葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性檢測試劑盒說明書-可見分光光度法UPLC-MS-4189

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4189規(guī)格：50T/24S

可見分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體40mL×1瓶4℃保存試劑一液體12mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×2瓶4℃保存試劑三粉劑×1瓶4℃保存試劑四粉劑×1瓶4℃保存試劑五液體8mL×1瓶4℃保存標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×1支4℃保存溶液的配制：18mL蒸餾水溶解備用。28mL蒸餾水溶解備用。310μmol/mL160.625μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。45mL-20℃5、定磷試劑的配制：按H2O:試劑三:試劑四:試劑五（V:V:V:V）=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。產(chǎn)品說明：葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC）是一種水解磷酸化合物的磷酸酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和細(xì)胞中，是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和無機(jī)磷，利用鉬藍(lán)法測定無機(jī)磷含量的增加，即可反映G6P活性。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)、低溫臺式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提?。╩L500~10001（5001mL提取液（20200W3s10s30次；8000g4℃10min，取上清，置冰上待測。2（g提取液體積(L)15~10（0.1g1mL提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃10min，取上清，置冰上待測。3、血清（漿）樣本：直接檢測。二、測定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至660nm，蒸餾水調(diào)零。2、操作表：在1.5mlEP管中進(jìn)行下列操作：測定管對照管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本（μL）4040工作液（μL）160哺乳動物或者25℃（其他物種應(yīng)10min10min工作液（μL）-16010000rpm常溫離心10min后取上清。上清液（μL）100100--標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL）--100-定磷試劑（μL）500500500500蒸餾水（μL）400400400500充分混勻，40℃10min660nmAAAAΔA=A測定管-A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。三、G6P活性計(jì)算1、血清（漿）G6P活力計(jì)算單位定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1nmol無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活力單位。G6P（U/mL）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×1000×V酶促÷V樣本÷T=312.5×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中G6P活力計(jì)算按樣本蛋白濃度計(jì)算：單位定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活力單位。G6P（U/mgprot）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×1000×V酶促÷（Cpr×V樣本）÷T=312.5×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算：單位定義：每g組織每分鐘生成1nmol無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活力單位。G6P（U/g質(zhì)量）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×1000×V酶促÷（W÷V提取×V樣本）÷T=312.5×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1nmol無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活力單位。G6P（U/104cell）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×1000×V酶促÷（500÷V提取×V樣本）÷T=0.625×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，0.625μmol/mL；V酶促：酶促反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.04mL；V細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬；1000：單位換算系數(shù)，1μmol=1000nmol。注意事項(xiàng)：1、建議將樣本用提取液