基因工程的基本操作程序

1.2基因工程的基本操作程序

1.2基因工程的基本操作程序教學(xué)過程教學(xué)內(nèi)容教學(xué)手段

和方法預(yù)期

目標(biāo)1.課前預(yù)習(xí)，引入對(duì)基因工程的基本操作程序的學(xué)習(xí)。

2.學(xué)習(xí)目的基因的獲取

2.1從基因文庫中獲取目的基因

2.2利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

3.學(xué)習(xí)基因表達(dá)載體的構(gòu)建

4.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.1將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞4.2將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞4.3將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞5.學(xué)習(xí)目的基因的檢測與鑒定6.布置作業(yè)課前準(zhǔn)備：通過預(yù)習(xí)解決以下問題基因工程的基本操作程序主要包括哪幾個(gè)步驟？試分析每一步驟的必要性。師：通過預(yù)習(xí)同學(xué)們都能解決第一個(gè)問題，基因工程的基本操作程序包括……生：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。師：第二個(gè)問題我們可以將它拆分成四個(gè)小問題逐個(gè)兒解決：為什么要有“目的基因的獲取”這一步？先請一個(gè)同學(xué)將基因工程的原理告訴大家。生：基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。師：這既是基因工程的原理又是其概念，通過這一表述中的“創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品”你得出什么樣的信息？生：這是基因工程的優(yōu)點(diǎn)也是基因工程的目的，可以實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)的只有目的基因，有了目的基因我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性。師：很好，良好的開端等于成功的一半，我們繼續(xù)往下分析為什么要有“表達(dá)載體的構(gòu)建”這一步？生：構(gòu)建表達(dá)載體的目的是為了使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。（教材P11）師：看來同學(xué)們課前已經(jīng)進(jìn)行了精心預(yù)習(xí)了，那么第三步“目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞”它又是出于什么目的呢？生：單獨(dú)的DNA片段──目的基因是不能穩(wěn)定遺傳的，含有目的基因的表達(dá)載體只有進(jìn)入受體細(xì)胞，并且維持穩(wěn)定和表達(dá)，才能實(shí)現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。（教材P12）師：最后一步“目的基因的檢測與鑒定”呢？生：這是因?yàn)槟康幕蚴欠裾嬲迦胧荏w細(xì)胞的DNA中，是否能夠在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá)，只有通過檢測、鑒定才能得知。（教材P13）師：看來基因工程的每個(gè)操作步驟都是必不可少的，下面我們按照基因工程的操作步驟，對(duì)每一程序的相關(guān)技術(shù)和方法進(jìn)行學(xué)習(xí)一、目的基因的獲取通俗地講就是將需要的基因從供體生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來。閱讀教材9～11頁相關(guān)內(nèi)容，回答下列問題：什么是目的基因，舉例說明。生：目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因，例如，與生物抗逆性有關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因、與生物藥物和保健品有關(guān)的基因、與毒物降解有關(guān)的基因，以及與工業(yè)所需用酶相關(guān)的基因等。師：同樣目的基因還可以是一些具有調(diào)控作用的因子。目前被較廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。師：獲得目的基因的方法有哪些？生：可以從基因文庫中獲取目的基因，還可以利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。師：什么是基因文庫？生：將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。師：什么是部分基因文庫？生：只含有一種生物的一部分基因，這樣的基因文庫叫做部分基因文庫。師：基因文庫包含了某種生物的全部基因，又可稱為基因組文庫，如果將每個(gè)基因看成一本書則基因文庫就可以比喻成國家圖書館，這里的資料既多又齊全，而部分基因文庫只包含了該生物的部分基因，如，cDNA文庫，因此部分基因文庫只能比喻成某個(gè)市或單位的圖書館。閱讀教材P11的生物技術(shù)資料卡，比較cDNA文庫和基因組文庫的區(qū)別。師：怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？生：根據(jù)基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA，以及基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來獲取目的基因。師：很好。除了這種方法我們還可以利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction)的縮寫，是一項(xiàng)再生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)，可獲取大量的目的基因。通過閱讀教材完成下列填空。