產(chǎn)品無(wú)菌檢測(cè)實(shí)操介紹提綱課件

無(wú)菌檢查實(shí)操簡(jiǎn)介

（——《藥典》（2005版）無(wú)菌檢查的操作簡(jiǎn)介）

一、無(wú)菌檢查的基本條件二、常用培養(yǎng)基的制備三、常見樣本的處理四、結(jié)果判定五、無(wú)菌操作流程六、其它說(shuō)明七、審核提示

無(wú)菌檢查實(shí)操簡(jiǎn)介

（——《藥典》（20一、無(wú)菌檢查的基本條件

人機(jī)料法環(huán)一、無(wú)菌檢查的基本條件

人機(jī)料法環(huán)

人：經(jīng)過培訓(xùn)、授權(quán)

建立無(wú)菌概念、微生物專業(yè)知識(shí)，并經(jīng)過無(wú)菌技術(shù)培訓(xùn)。熟知對(duì)相關(guān)產(chǎn)品的無(wú)菌檢查要求和相關(guān)作業(yè)指導(dǎo)書熟練填寫建立的記錄表單.誰(shuí)能授權(quán)？人：經(jīng)過培訓(xùn)、授權(quán)誰(shuí)能授權(quán)？機(jī)：主要設(shè)備水浴箱高壓蒸汽滅菌器天平培養(yǎng)箱100級(jí)潔凈工作區(qū)機(jī)：主要設(shè)備水浴箱高壓蒸汽滅菌器天平培養(yǎng)箱100級(jí)潔凈工作區(qū)

恒溫水浴箱

保持營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基處于液體狀態(tài)（約45℃），需要大量制作培養(yǎng)皿時(shí)使用。室溫時(shí)熱溶時(shí)營(yíng)養(yǎng)瓊脂

恒溫水浴箱

保持營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基處于液體狀態(tài)（約45℃），

培養(yǎng)箱

（生物培養(yǎng)箱）

普通：僅有升溫控制。后者：設(shè)計(jì)有升溫和降溫的雙向控制裝置。二臺(tái)溫度(23~28℃、30~35℃)南方高溫天氣（35度）時(shí)霉菌培養(yǎng)的控制？箱內(nèi)的溫度均衡性？

超凈工作臺(tái)生物安全柜

作用：提供100級(jí)單向流空氣區(qū)。作用效果：防止被操作物（檢品）被污染。作用：提供隔離系統(tǒng)（多氣流方向）。作用：防止檢品、操作人、環(huán)境被污染。超凈工作臺(tái)生物安全柜作用：提供1超凈工作臺(tái)整體設(shè)計(jì)普通層流超凈工作臺(tái)內(nèi)的氣流最終直接對(duì)著操作者而排向周圍環(huán)境。因此，此類凈化工作臺(tái)不得用于處理感染性物品、有毒物品或敏感物品等。它們只適用一般性的無(wú)菌操作活動(dòng)，如無(wú)菌物品的裝配、常規(guī)物品的微生物檢查、培養(yǎng)基的制備等。超凈工作臺(tái)整體設(shè)計(jì)普通層流超凈工作臺(tái)內(nèi)的氣流最終直接對(duì)著操作生物安全柜的整體設(shè)計(jì)生物安全柜的整體設(shè)計(jì)生物安全柜的用途專用于常規(guī)性微生物菌種的處理，如微生物的鑒別、生物指示劑的制備與培養(yǎng)、陽(yáng)性對(duì)照或培養(yǎng)基靈敏度檢查用標(biāo)準(zhǔn)菌株的制備、保藏和使用等。實(shí)驗(yàn)室如果配備一臺(tái)凈化工作臺(tái)最好是生物安全柜。生物安全柜的用途專用于常規(guī)性微生物菌種的處理，如微生物的鑒別無(wú)菌操作中使用的滅菌器

以火焰為中心點(diǎn)可形成近10cm直徑的“無(wú)菌區(qū)”。酒精燈只可在單氣流的環(huán)境中使用

可在單向氣流或多向氣流的環(huán)境中使用

金屬用具、每次重復(fù)使用前的快速處理紅外線熱能滅菌器.doc電子火焰滅菌器.doc無(wú)菌操作中使用的滅菌器金屬用具、每次重復(fù)使用前的快速處理紅物品：確認(rèn)適宜培養(yǎng)基陽(yáng)性對(duì)照菌檢品其它酒精燈、三角燒瓶，接種環(huán)、無(wú)菌棉簽、鑷子，試管架，大試管若干等。物品：確認(rèn)適宜培養(yǎng)基陽(yáng)性對(duì)照菌法：文件和記錄操作規(guī)程無(wú)菌檢驗(yàn)規(guī)程（作業(yè)指導(dǎo)書）抽樣規(guī)程產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)超凈工作臺(tái)的維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程《中國(guó)藥典》（2005年版）GB14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第二部分：生物試驗(yàn)方法GB15980-1995一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)記錄表單《無(wú)菌檢驗(yàn)原始記錄》《菌種外購(gòu)、轉(zhuǎn)種記錄》《培養(yǎng)基制備記錄》《實(shí)驗(yàn)中廢棄的帶菌物品滅菌處理記錄》《實(shí)驗(yàn)用稀釋液、沖洗液、緩沖液制備記錄》《濃菌液制備使用記錄》《潔凈區(qū)域凈化系統(tǒng)運(yùn)行記錄》法：文件和記錄操作規(guī)程無(wú)菌檢驗(yàn)規(guī)程（作業(yè)指導(dǎo)書）抽樣規(guī)程產(chǎn)抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表1批出廠產(chǎn)品最少檢驗(yàn)數(shù)量供試品批產(chǎn)量N（個(gè)）每種培養(yǎng)基最少檢驗(yàn)數(shù)量注射劑大體積注冊(cè)劑(＞100ml)≤100100＜N≤500＞50010%或4個(gè)（取較多者）10個(gè)2%或20個(gè)（取較少者）2%或10個(gè)（取較少者）眼用及其他非注射產(chǎn)品≤200＞2005%或2個(gè)（取較多者）10個(gè)桶裝固體原料抗生素原料藥（≥5g）≤44＜N≤50＞500每個(gè)容器20%或4個(gè)容器（取較大者）2%或10個(gè)容器（取較大者）6個(gè)容器醫(yī)療器具≤100100＜N≤500＞50010%或4個(gè)（取較多者）10個(gè)2%或20個(gè)（取較少者）注：若每個(gè)容器中的裝量不足接種兩種培養(yǎng)基，那么表中的檢驗(yàn)數(shù)量加倍.抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表1批出廠產(chǎn)品最少抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表2上市抽驗(yàn)樣品（液體制劑）的最少檢驗(yàn)量供試品裝量V（ml）每支樣品接入每管培養(yǎng)基的最少樣品量最少檢驗(yàn)數(shù)量（瓶或支）≤1全量2011＜V＜5半量105≤V＜202ml1020≤V＜505ml1050≤V＜10010ml1050≤V＜100（靜脈給藥）半量10100≤V＜500半量6V≥500500ml61

每種培養(yǎng)基各接種10支供試品抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表2上市抽驗(yàn)樣品（液體制劑）的最抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表3上市抽驗(yàn)樣品（固體制劑）的最少檢驗(yàn)量供試品裝量M/支、瓶、個(gè)每支樣品接入每管培養(yǎng)基的最少樣品量最少檢驗(yàn)數(shù)量（瓶或支）M＜50mg50mg≤M＜300mg300mg≤M＜5gM≥5g外科用敷料棉花及紗布縫合線、一次性醫(yī)用材料帶導(dǎo)管的一次性醫(yī)療器械（如輸液袋）其他醫(yī)療器具全量半量150mg500mg取100mg或1cm×3cm整個(gè)材料③整個(gè)器具③（切碎或拆散）20①101010②1020①1020①每種培養(yǎng)基各接種10支供試品?？股胤坩槃ā?g）及抗生素原料（≥5g）的最少檢驗(yàn)數(shù)量為6瓶或（支），桶裝固體原料的最少檢驗(yàn)數(shù)量為4個(gè)包裝。如果醫(yī)用器械體積過大，培養(yǎng)基用量可在2000ml以上，將其完全浸沒。抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表3上市抽驗(yàn)樣品（固體無(wú)菌檢驗(yàn)原始記錄.doc應(yīng)記錄實(shí)現(xiàn)可追溯的基本信息：品名、規(guī)格、型號(hào)生產(chǎn)批號(hào)抽樣數(shù)量滅菌批號(hào)培養(yǎng)基的名稱培養(yǎng)基的配制批號(hào)培養(yǎng)基的接種數(shù)量培養(yǎng)溫度檢查方法檢查日期培養(yǎng)過程的觀察記錄陽(yáng)性對(duì)照菌的名稱設(shè)備編號(hào)檢查結(jié)果檢查人無(wú)菌檢驗(yàn)原始記錄.doc應(yīng)記錄實(shí)現(xiàn)可追溯的基本信息：培養(yǎng)溫度操作環(huán)境在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行.其全過程應(yīng)嚴(yán)格

