呂毅臨床使用微柱凝膠卡產(chǎn)品注意事項(xiàng)課件

臨床使用微柱凝膠卡產(chǎn)品

注意事項(xiàng)衛(wèi)生部抗體技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室稀有血型診斷試劑（江陰）研發(fā)中心臨床使用微柱凝膠卡產(chǎn)品

注意事項(xiàng)衛(wèi)生部抗體技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室1凝膠卡類產(chǎn)品ABO/RhD血型定型檢測試劑卡ABO、RhD血型抗原檢測卡（微柱凝膠）抗人球蛋白交叉配血卡（抗IgG）廣譜抗人球蛋白卡（抗IgG+C3d）直接抗人球蛋白試劑卡ABO亞型檢測卡Rh血型分型卡新生兒溶血病檢測卡凝膠卡類產(chǎn)品ABO/RhD血型定型檢測試劑卡2呂毅臨床使用微柱凝膠卡產(chǎn)品注意事項(xiàng)課件3

配套儀器。配套儀器。4實(shí)驗(yàn)前注意事項(xiàng)

使用凝膠卡前應(yīng)先離心后應(yīng)用；

檢查凝膠卡，若封口開裂、孔中凝膠干

涸或有氣泡時(shí)，則不可使用；撕開凝膠卡的封口膜時(shí)，不能用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。實(shí)驗(yàn)前注意事項(xiàng)使用凝膠卡前應(yīng)先離心后應(yīng)用；5血液樣本處理血漿標(biāo)本必須充分離心去除纖維蛋白，否則會(huì)在微柱凝膠中阻止紅細(xì)胞沉淀呈現(xiàn)假陽性反應(yīng)。EDTA抗凝樣本，通過離心（3000rpm，1分鐘）觀察血漿的透明度。如渾濁或存在不溶物，需將血漿再次離心，確保血漿中不存在不溶物。血液樣本處理血漿標(biāo)本必須充分離心去除纖維蛋白，否則會(huì)在微柱6實(shí)驗(yàn)細(xì)胞濃度紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8～1%，濃度過高或過低會(huì)影響檢測結(jié)果。紅細(xì)胞懸液的制備：將待檢者的血液樣本離心（3000rpm、1min），用加樣槍在壓積紅細(xì)胞中層量取10μl壓積紅細(xì)胞加入至1ml生理鹽水中，配制成0.8~1%濃度的紅細(xì)胞懸液。

