染色體與DNA345-復(fù)制

2.3DNA的復(fù)制染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!2.3.1DNA的半保留復(fù)制機(jī)理1、半保留復(fù)制的模型和驗證模型假設(shè)：有三種可能半保留模型（semioconservetivemodel）

全保留復(fù)制模型(conservetivemodel)分散模型(Dispersivemodel)。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!驗證半保留復(fù)制的實驗1958年Meselson-Stahl實驗

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!2.3.2

復(fù)制的起點方向和速度

復(fù)制結(jié)構(gòu)---復(fù)制叉復(fù)制子（replicon)通常把生物體的復(fù)制單位稱為----染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!復(fù)制的方向---單向、雙向1、

E.coli定點、雙向?qū)ΨQ復(fù)制。2、T7在近一端的17％處開始，向兩端延伸。3、枯草桿菌有固定的起始點，雙向不對稱復(fù)制。4、質(zhì)粒R6K早期為單向復(fù)制，復(fù)制了約1/5基因組進(jìn)行時雙向復(fù)制。5、質(zhì)粒ColE1有固定起始點，但卻為單向復(fù)制。6、mtDNA進(jìn)行D（displacedloop）環(huán)復(fù)制

7、真核有多個復(fù)制起點（i），雙向等速復(fù)制。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!2.3.3復(fù)制的幾種主要方式雖然DNA均以半保留進(jìn)行復(fù)制，但因DNA在細(xì)胞內(nèi)的存在形式不同，復(fù)制叉部位復(fù)制方式也不同。主要有：1、線性雙鏈DNA2、環(huán)狀雙鏈DNA染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!舉例：腺病毒DNA的復(fù)制腺病毒DNA全長35937bp線性雙鏈，兩端各有反向重復(fù)順序103～162bp，兩末端各有50bp為復(fù)制起點。其復(fù)制是以單鏈置換（stranddisplacement）形成一個大的莖環(huán)或叫平鍋形結(jié)構(gòu)來進(jìn)行的。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!

2.3.3.2環(huán)狀DNA雙鏈復(fù)制依環(huán)型DNA的復(fù)制過程中間物結(jié)構(gòu)有3種：1、θ型復(fù)制2、滾環(huán)式復(fù)制（δ型復(fù)制）3、D型復(fù)制染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!E.coli3H-T培養(yǎng)物與放射自顯影實驗染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!

滾環(huán)復(fù)制的電鏡照片染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!3、D環(huán)復(fù)制模式

單向復(fù)制一種特殊形式染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!2.4原核生物和真核生物

DNA復(fù)制的特點2.4.1原核生物DNA復(fù)制的特點以大腸桿菌基因組DNA復(fù)制為例：基因組DNA為雙鏈雙向θ型等速復(fù)制染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!復(fù)制起始點解鏈染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!2.4.1.1

DNA雙螺旋的解鏈復(fù)制時，DNA雙鏈解開形成復(fù)制叉。此過程有許多蛋白質(zhì)和酶參與完成。重要的酶和蛋白質(zhì)有：（1）單鏈結(jié)合蛋白（SSB）（2）DNA解鏈酶（DNAhelicase)（3）DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(DNAtopoisomerase)染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!DNA解螺旋酶解螺旋酶是拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ型酶。具有ATPase活性，催化DNA解鏈，放松負(fù)超螺旋。有兩類：一是在滯后鏈解螺旋酶二是在前導(dǎo)鏈解螺旋酶染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!復(fù)制叉移動帶來的拓?fù)鋵W(xué)問題染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!2.4.1.2DNA復(fù)制的引發(fā)

引發(fā)酶（primase)：一種特殊的RNA聚合酶

引物：RNA片段

引發(fā)體：6種蛋白質(zhì)（n,n’,n’’DnaB,C)和I共同組成

引發(fā)過程：前導(dǎo)鏈引發(fā)后隨鏈引發(fā)

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!引物酶與RNA聚合酶引物酶即RNA聚合酶，可從頭合成引物。例如：大腸桿菌的引物酶分子量60KD，有染色體基因dnaG編碼引物合成長10-60個b.染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!半不連續(xù)復(fù)制要點：1、復(fù)制叉的兩條摸板鏈合成新生鏈的方式不同，即前導(dǎo)鏈?zhǔn)沁B續(xù)合成的，后隨鏈?zhǔn)遣贿B續(xù)合成的；2、前導(dǎo)鏈的連續(xù)合成總是領(lǐng)先于不連續(xù)合成的滯后鏈；染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!補(bǔ)充：滯后鏈復(fù)制的回環(huán)模型回環(huán)模型：DNA雙鏈在復(fù)制叉初同時進(jìn)行復(fù)制，在滯后鏈摸板形成一個環(huán)。證據(jù)：回環(huán)模型解釋染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!