遵守?zé)o菌操作,

防止微生物污染。注意鞋套與褲腳的連接操作環(huán)境在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向環(huán)境控制單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境（10000級(jí)）必須進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。驗(yàn)證依據(jù)：《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》日常：—對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控—維護(hù)過程中使用不脫落顆粒物的專業(yè)擦拭毛巾、地拖。—不同潔凈區(qū)，分別專用。超凈工作臺(tái)清潔標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.doc100級(jí)潔凈區(qū)的管理要求.doc

專業(yè)地拖環(huán)境控制單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境（10000級(jí)）必須進(jìn)行環(huán)境控制

在潔凈區(qū)內(nèi)，如條件許可，盡量使層流凈化工作臺(tái)始終處于運(yùn)行狀態(tài)。一旦停止運(yùn)行而重新啟動(dòng)后，要對(duì)工作區(qū)進(jìn)行徹底性消毒并且在使用前至少要預(yù)運(yùn)行5min。此外，在每次使用前和使用后，均應(yīng)對(duì)工作臺(tái)面采取清潔和消毒措施。常用的消毒劑：乙醇、碘伏、新潔爾滅。

注意有效性（抗菌譜、有效濃度、干擾因素）常用消毒劑.doc工作區(qū)表面滅菌：紫外線照射。（能被普通的紙、玻璃阻擋）環(huán)境控制

在潔凈二、常用培養(yǎng)基的制備

制備的方式有以下三種：自配培養(yǎng)基購(gòu)買半成品脫水培養(yǎng)購(gòu)買成品培養(yǎng)基目前最常見的方式二、常用培養(yǎng)基的制備

制備的方式有以下三種常用培養(yǎng)基的形態(tài)：二種固體（營(yíng)養(yǎng)瓊脂）斜面培養(yǎng)皿（平板）斜面：將培養(yǎng)基試管傾斜放置，凝固后即成。常用培養(yǎng)基的形態(tài)：二種固體（營(yíng)養(yǎng)瓊脂）斜面培養(yǎng)皿（平板）斜面培養(yǎng)基的種類依據(jù)用途劃分1、無(wú)菌檢查和測(cè)定菌數(shù)用培養(yǎng)基

2、增菌、運(yùn)送用培養(yǎng)基3、分離培養(yǎng)用培養(yǎng)基

4、鑒別用培養(yǎng)基

5、抗生素檢定用培養(yǎng)基6、其它類培養(yǎng)基（生芽孢瓊脂斜面培養(yǎng)基）培養(yǎng)基的種類依據(jù)用途劃分常用的無(wú)菌檢查脫水培養(yǎng)基編號(hào)

品

名

用

途A1硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)A2改良馬丁培養(yǎng)基真菌培養(yǎng)A3選擇性培養(yǎng)基（A1/A2+中和劑或表面活性劑）磺胺類、非水溶性供試品的無(wú)菌檢查A4營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基細(xì)菌總數(shù)測(cè)定及一般細(xì)菌培養(yǎng)A5營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基細(xì)菌總數(shù)測(cè)定及一般細(xì)菌培養(yǎng)A60.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基需氣菌無(wú)菌試驗(yàn)A7改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基生物制品真菌無(wú)菌試驗(yàn)A80.1%蛋白胨水溶液稀釋液、沖洗液A9氯化鈉-蛋白胨緩沖液（pH7.0）稀釋液、沖洗液常用的無(wú)菌檢查脫水培養(yǎng)基

A1硫乙醇常用培養(yǎng)基的配方A1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基酪腖（胰酶水解）15.0g氯化鈉2.5g葡萄糖5.0g新配制的0.1%刃天L-胱氨酸0.5g青溶液1.0ml硫乙醇酸鈉0.5g瓊脂0.75g（或硫乙醇酸）0.3ml水1000ml酵母浸出粉5.0gPH=7.1±0.2.30℃~35℃。常用培養(yǎng)基的配方酪腖（胰酶水解）15.0g氯化鈉2.5g葡萄硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)厭氧菌的原理：在液體中加入了0.05%~0.07%的瓊脂，增加了培養(yǎng)基的粘度，降低培養(yǎng)基中氧含量，使培養(yǎng)基在一定的時(shí)間內(nèi)保持厭氧的條件，利于厭氧菌的生長(zhǎng)。紅色氧化層：需氧菌生長(zhǎng)層硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)厭氧菌的原理：紅色氧化層：需氧菌生長(zhǎng)

常用培養(yǎng)基的配方

A2.改良馬丁培養(yǎng)基

腖5.0g磷酸氫二鉀1.0g酵母浸出粉5.0g硫酸鎂0.5g葡萄糖20.0g水1000mlPH=6.4±0.2.23℃~28℃。

常用培養(yǎng)基的配方

常用培養(yǎng)基的配方

A3.選擇性培養(yǎng)基

在上A1、A2二種培養(yǎng)基增加：中和劑：對(duì)氨基苯甲酸表面活性劑：聚山梨脂80、

β-內(nèi)酰胺酶A4.營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基腖10.0g氯化鈉5.0g牛肉浸出粉3.0g水1000ml

常用培養(yǎng)基的配方

A3.選擇性培養(yǎng)基A4.營(yíng)養(yǎng)肉常用培養(yǎng)基的配方A5.營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基肉湯1000ml瓊脂14.0gA7.改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁肉湯1000ml瓊脂14.0gA6、0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基蛋白胨10g氯化鈉5.0g葡萄糖5.0g水1000ml牛肉浸出粉3.0gPH=7.2±0.2常用培養(yǎng)基的配方A5.營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基肉湯1000ml瓊脂1其它脫水培養(yǎng)基編號(hào)

品

名

用

途A8胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基需氣菌和真菌無(wú)菌試驗(yàn)A9真菌培養(yǎng)基真菌無(wú)菌試驗(yàn)A10真菌瓊脂培養(yǎng)基真菌無(wú)菌試驗(yàn)A11支原體半流體基礎(chǔ)培養(yǎng)基（100g）生物制品支原體檢查A12血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基血瓊脂斜面和平板配制A13玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（虎紅瓊脂培養(yǎng)基）真菌總數(shù)測(cè)定A14酵母浸出粉葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YPD瓊脂培養(yǎng)基）酵母菌總數(shù)測(cè)定其它脫水培養(yǎng)基編號(hào)

品

名

培養(yǎng)基制備流程圖調(diào)PH值分裝包扎封口稱量滅菌加熱溶解培養(yǎng)基制備流程圖調(diào)PH值分裝包扎稱量滅菌加熱溶解培養(yǎng)基制備流程圖說(shuō)明：按以上培養(yǎng)基的配方稱取各組分后，充分溶解（必要時(shí)加熱），分裝試管（或其它適合的容器）后，包扎封口（應(yīng)可通氣）、高壓蒸汽滅菌。備用。

PH的調(diào)節(jié)方法：比色（膠體溶液）或生物型

普通PH計(jì)：適用離子溶液培養(yǎng)皿（俗稱平板）：需要在滅菌后無(wú)菌分裝；培養(yǎng)基制備流程圖說(shuō)明：培養(yǎng)皿制備：無(wú)菌分裝皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長(zhǎng)時(shí)間放置，應(yīng)倒置存放、培養(yǎng)，以避免菌落蔓延生長(zhǎng)。培養(yǎng)皿制備：無(wú)菌分裝皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長(zhǎng)時(shí)間放置，應(yīng)倒置存培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制滅菌：115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基的裝量：約為試管或容器高度的2/5。