可將2～4%的紅細(xì)胞用Liss液進(jìn)行1:3～1:4稀釋。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞濃度紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8～1%，濃度過高或過低7加樣操作要求用定量加液器，先取50ul紅細(xì)胞（0.8～1%）呈45度角沿微柱凝膠管的樣品槽內(nèi)壁加入；然后再加入25ul血清或血漿；細(xì)胞和血漿加入樣品槽后要混勻，并保證樣品液面水平。加樣操作要求用定量加液器，先取50ul紅細(xì)胞（0.8～1%）8加樣注意事項(xiàng)嚴(yán)格按照上述50ul（0.8～1%濃度）的紅細(xì)胞加25ul血清或血漿的比例；微柱凝膠法50ul（0.8～1%）紅細(xì)胞（換算成2～4%的紅細(xì)胞則是50/4=12.5ul）和25ul血漿或血清，微柱凝膠法與試管法是同樣的紅細(xì)胞和血清比例。加樣注意事項(xiàng)嚴(yán)格按照上述50ul（0.8～1%濃度）的紅細(xì)胞9孵育時(shí)間要求凡抗人球蛋白卡、抗篩、交叉配血卡所用的紅細(xì)胞均必須用Liss液懸浮，這樣才能在孵育器中孵育15分鐘。凡直接抗人球卡、血型定型卡（ABO/RhD血型、Rh分型）可以用生理鹽水懸浮紅細(xì)胞。但鹽水懸浮的紅細(xì)胞則必須將37℃孵育時(shí)間延長到30～60分鐘。孵育時(shí)間要求凡抗人球蛋白卡、抗篩、交叉配血卡所用的紅細(xì)胞均必10凝膠卡配套用離心機(jī)凝膠卡的離心參數(shù)為900r/min2分鐘后自動(dòng)轉(zhuǎn)檔提至1500r/min3分鐘。本公司離心機(jī)設(shè)置的是固定轉(zhuǎn)速，不需要調(diào)節(jié)，避免用戶非正常離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行試驗(yàn)。凝膠卡配套用離心機(jī)凝膠卡的離心參數(shù)為900r/min11結(jié)果判讀結(jié)果判讀12影響結(jié)果因素陰性結(jié)果拖尾（細(xì)胞濃度，離心機(jī)轉(zhuǎn)速）陰性結(jié)果時(shí)凝膠上層有很少細(xì)胞殘留（血液樣本有破碎的紅細(xì)胞，樣本時(shí)間長自身有凝塊）假陰性（加樣是否正確）整管都是紅色（血液樣本溶血）雙向反應(yīng)（凝膠頂層和底部都有細(xì)胞）影響結(jié)果因素陰性結(jié)果拖尾（細(xì)胞濃度，離心機(jī)轉(zhuǎn)速）13影響結(jié)果因素有些血液病患者，由于幼稚紅細(xì)胞（有核）多，容易導(dǎo)致假陽性。某些藥物、疾病可導(dǎo)致正定型結(jié)果呈弱陽性反應(yīng)或正反定型不相符；溶血性疾病、巨球蛋白血癥、輸注大分子血漿擴(kuò)容劑如右旋糖酐等可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。影響結(jié)果因素有些血液病患者，由于幼稚紅細(xì)胞（有核）多，容易導(dǎo)14影響結(jié)果因素如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，強(qiáng)烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性反應(yīng)；但不排除其他原因所致溶血，一定要認(rèn)真分析并向上級主管技術(shù)人員報(bào)告并討論。影響結(jié)果因素如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，強(qiáng)烈提示為15細(xì)胞類產(chǎn)品注意事項(xiàng)細(xì)胞類產(chǎn)品注意事項(xiàng)16ABO血型定型紅細(xì)胞試劑

（人紅細(xì)胞）

產(chǎn)品如出現(xiàn)顏色改變、有凝集或異物、溶血，則不能使用。試劑使用后于2～8℃儲存。若細(xì)胞顏色變暗、細(xì)胞自發(fā)性聚集成塊或產(chǎn)生明顯溶血現(xiàn)象，則試劑紅細(xì)胞不能使用。保存期內(nèi)出現(xiàn)輕微溶血時(shí)，可在使用前用LISS液或生理鹽水將紅細(xì)胞洗滌后使用。ABO血型定型紅細(xì)胞試劑

（人紅細(xì)胞）產(chǎn)品如出現(xiàn)顏色改變、17不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑若細(xì)胞顏色變暗、細(xì)胞自發(fā)性聚集成塊或產(chǎn)生明顯溶血現(xiàn)象，則試劑紅細(xì)胞不能使用。在保存期內(nèi)，紅細(xì)胞可能會(huì)發(fā)生輕微溶血，如有此現(xiàn)象，可在使用前用LISS液或生理鹽水將紅細(xì)胞洗滌并制成懸浮液后使用。

不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑若細(xì)胞顏色變暗、細(xì)胞自發(fā)性聚18不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑紅細(xì)胞試劑長時(shí)間放置，紅細(xì)胞會(huì)自然沉降，形成壓積紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞保存液起不到保存的效果，最終會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)黑，或者形成凝塊。紅細(xì)胞試劑使用前需輕搖混勻，如長期不使用，需定期輕搖混勻（3~4天）。不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑紅細(xì)胞試劑長時(shí)間放置，紅細(xì)胞會(huì)自然沉19不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果的因素：樣本被細(xì)菌或化學(xué)試劑污染、孵育時(shí)間或溫度不合適、離心速度不當(dāng)不正確的血漿和細(xì)胞比例，抗體濃度太低、細(xì)胞洗滌不充分、樣本儲存不當(dāng)、試驗(yàn)管中漏加入被檢者血漿或抗人球蛋白試劑不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果的因素：20微柱凝膠卡法