原理：（DNA的復(fù)制）條件：（已知基因的核苷酸序列，四種脫氧核苷酸，一對(duì)引物，DNA聚合酶）方式：以（指數(shù)）方式擴(kuò)增，即（2n）（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）結(jié)果：（使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增）過程：a、DNA變性（90℃-96℃）：目的基因DNA受熱變性，（氫鍵斷裂），形成（DNA單鏈）。b、退火（復(fù)性25℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，（引物）與（DNA模板）結(jié)合，形成局部雙鏈。c、延伸（70℃-75℃師：此外，如果基因比較小，核苷酸序列又已知，也可以通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建這是實(shí)施基因工程的第二步也是基因工程的核心。1.用一定的_________（限制酶）切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出_________（黏性末端）。2.用_____________（同一種限制酶）切斷目的基因，使其產(chǎn)生__________（相同的黏性末端）。3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的______（切口）處，再加入適量_______（DNA連接酶），形成了一個(gè)重組DNA分子（重組質(zhì)粒）師：看圖1-10基因的表達(dá)載體模式圖總結(jié)基因表達(dá)載體的組成。生：基因表達(dá)載體是由復(fù)制原點(diǎn)，目的基因，啟動(dòng)子，終止子，標(biāo)記基因師：它們各自的作用是什么呢？生：啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。生：終止子位于基因的尾端，是一段特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來。生：標(biāo)記基因的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。師：并不是所有的基因表達(dá)載體都是一樣，根據(jù)受體細(xì)胞的不同它們也會(huì)有相應(yīng)的變化。三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞師：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法，目前開發(fā)出來的已有很多種，每種方法都有其利弊，適合于不同的受體細(xì)胞，在具體實(shí)施過程中，究竟選哪種方法，要根據(jù)具體情況而定。1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法，閱讀教材P12回答下列問題：你能說說農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的大概過程嗎？根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？生：根瘤農(nóng)桿菌具有趨化性，即植物的受傷組織會(huì)產(chǎn)生一些糖類和酚類物質(zhì)吸引根瘤農(nóng)桿菌向受傷組織集中，而研究表明這種物質(zhì)是在雙子葉植物的細(xì)胞壁中合成的，通常不存在于單子葉植物中，這也是單子葉植物不被根瘤農(nóng)桿菌侵染的原因。如果想將一個(gè)抗病基因?qū)雴巫尤~植物，理論上你認(rèn)為該怎么做？生：①選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，②加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)使農(nóng)桿菌向植物受傷組織靠攏。2、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中采用最多，也是最為有效的一種將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的方法。3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞思考：為什么選用微生物作為受體細(xì)胞？生：原核生物具有一些其他生物沒有的特點(diǎn)：繁殖快，多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等，因此，早期的基因工程都用原核生物作為受體細(xì)胞。師：大腸桿菌細(xì)胞最常用的轉(zhuǎn)化方法是:首先用Ca2+處理細(xì)胞,以增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞.第二步是將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程.第二步目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)，隨其繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌繁殖的速度非?？?，在很短的時(shí)間內(nèi)就能獲得大量的目的基因。思考：為什么要用Ca2＋處理細(xì)胞？生：因?yàn)榇竽c桿菌等細(xì)菌的細(xì)胞壁成分主要是肽聚糖，因此一般要先用Ca2＋處理，以增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性。四、目的基因的檢測與鑒定師：受體細(xì)胞攝入DNA分子后就說明目的基因完成了表達(dá)嗎？生：不能，受體細(xì)胞必須表現(xiàn)出特定的性狀，才能說明目的基因完成了表達(dá)。師：這是基因工程的最后一步也是檢查基因工程是否做成功的一步。它可以從以下三個(gè)是方面進(jìn)行檢測：檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，一般采用的方法是DNA分子雜交。采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA方法是分子雜交。檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交。作業(yè)：1.教材15頁“思考與探究”第4題2.教材11頁“尋根問底”

