精細(xì)化學(xué)品分析實驗

本文格式為Word版，下載可任意編輯——精細(xì)化學(xué)品分析實驗精細(xì)化學(xué)品分析測驗測驗薄層色譜-染料的分開和鑒別一、測驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)薄層板的制備方法和操作技術(shù)。

二、測驗原理1．吸附薄層色譜的原理及作用吸附薄層色譜的作用原理與吸附柱色譜一致，其識別在于吸附薄層色譜所用吸附的粒度較細(xì)小，且不是裝在柱中，而是被平勻地涂布于玻璃板、塑料板或金屬箔。形成確定厚度的薄層。被分開的樣品制成溶液用毛細(xì)管點(diǎn)在薄層上靠近一端處，作為滾動相的溶劑（稱為開展劑）那么靠毛細(xì)作用從點(diǎn)有樣品的一端向另一端運(yùn)動并帶動樣點(diǎn)前進(jìn)。經(jīng)過反復(fù)屢屢才吸附和溶解競爭后，受吸附力較弱而溶解度較大的組分將行進(jìn)較長的路程。反之，吸附較強(qiáng)或溶解度較小的組分那么行程較短、從而使各組分間拉開距離。用刮刀分別刮下各組分的色點(diǎn)（或色帶），各自以溶劑萃取。再蒸去溶劑后即得各組分的純品。

吸附薄層色譜可用于少量（一般為0.5g以下）物質(zhì)的分開，但更多應(yīng)用于化合物的鑒定和其他分開手段的效果檢測。

作為檢測手段的理論依據(jù)是同種分子在極性、溶解度、分子大小和外形等方面完全一致，因而在薄層色譜中隨開展劑爬升的高度亦應(yīng)一致；

不同種分子在這諸方面中總會有一些輕微的區(qū)別，因而其爬升高度不會完全一致。假設(shè)將用其他分開手段所得的某一個組分在薄層板上點(diǎn)樣開展后仍為一個點(diǎn)，那么說明該組分為同種分子。

即原來的分開方法達(dá)成了預(yù)期效果：假設(shè)開展后變成了幾個斑點(diǎn)，那么說明該組分中仍有數(shù)種分子，即原分開手段未達(dá)成頂期效果。

吸附薄層色譜作為化合物鑒定的手段，其理論依據(jù)是每種化合物都有自己特定比移值。比移值也叫Rf值，是在薄層色譜中化合物樣點(diǎn)移動的距離與開展劑前沿移動距離的比值，即例如，在下圖所示的薄層板上，（b）中由A、B兩種化合物組成的混合溶液被點(diǎn)在起始線上，用開展劑開展后，開展劑前沿爬升的高度為10，化合物A爬升高度為7，那么化合物A的Rf值是0.7。同理，化合物B的Rf值是0.4。

影響Rf值的因素好多，包括吸附劑的種類、活性等級、粒度、開展劑、溫度等。因此即使同一化合物要在不同薄層板上重現(xiàn)統(tǒng)一Rf值很困難，因此僅憑Rf值來鑒定未知化合物是不成取的、還是理應(yīng)用已知化合物在同一塊薄層板上點(diǎn)樣作對照對比穩(wěn)當(dāng)。如上圖（C）所示，可以認(rèn)為D和E為同一化合物，C那么與D和E不同。

薄層色譜吸附劑常見的有硅膠和氧化鋁兩類。薄層色譜用的硅膠分為：“硅膠H—不含膠勁劑；

‘硅膠G’一含煅石膏膠黏劑；

“硅膠HF254”一含熒光物質(zhì)（可用于波長為254nm紫外光下查看熒光）；

“硅膠GF254”一既含煅石膏又含熒光劑等類型。

與硅膠好像，氧化鋁也因含黏合劑或含熒光劑而分為氧化鋁G、氧化鋁HF254、氧化鋁GF2542．薄層色譜的用途在測驗室中，薄層色譜主要用于以下幾種目的。

①作為柱色譜的先導(dǎo)。一般說來，使用某種固定相和滾動相可以在柱中分開的混合物，使用同種固定相和滾動相也可以在薄層板上分開開。所以常利用薄層色譜為柱色譜選擇吸附劑和淋洗劑。

②監(jiān)控回響進(jìn)程。在回響過程中定時取樣，將原料和回響混合物分別點(diǎn)在同一塊薄層板上，開展后查看樣點(diǎn)的相對濃度變化。若只有原料點(diǎn)，那么說明回響沒有舉行；

若原料點(diǎn)很快變淡，產(chǎn)物點(diǎn)很快變濃，那么說明回響在急速舉行。若原料點(diǎn)根本消散，產(chǎn)物點(diǎn)變得很濃，那么說明回響根本完成。

