫為指示液。

溴量法：鹽酸去氧腎上腺素及其注射液采用此方法測定含量。利用藥物中的苯酚結構，在酸性溶液中酚羥基鄰、對位活潑氫能與過量的溴定量地發(fā)生溴代反應，再以碘量法測定剩余的溴，根據消耗的溴及硫代硫酸鈉兩種滴定液的量即可計算各供試品的含量。

操作要點：⑴游離溴及碘極易揮散，操作過程中必須防止逸失。

⑵不能加入太過量的溴，否則在溴代反應中會引起酚羥基的氧化或溴化，一般加入的溴液以過量2%為宜。

⑶為了校正操作中溴及碘的可能逸失，應按平行條件進行空白試驗。

氨基醚衍生物類藥物分析

鹽酸苯海拉明的鑒別：與硫酸反應顯色。初顯黃色，隨即變成橙紅色；滴加水，即成白色乳濁液。

水解反應。本品水溶液遇酸易水解，生成水溶性很小的二苯基甲醇，分散在水層，呈白色乳濁，加熱煮沸數分鐘，聚集呈油狀液體，放冷，凝成白色蠟狀。

與硝酸銀反應形成沉淀。

紫外特吸收和紅外特征吸收光譜。

鹽酸苯海拉明的含量測定：非水溶液滴定法。鹽酸苯海拉明原料藥為鹽酸鹽，在冰醋酸中加醋酸汞后，可定量地與高氯酸生成苯海拉明該氯酸鹽。

酸性染料比色法。主要用于鹽酸苯海拉明片劑的含量測定及片劑溶出度的測定。

陰離子表面活性劑滴定法。用于鹽酸苯海拉明注射液的含量測定。

此方法還可測定生物堿、含氮雜環(huán)、季銨鹽類。

溶劑：水、氯仿、稀硫酸，指示液：二甲基黃-溶劑藍19混合指示液，滴定液：磺基丁二酸鈉二辛酯試液。

注意：鹽酸苯海拉明含量測定：原料：非水溶液滴定法。片劑含量及溶出度：酸性染料比色法。注射液：陰離子表面活性劑滴定法。維生素A醋酸酯等吸收法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3,使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1。維生素A醇。

③雜質吸收：對維生素A的測定有影響的雜質主要有：

維生素A2和維生素A3；維生素A的氧化產物（環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸）；維生素A在光照下產生的無生物活性的聚合物鯨醇；維生素A的異構體；合成時產生的中間體。

④測定方法：第一法（使用于維生素A醋酸酯）

取維生素A醋酸酯，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml中含9～15單位的溶液。然后在300、316、328、340、360nm五個波長處分別測定吸收值，確定最大吸收波長（應為328nm）。計算各波長下的吸收度與328nm波長下的吸收度的比值。

計算：

a.求吸收系數，吸收系數＝A/cl。

b.求效價（U/g），U/g＝吸收系數×1900

1900為維生素A醋酸酯在環(huán)己烷溶液中測定的換算因數。

3.求維生素A醋酸酯膠丸為標示量的百分含量。

標示量%＝（A×D×1900×W）/（W×100×l×標示量）

1U=0.344μg維生素A醋酸酯

1U=0.300μg維生素A醇

4.A值的選擇法

第二法（適用于維生素A醇）

說明：

⑴維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程法（即代數法）推導出來的；維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（幾何法或成6/7定位法）推倒出來。

⑵在應用三點校正法時，除其中一點在最大吸收波長處測定外，其余兩點均在最大吸收峰的兩側上升或下降陡部的波長處進行測定。

維生素E

維生素E（消旋-α-生育酚醋酸酯）有天然片和合成品之分，天然品為右旋體（d-α）；合成品為消旋體（dl-α）。

結構：維生素E為苯丙二氫吡喃醇衍生物，苯環(huán)上又一個乙?；姆恿u基，故又稱生育酚。他主要有α、β、γ、δ四種異構體，其中以α異構體的生理作用最強。

性質：

溶解性：微黃色或黃色透明的粘稠液體，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水。

具有紫外吸收。

在無氧或其它氧化劑存在時，在酸性或堿性溶液中，加熱可水解生成游離生育酚；在有氧或其它氧化劑存在時，則進一步氧化生成醌型化合物。在堿性條件下加熱，這種氧化作用更易發(fā)生。

