糖原磷酸化酶 b (GPb)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)- 微量法UPLC-MS-4184

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)糖原磷酸化酶b(GPb)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)貨號(hào)：UPLC-MS-4184規(guī)格：100T/48S產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。

微量法試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體20mL×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×1支2-8℃保存試劑三粉劑×1支2-8℃保存試劑四粉劑×1支-20℃保存試劑五粉劑×2支-20℃保存試劑六粉劑×2支-20℃保存試劑七粉劑×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、試劑二：臨用前加入0.5mL蒸餾水，充分混勻；2、試劑三：臨用前加入0.5mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；3、試劑四：臨用前加入1.25mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；41mL-20℃4100T51mL-20℃4100T6、試劑七：臨用前加入2mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；7、工作液的配制：臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需用量，按照試劑一：試劑二：試劑三：試劑四=148μL:4μL:4μL:4μL（1T的量）的比例，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說(shuō)明：糖原磷酸化酶是糖原分解代謝中的關(guān)鍵酶，催化糖原的磷酸化反應(yīng)。該酶分為有活性的糖原磷酸化酶a（Glycogenphosphorylasea,GPa）b（Glycogenphosphorylaseb,GPb）aa1-6-NADPNADPH，340nm下測(cè)定NADPH上升速率，即可反映糖原磷酸化酶a活性。添加激活劑測(cè)定GP（GPa和GPb）GPa活性，GP活性-GPa活性得到GPb在340nm下測(cè)定NADPH上升速率，即可反映糖原磷酸化酶a活性。Glycogen

Gpa(withoutactivator)(Gpa+Gpb)(addactivator)

Glucose1-Phosphate

Phosphoglucomutase

Glucose6-PhosphateGlucose6-Phosphate

G6PDHNADP+

6-Phosphogluconolactone+NADPH(340nm)2-3紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、研缽/勻漿器、電子天平、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1（g）(mL)︰5~100.1g1mL提取液）8000g，4℃10min2漿35001mL200W3s10s30次。8000g，4℃10min二、測(cè)定步驟1、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。2、工作液置于37℃預(yù)熱5min。3、GPa活性:在石英比色皿或96孔UV板中依次加入10μL樣本、10μL試劑五、10μL試劑六、10μL蒸餾水、160μL10s340nm10sA1，37℃10min（3100s時(shí)吸光值A(chǔ)A1。4GP:96UV10μL樣本、10μL10μL10μL試劑七、160μL10s340nm10sA3，37℃10min（310n0s時(shí)吸光值4A3。三、糖原磷酸化酶b(GPb)活性計(jì)算單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。GPb（U/mgprot）＝[(ΔAGP-ΔAGPa)×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)÷Cpr單位定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。GPb（U/g質(zhì)量）＝[(ΔAGP-ΔAGPa)×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)÷W單位定義：每mL液體每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位GPa（U/mL）=[(ΔAGP-ΔAGPa)×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個(gè)酶活力單位。GPa（U/104cell）=[(ΔAGP-ΔAGPa)×V反總÷(ε×d)×109]÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)÷細(xì)胞數(shù)量V2×10-4L；ε：NADPH6.22×103L/mol/cm；d1cm；V0.01mL；V1mL；T10min；Cprg109：1mol=109nmol。96將上述公式中的d