臨床微生物實驗室質(zhì)量控制及質(zhì)量保證課件

臨床微生物實驗室

質(zhì)量控制及質(zhì)量保證12/11/20221臨床微生物實驗室

微生物實驗室質(zhì)量控制

為保證檢測結(jié)果的準確性、可靠性，臨床細菌室室內(nèi)質(zhì)控需要：

對人員進行評估建立質(zhì)量控制標準、選擇和適的質(zhì)控物對標本質(zhì)量進行評價對試劑、培養(yǎng)基、儀器設(shè)備進行監(jiān)測對檢測過程進行監(jiān)控對檢測結(jié)果和結(jié)果的臨床應(yīng)用進行評估12/11/20222微生物實驗室質(zhì)量控制為保證檢測結(jié)果的準確性、可靠性，臨床臨床微生物實驗室質(zhì)量控制環(huán)節(jié)標本合格判定培養(yǎng)基、試劑儀器設(shè)備結(jié)果報告標本留取運送分析前分析后分析中人員12/11/20223臨床微生物實驗室質(zhì)量控制環(huán)節(jié)標本合格判定結(jié)果報告標本留取運送人員具備相關(guān)教育背景，每年接受專業(yè)技術(shù)及知識培訓(xùn)，熟悉微生物實驗室操作規(guī)程、消毒滅菌及生物安全知識。..包括新員工培訓(xùn)、老員工的再培訓(xùn)以及員工工作能力評估人員能力人員培訓(xùn)人員資質(zhì)包括其對諸如分析前、中、后特定階段的專業(yè)經(jīng)驗和熟練試驗技術(shù)。并直接參與質(zhì)控工作12/11/20224人員具備相關(guān)教育背景，.包括新員工培訓(xùn)、老員工的再培訓(xùn)以及分析前質(zhì)量控制12/11/20225分析前質(zhì)量控制12/9/20225分析前質(zhì)量控制建立質(zhì)量控制標準（SOP)

制定自檢測申請、標本采集開始到發(fā)出檢測結(jié)果報告止的全過程的操作和管理程序微生物檢驗標本質(zhì)量控制實驗室應(yīng)給標本采集者提供標本采集和運送的指導(dǎo)手冊實驗室應(yīng)持續(xù)監(jiān)測標本采集和運送過程實驗室應(yīng)對標本質(zhì)和量進行評估不合格標本拒收12/11/20226分析前質(zhì)量控制建立質(zhì)量控制標準（SOP)12/9/20226標本采集和運送標本采集和運送是細菌培養(yǎng)成功的最最重要的環(huán)節(jié)但由于標本的采集和運送常有護士或醫(yī)生或病人自己完成,所以也是最不容易控制的環(huán)節(jié)，造成的后果是:標本污染、陽性率低12/11/20227標本采集和運送標本采集和運送是細菌培養(yǎng)成功的12/9/202標本收集基本原則1）在抗菌藥物使用前采集標本2）采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作3）采樣后立即送檢4）棉拭子標本宜用運送培養(yǎng)基5）標本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。6）送檢標本應(yīng)注明來源和檢驗?zāi)康?2/11/20228標本收集基本原則12/9/20228

標本收集和運送的質(zhì)量控制

向臨床提供標本采集說明(sop)不同部位標本的采集方法采集最佳時間、次數(shù)標本采集量正確時間、部位、方法等

對收集和運送標本的容器控制

無菌、無防腐劑、足夠大、安全嚴密、不易破碎、選擇合適的運送培養(yǎng)基

12/11/20229標本收集和運送的質(zhì)量控制向臨床提供標本采集說

標本收集和運送的質(zhì)量控制正確的運送方式

標本因冷藏及pH改變或在氧氣中暴露，可能減少很多種細菌的存活時間

腦膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血桿菌，肺炎鏈球菌，沙門菌，志賀氏菌，霍亂弧菌，空腸彎曲菌及厭養(yǎng)菌定量評價細菌數(shù)量的培養(yǎng)（尿標本）（運送時間）需進行微生物學(xué)檢測的所有標本，應(yīng)在收集后2小時內(nèi)送到實驗室12/11/202210標本收集和運送的質(zhì)量控制正確的運送方式需進行微生物標本運送貯存溫度血血培養(yǎng)瓶室溫或37膿、腦脊液、胸水、心包積液、腹水、滑液關(guān)節(jié)鼻竇分泌物短時間內(nèi)運送：標本在帶帽的注射器內(nèi)保證厭氧條件長時間內(nèi)運送：使用運送培養(yǎng)基室溫避免冷藏支氣管肺泡液、痰、其他分泌物、便等立刻送檢2-3小時冷藏眼、耳、鼻、尿道、生殖道、直腸、傷口拭子用運送培養(yǎng)基>4小時室溫微生物檢驗標本的運送及貯存條件12/11/202211標本運送貯存溫度血血培養(yǎng)瓶室溫或37膿、腦脊液、胸水、心包積

有可靠的標本質(zhì)量評價方法分類白細胞鱗狀上皮細胞門診或難以取材可培養(yǎng)6<25<25最好，適于培養(yǎng)5>25<104>2510-25不適于培養(yǎng)，重新留取標本3>25>25210-25>251<10>2512/11/202212有可靠的標本質(zhì)量評價方法分類白細胞鱗狀上皮細胞門診或難