復(fù)制陷阱染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!DNA聚合酶的種類DNA聚合酶Ⅰ--校正酶，切除修復(fù)酶DNA聚合酶Ⅱ--酶活性低DNA聚合酶Ⅲ--主要復(fù)制酶DNA聚合酶Ⅳ--SOS修復(fù)酶DNA聚合酶Ⅴ--SOS修復(fù)酶染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!DNA聚合酶I的發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)是個被鑒定出來的DNA聚合酶。是1956年kornberg(昆伯格）從大腸桿菌中分離出來的。又稱為kornberg酶分子量109KD的單鏈---單體酶。有polA基因編碼。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!DNA聚合酶I的主要位點DNA聚合酶有6個結(jié)合位點：(1)模板結(jié)合位點；(2)引物結(jié)合位點；(3)引物3/－OH結(jié)合位點；(4)底物dNTP結(jié)合位點；(5)5/→3/外切酶結(jié)合位點；(6)3'→5'校正位點。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!

DNA聚合酶Ⅰ的功能

1.5‘→3’聚合功能2.3‘→5’外切活性3.5‘→3’外切活性4.內(nèi)切酶活性染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!DNA聚合酶Ⅲ的亞基組成染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!真核生物DNA的復(fù)制真核生物DNA的復(fù)制與原核生物的區(qū)別：1、多個復(fù)制起始位點；2、不同的復(fù)制單元不同時啟動；3、復(fù)制受調(diào)控；染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!端粒DNA的序列結(jié)構(gòu)1、端粒DNA的3′端是由數(shù)百個串聯(lián)重復(fù)GT豐富的短的寡核苷酸序列。例如四膜蟲的重復(fù)序列為-GGGGTT-，人為-AGGGTT-。2、端粒DNA序列雖不含功能基因，但對維持染色體的穩(wěn)定性起著重要作用。如果端粒喪失，染色體之間可能出現(xiàn)端-端融合、降解、重排乃至染色體丟失等變化，最后細(xì)胞衰亡。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!端粒酶復(fù)制是1985年發(fā)現(xiàn)的一種核糖核蛋白酶，由三部分組成：端粒酶RNA、端粒酶協(xié)同蛋白和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶。該酶兼有提供RNA模板和催化逆轉(zhuǎn)錄的功能，通過一種稱為爬行模型的機(jī)制維持染色體的完整。端粒酶結(jié)合后，依其RNA模板，在端粒單鏈3′-OH為引物基礎(chǔ)上，不斷反向轉(zhuǎn)錄，催化其延長，到一定長度，形成G-G配對的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，3′-OH端回折與互補(bǔ)鏈方向一致，端粒酶脫落，由DNA聚合酶催化，按新延伸的鏈為模板合成互補(bǔ)鏈。DNA末端復(fù)制變短和用端粒酶增加其長度，這兩個過程處于平衡狀態(tài)，所以染色體保持大致相同的長度。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!補(bǔ)充：真核生物DNA復(fù)制的代表

病毒SV40DNA復(fù)制病毒SV40DNA有5243bp.寄生在猴細(xì)胞內(nèi)，形成具有核小體結(jié)構(gòu)的微染色體復(fù)制特點：1、有自身編碼的T抗原參與復(fù)制，其余組分來自寄主細(xì)胞。2、T抗原有類似于oriC復(fù)制體系中的DnaA的作用染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁!SV40DNA的復(fù)制起始區(qū)域染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁!SV40DNA的復(fù)制過程1、T抗原和RF-A蛋白識別復(fù)制起始區(qū)，DNA聚合酶α、引物酶結(jié)合到起始區(qū)上，開始合成異端RNA引物；2、RF-C蛋白結(jié)合到引物上，促使DNA聚合酶α合成前導(dǎo)鏈的一條片段；隨后DNA聚合酶α從前導(dǎo)鏈上解離下來，參與后滯鏈的合成；DNA聚合酶δ與RF-C作用結(jié)合到前導(dǎo)鏈的段3/-OH末端，繼續(xù)合成前導(dǎo)鏈。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁!2.4.3DNA復(fù)制的調(diào)控2.4.3.1