③檢測其他分開純化過程。在柱色譜、結(jié)晶、萃取等分開純化過程中，將分開出來的組分或純化所得的產(chǎn)物溶樣點(diǎn)板，開展后假設(shè)只有一個點(diǎn)，那么說明已經(jīng)完全分開開了或已經(jīng)純化好了；

若開展后仍有兩個或多個斑點(diǎn)，那么說明分開純化尚未達(dá)成預(yù)期的效果。

④確定混合物中的組分?jǐn)?shù)目。一般說來，混合物溶液點(diǎn)樣開展后展現(xiàn)幾個樣點(diǎn)，就說明混合物中有幾個組分。

⑤確定兩個或多個樣品是否為同一物質(zhì)。將各樣品點(diǎn)在同一塊薄層板上開展后若各樣點(diǎn)上升的高度一致，那么大體上可以認(rèn)定為同一物質(zhì)，若上升高度不同那么斷定不是同一物質(zhì)。

⑥根據(jù)薄層板上各組分斑點(diǎn)的相對濃度可粗略地判斷各組分的相對含量。

⑦急速分開出少量純真樣品。為了盡快從回響混合物中分開出少量純真樣品做分析測試，可擴(kuò)大薄層板的面積，加大薄層的厚度，并將混合物樣液點(diǎn)成一條直線，一次可分開出幾十毫克到約五百毫克的樣品。

本測驗以硅膠作為固定相，以乙酸乙酯一甲醇一水為滾動相。未知染料混合樣和染料標(biāo)準(zhǔn)樣分別點(diǎn)在薄層板上，用滾動相加以開展。染料色點(diǎn)可直接查看到無需舉行顯色處理。

染料組分可通過對比薄層板上各色點(diǎn)的位置或通過Rf值的測定舉行鑒別。

三、儀器和試劑250mL廣口瓶；

載玻片。燒杯；

玻璃棒；

烘箱；

毛細(xì)管；

鉛筆；

直尺：濾紙。

羅丹明B、孔雀綠、品紅等染料的乙醇溶液（1％左右）；

乙酸乙酯；

甲醇；

去離子水：青島硅膠H60；

數(shù)甲基纖維素鈉CMC-Na四、測驗步驟1．薄層極的制備（1）取一400mL燒杯，參與250mL去離子水，再參與1.5gCMC-Na，放在煤氣燈上小火加熱，并用玻璃棒攪拌直至羧甲基纖維素鈉溶解，放在一旁靜置，冷卻待用。

（2）取載玻片10塊，用洗滌劑洗滌明凈，標(biāo)準(zhǔn)是水能夠在上面形成平勻薄膜。然后用紙擦凈外觀待用。

（3）稱取硅膠H6010g置于100mL燒杯中，參與CMC澄清液，邊加邊磨，參與CMC溶液至提起玻璃棒時，殘留液剛好是一滴一滴的而不是線狀流下。

（4）將所得稠狀物用藥勺倒在載玻片上，然后振動使其平勻鋪平，留神硅膠量不必太多，否那么鋪出來的硅膠板太厚，在層折時速度慢，而且效果變差、平放使其自然瓊干。

（5）將晾干的硅膠板提防放在一搪瓷托盤內(nèi)，置于烘箱中經(jīng)105℃活化30min。

（6）用紗手套將托盤從烘箱內(nèi)取出，降溫至50℃后轉(zhuǎn)移到枯燥器內(nèi)待用。

2、點(diǎn)樣用毛細(xì)管在薄層板離底邊1cm處點(diǎn)加各染料標(biāo)準(zhǔn)液和未知試樣液。色點(diǎn)之間與色點(diǎn)到板邊距離1cm。留神：點(diǎn)樣量宜少。

3、開展（1）在一100mL錐形瓶內(nèi)參與39mL乙酸乙酯、10mL甲醇和lmL水，晃動混合平勻得到開展劑。

（2）取一個250mL的廣口瓶，在廣口瓶底部放上一個比內(nèi)腔直徑略小的圓濾紙。

（3）把配好的開展劑倒入廣口瓶中，留神廣口瓶底部液層厚度應(yīng)在0.5～0.8cm左右。蓋上瓶蓋，放置5～10min以保證瓶內(nèi)平勻地被開展劑蒸氣所飽和。

