生物工程下游技術(shù)復(fù)習(xí)題及解答

生物工程下游技術(shù)復(fù)習(xí)題及解答生物工程下游技術(shù)復(fù)習(xí)題及解答生物工程下游技術(shù)復(fù)習(xí)題及解答V:1.0精細(xì)整理，僅供參考生物工程下游技術(shù)復(fù)習(xí)題及解答日期：20xx年X月一、名詞解釋1、連續(xù)培養(yǎng)反應(yīng)器：不斷地往反應(yīng)器中加入營(yíng)養(yǎng)物，利用罐中的菌體增殖得到產(chǎn)物，并不斷采出。在良好的控制下，罐內(nèi)菌體的增殖速度可以與采出速度相同而達(dá)到穩(wěn)態(tài)。2、菌體比生長(zhǎng)速率（μ）：?jiǎn)挝粷舛染w在一定條件下引起的反應(yīng)速率,其值反映了培養(yǎng)菌體增長(zhǎng)的能力,受菌株及各種物理化學(xué)環(huán)境的影響.表示為μ=dx/x.dt3、得率系數(shù)：兩種物質(zhì)得失之間的計(jì)量比。Yx/s,Yp/s4、貼壁培養(yǎng):貼壁依賴性細(xì)胞在培養(yǎng)中要貼附于壁上才能迅速鋪展,開始有絲分裂并迅速進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,這種培養(yǎng)方式就叫貼壁培養(yǎng).多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)都采取這種方式.5、蛋白質(zhì)的復(fù)性：包含體蛋白質(zhì)溶解于變性劑溶液中，呈變性狀態(tài)，所有的氫鍵、疏水鍵全部被破壞，疏水側(cè)鏈完全暴露，但一級(jí)結(jié)構(gòu)和共價(jià)鍵不被破壞，當(dāng)除去變性劑后，一部分蛋白質(zhì)可以自動(dòng)折疊成具有活性的正確構(gòu)型，這一折疊過程稱為蛋白質(zhì)復(fù)性。6、濃差極化：指在分離過程中，料液中的溶劑在壓力驅(qū)動(dòng)下透過膜，溶質(zhì)被截留，于是在膜表面與臨近膜面區(qū)域濃度越來越高。在濃度梯度作用下，溶質(zhì)由膜面向本體溶液擴(kuò)散，形成邊界層，使流體阻力與局部滲透壓增加，從而導(dǎo)致溶劑透過量下降。溶劑向膜面流動(dòng)引起溶質(zhì)向膜面的流動(dòng)，這種流動(dòng)如果與濃度梯度所驅(qū)動(dòng)的溶質(zhì)向本體溶液擴(kuò)散的速度平衡時(shí)，在膜面附近就形成一個(gè)穩(wěn)定的濃度梯度區(qū)，這一區(qū)域就稱為濃度極化邊界層，這一現(xiàn)象稱為濃差極化。濃差極化是一個(gè)可逆的過程；7、膜污染：物料中的微粒、膠體粒子或溶質(zhì)大分子由于與膜存在物理化學(xué)相互作用或機(jī)械作用而引起的在膜表面或膜孔內(nèi)吸、沉積造成膜孔徑變小或堵塞，使膜產(chǎn)生透過流量與分離特性的不可逆變化的現(xiàn)象。8、排阻色譜（Sizeexclusionchromatography，SEC）：又稱凝膠色譜或凝膠滲透色譜，是利用被分離物質(zhì)分子量大小的不同和在填料上滲透程度的不同，以使組分分離。9、分配色譜：是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)不同，以使組分分離。其中一相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上，稱固定相；另一相為液體或氣體，稱流動(dòng)相。10、有效柱長(zhǎng)（有效遷移距離）：溶質(zhì)從開始遷移至其遷移速度等于流動(dòng)相速度時(shí)，溶質(zhì)在色譜柱上遷移的距離稱為有效遷移距離，也稱為有效柱長(zhǎng)。11、吸附等溫線：指在一定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面上進(jìn)行的吸附過程達(dá)到平衡時(shí)它們?cè)趦上嘀袧舛戎g的關(guān)系。12、切向流過濾：就是一種維持恒壓下高過濾速度的技術(shù)，其原理就是：使懸浮液在過濾介質(zhì)表面作切向流動(dòng)，利用液體的剪切作用將介質(zhì)表面的固體移走，當(dāng)移走固體與固體沉積速率相同時(shí)，過濾速度就保持恒定，控制不同的切向流速度就可以得到不同的過濾速度。（實(shí)際是維持了Ｒc).目前幾乎所有的膜固液分離都采用切向流方式13、包含體:存在于基因工程細(xì)胞中，主要由蛋白質(zhì)構(gòu)成，其中大部分是克隆表達(dá)的產(chǎn)物，一級(jí)結(jié)構(gòu)正確，立體結(jié)構(gòu)錯(cuò)誤，沒生物學(xué)活性。難溶于水，只有在變性劑溶液中才能溶解。15、雙水相萃?。豪帽惶崛∥镌诙嘀械姆峙洳煌鴮?shí)現(xiàn)分離的目的；由于蛋白質(zhì)在有機(jī)相中容易失活，因此采用的二相均為親水相，如PEG/葡聚糖、ＰＥＧ／無機(jī)鹽等，稱為雙水相，兩相密度不同，輕相富含一種高分子，重相可能富含另一高分子，細(xì)胞碎片和蛋白質(zhì)在二相間的分配系數(shù)不同，從而實(shí)現(xiàn)分離的目的。16、反滲透：在高于溶液滲透壓的壓力作用下，只有溶液中的水透過膜，而所有溶液中的大分子、小分子有機(jī)物及無機(jī)鹽全被截留。理想的反滲透膜應(yīng)被認(rèn)為是無孔的，它分離的原理是溶解擴(kuò)散（或毛細(xì)孔流學(xué)說）。17、分配系數(shù)一定溫度下，組分在兩相間分配達(dá)到平衡時(shí)的濃度（單位：g/mL）比，稱為分配系數(shù)，用K表示18、色譜曲線基線：無試樣通過檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)到的信號(hào)即為基線。19、保留時(shí)間（tR）：組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需的時(shí)間。20、死時(shí)間（tM）：不與固定相作用的氣體（如空氣）的保留時(shí)間。調(diào)整保留時(shí)間（tR＇）：tR＇=tR－tM21、容量因子k：平衡時(shí)，組分在各相中總的質(zhì)量比23、排阻色譜：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。24、親和色譜：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進(jìn)行選擇性分離。25、正相色譜法：親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，極性柱也稱正相柱。26、反相色譜：若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，非極性柱也稱為反相柱。27、非線性色譜:Cm與Cs不存在線性關(guān)系的色譜.28、吸附等溫線：一定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面上進(jìn)行的吸附過程達(dá)到平衡時(shí)它們?cè)趦上嘀袧舛戎g的關(guān)系。29、全交換容量:每克干介質(zhì)或每毫升濕介質(zhì)具有的功能基含量.是一個(gè)定值.30、工作容量:每克干介質(zhì)或每毫升濕介質(zhì)在一定的操作條件下的交換吸附蛋白質(zhì)的實(shí)際容量.是一個(gè)變值.31、疏水性色譜:填料表面具有弱疏水性,蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)與填料表面之間產(chǎn)生弱的疏水性相互作用.高濃度的鹽條件下,蛋白質(zhì)與疏水固定相的吸附能力高,隨著鹽濃度的下降,吸附能力下降.當(dāng)淋洗液離子強(qiáng)度逐漸降低時(shí),蛋白質(zhì)樣品按其疏水性的不同依次被洗脫.32、徑向流色譜技術(shù)：即樣品和流動(dòng)相沿徑向流動(dòng),可從色譜柱的周圍流向圓心,也可從圓心流向柱的周圍.通常采用從柱的周圍流向圓心的方式.33、泳動(dòng)度(遷移率):帶電質(zhì)點(diǎn)在單位強(qiáng)度電場(chǎng)下的泳動(dòng)速度即:U=V/E=(d/t)/(V/L)34、變性膠：膠電脈在蛋白質(zhì)變性的狀態(tài)下進(jìn)行，主要指SDS變性條件下進(jìn)生45、非變性膠：電泳在蛋白質(zhì)保持天然狀態(tài)下進(jìn)行，不加變性劑線性色譜:樣品的濃度流動(dòng)相中與固定相中之間是線性關(guān)系生物過程動(dòng)力學(xué):定量地描述過程的速率以及影響過程速率的諸多因素.包括細(xì)胞生長(zhǎng)速率、各種基質(zhì)消耗的速率、代謝產(chǎn)物的生成速率。懸浮培養(yǎng)：是指細(xì)胞在培養(yǎng)器中自由懸浮生長(zhǎng)的過程.主要用于非貼壁依賴性細(xì)胞培養(yǎng),如雜交瘤細(xì)胞等。固定化培養(yǎng)：利用吸附或包埋等固定化的方式將細(xì)胞限制在一定的空間內(nèi),然后以固定化的顆粒進(jìn)行懸浮培養(yǎng).該方法對(duì)貼壁性和非貼壁依賴性細(xì)胞都是適合的。