鑒別試驗：

⑴硝酸反應：取本品約30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75℃加熱約15min，溶液應顯橙紅色。

⑵水解后氧化反應：取本品約10mg，加醇制氫氧化鉀試液2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml與乙醚10ml，振搖、靜置使分層，取乙醚液2ml，加2,2’-聯(lián)吡啶的乙醇溶液（0.5→100）數滴和三氯化鐵的乙醇溶液（0.2→100）數滴，應顯血紅色。

⑶紫外光譜法。

⑷薄層色譜法。

特殊雜質：

游離維生素E。利用游離維生素E的還原性，用硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）滴定，以二苯胺為指示劑，限量為2.15%。

含量測定：

⑴氣相色譜法：載氣：氮氣；固定相：硅酮（OV-17），涂布于經酸洗并硅烷化處理的硅藻土或高分子小球上；檢測器：氫火焰離子化檢測器；理論板數：按維生素E峰計算應不低于500；維生素E與內標物質的分離度應大于2。

內標：正三十二烷。

⑵高效液相色譜法：C18柱；流動相為甲醇：水（49：1）；紫外檢測器；波長292nm。

維生素B1

結構：維生素B1（鹽酸硫胺）是由氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過央甲基連接而成的季銨化合物，噻唑環(huán)上季銨及嘧啶環(huán)上氨基，為兩個堿性基團，可與酸成鹽。

性質：

溶解性：本品在水中易溶，水溶液顯酸性反應。在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。

具有紫外吸收。

在堿性中遇氧化劑，如鐵氰化鉀，可被氧化為具有熒光的硫色素，后者溶液正丁醇中呈藍色熒光。

分子中含有兩個雜環(huán)，故可與某些生物堿沉淀試劑反應生成組成恒定的沉淀。

鑒別試驗

⑴硫色素反應

方法：取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2min，放置使分層，上面的醇層顯強烈的藍色熒光。加酸使成酸性，熒光即消失。再加堿使成堿性，熒光又顯出。

原理：維生素B1在堿性溶液中，可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或異丁醇等）中，顯藍色熒光。

⑵沉淀反應

維生素B1與碘化汞生成淡黃色沉淀

維生素B1與碘生成紅色沉淀

維生素B1與硅鎢酸生成白色沉淀

含量測定

方法有：硅鎢酸重量法、硫色素熒光法、非水溶液滴定法和紫外分光光度法。

中國藥典收載紫外分光光度法

維生素C

結構：維生素C分子結構中具有二烯醇結構和內酯環(huán)，且有二個手性碳原子（C4、C5），因此不僅使維生素C性質極為活潑，且具旋光性。

性質：

溶解性：維生素C在水中易溶，水溶液呈酸性，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。

結構遇糖類相似，也具糖的性質。

分子中二烯醇基具極強的還原性，易被氧化為二酮基而成為去氫抗維生素C,加氫又可還原為維生素C.在堿性溶液或強酸性溶液中能進一步水解為二酮古羅糖酸。

C3-OH由于受共軛效應的影響，酸性較強；C2-OH的酸性極弱，故維生素C一般表現為一元酸，能與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。

分子中有兩個手性碳原子，故有四個光學異構體，其中L（+）-維生素C活性最強。

維生素C和碳酸鈉作用可生成單鈉鹽，不致發(fā)生水解，因雙鍵使內酯環(huán)變得較穩(wěn)定；但在強堿中，內酯環(huán)可水解，生成酮酸鹽。

維生素C有共軛雙鍵，在稀礦酸溶液中，在245nm波長處有最大吸收；若在中性或堿性條件下，則紅移至265nm處。

鑒別試驗：

⑴與硝酸反應

方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加硝酸銀試液0.5ml，即生成銀的黑色沉淀。

原理：維生素C分子中有二烯醇基，具強還原性，可被硝酸銀氧化為去氫維生素C,同時可產生黑色銀沉淀。

⑵與2,6-二氯靛酚反應

方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取該溶液5ml，加2,6-二氯靛酚試液1～2滴，試液的顏色即消失。

