含量測定方法與驗證7版

第四章

藥物的含量測定方法與驗證定量分析方法的分類與特點樣品的前處理方法藥品分析方法的驗證含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!節(jié)定量分析方法的分類與特點定量分析方法的計算藥典對藥物的含量限度的表示方法原料藥：多以%表示，有二種情況①按原料藥本身形式計算其含量例：阿司匹林（P.11）按干燥品計不得少于99.5%對氨基水楊酸鈉按干燥品計不得少于99.0%凡未規(guī)定上限的，藥典凡例中規(guī)定，其含量上限不得超過101.0%。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!②由于藥物組成不定，需以另一種穩(wěn)定形式計算含量例：氫氧化鋁[Al(OH)3]以含三氧化二鋁（Al2O3）計，不得少于48.0%制劑：制劑的含量限度表示方法有三種情況①按標示量計算標示量即規(guī)格量，生產(chǎn)廠家的處方量。它是以標示量為100%，將測得含量與之相比較，求出相對于標示量的百分含量。例：維生素B1注射液含維生素B1應(yīng)為標示量的95.0%～105.0%干酵母片含蛋白質(zhì)不得少于標示量的40.0%含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!②直接用%含量規(guī)定范圍（主藥含量微）例：復(fù)方碘溶液含I應(yīng)為4.5%～5.5%含KI應(yīng)為9.5%～10.5%復(fù)方氯化鈉注射液含總Cl-量0.52%～0.58%含KCl量0.028%～0.032%含CaCl2·2H2O0.031%～0.035%含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!2022/12/105一、容量分析法——滴定法aA+bBcC+dD（A——被測藥物；B——滴定液）（一）、滴定度的概念T---與1ml規(guī)定濃度的標準溶液所相當?shù)谋粶y物的mg數(shù)。（二）、滴定度的計算T=MA×mB×a/b（mg/ml）含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!相當于標示量%的計算公式片劑：V×F×T/W×平均片重/標示量×100%針劑：V×F×T/W/標示量（g/ml）×100%以重量/片計的計算公式V×F×T/W×平均片重=重量/片含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!2022/12/107司可巴比妥鈉的滴定度計算

1摩爾司可巴比妥鈉與1摩爾溴相當T=MA×mB×a/b＝260.2×0.05×1/1＝13.01mg/ml含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!精密量取維生素C注射液4mL（相當于維生素C0.2g），加水15mL與丙酮2mL，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4mL與淀粉指示液1mL，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液顯藍色，并持續(xù)30秒鐘不退。已知：注射液規(guī)格2mL:0.1g，消耗0.05mol/L碘滴定液（F=1.005）22.45mL，維生素C的分子量為176.12，問：（1）丙酮和稀醋酸分別起什么作用？（2）每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相當于多少mg的維生素C？（3）求本品相當于標示量的百分含量？含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!二、光譜分析（一）、UV法1、標準對照法（一點法）A樣/A標

=C樣/C標，樣品%=A樣/A標

×C標×F/W×100%F=稀釋倍數(shù)W=取樣量2、百分吸收系數(shù)法（A=E1%cm×C×L）C%=A/E1%cm樣品%=A/E1%cm×F/WF=稀釋倍數(shù)和濃度換算因子W=取樣量含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!差示分光光度法原理：利用被測物在兩種不同溶液中吸收光譜發(fā)生了特征性變化，而共存干擾物在該兩種溶液中未引起光譜變化，測定兩種溶液的吸收度差值（ΔA值），根據(jù)ΔA與被測物濃度C的線性關(guān)系進行定量測定。方法：一定量+酸→一定體積（測定）→A測同樣量+堿→同樣體積（參比）→A參

A測－A參=△A樣∵干擾物在兩種溶液中吸收光譜無變化，即△A雜=0，∴△A樣只與樣品濃度C呈線性關(guān)系。供試品含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!2022/12/1011（二）、FLU法以熒光強度△R代替吸收度A1、對照品溶液與空白溶液的熒光強度之差（ΔR對）2、供試品溶液與空白溶液的熒光強度之差（ΔR樣）

ΔR樣C樣＝×C對

ΔR對含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!