學(xué)生討論。

引導(dǎo)大家思考。

贊揚(yáng)也是教育的一種方式。

學(xué)生討論。

討論中及時(shí)發(fā)現(xiàn)有創(chuàng)新思維的學(xué)生，鼓勵(lì)發(fā)表意見。學(xué)生再次議論。

及時(shí)鼓勵(lì)學(xué)生。

學(xué)生看書。

教師點(diǎn)撥。

學(xué)生看插圖。

學(xué)生看書。

學(xué)生看書，接著議論。

。

。

看書學(xué)習(xí)。

學(xué)生討論。

將局部問題整合到實(shí)際工作的全過程中思考。

學(xué)生歸納。

學(xué)生結(jié)合插圖尋找分析插圖看書學(xué)習(xí)。教師點(diǎn)撥學(xué)生討論，討論中及時(shí)發(fā)現(xiàn)有創(chuàng)新思維的學(xué)生，鼓勵(lì)發(fā)表意見。教師點(diǎn)撥

加強(qiáng)預(yù)習(xí)環(huán)節(jié)

使學(xué)生認(rèn)識(shí)每一步驟的必要性

。

將直白的教學(xué)內(nèi)容變得有思維力度。

以上教學(xué)也是將四個(gè)操作過程整合到一個(gè)完整的過程之中

引導(dǎo)學(xué)生對(duì)基因組文庫和部分基因文庫作對(duì)比，在比較中加深認(rèn)識(shí)。

讓文字與插圖結(jié)合，使抽象的文字在直觀的插圖中得以體現(xiàn)。

提高學(xué)生思維的深刻性。

解決本課的難點(diǎn)。

以填空的形式，誘導(dǎo)思考，解決難點(diǎn)。

利用插圖加深對(duì)載體必須具備條件的認(rèn)識(shí)。培養(yǎng)學(xué)生的歸納能力。體現(xiàn)基礎(chǔ)知識(shí)的準(zhǔn)確運(yùn)用。在運(yùn)用中加深對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的深層次理解培養(yǎng)思維的廣闊性。以上教學(xué)改變直白的教學(xué)方式，通過誘思，提高學(xué)生的思維能力。經(jīng)典例題剖析［例1］下列有關(guān)基因工程技術(shù)的正確敘述是A．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運(yùn)載體B．所有的限制酶都只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列C．選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D．只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)【解析】基因操作的工具有限制酶、連接酶，一種限制酶只能識(shí)別特定的核苷酸序列。運(yùn)載體是基因的運(yùn)輸工具，目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，受體細(xì)胞表現(xiàn)出特定的性狀，才說明目的基因完成了表達(dá)，基因工程的結(jié)果是讓目的基因完成表達(dá)，生產(chǎn)出目的基因的產(chǎn)物，選擇受體細(xì)胞的重要條件就是能夠快速繁殖?！敬鸢浮緾［例2］應(yīng)用基因工程技術(shù)診斷疾病的過程中必須使用基因探針才能達(dá)到探測疾病的目的?；蛱结樖侵窤．用于檢測疾病的醫(yī)療器械B．用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的DNA分子C．合成β—球蛋白的DNAD．合成苯丙羥化酶DNA片段【解析】基因診斷是用放射性同位素、熒光分子等標(biāo)記的DNA作探針，利用DNA分子雜交原理，鑒定被檢測標(biāo)本上的遺傳信息，達(dá)到檢測疾病的目的?；A(chǔ)試題訓(xùn)練1、構(gòu)建基因組DNA文庫時(shí)，首先雷分離細(xì)胞的A、染色體DNA

B、線粒體DNA

C、總mRNA

D、tRNA

2．在基因工程中，把選出的目的基因（共1000個(gè)脫氧核苷酸對(duì)，其中腺嘌嶺脫氧核苷酸是460個(gè)）放入DNA擴(kuò)增儀中擴(kuò)增4代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個(gè)數(shù)是()A.540個(gè) B.8100個(gè) C.17280個(gè) D.7560個(gè)2．在基因工程中，科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是（）A.結(jié)構(gòu)簡單，操作方便B.遺傳物質(zhì)含量少C.繁殖速度快D.性狀穩(wěn)定，變異少3．因工程的操作步驟：①使目的基因與運(yùn)載體相結(jié)合，②將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，③檢測目的基因的表達(dá)是否符合特定性狀要求，④提取目的基因，正確的操作順序是（）