有可靠的標本質(zhì)量評價方法12/11/202213有可靠的標本質(zhì)量評價方法12/9/202213不合格標本拒收除非不能再采集的標本，否則不予檢測；如果培養(yǎng)或檢測，要對結(jié)果進行說明。12/11/202214不合格標本拒收除非不能再采集的標本，否則不樣本拒收標準1）樣本上無病患標簽或病患標簽與檢驗申請單不符；2）樣本以不當(dāng)?shù)臏囟?、運送培養(yǎng)基及容器運送；3）樣本量不足、已被防腐劑固定或運送時間過長；4）樣本外漏、容器破損及明顯受污染的標本；5）樣本的檢驗項目申請不適合進行；6）特殊的難以再次獲得標本，與臨床醫(yī)師聯(lián)系后再做相應(yīng)處理12/11/202215樣本拒收標準1）樣本上無病患標簽或病患標簽與檢驗申請單不符；分析中質(zhì)量控制12/11/202216分析中質(zhì)量控制12/9/202216分析中質(zhì)量控制培養(yǎng)基主要試劑自制生化鑒定試劑染色液細菌、酵母菌鑒定系統(tǒng)藥物敏感試驗儀器設(shè)備對臨床微生物實驗室室內(nèi)質(zhì)控的基本要求只能滿足分析中對主要培養(yǎng)基、試劑的質(zhì)控需要是試驗室進行相應(yīng)操作的應(yīng)做到或至少要做到12/11/202217分析中質(zhì)量控制培養(yǎng)基對臨床微生物實驗室只能滿足分析中對主要是培養(yǎng)基的質(zhì)量控制12/11/202218培養(yǎng)基的質(zhì)量控制12/9/202218培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

購買有質(zhì)量保證標準的商品培養(yǎng)基，保存制造商質(zhì)量控制性能合格的證明文件購買無質(zhì)量保證標準的商品或自制培養(yǎng)基，每批號產(chǎn)品檢測相應(yīng)的性能，如無菌試驗、生長試驗、生長抑制試驗等12/11/202219培養(yǎng)基的質(zhì)量控制購買有質(zhì)量保證標準的商品培養(yǎng)基，購買無質(zhì)

最好使用標準菌ATCC美國典型菌株保藏中心

NCTC英國國家典型菌種保藏中心12/11/202220最好使用標準菌12/9/202220培養(yǎng)基質(zhì)量控制肉眼檢查培養(yǎng)基的顏色、均一性、厚度、氣泡等無菌試驗<100塊隨機選取5%的量，>100塊則任意選取10塊平板或管裝培養(yǎng)基35℃，培養(yǎng)24小時，無菌生長為合格。生長試驗生長抑制試驗（必要時）12/11/202221培養(yǎng)基質(zhì)量控制12/9/202221常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果血瓊脂需氧或CO2，24小時化膿鏈球菌19615肺炎鏈球菌6035大腸埃希菌25922生長，?溶血生長，α溶血生長巧克力瓊脂需氧或CO2，48小時淋病奈瑟菌43069流感嗜血桿菌10211生長生長SS瓊脂需氧，24小時鼠傷寒沙門菌14028福氏志賀菌12022糞腸球菌29212大腸埃希菌25922生長生長部分生長或抑制部分生長或抑制12/11/202222常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果麥康凱瓊脂

需氧，24小時大腸埃希菌25922福氏志賀菌12022金黃色葡萄球菌25923分解乳糖，菌落紅色不分解乳糖，菌落無色透明不生長中國藍瓊脂需氧，24小時大腸埃希菌25922福氏志賀菌12022金黃色葡萄球菌25923分解乳糖，菌落藍色不分解乳糖，菌落無色不生長

營養(yǎng)瓊脂需氧，24小時金黃色葡萄球菌25923生長沙保羅瓊脂需氧，24小時大腸埃希菌25922白色假絲酵母菌生長不生長12/11/202223常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果常用生化反應(yīng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標準

生化管陽性質(zhì)控菌株陰性質(zhì)控菌株陽性質(zhì)控結(jié)果靛基質(zhì)大腸埃希菌肺炎克雷伯菌加入吲哚試劑后兩者液面接觸處由無色變?yōu)榧t色枸櫞酸鹽培養(yǎng)基弗勞地枸櫞酸桿菌大腸埃希菌培養(yǎng)基由淡綠色變?yōu)樯钏{色硝酸鹽培養(yǎng)基大腸埃希菌鮑曼不動桿菌將甲液和乙液等量加入后培養(yǎng)基由淡灰色變?yōu)榧t色

V-P培養(yǎng)基肺炎克雷伯菌大腸埃希菌將甲液和乙液按3：1加入后培養(yǎng)基由無色變?yōu)榧t色質(zhì)控要求：每批試劑使用前應(yīng)使用相應(yīng)陰性和陽性反應(yīng)（標準）菌株做質(zhì)控12/11/202224常用生化反應(yīng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標準生化管陽性質(zhì)控菌株陰性質(zhì)控試劑質(zhì)量控制具體要求：每批次或使用當(dāng)天用相應(yīng)的標準菌株作陰、陽性對照控。氧化酶試驗血漿凝固酶試驗過氧化氫酶試驗β-內(nèi)酰胺酶12/11/202225試劑質(zhì)量控制具體要求：氧化酶試驗血漿凝固酶試驗過氧化氫酶試驗