制備中滅菌指示劑培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制滅菌：115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基的裝滅菌指示劑（生物型+化學(xué)型）

生物指示劑指示劑：培養(yǎng)后生物指示劑中的溴甲酚紫培養(yǎng)液由紫色澄清液體變?yōu)辄S色澄清液體即表示有菌生長(zhǎng)，判定為滅菌不合格；培養(yǎng)液仍為紫色澄清液體為無(wú)菌生長(zhǎng)，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照管中的嗜熱脂肪桿菌生長(zhǎng)正常即培養(yǎng)液由紫色澄清液體變?yōu)辄S色澄清液體，判定為滅菌合格。嗜熱芽孢壓力蒸汽滅菌生物指示劑.doc化學(xué)指示卡：由特殊卡紙、標(biāo)準(zhǔn)色塊和指示色塊組成壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡。指示色塊由淡黃色變?yōu)榛液谏蚝谏粗甘緶缇幚磉_(dá)到合格要求。滅菌化學(xué)指示卡和膠帶.doc滅菌指示膠帶：

是一種過程指示器材（是否經(jīng)過壓力蒸氣滅菌的標(biāo)識(shí)）。在溫度達(dá)到115℃以上時(shí)，條紋狀油墨發(fā)生化學(xué)變化并伴隨顏色變化。滅菌指示劑（生物型+化學(xué)型）

生物指示劑指示劑：培養(yǎng)后生物指

培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制

每批抽樣：不少于5支。細(xì)菌培養(yǎng)基經(jīng)30～35℃培養(yǎng)14天,應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。真菌培養(yǎng)基經(jīng)23～28℃培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。觀察滅菌指示劑（呈陰性色）通過培養(yǎng)基靈敏度檢查法。

滅菌后

培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制

每批抽樣：不少于5支。

培養(yǎng)基靈敏度檢查法

——目的：證明配置的培養(yǎng)基是適合相應(yīng)的微生物生長(zhǎng)。證明檢查結(jié)果的準(zhǔn)確、有效?？梢耘c無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。

菌株(1)藤黃微球菌(Micrococcus

Luteus)[CMCC(B)2800(2)生孢梭菌(Clostridium

sporogenes)[CMCC(B)64941]

(3)白色念珠菌(Candida

albicans)[CMCC(F)98001]等6株接種量

1ML(10~100個(gè)菌/ML)上述菌液接種于各培養(yǎng)基

各3支，每支培養(yǎng)基裝量9ml或12ml。判定以每株菌接種后的培養(yǎng)基不得少于2管呈現(xiàn)生長(zhǎng)，即該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合要求。

培養(yǎng)基靈敏度檢查法

——目的：證明配置的培養(yǎng)基是適合相應(yīng)試驗(yàn)用菌株的說(shuō)明*非靈敏度檢查用菌。注意：培養(yǎng)時(shí)間要求不同試驗(yàn)用菌株的說(shuō)明*非靈敏度檢查用菌。注意：培養(yǎng)時(shí)間要求不同

菌株的來(lái)源：

菌株的來(lái)源：

菌株的來(lái)源：菌株的來(lái)源：菌種的質(zhì)量控制保藏原理

適當(dāng)?shù)姆绞奖４?。菌種的質(zhì)量控制保藏原理適當(dāng)?shù)姆绞奖４?。菌株的質(zhì)量控制傳代不能超過5代。菌種傳代.doc甘油冷凍管G2斜面：菌種作為工作用菌種G3/W3G0G1G2甘油冷凍管G4純度、理化簽定后挑取純菌落甘油冷凍管G3斜面：菌種作為工作用菌種G4/W4G4G3G5斜面：菌種作為工作用菌種G5/W5甘油冷凍管G5菌株的質(zhì)量控制傳代不能超過5代。菌種傳代.doc甘油冷凍管G

提示：——培養(yǎng)基的靈敏度檢查法是一項(xiàng)對(duì)微生物專業(yè)要求較高的操作技術(shù)。目前多數(shù)企業(yè)都不具備作該試驗(yàn)的技術(shù)人員，目前比較普通做法是購(gòu)買有資質(zhì)的脫水培養(yǎng)基（如中檢所），同時(shí)要求制造商提供有關(guān)報(bào)告。自己不做該檢查?！绻囵B(yǎng)基在有效期內(nèi)沒有用完，在繼續(xù)使用前應(yīng)再次驗(yàn)證其培養(yǎng)靈敏度。培養(yǎng)基靈敏度檢查法.doc

提示：——培養(yǎng)基的靈敏度檢查法是一項(xiàng)對(duì)微生物專業(yè)要求較高的培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制

2~25℃、避光。有效期：非密閉3周，密閉1年。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基使用培養(yǎng)前，培養(yǎng)基的氧化層（粉色層）不超過液面高度1/5。否則,須經(jīng)水浴煮沸加熱（不超過20分鐘）,

迅速冷卻，只限加熱一次。培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基的氧化層（粉色層），不超過液面高度的1/2。保存使用后培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制2~25℃、避光。保存使用后

成品培養(yǎng)基

規(guī)?；a(chǎn)細(xì)菌培養(yǎng)基節(jié)省時(shí)間和制備成本沒有灰塵、粉塵對(duì)環(huán)境的影響良好的批量一致性和可追溯性保存：2~25℃、避光。有效期：非密閉3周，密閉1年。液體培養(yǎng)基優(yōu)勢(shì)

成品培養(yǎng)基

規(guī)模化生產(chǎn)細(xì)菌培養(yǎng)基保存三、常見樣本的處理無(wú)菌檢查法薄膜過濾法適用于液體制劑和可溶性固體制劑及有抗菌作用的供試品；原理：供試液通過濾膜，將菌集留在膜上，將濾膜放置在有營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì)中，經(jīng)培養(yǎng)，微生物增長(zhǎng)，形成菌落。直接接種法適用于非抗菌作用的供試品；固體供試品；三、常見樣本的處理無(wú)菌檢查法薄膜過濾法適用于液體制劑和可溶性三、常見樣本的處理方法驗(yàn)證試驗(yàn)?zāi)康模鹤C明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查（測(cè)定供試品是否具有抑細(xì)菌和抑真菌作用）。試驗(yàn)的時(shí)機(jī)：1）建立產(chǎn)品的無(wú)菌檢查方法時(shí)。

2）產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。驗(yàn)證范圍：

對(duì)每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。方法：

檢品+靈敏度檢測(cè)試驗(yàn)菌+培養(yǎng)基=》試驗(yàn)菌生長(zhǎng)良好。無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證試驗(yàn).docx三、常見樣本的處理方法驗(yàn)證試驗(yàn)無(wú)菌檢查和驗(yàn)證示例產(chǎn)品：納米銀離子敷料，規(guī)格6cm×7cm，包裝規(guī)格：1片/袋驗(yàn)證試驗(yàn)：培養(yǎng)基15ml/支，剪取1片樣品（1cm×3cm），直接接種硫乙醇培養(yǎng)基4支、改良馬丁2支，再加入6株陽(yáng)性菌。表：樣品對(duì)6株陽(yáng)性菌的試驗(yàn)結(jié)果無(wú)菌檢查和驗(yàn)證示例產(chǎn)品：納米銀離子敷料，規(guī)格6cm×7cm，結(jié)果分析：該檢驗(yàn)量對(duì)26003（金黃色葡萄球菌）有抑制作用。

解決方法：增加培養(yǎng)基用量。

表：樣品對(duì)26003的再次驗(yàn)證再驗(yàn)證結(jié)果分析：

納米銀離子敷料，該檢測(cè)量在該條件下無(wú)抑菌作用或者其抑菌作用可以忽略不計(jì)。驗(yàn)證結(jié)論：

納米銀離子敷料的無(wú)菌檢查方法是取樣品10袋、培養(yǎng)基40ml/支，每支培養(yǎng)基接種量1cm×3cm，培養(yǎng)14天。數(shù)量依據(jù)表3確定結(jié)果分析：該檢驗(yàn)量對(duì)26003（金黃色葡萄球菌）有抑制作用。三、常見樣本的處理