（4）把點(diǎn)過樣的薄層板斜放入廣口瓶中，略微傾斜靠在瓶壁上，盡快蓋上頂?shù)组_展劑自下而上平勻上升。

（5）待開展劑前沿到達(dá)離板頂端約1cm處，取出薄層板，用鉛筆在溶劑前沿處做一標(biāo)記。

16）用電吹風(fēng)機(jī)將薄層板上的溶劑吹干。

17）測量各染料樣點(diǎn)移動的距離與開展劑前沿移動距離。

I（8）根據(jù)各染料樣點(diǎn)移動的距離與開展劑前沿移動距離的比值測量并對比各染料色斑和未知樣的Rf值，定出未知樣的組成。

五、測驗裝置六、測驗留神事項1．CMC-Na濃度在5‰～6‰為宜，太稀了硅膠層強(qiáng)度較差，輕易掉粉。

2．硅膠與CMC-Na混合要平勻，留神混合物內(nèi)不要有包裹干硅膠的顆粒存在。3．硅膠與CMC-Na混合以稠狀物能沿玻璃棒細(xì)直線往下流為宜，假設(shè)以滴狀往下流那么大稀，應(yīng)加硅膠。假設(shè)太稠不往下流那么應(yīng)加水稀釋。

4．硅膠鋪在載玻片硅膠層厚度要適中，太厚輕易使硅膠板中間高兩邊低；

太薄那么輕易引起邊沿高，中間低，兩種處境都會影響使用效果。

七、斟酌題1．制備薄層板是參與羧甲基纖維素鈉的作用是什么？假設(shè)不加會展現(xiàn)什么處境？2．點(diǎn)樣的濃度太濃時在開展的過程中會展現(xiàn)什么處境？3．薄層色譜板為何要舉行“活化”？4．開展前層析缸內(nèi)空間為什么要用溶劑蒸氣預(yù)先舉行飽和？測驗醋酸甲酯、環(huán)己烷、甲醇等混合樣品的色譜測定一、[目的要求]1、進(jìn)一步掌管色譜定量分析的原理2、了解校正因子的含義，用途和測定方法3、學(xué)會面積歸一化定量方法二、[根本原理]色譜定量分析的依據(jù)是，在確定條件下，被測物質(zhì)的重量w與檢測器的響應(yīng)值成正比，即：

Ai:被測組分的峰面積；

hi:被測組分的峰高；

Fi:比例常數(shù)（以峰面積表示時）

Fih:比例常數(shù)（以峰高表示時）

所以定量時需要：

（1）切實測量響應(yīng)信號A或h。

A或h是最根本的定量數(shù)據(jù)，h可以直接測得，A和其他參數(shù)計算求得。

如：A=1.065hW1/2（2）切實求得校正因子F響應(yīng)值除正比于組分含量外，與樣品的性質(zhì)也有關(guān)，即在一致的條件下，數(shù)量相等的不同物質(zhì)產(chǎn)生的信號的大小可能不同。因此，在舉行定量分析時需加以校正。

由前述可知：

即單位峰面積所代表的樣品重量，由于受操作條件影響較大，F(xiàn)的測定較困難。所以在實際操作中都采用相對校正因子f′。f′為組分i和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)s的十足校正因子之比：

Wi、Ws分別為待測物和標(biāo)準(zhǔn)物之重量；

As、Ai分別為待測物和標(biāo)準(zhǔn)物之峰面積。f′與檢測器類型有關(guān)，而與檢測器布局特性及操作條件無關(guān)。

因物質(zhì)的量可以用重量或摩爾表示，故：

其中Mi，Ms——分別為待測物和標(biāo)準(zhǔn)物的分子量f′、f可以從文獻(xiàn)查得，亦可直接測量。切實稱量確定重量的待測物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，混勻后進(jìn)樣，分別測得峰面積，即可求其校正因子。

（3）選擇適合的定量方法常用的定量方法有好多種，本測驗采用歸一法。

歸一法就是分別求出樣品中全體組分的峰面積和校正因子，然后依次求各組分的百分含量。

歸一法優(yōu)點(diǎn)：干脆；

進(jìn)樣量無需切實；

條件變化時對結(jié)果影響不大。

缺點(diǎn)：混合物中全體組分務(wù)必全出峰；

務(wù)必測出全體峰面積。

[儀器試劑]氣相色譜儀（附TCD、FID）；

微量注射器：1μL、5μL；

三組分混合樣：甲醇，醋酸甲酯，環(huán)己烷[色譜條件]色譜柱：GDX-102(60—80目)。

溫度：Tc——100-120℃；

TD——150℃；

Ti——150℃載氣：H245mL/min三、[測驗步驟]按上述條件開機(jī)調(diào)試，待儀器穩(wěn)定后依次舉行。

1、定性分析（1）調(diào)記錄紙速為5cm/min，用1μL注射器進(jìn)分別進(jìn)甲醇，醋酸甲酯，環(huán)己烷0.1μL，記錄色譜圖，切實測量各峰的留存時間（tR）。

（2）在一致條件下進(jìn)0.1μL—0.2μL三組分混合樣記錄色譜圖，切實測量各峰的留存時間（tR）。

2、測量校正因子于分析天平上切實稱取三標(biāo)準(zhǔn)試樣與同一小瓶中混勻，在設(shè)定的條件下進(jìn)樣0.1μL—0.2μL，記錄峰面積。

3、