過氧化氫酶（H2O2）陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：糞腸球菌ATCC29212區(qū)別鏈球菌屬/葡萄球菌屬，少見G-菌、G+菌12/11/202226過氧化氫酶（H2O2）陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC2血漿凝固酶試驗

陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：表皮葡萄球菌ATCC12228區(qū)別金黃色葡萄球菌/凝固酶陰性葡萄球菌12/11/202227血漿凝固酶試驗

區(qū)別金黃色葡萄球菌/凝固酶陰性葡萄球菌12/氧化酶陽性對照：綠膿假單胞菌ATCC27853陰性對照：大腸桿菌ATCC25922氧化酶試驗G-菌區(qū)別，腸桿菌科/非發(fā)酵菌/弧菌科/少見G-菌等12/11/202228氧化酶陽性對照：綠膿假單胞菌ATCC27853氧化酶試驗β內(nèi)酰胺酶陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：流感嗜血桿菌ATCC29247判斷苛養(yǎng)菌流感嗜血桿菌、卡他布蘭漢菌和淋病奈瑟菌對青霉素、阿莫西林和氨芐西林的敏感性。12/11/202229β內(nèi)酰胺酶陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923判斷苛養(yǎng)染色液質(zhì)控革蘭染色：G+:金黃色葡萄球菌ATCC25923G-:大腸埃希菌ATCC25922抗酸染色:陽性:Mube.trculosisATCC25177陰性:大腸埃希菌ATCC25922要求:每批試劑并每周12/11/202230染色液質(zhì)控革蘭染色：12/9/202230照片革蘭氏抗酸12/11/202231照片革蘭氏抗酸12/9/202231設(shè)備質(zhì)量控制新設(shè)備的檢查，包括如安全性、配件、有無破損等新設(shè)備比對實驗（與舊設(shè)備比對或與參考設(shè)備或方法比對）設(shè)備運行記錄、維護保養(yǎng)記錄、維修記錄制定和執(zhí)行標準操作規(guī)程培訓(xùn)操作人員12/11/202232設(shè)備質(zhì)量控制新設(shè)備的檢查，包括如安全性、配件、有無破損等12手工、半自動、自動鑒定系統(tǒng)使用廠家規(guī)定的標準菌株對相應(yīng)試劑進行質(zhì)控，每批試劑至少1次使用廠家規(guī)定的標準菌株做質(zhì)控，應(yīng)符合預(yù)期結(jié)果當(dāng)新儀器啟用時、新批號試劑啟用時、結(jié)果出現(xiàn)問題時都需要做質(zhì)控12/11/202233手工、半自動、自動鑒定系統(tǒng)使用廠家規(guī)定的標準菌株對相應(yīng)試劑進設(shè)備質(zhì)量控制天平、pH計、離心機、加樣槍、溫度計、生物安全柜、高壓鍋等需進行校準冷藏和培養(yǎng)等設(shè)備應(yīng)進行溫度監(jiān)控并記錄12/11/202234設(shè)備質(zhì)量控制12/9/202234藥物敏感試驗質(zhì)量控制紙片擴散法：每周至少1次；更換藥物或培養(yǎng)基時要做質(zhì)控。常見菌：大腸埃希菌ATCC25922,金黃色葡萄球菌25923,綠膿假單胞菌27853質(zhì)控手工法（稀釋法）：每周至少1次，最好每次試驗做控。解釋：常規(guī)試驗通常使用微量肉湯稀釋法，標準做法是每批試驗標準菌株與臨床分離株同時做。金黃色葡萄球菌29213,大腸埃希菌ATCC25922綠膿假單胞菌27853質(zhì)控12/11/202235藥物敏感試驗質(zhì)量控制紙片擴散法：每周至少1次；更換藥物或培養(yǎng)藥物敏感試驗質(zhì)量控制藥物敏感試驗（儀器法）使用廠家規(guī)定的標準菌株對相應(yīng)試劑進行質(zhì)控?每批試劑至少1次?當(dāng)試驗結(jié)果異常、不穩(wěn)定，或缺少經(jīng)驗的人員操作時，應(yīng)增加質(zhì)控的頻率。12/11/202236藥物敏感試驗質(zhì)量控制藥物敏感試驗（儀器法）12/9/2022紙片擴散法藥敏試驗質(zhì)量控制條件及質(zhì)控菌株細菌類別質(zhì)控菌株試驗條件腸桿菌科大腸埃希菌ATCC25922大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h銅綠假單胞及不動桿菌屬銅綠假單胞ATCC27853大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）同上葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h如測試苯唑西林、甲氧西林時，孵育時間應(yīng)增至24h12/11/202237紙片擴散法藥敏試驗質(zhì)量控制條件及質(zhì)控菌株細菌類別質(zhì)控菌株試驗紙片擴散法藥物敏感試驗質(zhì)量控制連續(xù)質(zhì)控檢測1次/天共30天，獲30個檢測值如：1、≤3個值超出范圍，可行每周一次質(zhì)控2、≥4個值超出范圍，繼續(xù)做每天一次質(zhì)控3、每當(dāng)試劑、藥敏紙片、培養(yǎng)基改變時，應(yīng)重新行30天的質(zhì)控4、每周一次質(zhì)控時如某周出現(xiàn)一次失控，則應(yīng)連續(xù)做5次質(zhì)控。零失控時作每周一次質(zhì)控，否則行連續(xù)30次質(zhì)控12/11/202238紙片擴散法藥物敏感試驗質(zhì)量控制連續(xù)質(zhì)控檢測1次/天共30天，藥物敏感試驗質(zhì)量控制