1、液體樣品：薄膜過濾法藥典推薦使用全封閉的系統(tǒng)進(jìn)行檢查。目前已商品化的產(chǎn)品：

集菌儀

實(shí)物展示、培養(yǎng)器（濾筒）結(jié)構(gòu)說(shuō)明

濾膜孔徑：0.45μm濾膜直徑：50mm

三、常見樣本的處理

1、液體樣品：薄膜過濾法集菌儀工作原理圖示集菌儀工作原理圖示三、常見樣本的處理兩種培養(yǎng)基的接種支/瓶數(shù)之比為2：1無(wú)菌檢查的陽(yáng)性陰性對(duì)照設(shè)置.docx改良馬丁培養(yǎng)基1支（100ml/支）硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基2支（100ml/支）薄膜過濾法的接種數(shù)量其中1支在培養(yǎng)14天后，加入陽(yáng)性對(duì)照菌陰性對(duì)照：使用相應(yīng)的溶劑、稀釋液和沖洗液同法操作。三、常見樣本的處理兩種培養(yǎng)基的接種支/瓶數(shù)之比為2：1改良馬其它細(xì)菌過濾器接真空泵增加過濾速度其它細(xì)菌過濾器接真空泵增加過濾速度微生物過濾膜常用孔徑：除菌--0.22μm集菌--0.45μm不同溶液可選擇不同的截流效果膜微生物過濾膜常用孔徑：除菌--0.22μm不同溶液可選擇不同陽(yáng)性對(duì)照菌的使用供試產(chǎn)品對(duì)照陽(yáng)性菌編號(hào)無(wú)抑菌作用及抗革蘭氏陽(yáng)性菌為主的供試品，金黃色葡萄球菌26003抗革蘭氏陰性菌為主的供試品大腸埃希氏菌44102抗厭氧菌的供試品生孢梭菌64941抗真菌的供試品白色念球菌98001*使用的菌液濃度 <100cfu/ml。陽(yáng)性對(duì)照菌的使用供試產(chǎn)品對(duì)照陽(yáng)性菌編號(hào)無(wú)抑菌作用及抗革蘭氏陽(yáng)對(duì)照菌液的制備

——同培養(yǎng)基靈敏度檢查的菌液制備標(biāo)準(zhǔn)菌株G3/W3對(duì)照菌液的制備

——同培養(yǎng)基靈敏度檢查的菌液制備標(biāo)準(zhǔn)菌株G3對(duì)照菌液的制備

使用的菌液濃度：10~100cfu/ml對(duì)照菌液的制備

菌落計(jì)數(shù)2）、在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿上計(jì)算菌落數(shù)。每個(gè)菌堆積點(diǎn)算一個(gè)菌。1）、菌液稀釋后可直接與細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)濃度比濁管比較。菌落計(jì)數(shù)2）、在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿上計(jì)算菌落數(shù)。每個(gè)菌堆積點(diǎn)算一三、常見樣本的處理2、固體樣品：

直接接種法三、常見樣本的處理2、固體樣品：直接接種法固體樣品檢查應(yīng)注意的事項(xiàng)樣品的要求完整：最小包裝完好、沒有任何污染、破損。有效：名稱、地址、批號(hào)、規(guī)格型號(hào)。

*樣品檢驗(yàn)前的處理：信息、脫去外包裝、標(biāo)記編號(hào)。用適宜的消毒液對(duì)其外表面進(jìn)行消毒、紫外線照射。*培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基接種支/瓶數(shù)之比為2：1。供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的

10%。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于

15ml。改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。培養(yǎng)基的用量和高度同方法驗(yàn)證試驗(yàn)。固體樣品檢查應(yīng)注意的事項(xiàng)樣品的要求*樣品檢驗(yàn)前的處理：三、常見樣本的處理3、表面有活性劑、中和劑或滅活劑、抗菌作用的供試品:薄膜過濾法

檢查前應(yīng)證明檢查方法的有效性及對(duì)微生物的生長(zhǎng)無(wú)影響。抑細(xì)菌和抑真菌試驗(yàn).docx

供試品具有抑菌作用或含防腐劑時(shí)，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次。每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，總沖洗量不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。所用的沖洗量、沖洗方法同方法驗(yàn)證試驗(yàn)4、其它產(chǎn)品復(fù)溶、清洗：將復(fù)溶液、清洗液按薄膜過濾法進(jìn)行。三、常見樣本的處理3、表面有活性劑、中和劑或滅活劑、抗菌作用2005版藥典明確檢驗(yàn)方法的IVDD產(chǎn)品薄膜過濾法直接接種法具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具：輸血、輸液袋*每個(gè)最小包裝用50~100ml沖洗液內(nèi)壁后過濾配帶的針頭敷料*不同部位剪取約1cm×3cm腸線、縫合線等*用最小包裝接種滅菌醫(yī)用器具等拆散或切成小碎段2005版藥典明確檢驗(yàn)方法的IVDD產(chǎn)品薄膜過濾法直接接種法培養(yǎng)及觀察逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)23℃~28℃：改良馬丁培養(yǎng)基1份30℃~35℃：硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基2份、培養(yǎng)14天后培養(yǎng)及觀察逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)23℃~28℃：30四、結(jié)果判定判定方法逐日觀看任何一管培養(yǎng)基是否保持透明（陰性）、或出現(xiàn)渾濁、絮狀物（陽(yáng)性）。對(duì)照菌液的生長(zhǎng)（細(xì)菌在24小時(shí)內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，真菌應(yīng)在培養(yǎng)24～72小時(shí)有菌生長(zhǎng)。）四、結(jié)果判定判定方法培養(yǎng)及觀察培養(yǎng)

14天后，不能從外觀上判斷有無(wú)菌生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中及營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面和改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)

2天、真菌培養(yǎng)

3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基及營(yíng)養(yǎng)瓊脂和改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上是否有菌生長(zhǎng)；或取培養(yǎng)液（物）涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌，必要時(shí)作菌種鑒定。培養(yǎng)及觀察培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無(wú)細(xì)菌轉(zhuǎn)種的器具、分離細(xì)菌轉(zhuǎn)種的器具、分離結(jié)果判定當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效：⑴無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求。⑵回顧無(wú)菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。⑶

陰性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)。(4)供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。

結(jié)果判定當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效：五、無(wú)菌檢查操作流程取樣、物品、環(huán)境準(zhǔn)備清潔產(chǎn)品外包裝轉(zhuǎn)入工作區(qū)無(wú)菌操作樣品接種（直接接種或薄膜過濾法）培養(yǎng)觀察判定五、無(wú)菌檢查操作流程取樣、物品、環(huán)境準(zhǔn)備清潔產(chǎn)品外包裝轉(zhuǎn)入工無(wú)菌操作流程一盞酒精燈，以火焰為中心點(diǎn)可形成近10cm直徑的“無(wú)菌區(qū)”。無(wú)菌操作流程一盞酒精燈，以火焰為中心點(diǎn)可形成近10cm直徑的六、其它說(shuō)明微生物學(xué)檢驗(yàn)無(wú)菌檢查微生物限度檢驗(yàn)細(xì)菌、真菌數(shù)量控制菌其它六、其它說(shuō)明微生物學(xué)檢驗(yàn)無(wú)菌檢查微生物限度檢驗(yàn)細(xì)菌、真菌數(shù)

六、其它說(shuō)明

檢樣過程中應(yīng)在工作臺(tái)上打開一塊空白平板計(jì)數(shù)瓊脂，其暴露時(shí)間應(yīng)與檢樣時(shí)間相當(dāng)，以了解檢樣在檢驗(yàn)操作過程中有無(wú)受到來(lái)自空氣的污染。(要求：每平皿<1CFU)無(wú)菌檢查的培養(yǎng)時(shí)間：7天？《藥典》2000版2005版藥典是14天。產(chǎn)品檢測(cè)工作區(qū)與陽(yáng)性對(duì)照菌接種區(qū)是否應(yīng)分開？（2005版藥典未明確？各檢測(cè)中心是分設(shè)的）