膜分離技術(shù)：以半透膜為選擇障礙層，允許某些組分透過而保留混合物中的其他組分，從而達(dá)到分離目的的技術(shù)。離子交換法：通過帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換離子進(jìn)行交換而達(dá)到分離純化的方法。主要依賴電荷間的相互作用，利用帶電分子中電荷的微小差異而進(jìn)行分離。43、肽譜：指蛋白質(zhì)被酶解或化學(xué)降解后肽段的分離分析或制備。二、填空題1、超聲波破碎細(xì)胞的效率與聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度及細(xì)胞類型等因素有關(guān)。2、目前用于固液分離的膜過濾法主要有以下三種:微孔過濾(微濾)、超濾、反滲透。3、在生物工程下游技術(shù)領(lǐng)域，色譜和電泳是目前所知最好的兩種分離蛋白的方法。4、在生物物質(zhì)分離中，可以依據(jù)一次進(jìn)樣量多少，將色譜分為：分析色譜、半制備色譜（中等規(guī)模制備色譜）、制備色譜和工業(yè)生產(chǎn)規(guī)模色譜4大類。5、無論是什么類型的液相或氣相色譜,其色譜裝置均應(yīng)包括:流動(dòng)相供給、進(jìn)樣、色譜柱、檢測(cè)器等四大部分。6、在色譜過程中，有兩種將目標(biāo)產(chǎn)品從色譜柱上洗脫下來的方法：一種是維持流動(dòng)相熱力學(xué)參數(shù)不變的等梯度洗脫法，另一種叫梯度洗脫法。7、徑向色譜填料主要有：離子交換樹脂和親和色譜填料兩種。8、評(píng)價(jià)HPLC色譜填料性能的主要表征指標(biāo)包括：保留值，選擇性，柱效率，填充柱的總空隙度和穿透性，分離度。11、羥基磷灰石在原理上一般被認(rèn)為是一種無機(jī)基質(zhì)高效色譜。請(qǐng)列舉二種測(cè)量蛋白質(zhì)含量的方法：雙縮脲法，考馬斯藍(lán)法。12、常見的無機(jī)色譜填料主要包括：多孔硅膠、可控孔徑玻璃、氧化鋁、氧化鈦、羥基磷灰石以及碳和石墨等基質(zhì)。13、無機(jī)HPLC填料最常見的是以多孔大硅膠為基本材料的填料；含硼的Na2O-B2O3-SiO2系玻璃經(jīng)過熱處理引起相分離，生成可溶于酸的Na2O-B2O3相及不溶于酸的高硅相。將酸可溶相浸析出來后剩下的另一相就制成了可控孔徑玻璃，可控孔徑玻璃的主要化學(xué)成份就是SiO2。17、根據(jù)離子交換樹脂官能團(tuán)的性質(zhì)，將其分為（強(qiáng)酸型）、（弱酸型）、（強(qiáng)堿型）、（弱堿型）、（鰲合型）、（兩性）及（氧化還原）等7類。18．指出三種交聯(lián)葡聚糖的微載體：Cytodex1微載體；Cytodex2微載體；Cytodex3微載體19．指出蛋白質(zhì)復(fù)性的三種方法：稀釋法，透析法，液相色譜法等20．固液分離的主要方式包括：離心法，微孔膜過濾法，雙水相萃取，泡沫分離法。21．膜的孔徑一般為微米級(jí)，依據(jù)其孔徑的不同（或稱為截留分子量），可將膜分為微濾膜、超濾膜、納濾膜和反滲透膜22色譜的保留值可以用保留時(shí)間也可以用保留體積來表示。23．色譜的峰寬可以用半峰寬、峰底寬、標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。24．指出下列情況下色譜系統(tǒng)對(duì)容質(zhì)的柱效和分配系統(tǒng)差的關(guān)系：①柱效較高，△K較大,完全分離；②柱效較高，△K不是很大峰較窄，基本上完全分離；③柱效較低，△K較大,但分離的不好；④柱效低，△K小，分離效果更差。25．線性色譜的吸附等溫線是直線，非線性色譜的吸附等溫線的形狀常見的有：凸形、凹形、S形、H形、階梯形。從吸附等溫線的形狀可以預(yù)見色譜曲線的形狀，一般凸形的吸附等溫線代表色譜圖是拖尾的，凹形吸附等溫線代表的色譜圖是吐舌頭形狀、S形的色譜圖是波浪形的。27．ShephadexG100是一種凝膠排阻色譜，主要用于蛋白質(zhì)的純化。28．DEAE-ShaphdexA25是一種離子交換層析介質(zhì)。29．CM-纖維素是一種弱陽(yáng)離子交換介質(zhì)。30．離子交換層析一般是通過梯度一般采用兩種方法達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的。一種是增加洗脫液的離子強(qiáng)度，一種是改變洗脫液的pH值。31．QAE-葡聚糖是強(qiáng)堿陰離子交換劑，SP—是強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換劑。33．蛋白質(zhì)含量和純度測(cè)定方法。含量測(cè)定:克氏定氮法，TCA比濁度法、雙縮脲法、福林-酚法和紫外線法，考馬斯蘭法（Bradford法）。純度衡量:電泳法，層析法，質(zhì)譜法等。一般應(yīng)采用二種以上方法，而且同一原理的方法不應(yīng)該采用二次。細(xì)胞破碎法包括：機(jī)械力和非機(jī)械力破碎方法；機(jī)械方式又包括：液體剪切力和固體剪切力方法，液體剪切力包括：高壓勻漿法和超聲破碎法；固體剪切力包括：高速珠磨法和壓榨法。35．高壓勻漿法的主要困難包括：溫控和堵塞問題26．高壓勻漿法的破碎率決定于：勻漿閥的結(jié)構(gòu)，操作壓力，破碎次數(shù)。34．蛋白質(zhì)的分子量測(cè)定：超離心法、光散射方法、凝膠過濾法、SDS-PAG電泳法。三、判斷題3.絮凝劑須有長(zhǎng)鏈的線性結(jié)構(gòu)，越長(zhǎng)越好（×）。4.細(xì)胞壁破碎的主要阻力是連接細(xì)胞壁網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的共價(jià)鍵（√）6.離子交換的推動(dòng)力是離子濃度差。（√）9.凝膠過濾操作中，通常上樣量越小，分辨率越高?！?6.層析過程中,有效柱長(zhǎng)是隨層析條件的變化而變化的.∨17.層析過程中,可以通過改變洗脫劑的濃度變化梯度改變有效柱長(zhǎng)和最短柱長(zhǎng).∨23.HPLC填料的顆粒粒度的分布應(yīng)該是越小越好的，最好是能實(shí)現(xiàn)顆粒的單分散?！?8.葡聚糖凝膠排阻色譜中，上樣量越大，分辨率越高。×29.同一蛋白質(zhì)在不同種類的緩沖液中，只要緩沖液的pH值相同，則30.蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)量也相同?！?7.為了減小樣品在洗脫過程的軸向擴(kuò)散，可采取增大進(jìn)樣濃度減少進(jìn)樣量的方式?！?0.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)微戴體的密度應(yīng)略大于培養(yǎng)基?！?2.一般講，親水性膜及膜材料電荷與溶質(zhì)相同的膜較耐污染。∨43.色譜過程中試樣中的各組分具有不同的K值是分離的基礎(chǔ)。∨44.色譜過程一定溫度下，組分的分配系數(shù)K越大，出峰越慢?！?7.色譜柱效高說明該色譜對(duì)物質(zhì)的分離度高?！?1.分離度由色譜柱的柱效率和物質(zhì)間的分配系數(shù)的差異共同決定。∨53.在凝膠排阻層析中，流動(dòng)相的速度越慢越有利于色譜分離和分析。∨55.兩性的生物大分子所帶電荷的性質(zhì)和數(shù)量由其等電點(diǎn)及溶液環(huán)境(pH值)所決定?！?6.聚丙烯酰胺濃縮膠的原理包括其pH值=6.9為甘氨酸的等電點(diǎn)?！?9.樣品溶解不好容易造成拖尾?！?0.Monod常數(shù)隨菌體的濃度的變化而變化?！?1.Monod常數(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)過程中的一個(gè)對(duì)菌體性質(zhì)的特征性常數(shù)?！?2.色譜柱效可從峰寬得到，色譜峰越寬，柱效越低，峰寬相同，柱效相同?！?3.決定柱效的因素是分配系數(shù)?！?4.決定柱效的因素是容量因子。×66.可以說“A柱子的柱效高于B柱子?！?7.分配系數(shù)與柱效沒有關(guān)系。×68.容量因子與柱效有關(guān)系?！?9.柱效不能表示被分離組分的實(shí)際分離效果?！?0.用有效塔板數(shù)和有效塔板高度作為衡量柱效能的指標(biāo)時(shí)，應(yīng)指明測(cè)定物質(zhì)?！?2.發(fā)酵反應(yīng)器設(shè)計(jì)要求有盡量高的傳氧系數(shù)?！?3.生物放大器的常用控制方法是反饋調(diào)節(jié)?！?5.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就操作而言，深層培養(yǎng)可分為批式、流加式，半連續(xù)式、連續(xù)式和灌注式5種。∨80.明膠涂覆的多孔微載體適應(yīng)于一切的細(xì)胞系?！?6.產(chǎn)物提純過程包括初級(jí)分離階段和純化精制階段兩個(gè)階段。∨93．溶液pH對(duì)蛋白質(zhì)在水中溶解性，荷電性及構(gòu)型有很大影響。∨94.膜分離技術(shù)中清洗過程中主要考慮膜的化學(xué)特性和污染物的特性二個(gè)因素?！?6.