A．③②④①B.②④①③C．④①②③D．③④①②4．工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是（）

A．人工合成基因B．目的基因與運(yùn)載體結(jié)合

C．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞D．目的基因的檢測和表達(dá)5．就分于結(jié)構(gòu)而論，質(zhì)粒是A、環(huán)狀雙鏈DNA分子

B、環(huán)狀單鏈DNA分于C、環(huán)狀單鏈RNA分子

D、線狀雙鏈DNA分子6．聚合酶鏈反應(yīng)可表示為A、PEC

B、PER

C、PDR

D、PCR7．在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是A、化學(xué)合成法

B、基因組文庫法C、CDNA文庫法

D、聚合酶鏈反應(yīng)8．有關(guān)基因工程的敘述正確的是（）

A.限制性內(nèi)切酶只在獲得目的基因時(shí)才用

B.重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成

C.質(zhì)粒都可作運(yùn)載體

D.蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料9．不屬于目的基因與運(yùn)載體結(jié)合過程的是（）A．用一定的限制酶切割質(zhì)粒露出黏性末端B．用同種限制酶切割目的基因露出黏性末端

C.將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增

D．將切下的目的基因插入到質(zhì)粒切口處10．科學(xué)家通過基因工程的方法，能使馬鈴薯塊莖含有人奶蛋白。以下有關(guān)該基因工程的敘述錯(cuò)誤的是A．采用反轉(zhuǎn)錄的方法得到的目的基因B．基因非編碼區(qū)對(duì)于目的基因在塊莖中的表達(dá)是不可缺少的C．馬鈴薯的葉肉細(xì)胞可作為受體細(xì)胞D．用不同種限制酶處理質(zhì)粒和含有目的基因的DNA，可產(chǎn)生黏性末端而形成重組DNA分子11．基因工程常用的受體細(xì)胞有①大腸桿菌②枯草桿菌③支原體④動(dòng)植物細(xì)胞A．①②③④ B．①②③C．②③④ D．①②④12．用DNA探針檢測飲用水中病毒的具體方法是A．與被檢測病毒的DNA堿基序列進(jìn)行比較B．與被檢測病毒的DNA堿基序列進(jìn)行組合C．與被檢測病毒的DNA堿基序列進(jìn)行雜交D．A、B、C三種方法均可13．1976年，美國的H.Boyer教授首次將人的生長抑制素釋放因子的基因轉(zhuǎn)移到大腸桿菌，并獲得表達(dá)，此文中的“表達(dá)”是指該基因在大腸桿菌()A．能進(jìn)行DNA復(fù)制B.能傳遞給細(xì)菌后代C.能合成生長抑制素釋放因子D.能合成人的生長素14．在遺傳工程技術(shù)中，限制性內(nèi)切酶主要用于（）A．目的基因的提取和導(dǎo)入B．目的基因的導(dǎo)入和檢測C．目的基因與運(yùn)載體結(jié)合和導(dǎo)入D．目的基因的提取和與運(yùn)載體結(jié)合15、（05廣東）以下有關(guān)基因工程的敘述，正確的是A.基因工程是細(xì)胞水平上的生物工程B．基因工程的產(chǎn)物對(duì)人類全部是有益的C．基因工程產(chǎn)生的變異屬于人工誘變D．基因工程育種的優(yōu)點(diǎn)之一是目的性強(qiáng)16．（多選）一個(gè)基因表達(dá)載體的構(gòu)建應(yīng)包括（）A．目的基因B．啟動(dòng)子C．終止子D．標(biāo)記基因創(chuàng)新應(yīng)用訓(xùn)練1、在藥品生產(chǎn)中，有些藥品如干擾素，白細(xì)胞介素，凝血因子等，以前主要是從生物體的組織、細(xì)胞或血液中提取的，由于受原料來源限制，價(jià)價(jià)十分昂貴，而且產(chǎn)量低，臨床供應(yīng)明顯不足。自70年代遺傳工程發(fā)展起來以后，人們逐步地在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了相應(yīng)的目的基因，使之與質(zhì)粒形成重組DNA，并以重組DNA引入大腸桿菌，最后利用這些工程菌，可以高效率地生產(chǎn)出上述各種高質(zhì)量低成本的藥品，請分析回答：（1）在基因工程中，質(zhì)粒是一種最常用的，它廣泛地存在于細(xì)菌細(xì)胞中，是一種很小的環(huán)狀分子。（2）在用目的基因與質(zhì)粒形成重組DNA過程中，一般要用到的工具酶是和。（3）將含有“某激素基因”的質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞后，能在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)直接合成“某激素”，則該激素在細(xì)菌體內(nèi)的合成包括和兩個(gè)階段。（4）在將質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌時(shí)，一般要用處理細(xì)菌，以增大。2、下圖是將人類的生長激素基因?qū)爰?xì)菌B細(xì)胞內(nèi)制造“工程菌”的示意圖，所用的載體為質(zhì)粒A。已知細(xì)菌B細(xì)胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌B后，其上的基因能得到表達(dá)。請回答下列問題：（注：質(zhì)粒中的a點(diǎn)即是四環(huán)素抗性基因的存在位置，又是與目的基因的結(jié)合點(diǎn)；斜線部分為抗氨芐青霉素基因）（1）人工合成目的基因的途徑一般有哪兩條？（2）如何將目的基因和質(zhì)粒結(jié)合成重組質(zhì)粒？（3）目前把重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞時(shí)，效率還不高，導(dǎo)入完成后得到的細(xì)菌，實(shí)際上有的根本沒有導(dǎo)入質(zhì)粒，有的導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A，只有極少數(shù)導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒。可通過以下步驟鑒別得到的細(xì)菌是否導(dǎo)入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒；將得到的細(xì)菌涂布在一個(gè)含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導(dǎo)入了質(zhì)粒A和重組質(zhì)粒的細(xì)菌，反之則沒導(dǎo)入。使用這種方法鑒別的原因是什么？（4）若把通過鑒定證明導(dǎo)入了普通質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的細(xì)菌放在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，發(fā)生的現(xiàn)象是什么？（5）導(dǎo)入細(xì)菌B細(xì)胞的目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是什么？３、科學(xué)家通過基因工程培育抗蟲棉時(shí)，需要從蘇云金芽孢桿菌中提取出抗蟲基因，“放入”棉花的細(xì)胞中與棉花的DNA結(jié)合起來并發(fā)揮作用，請回答下列有關(guān)問題：