藥敏紙片保存：藥敏紙片應(yīng)在有干燥劑的容器內(nèi)低溫（-20℃）保存。少量日常工作用紙片4℃保存。藥敏紙片從冰箱取出后，應(yīng)平衡至室溫，從而減少暖空氣與冷的紙片接觸產(chǎn)生的冷凝。紙片應(yīng)在有效期內(nèi)使用，過期應(yīng)該丟棄。12/11/202239藥物敏感試驗質(zhì)量控制藥敏紙片保存：藥敏紙片應(yīng)在有干燥劑藥物敏感試驗的規(guī)則

目前，我國絕大多數(shù)臨床微生物實驗室均參考美國國家臨床實驗室標準委員會(CLSI)出版的對各類細菌進行常規(guī)藥敏試驗和報告時的選藥指南12/11/202240藥物敏感試驗的規(guī)則目前，我國絕大多數(shù)臨床微CLSICLSI(clinicalandlaboratorystandardsinstitute)-美國臨床實驗室標準化研究所-已被我國衛(wèi)生部指定為部頒標準-每年有新版12/11/202241CLSICLSI(clinicalandlaborat

實驗室應(yīng)該認真瀏覽CLSIM100內(nèi)容，將新的推薦內(nèi)容融入到實驗室的常規(guī)測試中，使之形成可行的操作規(guī)范M100每年更新一次M02,M07每三年更新一次12/11/202242實驗室應(yīng)該認真瀏覽CLSIM100內(nèi)容，將2011年CLSI主要變化修正-腸桿菌科—頭孢唑啉折點-腸桿菌科—碳青霉烯類折點-銅綠—氨曲南和頭孢菌素折點（再評價）-附錄A—罕見AST結(jié)果的核實增加-表格—β溶血鏈球菌組可誘導(dǎo)克林霉素耐藥-厭氧菌表格-腸桿菌科細菌天然耐藥12/11/2022432011年CLSI主要變化修正12/9/202243腸桿菌科-頭孢唑林折點的修訂

藥物紙片擴散法（mm）MIC法（ug/ml)SIRSIR頭孢唑林2009>=1815-17<=14<=816>=32頭孢唑林2010---<=12>=4頭孢唑林2011*>=2320-22<=19<=24>=8*頭孢唑啉的新折點是建立在每8小時2克的給藥劑量上12/11/202244腸桿菌科-頭孢唑林折點的修訂藥物紙片擴散法（mm腸桿菌科-碳青霉烯類折點的修訂

藥物紙片擴散法（mm）CLSIM100S-19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南--->=2320-22<=19厄他培南>=1916-18<=15>=2320-22<=19美洛培南>=1614-15<=13>=2320-22<=19亞胺培南>=1614-15<=13>=2320-22<=1912/11/202245腸桿菌科-碳青霉烯類折點的修訂藥腸桿菌科-碳青霉烯類折點的修訂

藥物MIC法（ug/ml)CLSIM100S19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南---<=12>=4厄他培南<=24>=8<=0.250.5>=1亞胺培南<=48>=16<=12>=4美洛培南<=48>=16<=12>=412/11/202246腸桿菌科-碳青霉烯類折點的修訂藥物分析后質(zhì)量控制12/11/202247分析后質(zhì)量控制12/9/202247分析后質(zhì)量控制報告的核對與審核分級報告報告結(jié)果的保存加強與臨床的溝通交流12/11/202248分析后質(zhì)量控制報告的核對與審核12/9/202248報告的核對與審核

在發(fā)出報告前確保所有室內(nèi)質(zhì)控在控。一般檢驗的審核：檢測項目與申請單內(nèi)容是否一致。病人基本信息、檢測項目與申請單內(nèi)容是否一致。細菌的分離和鑒定流程是否符合標準。鑒定的細菌和臨床標本是否相符。細菌的耐藥情況是否合理？對于連續(xù)送檢的患者，結(jié)果是否有變化？12/11/202249報告的核對與審核在發(fā)出報告前確保所有室內(nèi)質(zhì)控在控。12/報告的核對與審核

異常檢驗結(jié)果的審核：如細菌鑒定結(jié)果與藥敏實驗結(jié)果相矛盾，與臨床基本信息及診斷有矛盾，檢驗結(jié)果之間關(guān)系不合理，此次結(jié)果與近期測定結(jié)果不相符，應(yīng)作如下分析：對檢驗過程進行審核，如標本編號是否正確、結(jié)果錄入是否準確。分析是否可能存在標本采集、運輸及保存中的問題，并及時與臨床聯(lián)系；分析是否可能存在與治療及病程進展有關(guān)的問題，并及時與臨床聯(lián)系。如對以上情況無法確認應(yīng)對標本進行必要的復(fù)檢，所有重復(fù)或特殊處理均應(yīng)在備注欄中標明。12/11/202250報告的核對與審核異常檢驗結(jié)果的審核：如細菌鑒定結(jié)果與藥分級報告一級報告：血液骨髓標本培養(yǎng)瓶發(fā)現(xiàn)報警后，立即涂片做革蘭染色，將涂片結(jié)果電話通知臨床醫(yī)生，并詢問醫(yī)生用藥情況。詳細填寫《危機報告單》，包括陽性報警時間、革蘭染色結(jié)果，記錄報告具體時間、報告者及接收者等。二級報告：報告直接藥敏結(jié)果及初步鑒定結(jié)果。三級報告：書面報告細菌鑒定結(jié)果（種屬）、正式藥敏試驗、結(jié)果解釋或建議等12/11/202251分級報告12/9/202251報告結(jié)果的保存