氣液色譜的固定液在常溫下不一定為液體，但在使用溫度下一定呈液體狀態(tài)?！?8.用來衡量色譜峰寬度的參數(shù)有標(biāo)準(zhǔn)偏差()、半峰寬(Y1/2)和峰底寬(Wb)三種表示法。∨99.氣相色譜中容量因子越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)?！?00.離子交換色譜對(duì)于大分子和小分子的保留機(jī)理基本相同?！?01．示差折光檢測(cè)器是除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器，此檢測(cè)器靈敏度低、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫?！?02.液-固吸附色譜中非線形等溫吸附常引起峰的拖尾?！?04.非線性色譜基本理論包括吸附平衡熱力學(xué)、吸附平衡動(dòng)力學(xué)和色譜基本特料平衡方程。∨106.在非線性色譜中，峰高增加的速率隨濃度的增加而逐漸降低，因而峰高不能作為定量分析的指標(biāo)。×109.凝膠過濾中進(jìn)樣體積和樣品的濃度將明顯地影響蛋白質(zhì)的。∨110.膨化的凝膠可以直接高溫烘干?！?12.一般來說只要能溶解被洗脫物質(zhì)并不使其變性的緩沖液都可以用于凝膠層析。∨113.離子交換用的層析柱一般粗而短，不宜過長(zhǎng)?！?15.Superdax是葡聚糖與交聯(lián)瓊脂糖的結(jié)合，而Superose是珠狀瓊脂糖經(jīng)兩次交聯(lián)?！?16.反相色譜以硅膠基質(zhì)的鍵合相填料為主，特別是鍵合C18，C8烷基以及苯基填料?！?17.不同填料的化學(xué)結(jié)構(gòu)是通過對(duì)基質(zhì)材料的化學(xué)改性而實(shí)現(xiàn)的?！?18.疏水性相互作用色譜是為了適應(yīng)活性生物大分子特別是蛋白質(zhì)的分離而發(fā)展起來的種液相色譜方法。∨120.作為分離材料的硅膠，其顆粒的形狀與大小、孔的結(jié)構(gòu)、孔徑及其分布、總孔容、比表面積及機(jī)械強(qiáng)度等，均為重要的物理參數(shù)。∨121.硅膠的化學(xué)修飾大致可以三種不同的方式進(jìn)行，即整體修飾、通過表面硅羥基的化學(xué)修飾以及涂層法?！?22.物理吸附水的去除是硅膠衍生反應(yīng)中不可或缺的一步?！?23.硅膠一般有耐受高壓力,耐壓能力隨孔徑及孔度而下降。∨129.泳動(dòng)度(遷移率)只取決于帶電質(zhì)點(diǎn)的性質(zhì)。×131.丙烯酰胺濃度和交聯(lián)劑濃度決定膠的物理狀態(tài)及分子篩的孔徑的大小。∨132.電泳中緩沖液的種類,濃度和其他電解質(zhì)濃度影響蛋白質(zhì)所帶電荷的極性和數(shù)量,同時(shí)還影響蛋白質(zhì)分子間的相互作用?！?38.選擇具高選擇的填料可以克服徑向色譜直徑短的缺點(diǎn),發(fā)揮徑向色譜柱速度快,處理量大的優(yōu)點(diǎn)。∨四．單選題12.在理想狀態(tài)下,下列哪種色譜對(duì)二種物質(zhì)的分離度可以隨柱長(zhǎng)的延長(zhǎng)而無限增加:(A)凝膠排阻色譜;(B)離子交換色譜;(C)親和色譜;(D)分配色譜;17.聚合物型基質(zhì)材料中，下列哪種是應(yīng)用最為廣泛的：（A）交聯(lián)聚苯乙烯樹脂；18．對(duì)于硅膠而言，其表面的硅羥基是進(jìn)行化學(xué)修飾的基礎(chǔ)，硅膠表面的硅羥基的主要存在形式是：（A）硅三羥基；（B）硅二羥基；（C）鄰位硅羥基；（D）單硅羥基；19．不經(jīng)過化學(xué)修飾或改性的硅膠本身可以做為：（A）正相色譜填料；（B）反相色譜填料；（C）離子交換色譜填料；（D）親和色譜填料；29、目前細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的收率很低，不及總蛋白的1%，主要原因不包括：(A)血清蛋白質(zhì)的污染(B)細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物濃度低(C)產(chǎn)物在培養(yǎng)條件下不穩(wěn)定(D)分離技術(shù)限制30、生化分離用離子交換劑的特點(diǎn)不包括（A）粒徑小，分布均勻(B)疏水性(C)生物相容性(D)適當(dāng)?shù)碾姾擅芏?1、微囊化使一下哪個(gè)受到消極影響（A）抗剪切力（B）細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境（C）傳質(zhì)效率（D）產(chǎn)物濃度33、表征膜對(duì)某一大分子溶質(zhì)的截留能力的是：。A.孔道特征B.水通量C.截留率σD.截留分子量35、無機(jī)鹽對(duì)蛋白質(zhì)鹽析效果，下列選項(xiàng)錯(cuò)誤的是。A.檸檬酸鹽＞磷酸鹽＞硫酸鹽B.硫酸鹽＞醋酸鹽＞鹽酸鹽C.鹽酸鹽＜硝酸鹽＜硫氰酸鹽D.鹽酸鹽＞硝酸鹽＞硫氰酸鹽38、可測(cè)定蛋白質(zhì)亞基分子量以及未知蛋白質(zhì)分子量的電泳技術(shù)有。A.CEB.HPLCC.IEFD.SDS、可用于了解蛋白組成，蛋白分子和等電點(diǎn)的電泳技術(shù)是。A.凝膠電泳B.等電點(diǎn)聚焦電泳C.毛細(xì)管電泳D.雙向電泳41、強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂的功能基團(tuán)是。A.一SO3HB.一PO(OH)2C.－COOHD.－OH42、與離子交換樹脂的總交換容量有關(guān)的是。A.樹脂種類B.溶液的pHC.溶液的溶質(zhì)濃度D.溶液中溶質(zhì)的電荷數(shù)45、在采用離子交換技術(shù)時(shí)，對(duì)弱酸性樹脂pH應(yīng)選擇。A.pH＞pK產(chǎn)物＞pK樹脂B.pK產(chǎn)物＞pH＞pK樹脂C.pK產(chǎn)物＞pK樹脂＞pHD.pK樹脂＞pH＞pK物質(zhì)47、在低濃度下已吸附的被吸附分子又能吸附在液相中的分子，其吸附等溫表現(xiàn)為。A.凸形B.凹形C.S形D.階梯形49、當(dāng)溶質(zhì)濃度增加時(shí)，分子在固相表面逐漸吸附，趨于穩(wěn)定后被吸附的分子又吸附其他分子，其吸附等溫表現(xiàn)為。A.凸形B.凹形C.正S形D.反S形50、被吸附的分子在吸附劑表面隨液相中溶質(zhì)濃度的增加會(huì)發(fā)生吸附取向的變化或吸附狀態(tài)的改變，其吸附等溫表現(xiàn)為。A.凸形B.凹形C.S形D.階梯形51、在應(yīng)用吸附分離技術(shù)時(shí)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，吸附劑孔徑等于溶質(zhì)分子直徑的多少較適合。A.1倍B.2倍C.4倍D.6倍52、檢測(cè)蛋白質(zhì)是否變異的常用方法有。 A．肽譜B.HPLCC.等電聚焦D.毛細(xì)管電泳E.以上都對(duì)53、下列蛋白質(zhì)含量測(cè)定法，哪項(xiàng)靈敏度最高。A．凱氏定氮法B.考馬斯亮藍(lán)法C.Folin－酚試劑法D.紫外吸收法55、在有機(jī)相中添加下列哪項(xiàng)，將在表面活性劑總濃度不變的情況下可以提高反膠團(tuán)尺寸，增大反膠團(tuán)萃取的操作pH范圍。A.助溶劑B.帶溶劑C.稀釋劑D.助表面活性劑56、雙水相萃取技術(shù)與生物轉(zhuǎn)化過程結(jié)合，下列哪項(xiàng)不是其優(yōu)勢(shì)。A.消除產(chǎn)物反饋抑制B.細(xì)胞（酶）可循環(huán)使用C.生產(chǎn)能力、收率及分離效率高D.傳質(zhì)面積增大57、關(guān)于溫度對(duì)雙水相萃取的影響，下列說法正確的是。A.在臨界點(diǎn)附近，對(duì)蛋白質(zhì)分配系數(shù)影響較小B.遠(yuǎn)離臨界點(diǎn)時(shí)，對(duì)蛋白質(zhì)分配系數(shù)影響較大C.影響雙水相黏度和密度，從而影響蛋白質(zhì)的分配系數(shù)D.大規(guī)模的雙水相萃取操作需在冷卻狀態(tài)下進(jìn)行58、下列哪個(gè)組合不可能形成雙水相系統(tǒng)。A.PEG/DexB.PEG/InorganicsaltC.乙醇/硫酸鹽D.磷酸鹽/硫酸鹽59、在溶劑萃取中，在水相中加入無機(jī)鹽，下述哪項(xiàng)不是其目的。A.由于鹽析作用，使產(chǎn)物在水中的溶解度下降，而有利于轉(zhuǎn)入有機(jī)相B.增加兩相間密度差，減少有機(jī)溶劑和水之間的互溶度C.減輕乳化現(xiàn)象，使其容易分離D.沉淀雜質(zhì)60、萃取劑對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物和雜質(zhì)的分離能力可用下列哪項(xiàng)來表征。A.分離因素（β）B.萃取因素C.分配系數(shù)D.活度系數(shù)65、在GC和LC中,影響柱選擇性的不同的因素是A.固定相的種類；B.柱溫；C．流動(dòng)相的種類；D．分配比。66、在液相色譜中,某組分的保留值大小實(shí)際反映了哪些部分的分子間作用力？