檢測新生兒溶血病

操作指南微柱凝膠卡法

檢測新生兒溶血病

操作指南21

HDN

原

理新生兒溶血病（）是由母嬰血型不合引起的，常見于ABO及Rh血型系統(tǒng)。胎兒或新生兒紅細(xì)胞被來自于母體的IgG抗體包被，使紅細(xì)胞破壞，引起新生兒溶血病。輕則影響胎兒的臟器及智力發(fā)育，重則引起胎兒在子宮內(nèi)死亡。因此，新生兒溶血病的化驗(yàn)檢查對于臨床準(zhǔn)確診斷及治療具有非常重要的意義。HDN原理新生兒溶血病（）是由母嬰血型不合引22檢驗(yàn)前血液樣本的處理

采集EDTA抗凝的母親血樣5ml、新生兒血樣2ml；900-1000g離心1分鐘）分離出母血漿、子血漿。（離心獲得的血清應(yīng)透明無不溶物，如不符合需再次離心直至血漿為透明為止。）鑒定母子ABO血型，母Rh(D)血型。用生理鹽水分別洗滌母、子紅細(xì)胞1次后得到壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水配制成0.8-1%的紅細(xì)胞懸液。檢驗(yàn)前血液樣本的處理采集EDTA抗凝的母親血樣5ml、新23所需儀器設(shè)備血型血清學(xué)離心機(jī)（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞）微柱凝膠卡離心機(jī)微柱凝膠卡孵育器微量移液槍及吸頭所需儀器設(shè)備血型血清學(xué)離心機(jī)（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞）24所需試驗(yàn)耗材

微柱凝膠卡

（1）直接抗人球蛋白卡

（2）抗-IgG抗人球蛋白卡

（3）ABD血型定型卡紅細(xì)胞：(1）ABO反定型試劑紅細(xì)胞

（2）不規(guī)則抗體篩查紅細(xì)胞0.01MDTTLiss液（低離子液）試管（70×100mm）所需試驗(yàn)耗材

微柱凝膠卡25

試

驗(yàn)

操

作（一）母血漿中IgM抗體的滅活

在一試管中將4滴（0.2ml）母體血漿與等量的0.01M的二硫蘇糖醇液（DTT）混合后于37℃水浴中孵育30分鐘。 試驗(yàn)操作（一）母血漿中IgM抗體的滅活26（二）子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)

1、操作步驟：取直接抗人球蛋白卡一片，檢查外觀，確保沒有任何凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會(huì)干枯。將符合要求的卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開前三孔封口膜；用微量移液槍向每孔的樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的新生兒紅細(xì)胞。在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的紅細(xì)胞在樣品槽中呈水平狀態(tài)，避免偏向一側(cè)或出現(xiàn)空氣柱；將加入新生兒紅細(xì)胞的卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。（二）子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)

1、操作步驟：272、結(jié)果判讀注：“+”表示紅細(xì)胞懸浮在凝膠表面或凝膠中；“0”表示紅細(xì)胞全部沉降在微管底部。2、結(jié)果判讀注：“+”表示紅細(xì)胞懸浮在凝膠表面或凝膠中；28（三）母、子ABO、RhD血型鑒定1、母親ABO、RhD血型鑒定注：母親ABO血型鑒定必須正、反定型（1）ABO反定型試劑紅細(xì)胞的準(zhǔn)備

取2-4%濃度的ABO反定型試劑紅細(xì)胞200

微升，加入1ml生理鹽水洗滌后棄上清

，

加入600-800ulLiss液（也可用鹽水懸?。?/p>

即可得到0.8-1%濃度的懸浮的紅細(xì)胞。（三）母、子ABO、RhD血型鑒定1、母親ABO、RhD血型29（2）取ABO、RhD血型正反定型卡1張，檢查外觀，確保沒有任何凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會(huì)干涸。將卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開封口膜；用移液槍向1-3孔及第6孔沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的母親紅細(xì)胞，向第4、5孔按照標(biāo)記分別緩慢加入50微升0.8-1%濃度的反定型A紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞。在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的紅細(xì)胞在樣品槽中呈水平狀態(tài)，避免偏向一側(cè)或產(chǎn)生空氣柱；將加入新生兒紅細(xì)胞的卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。（2）取ABO、RhD血型正反定型卡1張，檢查外觀，確保沒有302、子ABO、RhD血型鑒定