原理：2.6-二氯靛酚為一染料，其氧化型在酸性介質中為玫瑰紅色，堿性介質中微藍色。與抗壞血酸作用后生成還原型的物色的酚亞胺。

⑶與其它氧化劑反應

維生素C還可被亞甲藍、高錳酸鉀、堿性酒石酸銅試液、磷鉬酸等氧化劑氧化為去氫維生素C,同時，維生素C可使這些試劑褪色，產生沉淀或顯色。

⑷利用維生素C具糖類性質的反應

維生素C可在三氯醋酸或鹽酸存在下水解、脫羧，生成戊糖，再失水，轉變?yōu)榭啡?，加入吡咯，加熱?0℃產生藍色。

⑸紫外分光光度法

維生素C在0.01mol/L鹽酸液中，在243nm波長處有唯一的最大吸收，利用此特征進行鑒別。

含量測定：

碘量法：溶劑：水和稀醋酸，指示劑：淀粉。

操作中加入稀醋酸10ml使滴定在酸性溶液中進行。在酸性介質中維生素C受空氣中氧的氧化作用減慢，但樣品溶于稀酸后仍需立即進行滴定。

加新沸過的冷水液是為了減少水中溶解氧對測定的影響。

如片劑，溶解后應濾過，取續(xù)濾液測定；注射液測定時要加2ml丙酮，以消除注射液內含有的抗氧劑亞硫酸氫鈉對測定的影響。

抗生素類藥物

β-內酰胺類抗生素

本類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族，他們的分子結構中均含有β-內酰胺環(huán)。

基本結構：

分子中都有一個游離羧基和酰胺側鏈。

青霉素：β-內酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán)

頭孢菌素：β-內酰胺環(huán)和氫化噻嗪環(huán)

性質：

溶解度：青霉素和頭孢菌素分子中的游離羧基具有相當強的酸性，能與無機堿或某些有機堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水，而有機堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機溶劑。

旋光性：青霉素族分子中含有三個手性碳原子，頭孢菌素族含有兩個手性碳原子，都具有旋光性。

紫外吸收特性

青霉素分子中的母核部分無紫外吸收，但出側鏈酰胺基上R如具苯環(huán)共軛系統(tǒng)，則有紫外吸收特性。

頭孢菌素由于母核部分具有O-C=N-C=C結構，故有紫外吸收。

β-內酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性

β-內酰胺環(huán)是青霉素族結構最不穩(wěn)定的地方，如與酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子（銅、鉛、汞和銀）等作用時，易發(fā)生水解和分子重排，導致β-內酰胺環(huán)的破壞而失去活性。

鑒別試驗：

⑴鉀、鈉鹽的火焰反應

⑵呈色反應

①羥肟酸鐵反應：青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，β-內酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子呈色。

頭孢哌酮：紅棕色；氨芐西林：紫紅色；頭孢氨芐：紅褐～褐色；頭孢噻吩鈉：紅褐色；普魯卡因青霉素：紫紅色；頭孢唑啉鈉：紅棕色。

②硫酸—硝酸呈色反應：頭孢菌素能與硫酸—硝酸反應后成色。

頭孢噻吩鈉：紅棕色；頭孢氨芐：黃色；頭孢噻肟鈉：亮黃色。

③茚三酮反應：某些具有α-氨基的本類藥物（如氨芐西林）遇茚三酮即顯藍紫色。

④與斐林試劑反應：本類藥物具有類似肽鍵結構，可產生雙縮脲反應。開環(huán)分解，使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。

⑤變色酸—硫酸呈色反應：阿莫西林加變色酸-硫酸實際混合后，于150℃加熱2～3min，因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。

⑥與重氮苯磺酸呈色反應：頭孢菌素族7位側鏈含有酚羥基基團時，能與重氮苯磺酸試液產生偶合反應，顯橙黃色。

⑦與銅鹽呈色：頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后，生成銅配位鹽，顯橄欖綠色。

⑶沉淀反應

①在稀酸中生成白色沉淀：青霉素鉀和青霉素鈉加水溶解后，加稀鹽酸2滴，即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過量的鹽酸中成鹽。