大腸桿菌染色體DNA的復(fù)制調(diào)控1、染色體復(fù)制與細(xì)胞分裂是同步的，但不偶連。2、復(fù)制的起始與復(fù)制子的起始物位點和調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的相互作用有關(guān)。起始物位點的突變可使復(fù)制停止導(dǎo)致細(xì)胞死亡。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁!

2.4.3.3真核生物DNA復(fù)制的調(diào)控有三個水平的調(diào)控：1、細(xì)胞生活周期水平的調(diào)控細(xì)胞周期分為：間期G1、S、G2分裂期M2、染色體復(fù)制水平的調(diào)控3、復(fù)制子水平的調(diào)控染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁!細(xì)胞周期的調(diào)控發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞周期的控制機(jī)制。CDK——細(xì)胞周期蛋白依賴酶

cyclin——細(xì)胞周期蛋白質(zhì)CDK分子可以比作引擎，細(xì)胞周期蛋白可以比作齒輪箱以控制引擎處于空轉(zhuǎn)狀態(tài)或者驅(qū)動細(xì)胞繼續(xù)細(xì)胞周期。細(xì)胞周期蛋白依賴激酶分子和細(xì)胞周期蛋白驅(qū)動細(xì)胞從一個階段到下一個階段。他們識別出了所有真核生物中調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的關(guān)鍵分子，真核生物包括酵母菌，植物，動物和人。這些發(fā)現(xiàn)可為人類找到診療癌癥的新方法。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁!1．錯配修復(fù)（mismatchRepair）錯配修復(fù)對DNA復(fù)制忠實性的貢獻(xiàn)力達(dá)102-103，DNA子鏈中的錯配幾乎完全都被修正，充分反映了母鏈的重要性。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁!3.核苷酸切除修復(fù)（nucleotide-excisionrepair）

當(dāng)DNA鏈上相應(yīng)位置的核苷酸發(fā)生損傷，導(dǎo)致雙鏈之間無法形成氫鍵，由核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)負(fù)責(zé)進(jìn)行修復(fù)。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第49頁!4.DNA的直接修復(fù)（Directrepair）

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第50頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第51頁!找錯配堿基染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第52頁!2.6DNA的轉(zhuǎn)座或移位染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第53頁!2.6.1轉(zhuǎn)位因子結(jié)構(gòu)特點和類型結(jié)構(gòu)特點：1、兩端有末端重復(fù)序列（TIR）；2、絕大多數(shù)轉(zhuǎn)位因子含有開放閱讀框（ORF），可能是轉(zhuǎn)座酶的基因，其功能是促進(jìn)轉(zhuǎn)位因子的轉(zhuǎn)位。3、靶序列在轉(zhuǎn)位因子的兩側(cè)形成正向重復(fù)序列。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第54頁!轉(zhuǎn)位因子的類型原核生物細(xì)菌的轉(zhuǎn)位因子根據(jù)結(jié)構(gòu)的大小分：1、插入序列，一般小于2000bp2、復(fù)合轉(zhuǎn)位子3、TnA型轉(zhuǎn)位子染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第55頁!

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第56頁!

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第57頁!3、TnA型轉(zhuǎn)位子組成：含有約5000bp的轉(zhuǎn)位子有關(guān)基因和抗藥性基因。特點：兩端沒有IS序列，通常含有末端反向重復(fù)序列。例如Tn3染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第58頁!2.6.2轉(zhuǎn)座作用的機(jī)理1、轉(zhuǎn)座時插入的靶序列（受體分子的短序列）的DNA會被復(fù)制，使插入的轉(zhuǎn)座子位于重復(fù)的靶序列之間。2、靶序列復(fù)制的機(jī)制可能起源于特定的內(nèi)切酶所造成的粘性DNA末端。3、轉(zhuǎn)座有復(fù)制性和非復(fù)制性兩大類。復(fù)制性轉(zhuǎn)座是整個轉(zhuǎn)座子被復(fù)制，所移動和轉(zhuǎn)位的是原轉(zhuǎn)座子的拷貝。非復(fù)制性轉(zhuǎn)座是原始轉(zhuǎn)座子實體直接移位。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第59頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第60頁!