注意：子ABO定型只做正定型，不做反定型，因?yàn)樽友獫{中的抗體不由自己產(chǎn)生，而是來自母體。取ABO、RhD血型正反定型卡1片，注意檢查外觀，確保沒有任何凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會(huì)干涸；將卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開封口膜，用微量移液槍向1-3孔及第6孔沿內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的子紅細(xì)胞；在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的紅細(xì)胞在樣品槽中呈水平狀態(tài)，避免偏向一側(cè)或有空氣柱；將加入新生兒紅細(xì)胞的卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。2、子ABO、RhD血型鑒定

注意：子ABO定型只做正定型，31（四）子血漿中游離抗體試驗(yàn)檢測游離抗體的目的是確認(rèn)新生兒血漿中是否還有沒結(jié)合到新生兒紅細(xì)胞上的抗體；如果存在游離抗體，這部分抗體還要繼續(xù)結(jié)合到新生兒紅細(xì)胞上，繼續(xù)破壞新生兒紅細(xì)胞，使得新生兒溶血病情繼續(xù)加重。（四）子血漿中游離抗體試驗(yàn)檢測游離抗體的目的是確認(rèn)新生兒血漿321、試劑紅細(xì)胞的準(zhǔn)備

（子血漿中游離抗體試驗(yàn)）

取2-4%濃度的試劑紅細(xì)胞200微升，加入1ml生理鹽水洗滌后棄去上清液；在壓積紅細(xì)胞中加入600-800微升Liss液；混勻，即可得到0.8-1%濃度的Liss液懸浮的紅細(xì)胞。

1、試劑紅細(xì)胞的準(zhǔn)備

（子血漿中游離抗體試驗(yàn)）取2-4%33子血漿中游離抗體試驗(yàn)2、取抗IgG抗人球蛋白卡1張，檢查外觀符合要求。將卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要量撕開封口膜；用微量移液槍向樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的Liss液懸浮的試劑紅細(xì)胞（試劑紅細(xì)胞的選擇見下表）；然后加入25微升新生兒血漿；在臺面交替輕叩卡左下角和右下角來混合紅細(xì)胞和血漿，混合均勻，避免偏向一側(cè)或產(chǎn)生空氣柱；將卡放入微柱凝膠卡孵育器中孵育15分鐘后用微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。子血漿中游離抗體試驗(yàn)2、取抗IgG抗人球蛋白卡1張，檢查外觀34子血漿中游離抗體試驗(yàn)

試劑紅細(xì)胞血型選擇3、結(jié)果判讀見表子血漿中游離抗體試驗(yàn)

試劑紅細(xì)胞血型選擇3、結(jié)果判讀見表35（五）母親血漿中的IgG

不規(guī)則抗體篩選1、不規(guī)則抗體篩選試劑紅細(xì)胞的準(zhǔn)備取2-4%濃度的不規(guī)則抗體篩選試劑紅細(xì)胞

I、II、III各200微升、分別加入1ml生理鹽水洗滌后棄上清液、向壓積紅細(xì)胞中各加入600-800ulLiss液，混勻即可得到0.8-1%濃度的Liss液懸浮

紅細(xì)胞。（五）母親血漿中的IgG

不規(guī)則抗體篩選1、不規(guī)則抗體篩選試362、取抗IgG抗人球蛋白卡一片，檢查外觀；將符合要求的卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要的3孔撕開封口膜；按照標(biāo)記，用移液槍沿樣品槽壁呈45°角分別緩慢加入50ul0.8-1%不規(guī)則抗體篩選I、II、III試劑紅細(xì)胞；向已加入紅細(xì)胞的微管樣品槽中加入已經(jīng)滅活I(lǐng)gM抗體的25ul母血漿；在臺面交替輕叩卡左下角和右下角進(jìn)行混合；確保所加入的紅細(xì)胞及血漿混合均勻呈水平狀，避免偏向一側(cè)或形成空氣柱；將卡放入微柱凝膠卡孵育器中孵育15分鐘后用微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。2、取抗IgG抗人球蛋白卡一片，檢查外觀；37結(jié)果判讀結(jié)果判讀38五、 綜合結(jié)果判斷