②有機胺鹽的特殊反應

重氮化-偶合反應：普魯卡因青霉素水溶液酸化后，顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反應，生成偶氮染料紅色沉淀。

與三硝基苯酚的反應：芐星青霉素經氫氧化鈉堿化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的殘渣含有二芐基乙二胺，加稀乙醇使殘渣溶解，加三硝基苯酚的飽和溶液，加熱后放冷，即析出二芐基乙二胺苦味酸結晶。

⑷光譜法

①紫外分光光度法

最大吸收波長鑒定法

水解產物的最大吸收波長鑒定法

②紅外吸收光譜

③核磁共振光譜

⑸色譜法

①薄層色譜法

②高效液相色譜法

含量測定

⑴碘量法（芐星青霉素）

青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，其降解產物消耗碘。

反應分兩步進行：第一步反應是按化學計算量進行；第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應受溫度、pH、時間等諸多因素影響，故耗碘量沒有固定的量關系。因此試驗過程中要嚴格控制溫度，同時采用與青霉素標準品平行對照測定，則可抵消上述可變因素的影響。

碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，溫度在24～26℃為最好。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘,故本法的靈敏度較高。

注意：在滴定終點時放慢滴定速度，并強力振搖；如果滴定至終點又返現藍色，說明真正的終點尚未到達。

⑵汞量法（青霉素鈉、青霉素鉀）

青霉素分子不與汞鹽反應，而其堿性水解產物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應，根據消耗的汞鹽量可以計算青霉素的含量。

電位滴定法：指示電極：鉑電極；參比電極：汞-硫酸亞汞電極。滴定液：硝酸汞。

每1ml的硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當于7.128mg的總青霉素。

總青霉素的百分含量與降解產物的百分含量之差值即為青霉素的含量。

注意：青霉素含量計算以第二次滴定終點為依據；水解必須完全；空白試驗也要稱取供試品，但不經氫氧化鈉水解；與碘量法比較，汞量法測定青霉素的主要優(yōu)點是不需要青霉素標準品作對照，汞鹽滴定液用EDTA標定即可。

⑶酸堿滴定法（苯唑西林鈉）

⑷紫外-可見分光光度法

⑸高效液相色譜法

氨基糖苷類抗生素雜環(huán)藥物

吡啶類藥物

異煙肼的鑒別試驗：還原反應。異煙肼的酰肼基有還原性，可還原硝酸銀中的Ag+成單質銀，肼基則被氧化生成氮氣。加氨制硝酸銀試液1ml，即產生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。

縮合反應。異煙肼的酰肼基可以和含羰基的試劑（如芳醛）發(fā)生縮合反應。異煙肼與香草醛反應，生成異煙腙，測定熔點供鑒別。

沉淀反應。異煙肼分子中的吡啶環(huán)具有堿性，可以和重金屬鹽類（如氯化汞、硫酸銅、碘化鉍鉀）乙基苦味酸形成沉淀。異煙肼和氯化汞可生成白色沉淀。和硫酸銅-枸櫞酸試液反應，先產生綠色沉淀，加熱，沉淀變?yōu)榧t棕色。

尼克剎米的鑒別：戊烯二醛反應。屬吡啶環(huán)的開環(huán)反應。尼克剎米分子中的吡啶環(huán)與溴化氰反應，開環(huán)形成戊烯二醛的衍生物，再與苯胺縮合，形成黃色的希夫氏堿。

異煙肼也可發(fā)生戊烯二醛反應，但需先用高錳酸鉀或溴水氧化為異煙酸，再與溴化氰作用。

與苯胺縮合形成黃色至棕黃色產物，與聯(lián)苯胺紫外分光光度法形成淡紅至紅色產物。

水解反應。尼克剎米分子中的酰胺基在堿性條件下可水解，加氫氧化鈉試液，加熱，即有二乙胺臭味逸出，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變成藍色。