復(fù)方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑（SMZ）的含量測定：精密稱取本品（每片含SMZ為0.4g）10片，總重量為5.5028g。精密稱取SMZ對照品0.0501g、片粉0.0756g，按雙波長分光光度法測定SMZ含量。在257nm波長處測得：對照品溶液的吸收度A對為0.330，供試溶液的吸收度A樣為0.372。在304nm波長處測得：對照品溶液的吸收度A對為0.009，供試溶液的吸收度A樣為0.021。計算SMZ的含量相當于標示量的百分含量。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!對乙酰氨基酚片劑溶出度測定：取標示量為0.3g的本品6片，依法在1000mL溶劑中測定溶出度。經(jīng)30分鐘時，取溶液5mL濾過，精密吸取續(xù)濾液1mL，加0.04%氫氧化鈉溶液稀釋至50mL，搖勻，在257nm波長處測得每片的吸收度分別為0.345，0.348，0.351，0.359，0.356和0.333，按其百分吸收系數(shù)為715計算出各片的溶出量。限度為標示量的80%。并判斷其溶出度是否符合規(guī)定。0.345×50×1000715×0.3=80.4%片1：片2……含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!三、色譜分析（HPLC和GC）內(nèi)標法：F=A內(nèi)/A標×C標/C內(nèi)樣品%=A樣/A內(nèi)×F×C內(nèi)×稀釋倍數(shù)/W×100%或C樣=

R樣/內(nèi)/R標/內(nèi)

×C標（R代表峰面積比值）外標法（同光譜法）:標準曲線法標準對照法(一點法)含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!

T=W0.05h/2d1d1hW0.05h0.05h含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!用HPLC法測得某藥保留時間為12.54min，半高峰寬3.0mm（紙速5mm/min），計算柱效？N=5.54（12.54/3.0）2？N=5.54[12.54/（3.0/5）]2？N=2420含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!

第二節(jié)樣品分析的前處理方法一、概述含金屬藥物有：富馬酸亞鐵、葡萄糖酸銻鈉、枸櫞酸鉍鉀、葡萄糖酸鋅、酒石酸銻鉀等。含鹵素藥物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞鈉等。根據(jù)所含金屬或鹵素在分子中結(jié)合的牢固程度，分析前采用不同方法進行預(yù)處理。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!葡萄糖酸銻鈉——為組成不定的五價銻化合物，采用間接碘量法測定銻的含量，在酸性條件下，葡萄糖酸銻鈉與碘化鉀試液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。枸櫞酸鉍鉀、葡萄糖酸鋅——EDTA滴定法測定含量。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!注意沉淀轉(zhuǎn)化（加有機溶劑）Fe3+的水解（酸性中滴定）含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!NaI＋

AgNO3→

AgI↓

曙紅鈉指示劑含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!經(jīng)有機破壞的分析方法濕法破壞HNO3-HClO4——破壞力強，反應(yīng)激烈，注意勿將內(nèi)容物蒸干，以免爆炸。適用于生物樣品的破壞，所得無機金屬離子為高價態(tài)。對含氮雜環(huán)藥物不適宜。HNO3-H2SO4——適用于大多數(shù)有機藥物的破壞，所得無機金屬離子為高價態(tài)。對堿土金屬藥物不適用，可改用HNO3-HClO4法。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!干法破壞將有機物置坩堝中，加Ca(OH)2或無水Na2CO3或輕質(zhì)氧化鎂，灼燒灰化，先小火加熱，然后高溫灰化。注意：溫度應(yīng)控制在420℃以下。本法所得灰分往往不易溶解，但不能丟棄。本法適用于濕法不易破壞完全的有機物（如含氮雜環(huán)），以及不能用硫酸破壞的有機藥物，不適用含揮發(fā)性金屬的有機藥物。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!稱樣燃燒分解操作（通O21-2min，燃燒）吸收液水-NaOH（含碘、氯藥物）例鹽酸胺碘酮、碘苯酯、甲狀腺粉水-NaOH-H2O2（含溴、含硫藥物）例磺溴酞鈉水（含氟藥物）硝酸溶液（含硒藥物）含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!分光光度法——含氟藥物例氟尿嘧啶含氟量測定：取15mg樣品，經(jīng)氧瓶燃燒破壞后加水稀釋至100ml。要求含氟量應(yīng)為13.1%-14.6%。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!氟尿嘧啶M=130.08氟的原子量為18.9984理論含氟量為：18.9984/130.08*100%=14.61%測定含量時以標準氟化鈉（20ugF/ml）為對照，置2cm比色皿中，以試劑為空白，于610nm波長處測定對照和樣品的吸收度。計算含氟量。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!2022/12/1027回收率測定要求：①