1、 當(dāng)子紅細(xì)胞的直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性，或子血清中游離抗體為陽性時(shí)，肯定發(fā)生新生兒溶血病。2、 當(dāng)母血漿中存在ABO以外的IgG抗體時(shí)，需對不規(guī)則抗體進(jìn)行抗體進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。五、 綜合結(jié)果判斷

1、 當(dāng)子紅細(xì)胞的直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性39

新生兒溶血病產(chǎn)后檢測結(jié)果報(bào)告

母姓名：住院號：

母ABO型：母Rh（D）型：子ABO型

子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)：

性

子

血清中游離抗體試驗(yàn)與A細(xì)胞性，與B細(xì)胞性

母血清中ABO以外IgG性質(zhì)抗體性。

新生兒溶血病產(chǎn)后檢測結(jié)果報(bào)告

40

江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司41江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司

力博公司注冊成立于2007年，注冊資金2700萬、實(shí)際資產(chǎn)1.5億元人民幣她坐落于江陰國家高新區(qū)揚(yáng)子江生物醫(yī)藥加速器基地內(nèi)，擁有四萬平方米的研發(fā)、生產(chǎn)和辦公場所。是一家主要從事血型檢測試劑、血型篩查配套儀器設(shè)備、腫瘤生物治療等產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的科技型企業(yè)。江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司

力博公司注冊成立于2007年，42呂毅臨床使用微柱凝膠卡產(chǎn)品注意事項(xiàng)課件43公司理念

視質(zhì)量、誠信為公司之生命以創(chuàng)新、發(fā)展作永恒的追求公司理念視質(zhì)量、誠信為公司之生命44謝

謝！謝謝！45臨床使用微柱凝膠卡產(chǎn)品

注意事項(xiàng)衛(wèi)生部抗體技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室稀有血型診斷試劑（江陰）研發(fā)中心臨床使用微柱凝膠卡產(chǎn)品

注意事項(xiàng)衛(wèi)生部抗體技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室46凝膠卡類產(chǎn)品ABO/RhD血型定型檢測試劑卡ABO、RhD血型抗原檢測卡（微柱凝膠）抗人球蛋白交叉配血卡（抗IgG）廣譜抗人球蛋白卡（抗IgG+C3d）直接抗人球蛋白試劑卡ABO亞型檢測卡Rh血型分型卡新生兒溶血病檢測卡凝膠卡類產(chǎn)品ABO/RhD血型定型檢測試劑卡47呂毅臨床使用微柱凝膠卡產(chǎn)品注意事項(xiàng)課件48

配套儀器。配套儀器。49實(shí)驗(yàn)前注意事項(xiàng)

使用凝膠卡前應(yīng)先離心后應(yīng)用；

檢查凝膠卡，若封口開裂、孔中凝膠干

涸或有氣泡時(shí)，則不可使用；撕開凝膠卡的封口膜時(shí)，不能用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。實(shí)驗(yàn)前注意事項(xiàng)使用凝膠卡前應(yīng)先離心后應(yīng)用；50血液樣本處理血漿標(biāo)本必須充分離心去除纖維蛋白，否則會(huì)在微柱凝膠中阻止紅細(xì)胞沉淀呈現(xiàn)假陽性反應(yīng)。EDTA抗凝樣本，通過離心（3000rpm，1分鐘）觀察血漿的透明度。如渾濁或存在不溶物，需將血漿再次離心，確保血漿中不存在不溶物。血液樣本處理血漿標(biāo)本必須充分離心去除纖維蛋白，否則會(huì)在微柱51實(shí)驗(yàn)細(xì)胞濃度紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8～1%，濃度過高或過低會(huì)影響檢測結(jié)果。紅細(xì)胞懸液的制備：將待檢者的血液樣本離心（3000rpm、1min），用加樣槍在壓積紅細(xì)胞中層量取10μl壓積紅細(xì)胞加入至1ml生理鹽水中，配制成0.8~1%濃度的紅細(xì)胞懸液。