應(yīng)保留所有檢驗申請單及檢驗流程單備查。檢驗申請單及檢驗流程單保留2年；原始結(jié)果的電子數(shù)據(jù)在指定電腦中保存，期限3年。12/11/202252報告結(jié)果的保存

應(yīng)保留所有檢驗申請單及檢加強與臨床的溝通交流

1）提高自身能力，加強與臨床醫(yī)師、護士的溝通交流，做好標本的質(zhì)量控制。2）加強與臨床醫(yī)生聯(lián)系，提供良好的解釋和咨詢服務(wù)。使臨床醫(yī)生能正確理解和解釋報告并用于臨床診治。3）加強與臨床醫(yī)生聯(lián)系，傾聽意見和建議12/11/202253加強與臨床的溝通交流

1）提高自身能力，加強與臨床醫(yī)師什么時候需要與臨床溝通12/11/202254什么時候需要與12/9/202254標本不好（不符、不合格）時；特殊標本、特殊病原菌、特殊藥敏時；出現(xiàn)危急值時；同一病人同一部位多次培養(yǎng)結(jié)果不同時；結(jié)果難以判斷時。12/11/202255標本不好（不符、不合格）時；12/9/202255小結(jié)

質(zhì)量控制是保證臨床微生物實驗室是否能提供準確、可靠、可重復(fù)和具有臨床意義的檢測信息，依靠評價臨床標本的質(zhì)量，監(jiān)控試驗步驟、儀器、培養(yǎng)基、試劑和人員操作，復(fù)核試驗結(jié)果，記錄試驗方法的有效性來實現(xiàn)。12/11/202256小結(jié)質(zhì)量控制是保證臨床微生物實驗室是否謝謝！12/11/202257謝謝！12/9/202257

臨床微生物實驗室

質(zhì)量控制及質(zhì)量保證12/11/202258臨床微生物實驗室

微生物實驗室質(zhì)量控制

為保證檢測結(jié)果的準確性、可靠性，臨床細菌室室內(nèi)質(zhì)控需要：

對人員進行評估建立質(zhì)量控制標準、選擇和適的質(zhì)控物對標本質(zhì)量進行評價對試劑、培養(yǎng)基、儀器設(shè)備進行監(jiān)測對檢測過程進行監(jiān)控對檢測結(jié)果和結(jié)果的臨床應(yīng)用進行評估12/11/202259微生物實驗室質(zhì)量控制為保證檢測結(jié)果的準確性、可靠性，臨床臨床微生物實驗室質(zhì)量控制環(huán)節(jié)標本合格判定培養(yǎng)基、試劑儀器設(shè)備結(jié)果報告標本留取運送分析前分析后分析中人員12/11/202260臨床微生物實驗室質(zhì)量控制環(huán)節(jié)標本合格判定結(jié)果報告標本留取運送人員具備相關(guān)教育背景，每年接受專業(yè)技術(shù)及知識培訓(xùn)，熟悉微生物實驗室操作規(guī)程、消毒滅菌及生物安全知識。..包括新員工培訓(xùn)、老員工的再培訓(xùn)以及員工工作能力評估人員能力人員培訓(xùn)人員資質(zhì)包括其對諸如分析前、中、后特定階段的專業(yè)經(jīng)驗和熟練試驗技術(shù)。并直接參與質(zhì)控工作12/11/202261人員具備相關(guān)教育背景，.包括新員工培訓(xùn)、老員工的再培訓(xùn)以及分析前質(zhì)量控制12/11/202262分析前質(zhì)量控制12/9/20225分析前質(zhì)量控制建立質(zhì)量控制標準（SOP)

制定自檢測申請、標本采集開始到發(fā)出檢測結(jié)果報告止的全過程的操作和管理程序微生物檢驗標本質(zhì)量控制實驗室應(yīng)給標本采集者提供標本采集和運送的指導(dǎo)手冊實驗室應(yīng)持續(xù)監(jiān)測標本采集和運送過程實驗室應(yīng)對標本質(zhì)和量進行評估不合格標本拒收12/11/202263分析前質(zhì)量控制建立質(zhì)量控制標準（SOP)12/9/20226標本采集和運送標本采集和運送是細菌培養(yǎng)成功的最最重要的環(huán)節(jié)但由于標本的采集和運送常有護士或醫(yī)生或病人自己完成,所以也是最不容易控制的環(huán)節(jié)，造成的后果是:標本污染、陽性率低12/11/202264標本采集和運送標本采集和運送是細菌培養(yǎng)成功的12/9/202標本收集基本原則1）在抗菌藥物使用前采集標本2）采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作3）采樣后立即送檢4）棉拭子標本宜用運送培養(yǎng)基5）標本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。6）送檢標本應(yīng)注明來源和檢驗?zāi)康?2/11/202265標本收集基本原則12/9/20228