沉淀反應。尼克剎米分子中的吡啶環(huán)也可以和重金屬離子反應。尼克剎米和硫酸銅及硫氰酸銨作用，生成草綠色配位化合物的沉淀。

異煙肼中游離肼的檢查：薄層色譜法。肼的檢測限為0.1μg，控制限量為0.02%。

異煙肼的含量測定：異煙肼分子中的酰肼基具有還原性，可采用氧化還原滴定法測定其含量。溴酸鉀法。甲基橙作指示劑，溴酸鉀滴定止粉紅色消失。每1ml的溴酸鉀滴定液（0.1667mol/L）相當于3.429mg的C6H7N3O。

異煙肼的片劑、注射劑均采用溴酸鉀法測定含量。

還可使用溴量法、剩余碘量法測定含量，也可用非水溶液滴定法。

尼克剎米含量測定：非水溶液滴定法。溶劑：冰醋酸，指示劑：結晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液藍綠色。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于17.82mg的C10H14N2O。

紫外分光光度法。測定尼克剎米注射劑含量。注射劑的溶劑對非水溶液滴定法有干擾，所以采用本法。使用0.5%硫酸溶液溶解樣品，是為了使藥物呈離解狀態(tài)，易溶于水。甾體激素類藥物

基本結構：均具有環(huán)戊烷駢多氫菲母核。

分類：

1.腎上腺皮質激素：皮質酮衍生物，如可的松、潑尼松、地塞米松等。

本類藥物多為C21-羥基所形成的酯類。

結構特點是具有21個C原子：A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有α-醇酮基并多數有α-羥基；C10、C13：具有角甲基；C11：具有羥基或酮基；其它：有些皮質激素具有Δ1,6α、9α鹵素，16α羥基，6α、12α、16α、16β甲基等。

2.雄性激素及蛋白同化激素：甲睪酮、丙酸睪酮、十一酸睪酮等；蛋白同化激素有苯丙酸諾龍。

結構特點：雄性激素具有19個C原子；蛋白同化激素具有18個C原子（C10上無角甲基）；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：無側鏈，多數是一個β-羥基，有些是由他形成的酯，有些具有α-甲基。

3.孕激素：也稱為黃體酮激素或孕酮。典型藥物為黃體酮。

中國藥典收載有：黃體酮、醋酸甲羥孕酮、己酸羥孕酮、醋酸甲地孕酮原料及制劑；醋酸氯地孕酮原料等。

結構特點：具有21個C原子；A環(huán)：具有Δ4-3-酮基；C17：具有甲酮基，有些具有α-羥基，與醋酸、已酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羥孕酮等）；其它：有些具有Δ6、6β-甲基、6α-甲基、6β-氯。

4.雌激素：又稱卵泡激素。雌二醇、炔雌醚、苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇原料及制劑等。

結構特點：具有18個C原子；A環(huán)：為苯環(huán)，C3上具有酚羥基且有些形成了酯或醚；C10：無角甲基；C17：具有β-羥基或酮基，有些羥基形成了酯，還有些具有乙炔基。

口服避孕藥：炔諾酮、炔諾孕酮、炔孕酮。多數在A環(huán)上具有Δ4-3-酮基，與黃體酮和睪酮一致；有的在C17上具有β-羥基、α-乙炔基或甲酮基；有的在C10上無角甲基，與雌激素相同。

鑒別試驗：

呈色反應

1.與強酸的呈色反應：許多甾體激素能與硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，其中與與硫酸的呈色反應應用較廣。

藥品名稱顏色熒光加水稀釋后的變化

醋酸可的松黃或微帶橙無顏色消失溶液澄清

氫化可的松棕黃至紅綠色黃至橙黃微帶綠色熒光，少量絮狀沉淀

潑尼松橙無黃至藍綠

潑尼松龍深紅無紅色消失，灰色絮狀沉淀

炔雌醇深紅黃綠

地塞米松磷酸鈉黃或紅棕無

某些甾體激素藥物與硫酸-乙醇或硫酸-甲醇作用而呈色。如甲睪酮：取本品數毫克，加硫酸-乙醇（2：1）1ml使溶解，即顯黃色并帶有黃綠色熒光。

2.官能團的呈色反應：

①C17-α-醇酮基的呈色反應：皮質激素類藥物分子結構中C17位上的α-醇酮基具有還原性，能與氧化劑四氮唑鹽反應而呈色。如醋酸潑尼松在堿性條件下與氯化三苯四氮唑試液反應生成紅色。

