土壤淀粉酶（S-AL）活性檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4039

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁土壤淀粉酶（S-AL）活性檢測試劑盒說明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。貨號：UPLC-MS-4039規(guī)格：100T/48S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一液體10mL×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×1瓶2-8℃保存試劑三液體20mL×1瓶2-8℃保存標準品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制：115mL2-8℃保存一周。2、標準品：10mg麥芽糖。臨用前加入1.38mL蒸餾水配制成20μmol/mL的儲備液，2-8℃保存兩周。產(chǎn)品說明：淀粉酶（EC）是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉酶主要來自于微生物，是一種重要的酶制劑，廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。淀粉酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖，可與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在540nm處有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。

3,5-DinitrosalicylicAcidSucrose

ReducingSugare 3-Amino-5-Nitrosalicylicacid(540nm)2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：天平、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、30~50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）。操作步驟：一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。二、測定步驟分光光度計/酶標儀預熱30min，波長調(diào)至540nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。將20μmol/mL的麥芽糖儲備液用蒸餾水稀釋為2、1、0.8、0.6、0.4μmol/mL的標準溶液備用。標準品濃度稀釋表序號稀釋前濃度（μmol/mL）標準液體積（μL）蒸餾水體積（μL）稀釋后濃度（μmol/mL）1201009002225005001314001000.8413002000.6512003000.4備注：實驗中每個標準管需60μL標準溶液。操作表：試劑名稱測定管對照管標準管空白管土樣（g）0.050.05--甲苯（μL）1010--蒸餾水（μL）-100試劑一（μL）100100--試劑二（μL）100充分震蕩混勻，37℃水浴或37℃恒溫箱培養(yǎng)24h，之后12000rpm，常溫離心10min，取上清。--上清液（μL）6060--蒸餾水（μL）60標準溶液（μL）--60-試劑三（μL）140140140140充分混勻，沸水浴10min，置于冰上冷卻，于微量玻璃比色皿/96孔板中測定540nm處的吸光值，分別A測定管、A對照管、AA空白管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。（1-2次）三、土壤淀粉酶活力的計算1、標準曲線的繪制：根據(jù)標準管的濃度（x，μmol/L）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，μmol/L）2、酶活的計算：單位的定義：每天每g土樣產(chǎn)生1μmol還原糖定義為一個土壤淀粉酶活力。S-AL（U/g土樣）=x×V反總÷W÷T=0.21×x÷WV反總：酶促反應(yīng)總體積，0.21mL；W：土樣質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，1d。注意事項：1、當ΔA大于1.5時，建議將上清液稀釋后再進行測定，注意在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。2、