標本收集和運送的質(zhì)量控制

向臨床提供標本采集說明(sop)不同部位標本的采集方法采集最佳時間、次數(shù)標本采集量正確時間、部位、方法等

對收集和運送標本的容器控制

無菌、無防腐劑、足夠大、安全嚴密、不易破碎、選擇合適的運送培養(yǎng)基

12/11/202266標本收集和運送的質(zhì)量控制向臨床提供標本采集說

標本收集和運送的質(zhì)量控制正確的運送方式

標本因冷藏及pH改變或在氧氣中暴露，可能減少很多種細菌的存活時間

腦膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血桿菌，肺炎鏈球菌，沙門菌，志賀氏菌，霍亂弧菌，空腸彎曲菌及厭養(yǎng)菌定量評價細菌數(shù)量的培養(yǎng)（尿標本）（運送時間）需進行微生物學(xué)檢測的所有標本，應(yīng)在收集后2小時內(nèi)送到實驗室12/11/202267標本收集和運送的質(zhì)量控制正確的運送方式需進行微生物標本運送貯存溫度血血培養(yǎng)瓶室溫或37膿、腦脊液、胸水、心包積液、腹水、滑液關(guān)節(jié)鼻竇分泌物短時間內(nèi)運送：標本在帶帽的注射器內(nèi)保證厭氧條件長時間內(nèi)運送：使用運送培養(yǎng)基室溫避免冷藏支氣管肺泡液、痰、其他分泌物、便等立刻送檢2-3小時冷藏眼、耳、鼻、尿道、生殖道、直腸、傷口拭子用運送培養(yǎng)基>4小時室溫微生物檢驗標本的運送及貯存條件12/11/202268標本運送貯存溫度血血培養(yǎng)瓶室溫或37膿、腦脊液、胸水、心包積

有可靠的標本質(zhì)量評價方法分類白細胞鱗狀上皮細胞門診或難以取材可培養(yǎng)6<25<25最好，適于培養(yǎng)5>25<104>2510-25不適于培養(yǎng)，重新留取標本3>25>25210-25>251<10>2512/11/202269有可靠的標本質(zhì)量評價方法分類白細胞鱗狀上皮細胞門診或難

有可靠的標本質(zhì)量評價方法12/11/202270有可靠的標本質(zhì)量評價方法12/9/202213不合格標本拒收除非不能再采集的標本，否則不予檢測；如果培養(yǎng)或檢測，要對結(jié)果進行說明。12/11/202271不合格標本拒收除非不能再采集的標本，否則不樣本拒收標準1）樣本上無病患標簽或病患標簽與檢驗申請單不符；2）樣本以不當(dāng)?shù)臏囟?、運送培養(yǎng)基及容器運送；3）樣本量不足、已被防腐劑固定或運送時間過長；4）樣本外漏、容器破損及明顯受污染的標本；5）樣本的檢驗項目申請不適合進行；6）特殊的難以再次獲得標本，與臨床醫(yī)師聯(lián)系后再做相應(yīng)處理12/11/202272樣本拒收標準1）樣本上無病患標簽或病患標簽與檢驗申請單不符；分析中質(zhì)量控制12/11/202273分析中質(zhì)量控制12/9/202216分析中質(zhì)量控制培養(yǎng)基主要試劑自制生化鑒定試劑染色液細菌、酵母菌鑒定系統(tǒng)藥物敏感試驗儀器設(shè)備對臨床微生物實驗室室內(nèi)質(zhì)控的基本要求只能滿足分析中對主要培養(yǎng)基、試劑的質(zhì)控需要是試驗室進行相應(yīng)操作的應(yīng)做到或至少要做到12/11/202274分析中質(zhì)量控制培養(yǎng)基對臨床微生物實驗室只能滿足分析中對主要是培養(yǎng)基的質(zhì)量控制12/11/202275培養(yǎng)基的質(zhì)量控制12/9/202218培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

購買有質(zhì)量保證標準的商品培養(yǎng)基，保存制造商質(zhì)量控制性能合格的證明文件購買無質(zhì)量保證標準的商品或自制培養(yǎng)基，每批號產(chǎn)品檢測相應(yīng)的性能，如無菌試驗、生長試驗、生長抑制試驗等12/11/202276培養(yǎng)基的質(zhì)量控制購買有質(zhì)量保證標準的商品培養(yǎng)基，購買無質(zhì)

最好使用標準菌ATCC美國典型菌株保藏中心

NCTC英國國家典型菌種保藏中心12/11/202277最好使用標準菌12/9/202220培養(yǎng)基質(zhì)量控制肉眼檢查培養(yǎng)基的顏色、均一性、厚度、氣泡等無菌試驗<100塊隨機選取5%的量，>100塊則任意選取10塊平板或管裝培養(yǎng)基35℃，培養(yǎng)24小時，無菌生長為合格。生長試驗生長抑制試驗（必要時）12/11/202278培養(yǎng)基質(zhì)量控制12/9/202221常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果血瓊脂需氧或CO2，24小時化膿鏈球菌19615肺炎鏈球菌6035大腸埃希菌25922生長，?溶血生長，α溶血生長巧克力瓊脂需氧或CO2，48小時淋病奈瑟菌43069流感嗜血桿菌10211生長生長SS瓊脂需氧，24小時鼠傷寒沙門菌14028福氏志賀菌12022糞腸球菌29212大腸埃希菌25922生長生長部分生長或抑制部分生長或抑制12/11/202279常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果麥康凱瓊脂