可將2～4%的紅細(xì)胞用Liss液進(jìn)行1:3～1:4稀釋。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞濃度紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8～1%，濃度過高或過低52加樣操作要求用定量加液器，先取50ul紅細(xì)胞（0.8～1%）呈45度角沿微柱凝膠管的樣品槽內(nèi)壁加入；然后再加入25ul血清或血漿；細(xì)胞和血漿加入樣品槽后要混勻，并保證樣品液面水平。加樣操作要求用定量加液器，先取50ul紅細(xì)胞（0.8～1%）53加樣注意事項(xiàng)嚴(yán)格按照上述50ul（0.8～1%濃度）的紅細(xì)胞加25ul血清或血漿的比例；微柱凝膠法50ul（0.8～1%）紅細(xì)胞（換算成2～4%的紅細(xì)胞則是50/4=12.5ul）和25ul血漿或血清，微柱凝膠法與試管法是同樣的紅細(xì)胞和血清比例。加樣注意事項(xiàng)嚴(yán)格按照上述50ul（0.8～1%濃度）的紅細(xì)胞54孵育時(shí)間要求凡抗人球蛋白卡、抗篩、交叉配血卡所用的紅細(xì)胞均必須用Liss液懸浮，這樣才能在孵育器中孵育15分鐘。凡直接抗人球卡、血型定型卡（ABO/RhD血型、Rh分型）可以用生理鹽水懸浮紅細(xì)胞。但鹽水懸浮的紅細(xì)胞則必須將37℃孵育時(shí)間延長到30～60分鐘。孵育時(shí)間要求凡抗人球蛋白卡、抗篩、交叉配血卡所用的紅細(xì)胞均必55凝膠卡配套用離心機(jī)凝膠卡的離心參數(shù)為900r/min2分鐘后自動(dòng)轉(zhuǎn)檔提至1500r/min3分鐘。本公司離心機(jī)設(shè)置的是固定轉(zhuǎn)速，不需要調(diào)節(jié)，避免用戶非正常離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行試驗(yàn)。凝膠卡配套用離心機(jī)凝膠卡的離心參數(shù)為900r/min56結(jié)果判讀結(jié)果判讀57影響結(jié)果因素陰性結(jié)果拖尾（細(xì)胞濃度，離心機(jī)轉(zhuǎn)速）陰性結(jié)果時(shí)凝膠上層有很少細(xì)胞殘留（血液樣本有破碎的紅細(xì)胞，樣本時(shí)間長自身有凝塊）假陰性（加樣是否正確）整管都是紅色（血液樣本溶血）雙向反應(yīng)（凝膠頂層和底部都有細(xì)胞）影響結(jié)果因素陰性結(jié)果拖尾（細(xì)胞濃度，離心機(jī)轉(zhuǎn)速）58影響結(jié)果因素有些血液病患者，由于幼稚紅細(xì)胞（有核）多，容易導(dǎo)致假陽性。某些藥物、疾病可導(dǎo)致正定型結(jié)果呈弱陽性反應(yīng)或正反定型不相符；溶血性疾病、巨球蛋白血癥、輸注大分子血漿擴(kuò)容劑如右旋糖酐等可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。影響結(jié)果因素有些血液病患者，由于幼稚紅細(xì)胞（有核）多，容易導(dǎo)59影響結(jié)果因素如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，強(qiáng)烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性反應(yīng)；但不排除其他原因所致溶血，一定要認(rèn)真分析并向上級主管技術(shù)人員報(bào)告并討論。影響結(jié)果因素如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，強(qiáng)烈提示為60細(xì)胞類產(chǎn)品注意事項(xiàng)細(xì)胞類產(chǎn)品注意事項(xiàng)61ABO血型定型紅細(xì)胞試劑

（人紅細(xì)胞）

產(chǎn)品如出現(xiàn)顏色改變、有凝集或異物、溶血，則不能使用。試劑使用后于2～8℃儲存。若細(xì)胞顏色變暗、細(xì)胞自發(fā)性聚集成塊或產(chǎn)生明顯溶血現(xiàn)象，則試劑紅細(xì)胞不能使用。保存期內(nèi)出現(xiàn)輕微溶血時(shí)，可在使用前用LISS液或生理鹽水將紅細(xì)胞洗滌后使用。ABO血型定型紅細(xì)胞試劑