轉(zhuǎn)座引起插入突變?nèi)旧w與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第61頁!TransposonsinEucaryoteAc-Ds:CCbzbzIIBzBzCIBzbz無色青銅色無色理論上：實際上：穩(wěn)定的紫色突變、不穩(wěn)定的斑點突變Ds+Ds+DsDsDs+DsC:色素基因I：色素抑制基因Bz：紫紅色Bz：青銅色Ds+：染色體上存在解離因子染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第62頁!插入解離紫色2、Ds因子的移動（存在Ac因子）插入到C基因中→無色；從C基因解離→紫色青銅色色素基因紫色基因青銅色基因插入無色染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第63頁!第二章思考題1、解釋名詞HMG蛋白C值矛盾衛(wèi)星DNA復(fù)制子轉(zhuǎn)座子Klenow大片段染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第64頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第65頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第66頁!舉例：大腸桿菌復(fù)制起始點復(fù)制速度染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第67頁!

2.3.3.1線性DNA雙鏈的復(fù)制線性DNA的末端序列的合成，可能是完全獨立的過程。目前有4種假設(shè)：1、線性DNA的轉(zhuǎn)變?yōu)榄h(huán)形。2、線性DNA的末端形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。3、末端加頭或接尾。4、與蛋白質(zhì)結(jié)合引發(fā)合成。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第68頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第69頁!腺病毒新DNA鏈合成---蛋白質(zhì)引物

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第70頁!1、θ型復(fù)制模式—雙向復(fù)制

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第71頁!2、滾環(huán)復(fù)制模型

1968年Gilbert提出，要點（1）共價延伸；（2）模板鏈和新合成的鏈分開;（3）不需RNA引物，在正鏈3‘－OH上延（4）只有一個復(fù)制叉;（5）形成多聯(lián)（concatemer）;染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第72頁!。

滾環(huán)復(fù)制模式染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第73頁!三種DNA復(fù)制的特征對比

中間物結(jié)構(gòu)模板方向1、θ型復(fù)制θ型雙鏈環(huán)狀分子兩條鏈雙向2、δ型復(fù)制δ型雙鏈環(huán)狀分子一條鏈單向3、D型復(fù)制D型雙鏈環(huán)狀分子兩條鏈單向染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第74頁!E.coli雙鏈復(fù)制的起始1、主要發(fā)生oriC區(qū)域。2、在oriC序列上(245bp)進(jìn)行復(fù)制起始，由形成引發(fā)復(fù)合物開始，需要6種蛋白質(zhì)裝配成復(fù)合物，使環(huán)狀超螺旋摸板轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈廣泛解旋的形式。反應(yīng)是在9kb和13kb的重復(fù)序列上。3、DnaA首先結(jié)合在oriC序列的4個9kb重復(fù)序列上。然后DnaA作用于3個13kb重復(fù)序列，使這幾個位點的DNA融化解鏈，形成開放復(fù)合物。4、前引發(fā)復(fù)合物能是DNAoriC區(qū)域解鏈約60bp，在oriC區(qū)域終止，并引發(fā)一段RNA引物。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第75頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第76頁!復(fù)制起始區(qū)的結(jié)構(gòu)特點（1）富含A－T，這可能和雙鏈易于解開起始復(fù)制有關(guān)；（2）含有多個回文結(jié)構(gòu)（9－14個GATC）8個GATC較保守,CATC中的“A”已甲基化;（3）具有4個反向重復(fù)順序，作為蛋白結(jié)合位點；（4）此順序的右側(cè)毗鄰區(qū)域有兩個啟動子，其可能的作用是：①轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生引物；②產(chǎn)生復(fù)制必要的蛋白；③產(chǎn)生調(diào)節(jié)功能的RNA；④起轉(zhuǎn)錄激活作用。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第77頁!單鏈結(jié)合蛋白SSB

（single-strandbindingprotein)又稱為雙螺旋去穩(wěn)定蛋白（helixdestabilizingprotein）由177個aa組成，在E.coli中以四聚存在,分子量為74KDa。在原核中SSB與DNA結(jié)合表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。（1）SSB之間的相互作用；（2）個SSB和DNA的結(jié)合改變了DNA的結(jié)構(gòu)。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第78頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第79頁!