需氧，24小時大腸埃希菌25922福氏志賀菌12022金黃色葡萄球菌25923分解乳糖，菌落紅色不分解乳糖，菌落無色透明不生長中國藍瓊脂需氧，24小時大腸埃希菌25922福氏志賀菌12022金黃色葡萄球菌25923分解乳糖，菌落藍色不分解乳糖，菌落無色不生長

營養(yǎng)瓊脂需氧，24小時金黃色葡萄球菌25923生長沙保羅瓊脂需氧，24小時大腸埃希菌25922白色假絲酵母菌生長不生長12/11/202280常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預(yù)期結(jié)果常用生化反應(yīng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標準

生化管陽性質(zhì)控菌株陰性質(zhì)控菌株陽性質(zhì)控結(jié)果靛基質(zhì)大腸埃希菌肺炎克雷伯菌加入吲哚試劑后兩者液面接觸處由無色變?yōu)榧t色枸櫞酸鹽培養(yǎng)基弗勞地枸櫞酸桿菌大腸埃希菌培養(yǎng)基由淡綠色變?yōu)樯钏{色硝酸鹽培養(yǎng)基大腸埃希菌鮑曼不動桿菌將甲液和乙液等量加入后培養(yǎng)基由淡灰色變?yōu)榧t色

V-P培養(yǎng)基肺炎克雷伯菌大腸埃希菌將甲液和乙液按3：1加入后培養(yǎng)基由無色變?yōu)榧t色質(zhì)控要求：每批試劑使用前應(yīng)使用相應(yīng)陰性和陽性反應(yīng)（標準）菌株做質(zhì)控12/11/202281常用生化反應(yīng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標準生化管陽性質(zhì)控菌株陰性質(zhì)控試劑質(zhì)量控制具體要求：每批次或使用當(dāng)天用相應(yīng)的標準菌株作陰、陽性對照控。氧化酶試驗血漿凝固酶試驗過氧化氫酶試驗β-內(nèi)酰胺酶12/11/202282試劑質(zhì)量控制具體要求：氧化酶試驗血漿凝固酶試驗過氧化氫酶試驗

過氧化氫酶（H2O2）陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：糞腸球菌ATCC29212區(qū)別鏈球菌屬/葡萄球菌屬，少見G-菌、G+菌12/11/202283過氧化氫酶（H2O2）陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC2血漿凝固酶試驗

陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：表皮葡萄球菌ATCC12228區(qū)別金黃色葡萄球菌/凝固酶陰性葡萄球菌12/11/202284血漿凝固酶試驗

區(qū)別金黃色葡萄球菌/凝固酶陰性葡萄球菌12/氧化酶陽性對照：綠膿假單胞菌ATCC27853陰性對照：大腸桿菌ATCC25922氧化酶試驗G-菌區(qū)別，腸桿菌科/非發(fā)酵菌/弧菌科/少見G-菌等12/11/202285氧化酶陽性對照：綠膿假單胞菌ATCC27853氧化酶試驗β內(nèi)酰胺酶陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對照：流感嗜血桿菌ATCC29247判斷苛養(yǎng)菌流感嗜血桿菌、卡他布蘭漢菌和淋病奈瑟菌對青霉素、阿莫西林和氨芐西林的敏感性。12/11/202286β內(nèi)酰胺酶陽性對照：金黃色葡萄球菌ATCC25923判斷苛養(yǎng)染色液質(zhì)控革蘭染色：G+:金黃色葡萄球菌ATCC25923G-:大腸埃希菌ATCC25922抗酸染色:陽性:Mube.trculosisATCC25177陰性:大腸埃希菌ATCC25922要求:每批試劑并每周12/11/202287染色液質(zhì)控革蘭染色：12/9/202230照片革蘭氏抗酸12/11/202288照片革蘭氏抗酸12/9/202231設(shè)備質(zhì)量控制新設(shè)備的檢查，包括如安全性、配件、有無破損等新設(shè)備比對實驗（與舊設(shè)備比對或與參考設(shè)備或方法比對）設(shè)備運行記錄、維護保養(yǎng)記錄、維修記錄制定和執(zhí)行標準操作規(guī)程培訓(xùn)操作人員12/11/202289設(shè)備質(zhì)量控制新設(shè)備的檢查，包括如安全性、配件、有無破損等12手工、半自動、自動鑒定系統(tǒng)使用廠家規(guī)定的標準菌株對相應(yīng)試劑進行質(zhì)控，每批試劑至少1次使用廠家規(guī)定的標準菌株做質(zhì)控，應(yīng)符合預(yù)期結(jié)果當(dāng)新儀器啟用時、新批號試劑啟用時、結(jié)果出現(xiàn)問題時都需要做質(zhì)控12/11/202290手工、半自動、自動鑒定系統(tǒng)使用廠家規(guī)定的標準菌株對相應(yīng)試劑進設(shè)備質(zhì)量控制天平、pH計、離心機、加樣槍、溫度計、生物安全柜、高壓鍋等需進行校準冷藏和培養(yǎng)等設(shè)備應(yīng)進行溫度監(jiān)控并記錄12/11/202291設(shè)備質(zhì)量控制12/9/202234藥物敏感試驗質(zhì)量控制紙片擴散法：每周至少1次；更換藥物或培養(yǎng)基時要做質(zhì)控。常見菌：大腸埃希菌ATCC25922,金黃色葡萄球菌25923,綠膿假單胞菌27853質(zhì)控手工法（稀釋法）：每周至少1次，最好每次試驗做控。解釋：常規(guī)試驗通常使用微量肉湯稀釋法，標準做法是每批試驗標準菌株與臨床分離株同時做。金黃色葡萄球菌29213,大腸埃希菌ATCC25922綠膿假單胞菌27853質(zhì)控12/11/202292藥物敏感試驗質(zhì)量控制紙片擴散法：每周至少1次；更換藥物或培養(yǎng)藥物敏感試驗質(zhì)量控制藥物敏感試驗（儀器法）使用廠家規(guī)定的標準菌株對相應(yīng)試劑進行質(zhì)控?每批試劑至少1次?當(dāng)試驗結(jié)果異常、不穩(wěn)定，或缺少經(jīng)驗的人員操作時，應(yīng)增加質(zhì)控的頻率。12/11/202293藥物敏感試驗質(zhì)量控制藥物敏感試驗（儀器法）12/9/2022紙片擴散法藥敏試驗質(zhì)量控制條件及質(zhì)控菌株細菌類別質(zhì)控菌株試驗條件腸桿菌科大腸埃希菌ATCC25922大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h銅綠假單胞及不動桿菌屬銅綠假單胞ATCC27853大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）同上葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h如測試苯唑西林、甲氧西林時，孵育時間應(yīng)增至24h12/11/202294紙片擴散法藥敏試驗質(zhì)量控制條件及質(zhì)控菌株細菌類別質(zhì)控菌株試驗紙片擴散法藥物敏感試驗質(zhì)量控制連續(xù)質(zhì)控檢測1次/天共30天，獲30個檢測值如：1、≤3個值超出范圍，可行每周一次質(zhì)控2、≥4個值超出范圍，繼續(xù)做每天一次質(zhì)控3、每當(dāng)試劑、藥敏紙片、培養(yǎng)基改變時，應(yīng)重新行30天的質(zhì)控4、每周一次質(zhì)控時如某周出現(xiàn)一次失控，則應(yīng)連續(xù)做5次質(zhì)控。零失控時作每周一次質(zhì)控，否則行連續(xù)30次質(zhì)控12/11/202295紙片擴散法藥物敏感試驗質(zhì)量控制連續(xù)質(zhì)控檢測1次/天共30天，藥物敏感試驗質(zhì)量控制