A．組分與流動(dòng)相；B．組分與固定相；C．組分與流動(dòng)相和固定相；D．組分與組分。68、在液相色譜中，梯度洗脫最宜于分離：A．幾何異構(gòu)體；B．沸點(diǎn)相近，官能團(tuán)相同的試樣；

C．沸點(diǎn)相差大的試樣；D．分配比變化范圍寬的試樣。五、簡(jiǎn)答題1.高效液相色譜是如何實(shí)現(xiàn)高效、快速、靈敏的？

從氣相色譜的高效、高速和高靈敏度得到啟發(fā)，采用5-10μm微粒固定相以提高柱效，用高壓泵加快液體流動(dòng)相的流速；設(shè)計(jì)高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測(cè)器，提高檢測(cè)靈敏度，克服經(jīng)典液相色譜的缺點(diǎn)，從而達(dá)到高效、快速、靈敏。2.簡(jiǎn)述液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素，如何減少譜帶擴(kuò)寬，提高柱效？

因素:渦流擴(kuò)散、流動(dòng)相傳質(zhì)、停留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。減少填料顆粒直徑，減小填料孔穴深度，提高裝填的均勻性，采用低黏度溶劑作流動(dòng)相，流速盡可能低，同時(shí)要盡可能采用死體積較小的進(jìn)樣器、檢測(cè)器、接頭和傳輸管線等。3.色譜柱A柱長(zhǎng)為15cm，載體粒度為5μm。另一B柱長(zhǎng)為30cm，載體粒度為10μm。兩柱的柱效相等嗎？

∵l=L/dp

∴l(xiāng)A=15/0.0005=30000

lB=30/0.0010=30000A柱的折合柱長(zhǎng)為30000，B柱的折合柱長(zhǎng)也為30000，表明組分在兩根柱內(nèi)從柱入口到出口都經(jīng)過30000個(gè)載體顆粒，兩柱的柱效相等。4.為什么體積排阻色譜中任何組分的分配系數(shù)必須符合0≤K≤1？如果K>1說明什么問題?因?yàn)榻M分的分配系數(shù)為K=Cs/Cm,Cs與Cm分別為組分在固定相和流動(dòng)相中的濃度,當(dāng)分子直徑大于孔徑時(shí),此時(shí)Cm=0,∴K=0。當(dāng)分子直徑小于固定相孔徑時(shí),組分向空隙內(nèi)流動(dòng)相擴(kuò)散,達(dá)到平衡時(shí),一半組分在空隙內(nèi),一半組分在空隙外,此時(shí)K=1,若分子直徑介于以上兩種極限情況之間,K一定介于0與1之間,可見體積排阻色譜中,任何組分的分配系數(shù)為0≤K≤1,如果K>1說明此時(shí)的分離方式已不是純粹的體積排阻色譜,其分離過程受到其他作用力(如吸附)的支配.5.HPLC操作中，流動(dòng)相為什么要脫氣常用的脫氣方法有拿幾種害處：（1）氣泡進(jìn)入檢測(cè)器，引起光吸收或電信號(hào)的變化，基線突然跳動(dòng)，干擾檢測(cè)；（2）溶解在溶劑中的氣體進(jìn)入色譜柱時(shí)，可能與流動(dòng)相或固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；（3）溶解氣體還會(huì)引起某些樣品的氧化降解，對(duì)分離和分析結(jié)果帶來誤差。脫氣法:（1）加熱脫氣法（2）抽吸脫氣法；（3）吹氦脫氣法；（4）超聲波振蕩脫氣法。6.生物工程下游技術(shù)的基本步驟。（1）建立分析方法：①生物測(cè)定方法；②理化測(cè)定方法；③理化方法與生物學(xué)方法結(jié)合測(cè)定；（2）選擇提取材料；（3）選擇提取方法；（4）分離純化方法的探索；(5）均一性的鑒定。7、生物工程下游技術(shù)按生產(chǎn)過程劃分幾個(gè)階段各階段的任務(wù)是什么①發(fā)酵液預(yù)處理、固液分離、細(xì)胞破碎：除去發(fā)酵液中的不溶性固形物雜質(zhì)和分離菌體細(xì)胞；分離胞內(nèi)產(chǎn)物，收集細(xì)胞后進(jìn)行細(xì)胞的破碎和細(xì)胞碎片分離。②提?。撼ヅc產(chǎn)物性質(zhì)差異較大的雜質(zhì)③濃縮：主要去除水分，提高產(chǎn)物濃度④純化：去除與產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)比較接近的雜質(zhì)。⑤成品化：根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和產(chǎn)品劑型制作產(chǎn)品。8.發(fā)酵液預(yù)處理的目的是什么，如何選擇發(fā)酵液預(yù)處理過程？

①去除部分雜質(zhì)②改善理化性質(zhì)，有利于固液分離③使產(chǎn)物轉(zhuǎn)入便于后處理的一相中如何選擇發(fā)酵液預(yù)處理過程：①胞外產(chǎn)物，發(fā)酵通過離心或過濾實(shí)現(xiàn)固液分離，使其轉(zhuǎn)入液相；②胞內(nèi)產(chǎn)物，先通過離心或過濾收集細(xì)胞并洗滌，然后細(xì)胞經(jīng)破碎或整體細(xì)胞萃取使目標(biāo)產(chǎn)物釋放，轉(zhuǎn)入液相，再進(jìn)行細(xì)胞碎片分離。③細(xì)胞本身，通過離心或過濾獲得細(xì)胞，然后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌、干燥。9.超臨界CO2破碎細(xì)胞技術(shù)的原理是什么？

超臨界流體CO2在高壓條件下滲透到細(xì)胞內(nèi)，突然降壓后，CO2變成氣體，使細(xì)胞內(nèi)外壓力差增加，細(xì)胞急劇膨脹發(fā)生破裂。另外CO2對(duì)脂質(zhì)有萃取作用，細(xì)胞碎片較大。10.在溶劑萃取時(shí)，為什么要進(jìn)行破壞乳化？

乳化是水或有機(jī)溶劑以微小液滴形式分散于有機(jī)相或水相中的現(xiàn)象。有機(jī)溶劑相和水相分層困難，出現(xiàn)兩種夾帶：①發(fā)酵廢液（萃余液）中夾帶有機(jī)溶劑（萃取液）微滴，使目標(biāo)產(chǎn)物受到損失；②有機(jī)溶劑（萃取液）中夾帶發(fā)酵液（萃余液），給后處理操作帶來困難。產(chǎn)生乳化有時(shí)即使采用離心機(jī)也往往不能將兩相分離完全，所以必須破壞乳化。11.超臨界萃取的原理是什么？

溶質(zhì)在超臨界流體中的溶解度，與其密度有關(guān)，密度越大，溶解度越大。在臨界點(diǎn)附近，微小的壓力增加或溫度下降，則超臨界流體的密度大幅度增加，對(duì)溶質(zhì)的溶解度將大幅度增加，有利于溶質(zhì)的萃取。而在臨界點(diǎn)附近，微小的壓力下降或溫度上升，則超臨界流體的密度大幅度減少，對(duì)溶質(zhì)的溶解度將大幅減少，有利于溶質(zhì)的分離和溶劑的回收。12.膜的濃差極化對(duì)生產(chǎn)有何影響減少濃差極化有哪些措施濃差極化：在膜過濾時(shí)，隨溶劑不斷透過膜，大分子溶質(zhì)被帶到膜表面，但不能透過，就被截留在膜的表面上，造成膜面濃度升高，產(chǎn)生膜面到主體溶液之間的濃度梯度，這種濃度差導(dǎo)致溶質(zhì)自膜面反擴(kuò)散至主體溶液中的現(xiàn)象稱為濃差極化。影響：①提高滲透壓，降低水通量；②降低膜的截留率；③產(chǎn)生結(jié)垢現(xiàn)象，造成物理阻塞，使膜逐漸失去透水能力。措施：對(duì)處理液攪動(dòng)、振動(dòng)、錯(cuò)流以及加快液流速度等。13.有機(jī)溶劑沉淀法原理是什么？

加入有機(jī)溶劑于蛋白質(zhì)溶液中可產(chǎn)生多種效應(yīng)，這些效應(yīng)結(jié)合起來，使蛋白質(zhì)沉淀。①有機(jī)溶劑，使溶液介電常數(shù)降低，蛋白質(zhì)、核酸、多糖等帶溶質(zhì)間靜電引力增大，從而相互吸引、聚集而沉淀。②有機(jī)溶劑減小水的極性，使兩性溶質(zhì)在溶液中的溶解度降低。③由于有機(jī)溶劑的水合作用，降低了自由水的濃度，從而降低了親水溶質(zhì)表面水化層的厚度和溶質(zhì)的親水性，導(dǎo)致脫水凝聚。④極性有機(jī)溶劑破壞溶質(zhì)的某種鍵（如氫鍵），使其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變形，使原來包在內(nèi)部的疏水基團(tuán)結(jié)合形成疏水層。14.聚丙烯酰胺凝膠電泳原理。由于聚丙烯酰胺凝膠是多孔介質(zhì)，不僅能防止對(duì)流，把擴(kuò)散減少到最低；而且其孔徑大小與生物大分子具有相似的數(shù)量級(jí)，能主動(dòng)參與生物分子的分離，具有分子篩效應(yīng)。因此，在使用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)分離時(shí)，在電泳過程中不僅取決于蛋白質(zhì)的電荷密度學(xué)（電荷效應(yīng)），還取決于蛋白質(zhì)的大小（分子量）和形狀（分子篩效應(yīng)）。15.簡(jiǎn)述SDS－PAGE電泳測(cè)定未知蛋白分子量的方法。以不同的標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白MARK，與未知蛋白樣品一同進(jìn)行SDS－PAGE電泳。染色后分別計(jì)算未知蛋白、標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白MARK的遷移率，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白MARK遷移率與其分子量的對(duì)數(shù)值作圖，可得一標(biāo)準(zhǔn)曲線并擬合方程。將未知蛋白遷移率代入擬合方程，求出未知蛋白的分子量。16.影響離子交換能力和選擇性因素有哪些？