（人紅細(xì)胞）產(chǎn)品如出現(xiàn)顏色改變、62不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑若細(xì)胞顏色變暗、細(xì)胞自發(fā)性聚集成塊或產(chǎn)生明顯溶血現(xiàn)象，則試劑紅細(xì)胞不能使用。在保存期內(nèi)，紅細(xì)胞可能會(huì)發(fā)生輕微溶血，如有此現(xiàn)象，可在使用前用LISS液或生理鹽水將紅細(xì)胞洗滌并制成懸浮液后使用。

不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑若細(xì)胞顏色變暗、細(xì)胞自發(fā)性聚63不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑紅細(xì)胞試劑長時(shí)間放置，紅細(xì)胞會(huì)自然沉降，形成壓積紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞保存液起不到保存的效果，最終會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)黑，或者形成凝塊。紅細(xì)胞試劑使用前需輕搖混勻，如長期不使用，需定期輕搖混勻（3~4天）。不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑紅細(xì)胞試劑長時(shí)間放置，紅細(xì)胞會(huì)自然沉64不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果的因素：樣本被細(xì)菌或化學(xué)試劑污染、孵育時(shí)間或溫度不合適、離心速度不當(dāng)不正確的血漿和細(xì)胞比例，抗體濃度太低、細(xì)胞洗滌不充分、樣本儲存不當(dāng)、試驗(yàn)管中漏加入被檢者血漿或抗人球蛋白試劑不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果的因素：65微柱凝膠卡法

檢測新生兒溶血病

操作指南微柱凝膠卡法

檢測新生兒溶血病

操作指南66

HDN

原

理新生兒溶血?。ǎ┦怯赡笅胙筒缓弦鸬?，常見于ABO及Rh血型系統(tǒng)。胎兒或新生兒紅細(xì)胞被來自于母體的IgG抗體包被，使紅細(xì)胞破壞，引起新生兒溶血病。輕則影響胎兒的臟器及智力發(fā)育，重則引起胎兒在子宮內(nèi)死亡。因此，新生兒溶血病的化驗(yàn)檢查對于臨床準(zhǔn)確診斷及治療具有非常重要的意義。HDN原理新生兒溶血病（）是由母嬰血型不合引67檢驗(yàn)前血液樣本的處理

采集EDTA抗凝的母親血樣5ml、新生兒血樣2ml；900-1000g離心1分鐘）分離出母血漿、子血漿。（離心獲得的血清應(yīng)透明無不溶物，如不符合需再次離心直至血漿為透明為止。）鑒定母子ABO血型，母Rh(D)血型。用生理鹽水分別洗滌母、子紅細(xì)胞1次后得到壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水配制成0.8-1%的紅細(xì)胞懸液。檢驗(yàn)前血液樣本的處理采集EDTA抗凝的母親血樣5ml、新68所需儀器設(shè)備血型血清學(xué)離心機(jī)（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞）微柱凝膠卡離心機(jī)微柱凝膠卡孵育器微量移液槍及吸頭所需儀器設(shè)備血型血清學(xué)離心機(jī)（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞）69所需試驗(yàn)耗材

微柱凝膠卡

（1）直接抗人球蛋白卡

（2）抗-IgG抗人球蛋白卡

（3）ABD血型定型卡紅細(xì)胞：(1）ABO反定型試劑紅細(xì)胞

（2）不規(guī)則抗體篩查紅細(xì)胞0.01MDTTLiss液（低離子液）試管（70×100mm）所需試驗(yàn)耗材

微柱凝膠卡70

試

驗(yàn)

操

作（一）母血漿中IgM抗體的滅活

在一試管中將4滴（0.2ml）母體血漿與等量的0.01M的二硫蘇糖醇液（DTT）混合后于37℃水浴中孵育30分鐘。 試驗(yàn)操作（一）母血漿中IgM抗體的滅活71（二）子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)

1、操作步驟：取直接抗人球蛋白卡一片，檢查外觀，確保沒有任何凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會(huì)干枯。將符合要求的卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開前三孔封口膜；用微量移液槍向每孔的樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的新生兒紅細(xì)胞。在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的紅細(xì)胞在樣品槽中呈水平狀態(tài)，避免偏向一側(cè)或出現(xiàn)空氣柱；將加入新生兒紅細(xì)胞的卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。（二）子紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)