添加的藥物量必須與實際測定量相近。②

添加物質(zhì)必須與實際存在的狀態(tài)相似。③

同時做空白試驗。④

考察高、中、低三個濃度。⑤

絕對回收率≥95%，每次測得值應(yīng)保持恒定。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!2022/12/1028特異性（專屬性）是復(fù)雜樣品分析時相互干擾程度的量度,是指樣品中有其他組分共存時該方法對供試物質(zhì)準確而專屬的測定能力。雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料——可取空白樣品試驗（化學(xué)藥與中藥的空白樣品）含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!2022/12/1029定量限（LOQ）指準確度、精密度達到要求的前提下，分析方法能定量測出樣品中藥物的最低值，通常以S/N=10倍時被測藥物的絕對量表示；含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!2022/12/1030要求：①y=bx＋a（r≥0.99）②系列濃度應(yīng)覆蓋實際樣品濃度范圍。（測試濃度的80～120％）③標準曲線應(yīng)平行測定5次，取各點的平均值計算回歸方程。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!③以重量規(guī)定含量范圍（多為復(fù)方制劑）例：復(fù)方炔諾酮片炔諾酮0.54～0.66mg/片炔雌醇31.5～38.5μg/片復(fù)方磺胺甲噁唑片SMZ0.360～0.440g/片TMP72.0～88.0mg/片含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!（三）含量計算1、直接滴定法原料藥以%表示的制劑樣品%=V×F×T/W×100%F=N實/N理2、間接滴定法（1）、剩余滴定法中須做空白樣品%=（V空白－V測)樣×F×T/W×100%

（2）、生成物滴定法aA+bB=cC（生成物）+dD，cC+eE=fF+gG找到A與E的關(guān)系，計算滴定度（p.146）（自學(xué)）含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!

司可巴比妥鈉膠囊含量測定：精密稱取內(nèi)容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25mL，再加鹽酸5mL，立即密塞并振搖1分鐘，暗處靜置15分鐘后，加碘化鉀試液10mL，立即密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L，F(xiàn)=0.992）滴定，至近終點時加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。已知：樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）17.05mL，空白試驗消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相當于13.01mg的司可巴比妥鈉。計算本品相當于標示量的百分含量（規(guī)格0.1g，20粒膠囊內(nèi)容物重2.7506g）？(p.90－生成物滴定法)含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!(25.22－

17.05)×13.01×0.992×2.7506

0.1385×0.1×1000×20×100%

含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!2022/12/1035維生素C1摩爾維生素C與1摩爾碘相當T＝0.05×176.12×1/1＝8.806mg/mlT×V×F維生素C標示量％＝4×0.05×100％8.806×22.45×1.005＝4×0.05×1000×100％＝99.34％含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!

3、標準曲線法（y=bx＋a）由標準曲線或回歸方程求出C樣，再根據(jù)F，W求出樣品%。4、計算分光光度法雙波長法，差示法均可應(yīng)用比爾定律的公式，以△A代替吸收度A。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!220240260280nmΔApH10溶液，

240nm

pH13溶液，255nm酸性溶液，無maxΔA樣=ApH13-ApH10ΔA標=ApH13-ApH10C樣=ΔA樣/ΔA標×C標特點：具備一般分光光度法簡易、快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點;無需事先分離，又能消除干擾;提供一個近似理想的參比溶液。ΔA含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!稱取己酸孕酮0.0105g,加無水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加無水乙醇稀釋至刻度,置1cm吸收池內(nèi)進行測定,根據(jù)下列數(shù)據(jù),求出按干燥品計算的己酸孕酮百分含量。A=0.390,E1%1cm=3930.390×10393×0.0105

×100%=含量%含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!257nm304nm對照品供試品0.3300.3720.0090.0210.372-0.021