解旋酶(helicase)染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第80頁!

旋轉(zhuǎn)酶引入負(fù)超螺旋的模型

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第81頁!RNA引物引物酶催化合成RNA引物。不同生物RNA引物長度不同。原核生物：φχ174和E.coli為2-5b真核生物：5-10bM13、G4：20-30b染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第82頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第83頁!2.4.1.3岡崎片段與半不連續(xù)復(fù)制半不連續(xù)復(fù)制假說

1968年,日本岡崎（Okazaki)利用放射性同位素示蹤培養(yǎng)大腸桿菌實驗而證實，提出了DNA半不連續(xù)復(fù)制模型。

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第84頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第85頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第86頁!2.4.1.4

復(fù)制的終止1、鏈的終止不需要許多蛋白質(zhì)的參與。2、當(dāng)子鏈延伸達(dá)到terminusregion（ter，帶有多個20bp序列）時，DNA復(fù)制就終止了。Ter有點像一個陷井（trap），使復(fù)制叉只能進(jìn)入，不能出來。Ter的功能主要是由Ter-Tus復(fù)合物（terutilizationsubstance）來完成的。Ter-Tus復(fù)合物能阻擋復(fù)制叉前移，等到相反方向的復(fù)制叉到達(dá)后，在拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ的作用下，使復(fù)制叉解體，釋放子鏈。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第87頁!2.4.1.5DNA聚合酶DNA聚合酶的特點和種類DNA聚合酶的共同特點是：（1）需要提供合成模板；（2）不能起始新的DNA鏈，必須要有引物提供3'－OH；（3）合成的方向都是5'→3'（4）除聚合DNA外還有其它功能。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第88頁!

表

E.coli中的三種DNA聚合酶

DNApolⅠDNApolⅡDNApolⅢ結(jié)構(gòu)分子量

109KD90KD900KD構(gòu)成

單體單體異多聚體分子數(shù)/細(xì)胞

400？10-20酶活性：5→3`聚合酶

+++3`→5`外切酶

+++5`→3`外切酶

+－－(可切單鏈)突變體突變位點polApolBpolC(dnaE),dnaN,dnaZX,dnaQ,dnaT突變表型修復(fù)有缺陷能修復(fù)阻止復(fù)制

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第89頁!DNA聚合酶I的結(jié)構(gòu)染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第90頁!

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第91頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第92頁!DNA聚合酶Ⅰ與Klenow大片段來源：是DNA聚合酶Ⅰ（Klenow酶）經(jīng)枯草桿菌蛋白酶水解成2個片段，大片段為7600，小片段為3400。將大片段為7600稱謂Klenow大片段功能：具有5‘→3’聚合功能和3‘→5’外切活性染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第93頁!DNA聚合酶Ⅲ的結(jié)構(gòu)全酶由多個亞基（10種22個）組成，即α2ε2θ2δ2γ2δ2δ/χ2ψ2β2

其中αεθ組成核心酶，其余為輔助蛋白。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第94頁!2.4.2

真核生物DNA復(fù)制的特點特點：1、有多個復(fù)制起始點；2、各個起始點上只能復(fù)制起始一次；3、復(fù)制的起始需要原點識別復(fù)合（ORC）；4、復(fù)制叉移動速度慢；5、有15種以上DNA聚合酶。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第95頁!真核生物DNA聚合酶哺乳動物有5種（α、β、γ、δ、ε）主要酶是DNA聚合酶α和δ染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第96頁!真核生物端粒DNA復(fù)制1、端粒是染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，是染色體頭部和尾部重復(fù)的DNA。2、端粒的存在是為了維持染色體的穩(wěn)定，沒有端粒,則末端暴露,易被外切酶水解，據(jù)報道說端粒與生命長短有關(guān)。3、端粒DNA是用端粒酶來合成的，端粒酶中含有RNA模板，用來合成端粒.