1、操作步驟：722、結(jié)果判讀注：“+”表示紅細(xì)胞懸浮在凝膠表面或凝膠中；“0”表示紅細(xì)胞全部沉降在微管底部。2、結(jié)果判讀注：“+”表示紅細(xì)胞懸浮在凝膠表面或凝膠中；73（三）母、子ABO、RhD血型鑒定1、母親ABO、RhD血型鑒定注：母親ABO血型鑒定必須正、反定型（1）ABO反定型試劑紅細(xì)胞的準(zhǔn)備

取2-4%濃度的ABO反定型試劑紅細(xì)胞200

微升，加入1ml生理鹽水洗滌后棄上清

，

加入600-800ulLiss液（也可用鹽水懸浮）

即可得到0.8-1%濃度的懸浮的紅細(xì)胞。（三）母、子ABO、RhD血型鑒定1、母親ABO、RhD血型74（2）取ABO、RhD血型正反定型卡1張，檢查外觀，確保沒有任何凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會(huì)干涸。將卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開封口膜；用移液槍向1-3孔及第6孔沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的母親紅細(xì)胞，向第4、5孔按照標(biāo)記分別緩慢加入50微升0.8-1%濃度的反定型A紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞。在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的紅細(xì)胞在樣品槽中呈水平狀態(tài)，避免偏向一側(cè)或產(chǎn)生空氣柱；將加入新生兒紅細(xì)胞的卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。（2）取ABO、RhD血型正反定型卡1張，檢查外觀，確保沒有752、子ABO、RhD血型鑒定

注意：子ABO定型只做正定型，不做反定型，因?yàn)樽友獫{中的抗體不由自己產(chǎn)生，而是來自母體。取ABO、RhD血型正反定型卡1片，注意檢查外觀，確保沒有任何凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會(huì)干涸；將卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開封口膜，用微量移液槍向1-3孔及第6孔沿內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的子紅細(xì)胞；在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的紅細(xì)胞在樣品槽中呈水平狀態(tài)，避免偏向一側(cè)或有空氣柱；將加入新生兒紅細(xì)胞的卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。2、子ABO、RhD血型鑒定

注意：子ABO定型只做正定型，76（四）子血漿中游離抗體試驗(yàn)檢測游離抗體的目的是確認(rèn)新生兒血漿中是否還有沒結(jié)合到新生兒紅細(xì)胞上的抗體；如果存在游離抗體，這部分抗體還要繼續(xù)結(jié)合到新生兒紅細(xì)胞上，繼續(xù)破壞新生兒紅細(xì)胞，使得新生兒溶血病情繼續(xù)加重。（四）子血漿中游離抗體試驗(yàn)檢測游離抗體的目的是確認(rèn)新生兒血漿771、試劑紅細(xì)胞的準(zhǔn)備

（子血漿中游離抗體試驗(yàn)）

取2-4%濃度的試劑紅細(xì)胞200微升，加入1ml生理鹽水洗滌后棄去上清液；在壓積紅細(xì)胞中加入600-800微升Liss液；混勻，即可得到0.8-1%濃度的Liss液懸浮的紅細(xì)胞。

1、試劑紅細(xì)胞的準(zhǔn)備

（子血漿中游離抗體試驗(yàn)）取2-4%78子血漿中游離抗體試驗(yàn)2、取抗IgG抗人球蛋白卡1張，檢查外觀符合要求。將卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要量撕開封口膜；用微量移液槍向樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的Liss液懸浮的試劑紅細(xì)胞（試劑紅細(xì)胞的選擇見下表）；然后加入25微升新生兒血漿；在臺面交替輕叩卡左下角和右下角來混合紅細(xì)胞和血漿，混合均勻，避免偏向一側(cè)或產(chǎn)生空氣柱；將卡放入微柱凝膠卡孵育器中孵育15分鐘后用微柱凝膠卡離心機(jī)離心判讀結(jié)果。子血漿中游離抗體試驗(yàn)2、取抗IgG抗人球蛋白卡1張，檢查外觀79子血漿中游離抗體試驗(yàn)

試劑紅細(xì)胞血型選擇3、結(jié)果判讀見表子血漿中游離抗體試驗(yàn)

試劑紅細(xì)胞血型選