離子交換能力和選擇性的好壞集中反映在離子交換常數(shù)K上，K值越大，說明離子交換能力和選擇性越好。影響K值的因素有：（1）被交換離子的水化半徑和化合價(jià)：樹脂對(duì)水化半徑小的離子和化合價(jià)高的離子選擇性好。（2）溶液濃度：樹脂對(duì)離子交換吸附的選擇性，在稀溶液中比較大，而在濃溶液中選擇性較小。（3）溶液的pH：pH必須滿足使樹脂和生化物質(zhì)都呈離子狀態(tài)。（4）交聯(lián)度：對(duì)凝膠樹脂，交聯(lián)度小，樹脂的孔徑大，選擇性降低。（5）有機(jī)溶劑：當(dāng)有機(jī)溶劑存在時(shí)，常會(huì)使樹脂對(duì)有機(jī)離子的選擇性降低，而容易吸附無機(jī)離子。因此進(jìn)行交換吸附時(shí)，料液中不應(yīng)存在有機(jī)溶劑。但在解吸附（洗脫）時(shí)，可采用有機(jī)溶劑來提高解吸的收率。18.色譜方法共分幾類常用的蛋白質(zhì)分離方法有哪些并簡(jiǎn)述其原理（1）按溶質(zhì)分子與固定相相互作用的機(jī)理不同，色譜分離可大致分成如下5大類：吸附色譜分離，分配色譜，離子交換色譜，凝膠色譜，親和色譜。（2）根據(jù)固定相的形狀不同，色譜分離技術(shù)可分為柱色譜分離、紙上色譜分離、薄層色譜分離。（3）根據(jù)流動(dòng)相的物態(tài)不同，色譜分離技術(shù)可分為氣相色譜分離、液相色譜分離、超臨界色譜分離。（4）根據(jù)操作壓力不同，色譜分離技術(shù)不同可分為低壓色譜分離、中壓色譜分離、高壓色譜分離。19.在吸附分離技術(shù)中，如何選擇洗脫劑？

（1）洗脫劑：選擇與吸附劑溶解度參數(shù)相近的試劑作為洗脫劑；洗脫劑對(duì)被吸附物有較大的溶解度；（2）洗脫劑為水溶液時(shí)，需考慮洗脫pH：對(duì)于弱酸性物質(zhì)，在偏酸性條件吸附，洗脫應(yīng)為堿性水溶液；弱堿性物質(zhì)則相反。（3）如果吸附在高濃度鹽溶液中，則洗脫可僅用水。（4）易揮發(fā)性物質(zhì)，可用熱水或蒸汽解吸。20.蛋白質(zhì)含量/濃度測(cè)定方法有哪些各有什么特點(diǎn)蛋白質(zhì)含量（濃度）測(cè)定，是生化檢測(cè)中的基本內(nèi)容，常見的測(cè)定方法有：凱氏定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法?？捡R斯亮藍(lán)法（Bradford法）。1）凱氏定氮靈敏度低，適用于0.2~1.0mg氮，誤差為±2％費(fèi)時(shí)8～10小時(shí)將蛋白氮轉(zhuǎn)化為氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)而分離）用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測(cè)定；干擾少；費(fèi)時(shí)太長(zhǎng)2）雙縮脲法（Biuret法）靈敏度低1～20mg中速20~30分鐘多肽鍵＋堿性Cu2＋?紫色絡(luò)合物硫酸銨；Tris緩沖液；某些氨基酸用于快速測(cè)定，但不太靈敏；不同蛋白質(zhì)顯色相似3）紫外吸收法較為靈敏50～100μg快速5～10分鐘蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收各種嘌吟和嘧啶；4）Folin－酚試劑法（Lowry法）靈敏度高～5μg慢速40～60分鐘雙縮脲反應(yīng)；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原硫酸銨；Tris緩沖液；甘氨酸；各種硫醇耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)；操作要嚴(yán)格計(jì)時(shí)；顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化5）考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法)靈敏度最高1～5μg快速5～15分鐘考馬斯亮藍(lán)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，其lmax由465nm變?yōu)?95nm強(qiáng)堿性緩沖液；21.（重組）蛋白質(zhì)量檢測(cè)方法有哪些？

（重組）蛋白必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制才能成為產(chǎn)品。重組蛋白的質(zhì)量控制指標(biāo)包括：1）重組蛋白的鑒別（序列）2）重組蛋白的純度（雜質(zhì)的類型）3）重組蛋白的活性（檢測(cè)方法）4）重組蛋白的安全性5）重組蛋白的穩(wěn)定性6）重組蛋白的一致性（構(gòu)象與構(gòu)型）具體的檢測(cè)項(xiàng)目和方法有：1）產(chǎn)品是否含內(nèi)毒素 家兔熱原法2）蛋白質(zhì)是否變異 肽譜、HPLC、等電聚焦、毛細(xì)管電泳3）甲硫氨酸是否被甲?；? 肽譜、質(zhì)譜、HPLC、Edman分析4）蛋白質(zhì)是否變性、聚合、脫氨基 SDS、凝膠層析、等電聚焦、質(zhì)譜、HPLC、毛細(xì)管電泳、Edman分析5）配體是否脫落 SDS、免疫分析6）氨基酸是否發(fā)生取代 氨基酸分析、肽譜、質(zhì)譜、毛細(xì)管電泳7）產(chǎn)品是否被細(xì)菌、病毒、支原體等污染 微生物學(xué)檢測(cè)22、生物技術(shù)產(chǎn)品的分離提取工藝應(yīng)考慮那些因素

某一具體產(chǎn)品的分離提取工藝與下列情況有關(guān)：(1)是胞內(nèi)產(chǎn)物還是胞外產(chǎn)物；原料中產(chǎn)物和主要雜質(zhì)濃度；(3)產(chǎn)物和主要雜質(zhì)的物理化學(xué)特性及差異；(4)產(chǎn)品用途和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；(5)產(chǎn)品的市場(chǎng)價(jià)格；(6)廢液的處理方法等。23、“清潔生產(chǎn)”應(yīng)該包括哪三方面的內(nèi)容

(1)清潔生產(chǎn)工藝技術(shù)和過程：含先進(jìn)的無廢少?gòu)U技術(shù)、高效的裝備和完善的管理；(2)清潔產(chǎn)品：使用中和使用后對(duì)人體和環(huán)境無害；(3)清潔能源：包括常規(guī)能源清潔利用、采用節(jié)能技術(shù)、再生能源和新能源的開發(fā)利用。六、綜合題試述非線性色譜的概念及其特點(diǎn)?非線性色譜:流動(dòng)相中的樣品濃度(Cm)與固定相中的樣品濃度(Cs)不呈線性關(guān)系的色譜.分析色譜大多屬于線性色譜;制備色譜大多屬于非線性色譜非線性色譜的特點(diǎn)樣品的保留值可變:非線性色譜的保留值隨樣品及其濃度的不同而變化;峰形的不對(duì)稱性:不是高斯正態(tài)分布的;色譜峰的峰高與濃度不是線性關(guān)系:峰高增加的速率隨濃度的增加而下降.什么叫吸附等溫線研究吸附等溫線有什么意義

附等溫線：指在一定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面上進(jìn)行的吸附過程達(dá)到平衡時(shí)它們?cè)趦上嘀袧舛戎g的關(guān)系。研究吸附等溫線可以提供得到以下方面的信息：預(yù)測(cè)代表該吸附等溫線的組分在非線性色譜中色譜峰的形狀；為非線性色譜分離與純化物質(zhì)選擇最佳條件；反映被分離物質(zhì)分子與固定相表面的作用，從而研究分子的構(gòu)型及吸附狀態(tài)。建立分子結(jié)構(gòu)-吸附之間的定量關(guān)系，從而由分子結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)吸附性能。做為優(yōu)良的凝色譜介質(zhì)應(yīng)該具備什么基本特點(diǎn)?介質(zhì)本身為惰性物質(zhì)，不與溶質(zhì)、溶劑分子發(fā)生任何作用；應(yīng)盡量減少介質(zhì)內(nèi)含的帶電離子基團(tuán)，以減少特異性吸附，提高蛋白質(zhì)的收率；介質(zhì)內(nèi)孔徑大小要分布均勻，即孔徑分布較窄。凝膠珠粒大小均勻；介質(zhì)要有良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性及較高的機(jī)械強(qiáng)度，易于消毒。做為優(yōu)良的HPLC填料應(yīng)具備什么基本的物理化學(xué)特性?在物理結(jié)構(gòu)上的要求:合適的顆粒大小及較窄的粒度分布;一定的顆粒強(qiáng)度;一定的孔徑大小和孔徑分布,避免復(fù)雜的微孔結(jié)構(gòu);一定的溶脹及收縮水平;優(yōu)良的HPLC填料目前的主要發(fā)展方向:顆粒單分散的填料;貫穿性超大孔結(jié)構(gòu)的填料;小顆粒的非多孔填料;在化學(xué)結(jié)構(gòu)上的要求:填料的化學(xué)結(jié)構(gòu),特別是顆粒表面和內(nèi)孔表面的化學(xué)結(jié)構(gòu)(如連接在基質(zhì)上的官能基團(tuán)或鏈段)是影響色譜熱力學(xué)行為(保留值,選擇性等)的主要因素特定的選擇性;良好的化學(xué)穩(wěn)定性;避免不可逆吸附;試述羥基磷灰石做為一種有廣闊發(fā)展前途的色譜填料的主要特點(diǎn).羥基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)是一種弱陽(yáng)離子或弱陰離子交換層析材料.其材料本是骨骼和牙齒等生物硬組織的主要無機(jī)成分,與生物組織有特異性的親和力和相容性.其優(yōu)點(diǎn)是:能精確地分離,純化結(jié)構(gòu)上只有微小差別的生物大分子.做為一種優(yōu)良的色譜填料,羥基磷灰石具有以下特點(diǎn):高機(jī)械強(qiáng)度:可以耐受15MPa以上壓力,陶瓷HAP可以耐受幾十MPa的壓力.高柱效:球形HAP顆粒大小,形狀及孔隙大小均適合HPLC的要求.其顆粒及孔徑小,有比較高的柱效.化學(xué)和熱穩(wěn)定性:是磷酸鈣鹽中最穩(wěn)定的,在中性和堿性不相中非常穩(wěn)定,溶解度很低,熱穩(wěn)定性很高,可采用高溫制備方法生產(chǎn).低的非可逆性吸附:HAP有非常低的非可逆性吸附.表面修飾性:HAP表面比較容易進(jìn)行各種化學(xué)修飾.總之HAP:高選擇性,高鍵合容量,低的非可逆吸附,良好的化學(xué)和熱穩(wěn)定性。與傳統(tǒng)的稀釋法和透析法相比，液相色譜復(fù)性的優(yōu)點(diǎn)是：在進(jìn)樣后可很快的除去變性劑；色譜固定相對(duì)變性蛋白質(zhì)的吸附可明顯的減少、甚至完全消除變性蛋白質(zhì)分子在脫離變性劑環(huán)境后的分子聚集，從而避免了沉淀的產(chǎn)生，提高蛋白質(zhì)復(fù)性的質(zhì)量和活性回收率；在蛋白質(zhì)復(fù)性的同時(shí)，可使目標(biāo)蛋白質(zhì)與雜蛋白分離達(dá)到純化的目的，使復(fù)性和純化同時(shí)進(jìn)行；便于回收變性劑，降低廢水處理成本。在對(duì)包含體蛋白質(zhì)進(jìn)行增溶和復(fù)性的過程中為什么要加入還原劑,同時(shí)為什么還必須加入金屬螯合劑常用的還原劑有哪些在復(fù)性后為什么要加入氧化劑常用的氧化劑有哪些（見21）什么叫雙水相萃取在雙水相萃取中為什么要盡量將細(xì)胞碎片集中在下相可以采取什么可能的措施在使細(xì)胞碎片盡量集中在下相的同時(shí),使目標(biāo)蛋白質(zhì)盡可能集中在上相什么是徑向色譜徑向色譜應(yīng)用于生物物質(zhì)分離有什么優(yōu)點(diǎn)