（1）從蘇云金芽孢桿菌中切割抗蟲基因所用的工具是，此工具主要存在于中，其特點(diǎn)是。

（2）蘇云金芽孢稈菌一個(gè)DNA分子上有許多基因，獲得抗蟲基因常采用的方法是“鳥槍法”。具體做法是：用酶將蘇云金芽孢桿菌的切成許多片段，然后將這些片段，再通過

轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，讓它們在各個(gè)受體細(xì)胞中大量，從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法把分離出來。

（3）進(jìn)行基因操作一般要經(jīng)過的四個(gè)步驟是、、、?；A(chǔ)試題訓(xùn)練1、A2、C3、C4、C5、A6、D7、D8、D9、C10、D11、【解析】基因工程常用的受體細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞。答案：D12、【解析】用DNA探針檢測飲水中病毒的具體方法是使用一個(gè)特定的DNA片段制成探針，與被檢測的病毒DNA雜交，從而檢測出飲用水中病毒來。答案：C13、C14、Ｄ15、Ｄ１６、ＡＢＣＤ【答案】創(chuàng)新應(yīng)用訓(xùn)練1、（1）基因的運(yùn)載體DNA（2）限制性內(nèi)切酶DNA連接酶（3）轉(zhuǎn)錄翻譯（4）氯化鈣細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性2、【解析】此題是對(duì)基因操作“四步曲”比較全面的考查，而且注意聯(lián)系實(shí)際。（1）據(jù)課本內(nèi)容知人工合成基因的兩條途徑是：①將從細(xì)胞中提取分離出的目的基因作為模板，轉(zhuǎn)錄成mRNA單鏈DNA雙鏈DNA；②據(jù)蛋白質(zhì)中氨基酸序列mRNA中堿基序列DNA堿基序列目的基因。（2）將目的基因和質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒的過程是：