過氧化氫酶（CAT）活性檢測試劑盒說明書- 微量法UPLC-MS-4533

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁過氧化氫酶（CAT）活性檢測試劑盒說明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。貨號：UPLC-MS-4533規(guī)格：100T/96S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體110mL×1瓶4℃保存試劑一液體30mL×1瓶4℃保存試劑二液體110μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、試劑二：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中，使用前需先離心。2、檢測工作液的配制：96UV25μL5mL（115mL空瓶）。25μL6.5mL試劑一，充分混勻，作為工作液（34T），現(xiàn)用現(xiàn)配；也可根據(jù)樣本量按比例配制（115mL空瓶）。產(chǎn)品說明：CAT(EC)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。H2O2240nm240nmCAT活性。注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備：a5001mL超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（200W3s10s30次8000g4℃10mn，取上清，置冰上待測。b、組織：按照組織質(zhì)量（g）：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測。2、血清（漿）樣本：直接檢測。二、測定步驟1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至240nm，蒸餾水調(diào)零。2、測定前將CAT檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。39610μL190μL240nmA1和1min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA=A1-A2。三、CAT活性計算用微量石英比色皿測定的計算公式如下1、血清（漿）CAT活力的計算：mL血清（漿）1μmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。CAT(U/mL)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×106]÷V樣÷T=459×ΔA2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計算：按樣本蛋白濃度計算：mg1μmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。CAT(U/mgprot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V樣)÷T=459×ΔA÷Cpr按樣本質(zhì)量計算：單位的定義：每g組織每分鐘催化1μmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。CAT(U/g質(zhì)量)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×106]÷（V樣÷V樣總×W）÷T=459×ΔA÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算：11μmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。CAT(U/104cell)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×106]÷（V樣÷V樣總×500）÷T=0.917×ΔAV反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，43.6L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01mL；V萬；106：單位換算系數(shù)，1mol=106μmol。用96孔板測定的計算公式如下1、血清（漿）CAT活力的計算：單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。CAT(U/mL)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×106]÷V樣÷T=764.5×ΔA2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計算：按樣本蛋白濃度計算：mg1μmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。CAT(U/mgprot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V樣)÷T=764.5×ΔA÷Cpr按樣本質(zhì)量計算：g1μmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。CAT(U/g質(zhì)量)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×106]÷（V樣÷V樣總×W）÷T=764.5×ΔA÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算：單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。CAT(U/104cell)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×106]÷（V樣÷V樣總×500）÷T=1.529×ΔAV2×10-4L；ε