采用徑向流技術(shù)的色譜，即樣品和流動(dòng)相沿徑向流動(dòng)，可以從色譜柱的周圍流向圓心，也可以從圓心流向柱的周圍。通常采用從柱的周圍流向圓心的方式。優(yōu)點(diǎn)：可以在較小的柱床層高度時(shí)使用較大的流動(dòng)相速度；在較高流動(dòng)相速度時(shí)，反壓降低；可以線性地增加樣品處理量，樣品可以在完全相同的色譜條件下直接放大。利用微載體進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)有哪些？微載體培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):表面積/體積比大;微載體懸浮于培養(yǎng)基中,細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境均一,便于監(jiān)測(cè)和控制;培養(yǎng)基利用率高;采樣重演性好;收獲過程不復(fù)雜;放大較容易;勞動(dòng)強(qiáng)度小,占用空間小.為什么動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要用血清培養(yǎng)基血清培養(yǎng)基使用有何缺點(diǎn)

答：1）因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞正常生長(zhǎng)所需要的一些必要成份均存在于血清中，而且這些成份的組成及其含量至今沒有被闡明，因此只能直接采用血清進(jìn)行培養(yǎng)，而目前尋找無血清的制品代替進(jìn)行培養(yǎng)并沒有獲得廣泛的成功。2）采用血清培養(yǎng)基有以下缺點(diǎn)：血清是培養(yǎng)基成本的主要部分；血清中含有細(xì)胞生長(zhǎng)必須的微量組分，但這些組分的成分及其作用至今未清楚，因此無法取代；血清的存在是產(chǎn)物純化的主要障礙；血清是病毒污染及其他未知因素影響的主要來源，增加了細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品潛在的使用危險(xiǎn)；血清同時(shí)也有生長(zhǎng)抑制的作用；血清使用使實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)過程標(biāo)準(zhǔn)化變得困難。試述聚賴氨酸/海藻酸（PLL/ALG）微囊化的原理：原理是：海藻酸的水溶液以鈣鹽形式存在是呈凝膠狀態(tài)，用螯合劑去除鈣離子后又恢復(fù)溶液狀態(tài)，當(dāng)海藻酸鈣用聚賴氨酸預(yù)先處理后，就不再被螯合劑去鈣而溶解。據(jù)此，先將動(dòng)物細(xì)胞與海藻酸混合，滴入CaCL2溶液中成微珠，用聚賴氨酸處理表面，再用螯合劑處理，則表面還是呈凝膠狀態(tài)而中間成液態(tài)。影響聚賴氨酸/海藻酸微囊化的一些因素：答：1）半透膜的孔徑大小是關(guān)鍵，由PLL的分子量所決定；2）海藻酸的純度、黏度及甘露糖醛酸/古羅糖醛酸比例都會(huì)影響微囊化的形成及機(jī)械性能；3）動(dòng)物細(xì)胞的存活率與微囊化過程的時(shí)間及溫度pH、滲透壓等有關(guān)；高壓勻漿法的作用機(jī)理：作用機(jī)理：高壓泵將電機(jī)的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)轉(zhuǎn)變成勻漿閥柱桿的直線運(yùn)動(dòng)，從高壓室（幾十兆帕）壓出細(xì)胞懸浮液，經(jīng)過碰撞環(huán)的撞擊后改變方向從出口管噴出，使細(xì)胞經(jīng)歷較高的流速下的剪切碰撞發(fā)生較大的變形，從而達(dá)到破碎細(xì)胞的目的化學(xué)滲透法破碎細(xì)胞的原理及其優(yōu)缺點(diǎn)。答：作用機(jī)理：某些有機(jī)溶劑，抗生素，表面活性劑，金屬螯合劑，變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細(xì)胞壁或膜的通透性，從而使內(nèi)容物有選擇地滲透出來，這種處理方法叫滲透法。優(yōu)點(diǎn)（相對(duì)機(jī)械破碎）：對(duì)產(chǎn)物釋出有一定的選擇性；細(xì)胞保持完整，碎片少，利于進(jìn)一步提??；核酸釋放量少，黏度低，便于進(jìn)一步分離。缺陷：時(shí)間長(zhǎng)，效率低；化學(xué)試劑有毒；通用性差。酶溶法破細(xì)胞的原理、優(yōu)缺點(diǎn)是什么？機(jī)理：就是利用生物酶將細(xì)胞壁和細(xì)胞膜消化溶解的方法。優(yōu)點(diǎn)：一定的選擇性；細(xì)胞外形完整，核酸釋放少，有利于進(jìn)一步分離過程缺點(diǎn)：（只能用于實(shí)驗(yàn)室）產(chǎn)物抑制造成效率低下；溶酶價(jià)格高；通用性差，不易確定最佳條件；微波加熱法胞的原理、優(yōu)缺點(diǎn)是什么？機(jī)理：微波加熱導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)極性物質(zhì)，尤其是水分子吸收微波能，產(chǎn)生大量熱量，使胞內(nèi)溫度迅速上升，液態(tài)水汽化產(chǎn)生的壓力將細(xì)胞膜和細(xì)胞壁沖裂，形成微小孔洞，進(jìn)一步加熱可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部和細(xì)胞壁水分減少，細(xì)胞收縮，表面出現(xiàn)裂紋。

優(yōu)點(diǎn)：微波穿透性強(qiáng)，選擇性高、加熱效率高。缺陷：一般只適合對(duì)熱穩(wěn)定物質(zhì)的分離；被處理的物料要具有良好的吸水性；不適于富含淀粉和樹膠等的天然植物。包含體蛋白溶解的主要方式是什么？在溶解過程中為什么要加入還原劑答：包涵體的溶解必須用很強(qiáng)的變性劑，如8mol/L尿素、6~8mol/L鹽酸胍，通過離子間的相互作用破壞包涵體蛋白間的氫鍵而增溶蛋白。其中尿素的增溶效果稍差，異氰鹽酸胍最強(qiáng)；去污劑，如SDS，可以破壞蛋白內(nèi)的疏水鍵，可以增溶幾乎所有的蛋白，但由于無法徹底去除而不允許用在制藥行業(yè)中；酸，如70%甲酸，可以破壞蛋白的次級(jí)鍵從而增溶蛋白，這種方法只適合少數(shù)蛋白質(zhì)。對(duì)于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶時(shí)應(yīng)加入還原劑（如DTT、GSH、β-ME）打開蛋白質(zhì)中所有二硫鍵，對(duì)于沒有二硫鍵的目標(biāo)蛋白有時(shí)也應(yīng)使用還原劑，因?yàn)楹蜴I的雜蛋白會(huì)影響包涵體的溶解，同時(shí)還應(yīng)加入金屬螯合劑，如EDTA或EGTA，用來螯合Cu2+、Fe3+等金屬離子以防止其與還原狀態(tài)的巰基發(fā)生氧化反應(yīng)。包涵體蛋白質(zhì)含有二個(gè)以上二硫鍵應(yīng)該如何處理為什么要在復(fù)性完成后再加入氧化劑