六、其它說(shuō)明

檢樣過程中應(yīng)在工作臺(tái)上打開一塊空白平板計(jì)數(shù)瓊

（2010版藥典？2010.7.1生效）

表1:出廠制品不同規(guī)格及原液和半成品最少抽驗(yàn)數(shù)量

供試品批產(chǎn)量(N)；裝量（V）最少抽驗(yàn)數(shù)量注射劑N≤1005個(gè)100＜N≤50010個(gè)N＞50020個(gè)凍干血液制品V＞5ml每柜凍干N≤200個(gè)5個(gè)每柜凍干N＞200個(gè)10個(gè)V≤5mlN≤1005個(gè)100＜N≤50010個(gè)N＞50020個(gè)原液或半成品每個(gè)容器取樣，取樣量為每個(gè)容器制品總量的0.1%或不少于10ml。每開瓶一次，應(yīng)如上法抽驗(yàn)。體外用診斷制品半成品每批抽驗(yàn)量應(yīng)不少于3ml。

（2010版藥典？2010.7.1生效）

表1:（2010版藥典？）

表2：上市制品監(jiān)督抽驗(yàn)數(shù)量

品種及裝量（V）最少抽驗(yàn)數(shù)量血液制品

V＜50ml6個(gè)V≥50ml2個(gè)其他生物制品10個(gè)（2010版藥典？）

表2：上市制品監(jiān)督抽驗(yàn)數(shù)量

品種及裝量（2010版

藥典？）

表3:不同規(guī)格制品的最少接種量

規(guī)格每支（瓶）供試品的最少接種量液體制劑（ml）≤1全量1＜V≤5半量5＜V＜202ml20≤V＜5010mlV≥50半量原液或半成品半量固體制劑＜50mg全量50mg≤M＜300mg半量300mg≤M＜150mgM≥半量（2010版藥典？）

表3:不同規(guī)格制品的最少接種量2010版藥典的變化：培養(yǎng)基的滅菌檢查數(shù)量：=》不少于10支。培養(yǎng)基的滅菌條件：115℃滅菌30分鐘=》驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。直接接種的數(shù)量：？未明確2010版藥典的變化：七、審核提示文件：1）是否編制了作業(yè)文件和相適應(yīng)的記錄？有否包括檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證？2）檢驗(yàn)范圍是否包括了需-厭氧細(xì)菌和霉菌、真菌（有的企業(yè)自己做無(wú)菌檢查，但不知道要檢查二類菌）3）使用的培養(yǎng)基是否適合、是否有靈敏度檢查記錄或報(bào)告？（有的企業(yè)使用的即不是硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、也不是馬丁培養(yǎng)基）記錄1）是否能夠反映IVDD要求追溯的內(nèi)容：品名、部件名稱、批號(hào)、滅菌批號(hào)、培養(yǎng)條件（培養(yǎng)基名稱、培養(yǎng)溫度、接種方式、接種數(shù)量等）、培養(yǎng)過程的逐日記錄。2）培養(yǎng)基配制記錄、陽(yáng)性菌的使用記錄？

（企業(yè)的記錄常常不全、菌株沒有傳代記錄、不用陽(yáng)性菌)3）實(shí)際應(yīng)用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。設(shè)備、設(shè)施1）培養(yǎng)箱的數(shù)量（2臺(tái)）、能否將溫度控制在23-28℃？2）集菌儀？（并非所有生產(chǎn)無(wú)菌產(chǎn)品的企業(yè)均適用）pH計(jì)？3）無(wú)菌檢查環(huán)境和工作區(qū)是否符合要求？醫(yī)療器械產(chǎn)品無(wú)菌檢驗(yàn)操作規(guī)程.doc無(wú)菌檢驗(yàn)原始記錄.doc七、審核提示文件：謝謝！產(chǎn)品無(wú)菌檢測(cè)實(shí)操介紹提綱課件

無(wú)菌檢查實(shí)操簡(jiǎn)介

（——《藥典》（2005版）無(wú)菌檢查的操作簡(jiǎn)介）

一、無(wú)菌檢查的基本條件二、常用培養(yǎng)基的制備三、常見樣本的處理四、結(jié)果判定五、無(wú)菌操作流程六、其它說(shuō)明七、審核提示

無(wú)菌檢查實(shí)操簡(jiǎn)介

（——《藥典》（20一、無(wú)菌檢查的基本條件

人機(jī)料法環(huán)一、無(wú)菌檢查的基本條件

人機(jī)料法環(huán)

人：經(jīng)過培訓(xùn)、授權(quán)

建立無(wú)菌概念、微生物專業(yè)知識(shí)，并經(jīng)過無(wú)菌技術(shù)培訓(xùn)。熟知對(duì)相關(guān)產(chǎn)品的無(wú)菌檢查要求和相關(guān)作業(yè)指導(dǎo)書熟練填寫建立的記錄表單.誰(shuí)能授權(quán)？人：經(jīng)過培訓(xùn)、授權(quán)誰(shuí)能授權(quán)？機(jī)：主要設(shè)備水浴箱高壓蒸汽滅菌器天平培養(yǎng)箱100級(jí)潔凈工作區(qū)機(jī)：主要設(shè)備水浴箱高壓蒸汽滅菌器天平培養(yǎng)箱100級(jí)潔凈工作區(qū)

恒溫水浴箱

保持營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基處于液體狀態(tài)（約45℃），需要大量制作培養(yǎng)皿時(shí)使用。室溫時(shí)熱溶時(shí)營(yíng)養(yǎng)瓊脂

恒溫水浴箱

保持營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基處于液體狀態(tài)（約45℃），

培養(yǎng)箱

（生物培養(yǎng)箱）

普通：僅有升溫控制。后者：設(shè)計(jì)有升溫和降溫的雙向控制裝置。二臺(tái)溫度(23~28℃、30~35℃)南方高溫天氣（35度）時(shí)霉菌培養(yǎng)的控制？箱內(nèi)的溫度均衡性？

超凈工作臺(tái)生物安全柜

作用：提供100級(jí)單向流空氣區(qū)。作用效果：防止被操作物（檢品）被污染。作用：提供隔離系統(tǒng)（多氣流方向）。作用：防止檢品、操作人、環(huán)境被污染。超凈工作臺(tái)生物安全柜作用：提供1超凈工作臺(tái)整體設(shè)計(jì)普通層流超凈工作臺(tái)內(nèi)的氣流最終直接對(duì)著操作者而排向周圍環(huán)境。因此，此類凈化工作臺(tái)不得用于處理感染性物品、有毒物品或敏感物品等。它們只適用一般性的無(wú)菌操作活動(dòng)，如無(wú)菌物品的裝配、常規(guī)物品的微生物檢查、培養(yǎng)基的制備等。超凈工作臺(tái)整體設(shè)計(jì)普通層流超凈工作臺(tái)內(nèi)的氣流最終直接對(duì)著操作生物安全柜的整體設(shè)計(jì)生物安全柜的整體設(shè)計(jì)生物安全柜的用途專用于常規(guī)性微生物菌種的處理，如微生物的鑒別、生物指示劑的制備與培養(yǎng)、陽(yáng)性對(duì)照或培養(yǎng)基靈敏度檢查用標(biāo)準(zhǔn)菌株的制備、保藏和使用等。實(shí)驗(yàn)室如果配備一臺(tái)凈化工作臺(tái)最好是生物安全柜。生物安全柜的用途專用于常規(guī)性微生物菌種的處理，如微生物的鑒別無(wú)菌操作中使用的滅菌器