0.05015.50280.330-0.009

0.075610

0.4××××100%=99.69%含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁!復(fù)方苯巴比妥散中苯巴比妥的測定主要成分：苯巴比妥，阿司匹林原理：在pH5.91和pH8.04條件下，阿司匹林及水解產(chǎn)物水楊酸等的紫外吸收光譜重合，ΔA=0，而苯巴比妥在此兩pH條件下的差示光譜在240nm處ΔA值最大，因此可測定此波長處的ΔA值，采用標準曲線法定量。方法：取樣品0.12g，加無水乙醇20ml，振搖，加水至200ml，取5ml兩份，分別用pH5.91和pH8.04的緩沖液稀釋至50ml，以試劑為空白，在240nm處測定吸收度，代入回歸方程計算含量。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁!系統(tǒng)適用性試驗柱效（理論板數(shù)）n=5.54(tR/Wh/2)2分離度R=

拖尾因子T=

重復(fù)性取對照品或樣品溶液，連續(xù)進樣5次，測得峰面積相對標準差RSD應(yīng)小于2.0%2(tR2-tR1)W1+W2W0.05h2d1(R≥1.5)(T=0.95～1.05)含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁!

HPLC測定復(fù)方SMZ片中SMZ含量，以SG為內(nèi)標，測得標準液中：SMZ峰高14.90cm，濃度8.0mg/mL，SG峰高13.80cm，濃度4.0mg/mL。樣品液中：SMZ峰高11.92cm，SG峰高16.20cm，濃度4.0mg/mL。求樣品液中SMZ的濃度為多少？（進樣量均為5l）13.8×8.014.9×4.0F=樣品（mg/mL）

=11.92×4.016.2=1.852×F=5.45含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁!丙酸睪酮含量測定采用高效液相法：取本品對照品適量，精密稱定，加甲醇定量稀釋成每1mL中約含1mg的溶液。精密量取該溶液和內(nèi)標溶液（1.6mg/mL苯丙酸諾龍甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10L注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取本品適量，同法測定，內(nèi)標法計算含量。已知對照品溶液為1.052mg/mL，樣品溶液為1.032mg/mL，測得對照液中丙酸睪酮和內(nèi)標準的峰面積分別為54678和61258，樣品液中丙酸睪酮和內(nèi)標準的峰面積分別為52213和61228，計算丙酸睪酮的含量？52213/6122854678/61258×1.052/1.032=？97.4%含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁!不經(jīng)有機破壞處理的分析方法直接測定法金屬原子不與碳直接相連的或C-M鍵結(jié)合不牢固的有機金屬藥物，在水溶液中電離，可選用適當方法直接測定。例：富馬酸亞鐵——在熱的稀礦酸中溶解，釋放出亞鐵離子，用硫酸鈰滴定液直接滴定。

含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁!經(jīng)水解后測定法本法適合于鹵素與脂肪碳鏈相連者，經(jīng)加熱回流使其水解，有機結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變成無機的鹵素離子，然后用適當方法進行測定。例：三氯叔丁醇的含量測定CCl3－C(CH3)2－OH+4NaOH3NaCl然后用銀量法測定氯化鈉含量?；亓骱繙y定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁!硬脂酸鎂——與定量硫酸標準溶液共沸，水解生成硬脂酸和硫酸鎂，剩余的硫酸標準溶液用氫氧化鈉標準溶液回滴。經(jīng)氧化還原后測定法堿性還原后測定——當鹵素結(jié)合于芳環(huán)上時，因結(jié)合較牢固，需在堿性條件下加還原劑回流，使X-C鍵斷裂，形成無機鹵化物后測定。例泛影酸的含量測定含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁!酸性還原后測定例碘番酸，JP采用冰醋酸酸性條件下用鋅粉還原，硝酸銀滴定液滴定，以四溴酚酞乙酯為指示劑，終點時沉淀由黃色變?yōu)榫G色。USP，BP，ChP均采用氫氧化鈉堿性條件下用鋅粉還原，然后用硝酸銀滴定液滴定，但指示終點方法不同，ChP采用吸附指示劑曙紅鈉，USP采用吸附指示劑四溴酚酞乙酯，BP采用電位法指示終點。含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁!H2SO4-SO42-——本法所得金屬離子為低價態(tài)，常用于含砷或銻有機藥物的破壞。若用本法破壞低碳藥物時，宜添加適量淀粉等多碳化合物，以保證破壞過程中將金屬離子轉(zhuǎn)變?yōu)榈蛢r態(tài)。其他濕法破壞HNO3-H2SO4-HClO4H2SO4–H2O2H2SO4–KMnO4濕法破壞的儀器一般為凱氏燒瓶。

含量測定方法與驗證7版共57頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁!氧瓶燃燒法（Oxygenfl