包涵體蛋白首先用高溶度的變性劑促進(jìn)蛋白質(zhì)的溶解，為了曾溶往往在溶液中加入一定量的還原劑打開蛋白質(zhì)的二硫鍵，如DTT、GSH或巰基乙醇（β-ME）等，同時(shí)也加入金屬螯合劑，絡(luò)合高價(jià)金屬例子，防止其與-SH結(jié)合。復(fù)性時(shí)，加入氧化劑可以引發(fā)變性蛋白質(zhì)形成正確的S-S鍵而復(fù)性，并與前面加入的還原劑形成氧化還原對(duì)，能促進(jìn)非正確折疊的二硫鍵快速交換，達(dá)到正確配對(duì)與折疊，促進(jìn)正確配對(duì)的產(chǎn)率。根據(jù)流體各組分尺寸大小的不同，利用高分子聚合膜，過濾分離微米級(jí)的細(xì)胞、細(xì)胞碎片和生物大分子的過程，叫微孔膜過濾。優(yōu)點(diǎn)：容易做到封閉式操作，不受環(huán)境污染設(shè)備投資少，操作安全；加工量可大可小，十分方便；有利于分離密度差小而難以離心的固體，可直接用于下游的層析過程。缺點(diǎn)：技術(shù)難以掌握，影響因素多；穩(wěn)定性和重復(fù)性不好；膜堵塞問題是最難以解決的問題雙水相萃取的一般原則：一般的原則是將碎片分配在下層(調(diào)節(jié)ＰＥＧ和無機(jī)鹽濃度比例，可以控制細(xì)胞碎片在上下層間的分配)其好處有：核酸等大部分雜質(zhì)一般處于下相，可以一并除去；下相是無機(jī)鹽富集相，作為廢棄物成本低些；蛋白質(zhì)保持于上相的ＰＥＧ層有利于其活性的保持；碎片在下相有利于離心機(jī)的連續(xù)分離；試述包含體復(fù)性的基本過程,復(fù)性過程錯(cuò)誤發(fā)生的主要原因是什么舉例分析主要的復(fù)性方法的優(yōu)缺點(diǎn),為什么LC復(fù)性是最好的

包含體復(fù)性的基本過程：分離包含體：第一步是對(duì)培養(yǎng)收集的細(xì)胞進(jìn)行破碎，比較有效的方法是高壓勻漿結(jié)合溶菌酶處理，然后5000~20000g離心，可使大部分包涵體沉淀，與可溶性蛋白分離洗滌：包涵體沉淀需用去污劑（TritonX-100或脫氧膽酸鈉）和低濃度變性劑（2mol/L尿素或鹽酸胍等）洗滌除去脂類和膜蛋白，這一步很重要，否則會(huì)導(dǎo)致包涵體溶解和復(fù)性的過程中重組蛋白質(zhì)的降解溶解：包涵體的溶解必須用很強(qiáng)的變性劑，通過離子間的相互作用破壞包涵體蛋白間的氫鍵而增溶蛋白。去污劑可以破壞蛋白內(nèi)的疏水鍵，可以增溶幾乎所有的蛋白，但由于無法徹底去除而不允許用在制藥行業(yè)中；酸可以破壞蛋白的次級(jí)鍵從而增溶蛋白，這種方法只適合少數(shù)蛋白質(zhì)。對(duì)于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶時(shí)應(yīng)加入還原劑打開蛋白質(zhì)中所有二硫鍵，對(duì)于沒有二硫鍵的目標(biāo)蛋白有時(shí)也應(yīng)使用還原劑，因?yàn)楹蜴I的雜蛋白會(huì)影響包涵體的溶解，同時(shí)還應(yīng)加入金屬螯合劑用來螯合Cu2+、Fe3+等金屬離子以防止其與還原狀態(tài)的巰基發(fā)生氧化反應(yīng)。復(fù)性過程錯(cuò)誤發(fā)生的主要原因是：在去除變性劑的同時(shí)，重組蛋白質(zhì)在體外折疊，分子間存在大量錯(cuò)誤折疊和聚合，復(fù)性效率往往很低，包涵體蛋白折疊復(fù)性的效率實(shí)際上取決于正確折疊過程與聚集過程之間的競(jìng)爭(zhēng)。復(fù)性方法的優(yōu)點(diǎn)：透析、稀釋和超濾復(fù)性法，這三種方法是最傳統(tǒng)也是應(yīng)用最普遍的蛋白質(zhì)折疊復(fù)性方法，使變性劑濃度降低到蛋白質(zhì)能恢復(fù)折疊的濃度。復(fù)性方法的缺點(diǎn)：復(fù)性活性回收率低，而且難于與雜蛋白分離。稀釋法大大增加溶液體積，不利于后續(xù)的分離純化；透析法耗時(shí)長(zhǎng)，易形成無活性蛋白質(zhì)聚集體；超濾法在膜上聚集變性，易造成膜污染；稀釋法處理量太大，不利于工業(yè)放大。LC復(fù)性是最好的原因：與傳統(tǒng)的稀釋法和透析法相比，液相色譜復(fù)性的優(yōu)點(diǎn)是：在進(jìn)樣后可很快的除去變性劑；色譜固定相對(duì)變性蛋白質(zhì)的吸附可明顯的減少、甚至完全消除變性蛋白質(zhì)分子在脫離變性劑環(huán)境后的分子聚集，從而避免了沉淀的產(chǎn)生，提高蛋白質(zhì)復(fù)性的質(zhì)量和活性回收率；在蛋白質(zhì)復(fù)性的同時(shí)，可使目標(biāo)蛋白質(zhì)與雜蛋白分離達(dá)到純化的目的，使復(fù)性和純化同時(shí)進(jìn)行；便于回收變性劑，降低廢水處理成本。寫出斯托克斯公式,分析其基本意義.從該公式分析離心的主要條件.斯托克斯公式(Stokes)：Uc=d2(ρs-ρL)rω2/18μ。其意義是：①密度差(ρs-ρL)越大，離心沉降速度越快；②在密度差(ρs-ρL)存在下，固體顆粒尺寸越大，越容易離心；③液體黏度μ越大，越不容易離心；④離心力（rω2）的大小對(duì)固液分離很有影響，要增大離心力來提高分離效率。離心的主要條件是：轉(zhuǎn)速和時(shí)間。從達(dá)西公式分析利用膜進(jìn)行固液分離要注意的問題,其目前存在的主要困難是什么?達(dá)西公式：V=ΔP/[μ(Rc+Rm)]。從式中可見，在ΔP恒定下，濾餅厚度的增加會(huì)降低過濾速度。因此寶座過濾速度不變的一個(gè)辦法是設(shè)法阻止濾餅的生成，或者維持濾餅的厚度不增加。其目前存在的主要困難是：膜堵塞問題。雙水相萃取的概念為什么要進(jìn)行雙水相萃取雙水相萃取的主要操作原則是什么有何注意事項(xiàng)雙水相萃?。豪帽惶崛∥镌诙嘀械姆峙洳煌鴮?shí)現(xiàn)分離的目的；由于蛋白質(zhì)在有機(jī)相中容易失活，因此采用的二相均為親水相，如PEG/葡聚糖、ＰＥＧ／無機(jī)鹽等，稱為雙水相，兩相密度不同，輕相富含一種高分子，重相可能富含另一高分子，細(xì)胞碎片和蛋白質(zhì)在二相間的分配系數(shù)不同，從而實(shí)現(xiàn)分離的目的。進(jìn)行雙水相萃取的原因：核酸等大部分雜質(zhì)一般處于下相，可以一并除去；下相是無機(jī)鹽富集相，作為廢棄物成本低些；蛋白質(zhì)保持于上相的ＰＥＧ層有利于其活性的保持；碎片在下相有利于離心機(jī)的連續(xù)分離。雙水相萃取的主要操作原則是：將碎片分配在下層(調(diào)節(jié)ＰＥＧ和無機(jī)鹽濃度比例，可以控制細(xì)胞碎片在上下層間的分配)。做的時(shí)候要考慮以下幾點(diǎn)：ＰＥＧ濃度；ＰＥＧ分子量；鹽和pH值。膜分離技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)？處理效率高，設(shè)備易于放大；可在室溫或低溫下操作，適宜于熱敏感物質(zhì)分離；化學(xué)與機(jī)械強(qiáng)度最小，減少失活；無相變，省能；選擇性好，可在分離、濃縮的同時(shí)達(dá)到部分純化的目的；選擇合適膜與操作參數(shù)，可得到較高的回收率；系統(tǒng)可密閉循環(huán)，防止外來污染；不外加化學(xué)物，透過液可循環(huán)使用，降低了成本，并減少了對(duì)環(huán)境的污染。膜污染與濃差極化的主要區(qū)別？膜污染與濃差極化的主要區(qū)別是濃差極化是一個(gè)可逆的過程，膜污染是一個(gè)不可逆的現(xiàn)象。應(yīng)該說，一旦料液與膜接觸，膜污染即開始；也就是說，由于溶質(zhì)與膜之間相互作用產(chǎn)生吸附，開始改變膜特性。操作運(yùn)行開始后，由于濃度差極化產(chǎn)生，尤其在低流速、高溶質(zhì)濃度情況下，在膜面到達(dá)或超過溶質(zhì)飽和溶解度時(shí)，便有凝膠層形成，導(dǎo)致膜的透量不以來于所加壓力，一起膜透過通量的急劇降低，在這種情況下運(yùn)行的膜，使用后必須清晰，以恢復(fù)其性能。超濾親和純化：將超濾技術(shù)優(yōu)點(diǎn)和親和技術(shù)優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來的一種分離技術(shù)。具有分離純度高和易于大規(guī)模工業(yè)化的優(yōu)點(diǎn)。其原理是：親和結(jié)合，利用與待分離物質(zhì)有親和力的大分子物質(zhì)親和結(jié)合待分離物質(zhì)；洗滌：選擇合適的超濾膜進(jìn)行透濾；解離：使大分子親和復(fù)合物分離，選用合適膜進(jìn)行超濾使待分離物質(zhì)透過膜并進(jìn)一步濃縮；再生：使大分子親和基再生并進(jìn)入下一輪超濾親和過程。非線性色譜的特點(diǎn)：樣品的保留值可變:非線性色譜的保留值隨樣品及其濃度的不同而變化;峰形的不對(duì)稱性:不是高斯正態(tài)分布的;色譜峰的峰高與濃度不是線性關(guān)系:峰高增加的速率隨濃度的增加而下降.凝膠色譜介質(zhì)應(yīng)具備的條件有哪些？介質(zhì)本身為惰性物質(zhì)，不與溶質(zhì)、溶劑分子發(fā)生任何作用；應(yīng)盡量減少介質(zhì)內(nèi)含的帶電離子基團(tuán)，以減少非特異性吸附，提高蛋白質(zhì)的收率；介質(zhì)內(nèi)孔徑大小要分布均勻，即孔徑分布較窄。凝膠珠粒大小均勻；均一系數(shù)顆粒粗細(xì)