②酮基的呈色反應：甾體激素分子結構中含有酮基，如C3-酮基和C20-酮基,均能與2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼等羰基試劑呈色。例如，醋酸可的松、氫化可的松等，其甲醇或乙醇溶液加新制的硫酸苯肼試液，加熱即顯黃色。

③甲酮基的呈色反應：甾體激素分子結構中含有甲酮基乙基活潑亞甲基時，能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛類反應呈色。其中亞硝基鐵氰化鈉反應可認為是黃體酮的靈敏、專屬的鑒別方法，在一定的條件下，黃體酮顯藍紫色，其他常用甾體激素均不顯藍紫色，而呈現淡橙色或不顯色。

④有機氟的呈色反應：一些含氟的甾體激素藥物（如醋酸氟輕松、醋酸地塞米松等），經氧瓶燃燒法后生成無機氟化物，在12%醋酸鈉的稀醋酸中與茜素氟藍及硝基亞鈰起反應，即顯藍紫色。

⑤酚羥基的呈色反應：C3為酚羥基的雌激素，能與重氮苯磺酸反應生成紅色偶氮染料。如JP(13)收載的苯甲酸雌二醇利用該法進行鑒別。

沉淀反應

1.與斐林試劑的沉淀反應

皮質激素的C17-α-醇酮基具強還原作用，與斐林試劑反應生成橙紅色氧化亞銅沉淀。

2.與氨制硝酸銀的沉淀反應

皮質激素的C17-α-醇酮基具強還原性，與氨制硝酸銀反應，生成黑色金屬銀沉淀。

3.與硝酸銀的沉淀反應

含炔基的甾體激素，如炔雌醇、炔諾酮，遇硝酸銀獎試液，即生成白色的炔雌醇銀鹽沉淀及白色炔諾酮銀沉淀。

4.與硝酸—硝酸銀的沉淀反應

甾體激素（如丙酸氯貝他索、丙酸貝氯米松）中有機結合的氯，經加熱或進行有機破壞生成無機氯化物，再在硝酸酸性條件下與硝酸銀作用，生成氯化銀的白色沉淀。

制備衍生物測定其熔點

利用甾醇、甾酮類藥物與一些試劑反應生成酯、肟、縮氨脲，或利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應的母體，然后測定其熔點進行鑒別。

1.酯的生成：如炔雌醇制成苯甲酸酯。

2.酮肟的生成：如黃體酮與鹽酸羥胺作用生成黃體酮雙酮肟為例。

3.縮氨基脲的生成：ChP收載苯丙酸諾龍生成其縮氨基脲衍生物。

4.酯的水解：如丙酸睪酮用醇制氫氧化鉀水解為例。

水解產物的反應

戊酸雌二醇、已酸羥孕酮等藥物，先在堿液中水解，經酸化加熱分別產生戊酸、己酸特臭，用此法可鑒別這兩種藥物。

紫外分光光度法

丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20μg/ml）在239nm波長處有最大吸收。

紅外分光光度法

薄層色譜法

中國藥典收載的炔諾酮、炔雌醚片、丙酸睪酮注射液、倍他米松磷酸鈉、醋酸氯地孕酮片、醋酸甲羥孕酮片、醋酸潑尼松片、苯丙酸諾龍注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液、復方己酸孕酮注射液、復方炔諾酮片、復方炔諾酮膜、復方炔諾孕酮片、復方炔諾孕酮滴丸、哈西奈德軟膏等甾體激素藥物均采用了薄層色譜（標準品對照法）進行鑒別。

高效液相色譜法：

中國藥典中醋酸氟輕松軟膏、醋酸氟氫可的松軟膏、醋酸曲安奈德軟膏、丙酸倍氯米松軟膏、地塞米松磷酸鈉滴眼液、哈西奈德乳膏等的鑒別試驗。

特殊雜質的檢查

1.游離磷酸：地塞米松磷酸鈉（中國藥典收載）、氫化可的松磷酸鈉中檢查游