以火焰為中心點(diǎn)可形成近10cm直徑的“無(wú)菌區(qū)”。酒精燈只可在單氣流的環(huán)境中使用

可在單向氣流或多向氣流的環(huán)境中使用

金屬用具、每次重復(fù)使用前的快速處理紅外線熱能滅菌器.doc電子火焰滅菌器.doc無(wú)菌操作中使用的滅菌器金屬用具、每次重復(fù)使用前的快速處理紅物品：確認(rèn)適宜培養(yǎng)基陽(yáng)性對(duì)照菌檢品其它酒精燈、三角燒瓶，接種環(huán)、無(wú)菌棉簽、鑷子，試管架，大試管若干等。物品：確認(rèn)適宜培養(yǎng)基陽(yáng)性對(duì)照菌法：文件和記錄操作規(guī)程無(wú)菌檢驗(yàn)規(guī)程（作業(yè)指導(dǎo)書）抽樣規(guī)程產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)超凈工作臺(tái)的維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程《中國(guó)藥典》（2005年版）GB14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第二部分：生物試驗(yàn)方法GB15980-1995一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)記錄表單《無(wú)菌檢驗(yàn)原始記錄》《菌種外購(gòu)、轉(zhuǎn)種記錄》《培養(yǎng)基制備記錄》《實(shí)驗(yàn)中廢棄的帶菌物品滅菌處理記錄》《實(shí)驗(yàn)用稀釋液、沖洗液、緩沖液制備記錄》《濃菌液制備使用記錄》《潔凈區(qū)域凈化系統(tǒng)運(yùn)行記錄》法：文件和記錄操作規(guī)程無(wú)菌檢驗(yàn)規(guī)程（作業(yè)指導(dǎo)書）抽樣規(guī)程產(chǎn)抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表1批出廠產(chǎn)品最少檢驗(yàn)數(shù)量供試品批產(chǎn)量N（個(gè)）每種培養(yǎng)基最少檢驗(yàn)數(shù)量注射劑大體積注冊(cè)劑(＞100ml)≤100100＜N≤500＞50010%或4個(gè)（取較多者）10個(gè)2%或20個(gè)（取較少者）2%或10個(gè)（取較少者）眼用及其他非注射產(chǎn)品≤200＞2005%或2個(gè)（取較多者）10個(gè)桶裝固體原料抗生素原料藥（≥5g）≤44＜N≤50＞500每個(gè)容器20%或4個(gè)容器（取較大者）2%或10個(gè)容器（取較大者）6個(gè)容器醫(yī)療器具≤100100＜N≤500＞50010%或4個(gè)（取較多者）10個(gè)2%或20個(gè)（取較少者）注：若每個(gè)容器中的裝量不足接種兩種培養(yǎng)基，那么表中的檢驗(yàn)數(shù)量加倍.抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表1批出廠產(chǎn)品最少抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表2上市抽驗(yàn)樣品（液體制劑）的最少檢驗(yàn)量供試品裝量V（ml）每支樣品接入每管培養(yǎng)基的最少樣品量最少檢驗(yàn)數(shù)量（瓶或支）≤1全量2011＜V＜5半量105≤V＜202ml1020≤V＜505ml1050≤V＜10010ml1050≤V＜100（靜脈給藥）半量10100≤V＜500半量6V≥500500ml61

每種培養(yǎng)基各接種10支供試品抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表2上市抽驗(yàn)樣品（液體制劑）的最抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表3上市抽驗(yàn)樣品（固體制劑）的最少檢驗(yàn)量供試品裝量M/支、瓶、個(gè)每支樣品接入每管培養(yǎng)基的最少樣品量最少檢驗(yàn)數(shù)量（瓶或支）M＜50mg50mg≤M＜300mg300mg≤M＜5gM≥5g外科用敷料棉花及紗布縫合線、一次性醫(yī)用材料帶導(dǎo)管的一次性醫(yī)療器械（如輸液袋）其他醫(yī)療器具全量半量150mg500mg取100mg或1cm×3cm整個(gè)材料③整個(gè)器具③（切碎或拆散）20①101010②1020①1020①每種培養(yǎng)基各接種10支供試品。抗生素粉針劑（≥5g）及抗生素原料（≥5g）的最少檢驗(yàn)數(shù)量為6瓶或（支），桶裝固體原料的最少檢驗(yàn)數(shù)量為4個(gè)包裝。如果醫(yī)用器械體積過大，培養(yǎng)基用量可在2000ml以上，將其完全浸沒。抽樣的規(guī)定（藥典2005版）表3上市抽驗(yàn)樣品（固體無(wú)菌檢驗(yàn)原始記錄.doc應(yīng)記錄實(shí)現(xiàn)可追溯的基本信息：品名、規(guī)格、型號(hào)生產(chǎn)批號(hào)抽樣數(shù)量滅菌批號(hào)培養(yǎng)基的名稱培養(yǎng)基的配制批號(hào)培養(yǎng)基的接種數(shù)量培養(yǎng)溫度檢查方法檢查日期培養(yǎng)過程的觀察記錄陽(yáng)性對(duì)照菌的名稱設(shè)備編號(hào)檢查結(jié)果檢查人無(wú)菌檢驗(yàn)原始記錄.doc應(yīng)記錄實(shí)現(xiàn)可追溯的基本信息：培養(yǎng)溫度操作環(huán)境在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行.其全過程應(yīng)嚴(yán)格

遵守?zé)o菌操作,

防止微生物污染。注意鞋套與褲腳的連接操作環(huán)境在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向環(huán)境控制單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境（10000級(jí)）必須進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。驗(yàn)證依據(jù)：《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》日常：—對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控—維護(hù)過程中使用不脫落顆粒物的專業(yè)擦拭毛巾、地拖?！煌瑵崈魠^(qū)，分別專用。超凈工作臺(tái)清潔標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.doc100級(jí)潔凈區(qū)的管理要求.doc

專業(yè)地拖環(huán)境控制單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境（10000級(jí)）必須進(jìn)行環(huán)境控制

在潔凈區(qū)內(nèi)，如條件許可，盡量使層流凈化工作臺(tái)始終處于運(yùn)行狀態(tài)。一旦停止運(yùn)行而重新啟動(dòng)后，要對(duì)工作區(qū)進(jìn)行徹底性消毒并且在使用前至少要預(yù)運(yùn)行5min。此外，在每次使用前和使用后，均應(yīng)對(duì)工作臺(tái)面采取清潔和消毒措施。常用的消毒劑：乙醇、碘伏、新潔爾滅。

注意有效性（抗菌譜、有效濃度、干擾因素）常用消毒劑.doc工作區(qū)表面滅菌：紫外線照射。（能被普通的紙、玻璃阻擋）環(huán)境控制

在潔凈二、常用培養(yǎng)基的制備

制備的方式有以下三種：自配培養(yǎng)基購(gòu)買半成品脫水培養(yǎng)購(gòu)買成品培養(yǎng)基目前最常見的方式二、常用培養(yǎng)基的制備

制備的方式有以下三種常用培養(yǎng)基的形態(tài)：二種固體（營(yíng)養(yǎng)瓊脂）斜面培養(yǎng)皿（平板）斜面：將培養(yǎng)基試管傾斜放置，凝固后即成。常用培養(yǎng)基的形態(tài)：二種固體（營(yíng)養(yǎng)瓊脂）斜面培養(yǎng)皿（平板）斜面培養(yǎng)基的種類依據(jù)用途劃分1、無(wú)菌檢查和測(cè)定菌數(shù)用培養(yǎng)基

2、增菌、運(yùn)送用培養(yǎng)基3、分離培養(yǎng)用培養(yǎng)基

4、鑒別用培養(yǎng)基

5、抗生素檢定用培養(yǎng)基6、其它類培養(yǎng)基（生芽孢瓊脂斜面培養(yǎng)基）培養(yǎng)基的種類依據(jù)用途劃分常用的無(wú)菌檢查脫水培養(yǎng)基編號(hào)

品

名

用

途A1硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)A2改良馬丁培養(yǎng)基真菌培養(yǎng)A3選擇性培養(yǎng)基（A1/A2+中和劑或表面活性劑）磺胺類、非水溶性供試品的無(wú)菌檢查A4營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基細(xì)菌總數(shù)測(cè)定及一般細(xì)菌培養(yǎng)A5營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基細(xì)菌總數(shù)測(cè)定及一般細(xì)菌培養(yǎng)A60.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基需氣菌無(wú)菌試驗(yàn)A7改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基生物制品真菌無(wú)菌試驗(yàn)A80.1%蛋白胨水溶液稀釋液、沖洗液A9氯化鈉-蛋白胨緩沖液（pH7.0）稀釋液、沖洗液常用的無(wú)菌檢查脫水培養(yǎng)基

A1硫乙醇常用培養(yǎng)基的配方A1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基酪腖（胰酶水解）15.0g氯化鈉2.5g葡萄糖5.0g新配制的0.1%刃天L-胱氨酸0.5g青溶液1.0ml硫乙醇酸鈉0.5g瓊脂0.75g（或硫乙醇酸）0.3ml水1000ml酵母浸出粉5.0gPH=7.1±0.2.30℃~35℃。常用培養(yǎng)基的配方酪腖（胰酶水解）15.0g氯化鈉2.5g葡萄硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)厭氧菌的原理：在液體中加入了0.05%~0.07%的瓊脂，增加了培養(yǎng)基的粘度，降低培養(yǎng)基中氧含量，使培養(yǎng)基在一定的時(shí)間內(nèi)保持厭氧的條件，利于厭氧菌的生長(zhǎng)。紅色氧化層：需氧菌生長(zhǎng)層硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)厭氧菌的原理：紅色氧化層：需氧菌生長(zhǎng)