藥敏紙片保存：藥敏紙片應(yīng)在有干燥劑的容器內(nèi)低溫（-20℃）保存。少量日常工作用紙片4℃保存。藥敏紙片從冰箱取出后，應(yīng)平衡至室溫，從而減少暖空氣與冷的紙片接觸產(chǎn)生的冷凝。紙片應(yīng)在有效期內(nèi)使用，過期應(yīng)該丟棄。12/11/202296藥物敏感試驗質(zhì)量控制藥敏紙片保存：藥敏紙片應(yīng)在有干燥劑藥物敏感試驗的規(guī)則

目前，我國絕大多數(shù)臨床微生物實驗室均參考美國國家臨床實驗室標準委員會(CLSI)出版的對各類細菌進行常規(guī)藥敏試驗和報告時的選藥指南12/11/202297藥物敏感試驗的規(guī)則目前，我國絕大多數(shù)臨床微CLSICLSI(clinicalandlaboratorystandardsinstitute)-美國臨床實驗室標準化研究所-已被我國衛(wèi)生部指定為部頒標準-每年有新版12/11/202298CLSICLSI(clinicalandlaborat

實驗室應(yīng)該認真瀏覽CLSIM100內(nèi)容，將新的推薦內(nèi)容融入到實驗室的常規(guī)測試中，使之形成可行的操作規(guī)范M100每年更新一次M02,M07每三年更新一次12/11/202299實驗室應(yīng)該認真瀏覽CLSIM100內(nèi)容，將2011年CLSI主要變化修正-腸桿菌科—頭孢唑啉折點-腸桿菌科—碳青霉烯類折點-銅綠—氨曲南和頭孢菌素折點（再評價）-附錄A—罕見AST結(jié)果的核實增加-表格—β溶血鏈球菌組可誘導(dǎo)克林霉素耐藥-厭氧菌表格-腸桿菌科細菌天然耐藥12/11/20221002011年CLSI主要變化修正12/9/202243腸桿菌科-頭孢唑林折點的修訂

藥物紙片擴散法（mm）MIC法（ug/ml)SIRSIR頭孢唑林2009>=1815-17<=14<=816>=32頭孢唑林2010---<=12>=4頭孢唑林2011*>=2320-22<=19<=24>=8*頭孢唑啉的新折點是建立在每8小時2克的給藥劑量上12/11/2022101腸桿菌科-頭孢唑林折點的修訂藥物紙片擴散法（mm腸桿菌科-碳青霉烯類折點的修訂

藥物紙片擴散法（mm）CLSIM100S-19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南--->=2320-22<=19厄他培南>=1916-18<=15>=2320-22<=19美洛培南>=1614-15<=13>=2320-22<=19亞胺培南>=1614-15<=13>=2320-22<=1912/11/2022102腸桿菌科-碳青霉