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第97頁!端粒酶(telomerase)由蛋白質(zhì)和RNA兩部分組成，其中RNA作為合成端粒DNA的模板，端粒酶是目前所知唯一攜帶RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄酶，具有種屬特異性。例如四膜蟲的端粒酶，其RNA部分含159個核苷酸，其中有一段序列為5′-CAACCCCAA-3′可作為合成端粒DNA3′端GT豐富序列-GGGGTT-模板。人端粒酶的RNA含450個堿基，其中-CUAACCCUAAC-為合成-AGGGTT-的模板。

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第98頁!小結(jié)端粒酶與端粒復(fù)制特點作用：延長端粒過程：與之互補(bǔ)，反轉(zhuǎn)錄，再互補(bǔ)，再轉(zhuǎn)錄。一次一個重復(fù)序列。分布：生殖細(xì)胞和癌細(xì)胞（體細(xì)胞無，所以，體細(xì)胞繼代培養(yǎng)若干代后即停止分裂甚至凋亡。）端粒功能穩(wěn)定末端結(jié)構(gòu)，輔助末端復(fù)制。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第99頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第100頁!SV40DNA的復(fù)制起始區(qū)序列

染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第101頁!小結(jié)細(xì)菌和真核復(fù)制酶比較

組成細(xì)菌真核復(fù)制酶聚合酶Ⅲ聚合酶αδ進(jìn)行性因子β夾子PCNA定位因子γ復(fù)合物RF-C引物合成酶引物酶聚合酶α去除引物聚合酶ⅠRNaseH1/MF-1滯后鏈修復(fù)聚合酶Ⅰ連接酶聚合酶ε連接酶Ⅰ解螺旋酶DnaBT抗原消除張力拓?fù)洚悩?gòu)酶拓?fù)洚悩?gòu)酶單鏈結(jié)合SSBRP-A染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第102頁!大腸桿菌染色體復(fù)制的調(diào)控機(jī)制1、在復(fù)制子上。2、復(fù)制子的調(diào)控由復(fù)制起始因子和起始位點兩部分組成。3、大腸桿菌DNA復(fù)制的起始點序列oriC與起始因子dnaA、dnaH等的相互作用，啟動復(fù)制。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第103頁!2.4.3.2質(zhì)粒ColE1DNA復(fù)制的調(diào)控1、質(zhì)粒ColE1DNA復(fù)制從RNA的轉(zhuǎn)錄開始。2、RNA轉(zhuǎn)錄的起始于ori上游555bp處。3、轉(zhuǎn)錄合成的RNA引物有兩種調(diào)控：（1）RNAⅠ（與RNA引物互補(bǔ)的108b的RNA分子）--阻止RNaseH產(chǎn)生RNA引物的3/-OH末端；（2）附近基因編碼的蛋白質(zhì)Rop蛋白—抑制引物的形成。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第104頁!RNAⅠ的調(diào)控染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第105頁!細(xì)胞周期染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第106頁!2.5DNA的修復(fù)DNA復(fù)制時，會出現(xiàn)堿基錯配現(xiàn)象，或因環(huán)境因素使DNA損傷等。在細(xì)胞內(nèi)有DNA修復(fù)系統(tǒng)?？杀ＷCDNA損傷的修復(fù)。修復(fù)系統(tǒng)有：1、錯配修復(fù)2、堿基切除修復(fù)3、核苷酸切除修復(fù)4、直接修復(fù)染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第107頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第108頁!2.堿基切除修復(fù)（Base-ExcisionRepair）

DNAgylcosylases能特異性識別常見的DNA損傷（如胞嘧啶或腺嘌呤去氨?；a(chǎn)物）并將受損害堿基切除。去掉堿基后的核苷酸被稱為AP位點（apurinicorapyrimidinic）。細(xì)胞中最常見的UracilGlycosylase就能特異性切除細(xì)胞中的去氨基胞嘧啶。染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第109頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第110頁!染色體與DNA345--復(fù)制共125頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第111頁!錯配修復(fù)染色