常用培養(yǎng)基的配方

A2.改良馬丁培養(yǎng)基

腖5.0g磷酸氫二鉀1.0g酵母浸出粉5.0g硫酸鎂0.5g葡萄糖20.0g水1000mlPH=6.4±0.2.23℃~28℃。

常用培養(yǎng)基的配方

常用培養(yǎng)基的配方

A3.選擇性培養(yǎng)基

在上A1、A2二種培養(yǎng)基增加：中和劑：對(duì)氨基苯甲酸表面活性劑：聚山梨脂80、

β-內(nèi)酰胺酶A4.營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基腖10.0g氯化鈉5.0g牛肉浸出粉3.0g水1000ml

常用培養(yǎng)基的配方

A3.選擇性培養(yǎng)基A4.營(yíng)養(yǎng)肉常用培養(yǎng)基的配方A5.營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基肉湯1000ml瓊脂14.0gA7.改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁肉湯1000ml瓊脂14.0gA6、0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基蛋白胨10g氯化鈉5.0g葡萄糖5.0g水1000ml牛肉浸出粉3.0gPH=7.2±0.2常用培養(yǎng)基的配方A5.營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基肉湯1000ml瓊脂1其它脫水培養(yǎng)基編號(hào)

品

名

用

途A8胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基需氣菌和真菌無(wú)菌試驗(yàn)A9真菌培養(yǎng)基真菌無(wú)菌試驗(yàn)A10真菌瓊脂培養(yǎng)基真菌無(wú)菌試驗(yàn)A11支原體半流體基礎(chǔ)培養(yǎng)基（100g）生物制品支原體檢查A12血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基血瓊脂斜面和平板配制A13玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（虎紅瓊脂培養(yǎng)基）真菌總數(shù)測(cè)定A14酵母浸出粉葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YPD瓊脂培養(yǎng)基）酵母菌總數(shù)測(cè)定其它脫水培養(yǎng)基編號(hào)

品

名

培養(yǎng)基制備流程圖調(diào)PH值分裝包扎封口稱量滅菌加熱溶解培養(yǎng)基制備流程圖調(diào)PH值分裝包扎稱量滅菌加熱溶解培養(yǎng)基制備流程圖說(shuō)明：按以上培養(yǎng)基的配方稱取各組分后，充分溶解（必要時(shí)加熱），分裝試管（或其它適合的容器）后，包扎封口（應(yīng)可通氣）、高壓蒸汽滅菌。備用。

PH的調(diào)節(jié)方法：比色（膠體溶液）或生物型

普通PH計(jì)：適用離子溶液培養(yǎng)皿（俗稱平板）：需要在滅菌后無(wú)菌分裝；培養(yǎng)基制備流程圖說(shuō)明：培養(yǎng)皿制備：無(wú)菌分裝皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長(zhǎng)時(shí)間放置，應(yīng)倒置存放、培養(yǎng)，以避免菌落蔓延生長(zhǎng)。培養(yǎng)皿制備：無(wú)菌分裝皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長(zhǎng)時(shí)間放置，應(yīng)倒置存培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制滅菌：115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基的裝量：約為試管或容器高度的2/5。

制備中滅菌指示劑培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制滅菌：115℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)基的裝滅菌指示劑（生物型+化學(xué)型）

生物指示劑指示劑：培養(yǎng)后生物指示劑中的溴甲酚紫培養(yǎng)液由紫色澄清液體變?yōu)辄S色澄清液體即表示有菌生長(zhǎng)，判定為滅菌不合格；培養(yǎng)液仍為紫色澄清液體為無(wú)菌生長(zhǎng)，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照管中的嗜熱脂肪桿菌生長(zhǎng)正常即培養(yǎng)液由紫色澄清液體變?yōu)辄S色澄清液體，判定為滅菌合格。嗜熱芽孢壓力蒸汽滅菌生物指示劑.doc化學(xué)指示卡：由特殊卡紙、標(biāo)準(zhǔn)色塊和指示色塊組成壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡。指示色塊由淡黃色變?yōu)榛液谏蚝谏?，即指示滅菌處理達(dá)到合格要求。滅菌化學(xué)指示卡和膠帶.doc滅菌指示膠帶：

是一種過程指示器材（是否經(jīng)過壓力蒸氣滅菌的標(biāo)識(shí)）。在溫度達(dá)到115℃以上時(shí)，條紋狀油墨發(fā)生化學(xué)變化并伴隨顏色變化。滅菌指示劑（生物型+化學(xué)型）

生物指示劑指示劑：培養(yǎng)后生物指

培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制

每批抽樣：不少于5支。細(xì)菌培養(yǎng)基經(jīng)30～35℃培養(yǎng)14天,應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。真菌培養(yǎng)基經(jīng)23～28℃培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。觀察滅菌指示劑（呈陰性色）通過培養(yǎng)基靈敏度檢查法。

滅菌后

培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制

每批抽樣：不少于5支。

培養(yǎng)基靈敏度檢查法

——目的：證明配置的培養(yǎng)基是適合相應(yīng)的微生物生長(zhǎng)。證明檢查結(jié)果的準(zhǔn)確、有效?？梢耘c無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。

菌株(1)藤黃微球菌(Micrococcus

Luteus)[CMCC(B)2800(2)生孢梭菌(Clostridium

sporogenes)[CMCC(B)64941]

(3)白色念珠菌(Candida

albicans)[CMCC(F)98001]等6株接種量

1ML(10~100個(gè)菌/ML)上述菌液接種于各培養(yǎng)基

各3支，每支培養(yǎng)基裝量9ml或12ml。判定以每株菌接種后的培養(yǎng)基不得少于2管呈現(xiàn)生長(zhǎng)，即該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合要求。

培養(yǎng)基靈敏度檢查法

——目的：證明配置的培養(yǎng)基是適合相應(yīng)試驗(yàn)用菌株的說(shuō)明*非靈敏度檢查用菌。注意：培養(yǎng)時(shí)間要求不同試驗(yàn)用菌株的說(shuō)明*非靈敏度檢查用菌。注意：培養(yǎng)時(shí)間要求不同

菌株的來(lái)源：

菌株的來(lái)源：

菌株的來(lái)源：菌株的來(lái)源：菌種的質(zhì)量控制保藏原理

適當(dāng)?shù)姆绞奖４妗＞N的質(zhì)量控制保藏原理適當(dāng)?shù)姆绞奖４?。菌株的質(zhì)量控制傳代不能超過5代。菌種傳代.doc甘油冷凍管G2斜面：菌種作為工作用菌種G3/W3G0G1G2甘油冷凍管G4純度、理化簽定后挑取純菌落甘油冷凍管G3斜面：菌種作為工作用菌種G4/W4G4G3G5斜面：菌種作為工作用菌種G5/W5甘油冷凍管G5菌株的質(zhì)量控制傳代不能超過5代。菌種傳代.doc甘油冷凍管G

提示：——培養(yǎng)基的靈敏度檢查法是一項(xiàng)對(duì)微生物專業(yè)要求較高的操作技術(shù)。目前多數(shù)企業(yè)都不具備作該試驗(yàn)的技術(shù)人員，目前比較普通做法是購(gòu)買有資質(zhì)的脫水培養(yǎng)基（如中檢所），同時(shí)要求制造商提供有關(guān)報(bào)告。自己不做該檢查。——如果培養(yǎng)基在有效期內(nèi)沒有用完，在繼續(xù)使用前應(yīng)再次驗(yàn)證其培養(yǎng)靈敏度。培養(yǎng)基靈敏度檢查法.doc

提示：——培養(yǎng)基的靈敏度檢查法是一項(xiàng)對(duì)微生物專業(yè)要求較高的培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制

2~25℃、避光。有效期：非密閉3周，密閉1年。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基使用培養(yǎng)前，培養(yǎng)基的氧化層（粉色層）不超過液面高度1/5。否則,須經(jīng)水浴煮沸加熱（不超過20分鐘）,

迅速冷卻，只限加熱一次。培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基的氧化層（粉色層），不超過液面高度的1/2。保存使用后培養(yǎng)基的配制的質(zhì)量控制2~25℃、避光。保存使用后

成品培養(yǎng)基

規(guī)?；a(chǎn)細(xì)菌培養(yǎng)基節(jié)省時(shí)間和制備成本沒有灰塵、粉塵對(duì)環(huán)境的影響良好的批量一致性和可追溯性保存：2~25℃、避光。有效期：非密閉3周，密閉1年。液體培養(yǎng)基優(yōu)勢(shì)

成品培養(yǎng)基

規(guī)?；a(chǎn)細(xì)菌培養(yǎng)基保存三、常見樣本的處理無(wú)菌檢查法薄膜過濾法適用于液體制劑和可溶性固體制劑及有抗菌作用的供試品；原理：供試液通過濾膜，將菌集留在膜上，將濾膜放置在有營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì)中，經(jīng)培養(yǎng)，微生物增長(zhǎng)，形成菌落。直接接種法適用于非抗菌作用的供試品；固體供試品；三、常見樣本的處理無(wú)菌檢查法薄膜過濾法適用于液體制劑和可溶性三、常見樣本的處理方法驗(yàn)證試驗(yàn)?zāi)康模鹤C明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查（測(cè)定供試品是否具有抑細(xì)菌和抑真菌作用）。試驗(yàn)的時(shí)機(jī)：1）建立產(chǎn)品的無(wú)菌檢查方法時(shí)。

2）產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。驗(yàn)證范圍：

對(duì)每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。方法：

檢品+靈敏度檢測(cè)試驗(yàn)菌+培養(yǎng)基=》試驗(yàn)菌生長(zhǎng)良好。無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證試驗(yàn).docx三、常見樣本的處理方法驗(yàn)證試驗(yàn)無(wú)菌檢查和驗(yàn)證示例產(chǎn)品：納米銀離子敷料，規(guī)格6cm×7cm，包裝規(guī)格：1片/袋驗(yàn)證試驗(yàn)：培養(yǎng)基15ml/支，剪取1片樣品（1cm×3cm），直接接種硫乙醇培養(yǎng)基4支、改良馬丁2支，再加入6株陽(yáng)性菌。表：樣品對(duì)6株陽(yáng)性菌的試驗(yàn)結(jié)果無(wú)菌檢查和驗(yàn)證示例產(chǎn)品：納米銀離子敷料，規(guī)格6cm×7cm，結(jié)果分析：該檢驗(yàn)量對(duì)26003（金黃色葡萄球菌）有抑制作用。

解決方法：增加培養(yǎng)基用量。

表：樣品對(duì)26003的再次驗(yàn)證再驗(yàn)證結(jié)果分析：

納米銀離子敷料，該檢測(cè)量在該條件下無(wú)抑菌作用或者其抑菌作用可以忽略不計(jì)。驗(yàn)證結(jié)論：

納米銀離子敷料的無(wú)菌檢查方法是取樣品10袋、培養(yǎng)基40ml/支，每支培養(yǎng)基接種量1cm×3cm，培養(yǎng)14天。數(shù)量依據(jù)表3確定結(jié)果分析：該檢驗(yàn)量對(duì)26003（金黃色葡萄球菌）有抑制作用。三、常見樣本的處理

1、液體樣品：薄膜過濾法藥典推薦使用全封閉的系統(tǒng)進(jìn)行檢查。目前已商品化的產(chǎn)品：

集菌儀

實(shí)物展示、培養(yǎng)器（濾筒）結(jié)構(gòu)說(shuō)明

濾膜孔徑：0.45μm濾膜直徑：50mm

三、常見樣本的處理

1、液體樣品：薄膜過濾法集菌儀工作原理圖示集菌儀工作原理圖示三、常見樣本的處理兩種培養(yǎng)基的接種支/瓶數(shù)之比為2：1無(wú)菌檢查的陽(yáng)性陰性對(duì)照設(shè)置.docx改良馬丁培養(yǎng)基1支（100ml/支）硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基2支（100ml/支）薄膜過濾法的接種數(shù)量其中1支在培養(yǎng)14天后，加入陽(yáng)性對(duì)照菌陰性對(duì)照：使用相應(yīng)的溶劑、稀釋液和沖洗液同法操作。三、常見樣本的處理兩種培養(yǎng)基的接種支/瓶數(shù)之比為2：1改良馬其它細(xì)菌過濾器接真空泵增加過濾速度其它細(xì)菌過濾器接真空泵增加過濾速度微生物過濾膜常用孔徑：除菌--0.22μm集菌--0.45μm不同溶液可選擇不同的截流效果膜微生物過濾膜常用孔徑：除菌--0.22μm不同溶液可選擇不同陽(yáng)性對(duì)照菌的使用供試產(chǎn)品對(duì)照陽(yáng)性菌編號(hào)無(wú)抑菌作用及抗革蘭氏陽(yáng)性菌為主的供試品，金黃色葡萄球菌26003抗革蘭氏陰性菌為主的供試品大腸埃希氏菌44102抗厭氧菌的供試品生孢梭菌64941抗真菌的供試品白色念球菌98001*使用的菌液濃度 <100cfu/ml。陽(yáng)性對(duì)照菌的使用供試產(chǎn)品對(duì)照陽(yáng)性菌編號(hào)無(wú)抑菌作用及抗革蘭氏陽(yáng)對(duì)照菌液的制備

——同培養(yǎng)基靈敏度檢查的菌液制備標(biāo)準(zhǔn)菌株G3/W3對(duì)照菌液的制備

——同培養(yǎng)基靈敏度檢查的菌液制備標(biāo)準(zhǔn)菌株G3對(duì)照菌液的制備

使用的菌液濃度：10~100cfu/ml對(duì)照菌液的制備

菌落計(jì)數(shù)2）、在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿上計(jì)算菌落數(shù)。每個(gè)菌堆積點(diǎn)算一個(gè)菌。1）、菌液稀釋后可直接與細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)濃度比濁管比較。菌落計(jì)數(shù)2）、在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿上計(jì)算菌落數(shù)。每個(gè)菌堆積點(diǎn)算一三、常見樣本的處理2、固體樣品：

直接接種法三、常見樣本的處理2、固體樣品：直接接種法固體樣品檢查應(yīng)注意的事項(xiàng)樣品的要求完整：最小包裝完好、沒有任何污染、破損。有效：名稱、地址、批號(hào)、規(guī)格型號(hào)。

*樣品檢驗(yàn)前的處理：信息、脫去外包裝、標(biāo)記編號(hào)。用適宜的消毒液對(duì)其外表面進(jìn)行消毒、紫外線照射。*培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基接種支/瓶數(shù)之比為2：1。供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的

10%。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于

15ml。改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。培養(yǎng)基的用量和高度同方法驗(yàn)證試驗(yàn)。固體樣品檢查應(yīng)注意的事項(xiàng)樣品的要求*樣品檢驗(yàn)前的處理：三、常見樣本的處理3、表面有活性劑、中和劑或滅活劑、抗菌作用的供試品:薄膜過濾法

檢查前應(yīng)證明檢查方法的有效性及對(duì)微生物的生長(zhǎng)無(wú)影響。抑細(xì)菌和抑真菌試驗(yàn).docx

供試品具有抑菌作用或含防腐劑時(shí)，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次。每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，總沖洗量不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。所用的沖洗量、沖洗方法同方法驗(yàn)證試驗(yàn)4、其它產(chǎn)品復(fù)溶、清洗：將復(fù)溶液、清洗液按薄膜過濾法進(jìn)行。三、常見樣本的處理3、表面有活性劑、中和劑或滅活劑、抗菌作用2005版藥典明確檢驗(yàn)方法的IVDD產(chǎn)品薄膜過濾法直接接種法具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具：輸血、輸液袋*每個(gè)最小包裝用50~100ml沖洗液內(nèi)壁后過濾配帶的針頭敷料*不同部位剪取約1cm×3cm腸線、縫合線等*用最小包裝接種滅菌醫(yī)用器具等拆散或切成小碎段2005版藥典明確檢驗(yàn)方法的IVDD產(chǎn)品薄膜過濾法直接接種法培養(yǎng)及觀察逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)23℃~28℃：改良馬丁培養(yǎng)基1