介質(zhì)要有良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性及較高的機(jī)械強(qiáng)度，易于消毒。填料性能評(píng)價(jià)物化性質(zhì)指標(biāo):顆粒大小及其分布(dp);比表面積S(m2/g);骨架密度ρg(g/ml);溶劑吸收量Sγ(ml/g);溶脹因子f;比孔體積Vp(ml/g);孔度Ψ填料的色譜性能表征:保留值:三個(gè)概念:保留時(shí)間(TR),保留體積(VR),容量因子(K`)選擇性:相鄰二物質(zhì)保留時(shí)間之比,與固定相、流動(dòng)相及溫度有關(guān)。柱效率：理論塔板數(shù)（N），或理論塔板高度（H）表示。填充柱的總空隙度和穿透性：分離度（R）：相鄰兩色譜峰的保留值之差與各自峰底寬度一半之和的比值。表面硅羥基的化學(xué)修飾：1）通過氯化反應(yīng)：可以將硅羥基轉(zhuǎn)化成硅氯基，硅氯基性質(zhì)活潑可以與各種化合物反應(yīng)而引入相應(yīng)的基團(tuán)。這種方法引入的基團(tuán)是單分子層的，具有較好的傳質(zhì)能力和色譜性能，但成本較高。2）通過氯硅烷與硅羥基的反應(yīng)：通過氯硅烷可以將各種烷基鏈引入硅膠表面。氯硅烷包括一氯代型，二氯代型和三氯代型等。3）通過烷氧基硅烷與硅羥基的反應(yīng)：烷氧基硅烷與硅膠進(jìn)行縮合反應(yīng)，使硅膠表面帶上環(huán)氧基或氨基等基團(tuán)，在此基礎(chǔ)上可以很方便地進(jìn)一步進(jìn)行反應(yīng)或修飾。這一健合反應(yīng)可以在水相，也可以有機(jī)介質(zhì)中進(jìn)行。HAP的色譜機(jī)理是一種弱離子交換色譜,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其對(duì)DNA,多肽,蛋白質(zhì)的分離機(jī)理合乎離子交換色譜的機(jī)理.HAP的色譜機(jī)理可能包括以下幾個(gè)方面:存在兩種不同的吸附晶面;兩種不同晶面吸附方式不同;兩種不同吸附點(diǎn)的起因:Ca2+離子和PO43-色譜歷程為離子間的競(jìng)爭(zhēng)過程泳動(dòng)度(遷移率)取決于帶電質(zhì)點(diǎn)的性質(zhì)，即質(zhì)點(diǎn)所帶的凈電荷的量、質(zhì)點(diǎn)的大小和質(zhì)點(diǎn)的形狀。同時(shí)決定于：電泳介質(zhì)阻力、溶液黏度.Monod公式的物理意義，Monod常數(shù)的意義，公式的適應(yīng)范圍？Monod方程的物理意義：①其中μm為最大比生長(zhǎng)速率；Ks為Monod常數(shù)（飽和常數(shù)），取決于環(huán)境條件（pH,溫度，離子強(qiáng)度等）；②基本上反映了比生長(zhǎng)速率與底物濃度的關(guān)系，由Ks值又反映了比生長(zhǎng)速率與環(huán)境的關(guān)系；③不適合于比較黏稠的發(fā)酵液，有不同模型表示；④有二個(gè)以上限制性底物，有抑制性底物或抑制性產(chǎn)物存在時(shí)有不同的模型表示；Monod常數(shù)，等于比生長(zhǎng)速率達(dá)到最大比生長(zhǎng)速度一半時(shí)的限制基質(zhì)濃度。對(duì)于高密度培養(yǎng)，特別是絲狀菌培養(yǎng)過程，應(yīng)用該公式常得到滿意的結(jié)果。生物反應(yīng)器中基質(zhì)包括什么基質(zhì)的消耗主要用于什么方面如何用模型公式表示生物反應(yīng)器中基質(zhì)包括：碳源、氮源、氧及其他營(yíng)養(yǎng)源?；|(zhì)消耗包括：細(xì)胞生長(zhǎng)（合成新細(xì)胞）、細(xì)胞維持生命、合成次級(jí)代謝產(chǎn)物。用數(shù)學(xué)模型公式：ds/dt=-1/Yx/s*dx/dt-mxx-1/Yp/s*dp/dt表示。寫出細(xì)胞培養(yǎng)過程的產(chǎn)物生成的模型公式。產(chǎn)物生成的模型公式：dp/dt=αdx/dt+βx動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生產(chǎn)生物工程產(chǎn)品,特別是功能蛋白質(zhì)方面的優(yōu)勢(shì)？1）同源性直接進(jìn)行翻譯后加工蛋白質(zhì)可直接折疊成正確的構(gòu)象；2）有利于產(chǎn)品的分離純化，市場(chǎng)需求:目前全世界蛋白治療藥物的迅速增長(zhǎng)和市場(chǎng)需求已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了現(xiàn)有生產(chǎn)能力。生產(chǎn)產(chǎn)品:動(dòng)物細(xì)胞規(guī)?；a(chǎn)重組蛋白和抗體的工藝選擇可考慮使用當(dāng)前較成熟的工業(yè)化支持技術(shù)平臺(tái)以縮短產(chǎn)品工藝研發(fā)的時(shí)間加快工業(yè)化進(jìn)程。45.微囊化動(dòng)物細(xì)胞及其應(yīng)用目前微囊化細(xì)胞可以在兩方面應(yīng)用，意識(shí)培養(yǎng)微囊化動(dòng)物細(xì)胞以生產(chǎn)一些藥物；二是作為藥物直接用于治療或作為篩選藥物之用。生產(chǎn)藥物上的應(yīng)用：?jiǎn)慰寺】贵w的生產(chǎn)微囊化哺乳動(dòng)物的主要應(yīng)用是單克隆抗體的生產(chǎn)。微囊工藝已生產(chǎn)以克計(jì)的單克隆抗體。高值生化藥物的生產(chǎn)一些生化藥物的生產(chǎn)，總生產(chǎn)率可達(dá)培養(yǎng)瓶生產(chǎn)的5倍以上。而且，產(chǎn)物在電泳上顯示純度明顯高。干擾素的生產(chǎn)通過對(duì)一些培養(yǎng)生產(chǎn)干擾素發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞在微囊中生長(zhǎng)比懸浮胖或單層培養(yǎng)更旺盛。在治療及藥物篩選上的應(yīng)用：人工器官微囊化動(dòng)物細(xì)胞在排除免疫反應(yīng)上可能有普遍意義。人們已將某些器官的細(xì)胞微囊化并植入體內(nèi)以期待能代替這些器官的功能?？拱┧幬锏暮Y選微囊化的腫瘤細(xì)胞用于估價(jià)抗癌藥物對(duì)活體的作用。人的腫瘤細(xì)胞經(jīng)微囊化后注入小鼠腹腔中，服用受檢的抗癌藥，檢測(cè)微囊化的腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的反應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗癌藥能穿透微囊的膜作用于微囊中的腫瘤細(xì)胞，抑制和殺滅的水平與其他體外和體內(nèi)測(cè)定的藥效一致。HPLC色譜柱的關(guān)鍵在于填料，填料的物理化學(xué)參數(shù)有什么要求？在物理結(jié)構(gòu)上的要求:合適的顆粒大小及較窄的粒度分布;一定的顆粒強(qiáng)度;一定的孔徑大小和孔徑分布,避免復(fù)雜的微孔結(jié)構(gòu);一定的溶脹及收縮水平;目前的主要發(fā)展方向(研究熱點(diǎn)):顆粒單分散的填料;貫穿性超大孔結(jié)構(gòu)的填料;小顆粒的非多孔填料;在化學(xué)結(jié)構(gòu)上的要求:填料的化學(xué)結(jié)構(gòu),特別是顆粒表面和內(nèi)孔表面的化學(xué)結(jié)構(gòu)(如連接在基質(zhì)上的官能基團(tuán)或鏈段)是影響色譜熱力學(xué)行為(保留值,選擇性等)的主要因素特定的選擇性;良好的化學(xué)穩(wěn)定性;避免不可逆吸附;不同填料的化學(xué)結(jié)構(gòu)是通過對(duì)基質(zhì)材料的化學(xué)改性而實(shí)現(xiàn)的.46.HPLC柱對(duì)介質(zhì)的要求和羥基磷灰石填料的性能。HPLC柱對(duì)于介質(zhì)的要求和羥基磷灰石作為色譜填充介質(zhì)的性能主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：高機(jī)械強(qiáng)度在HPLC柱中流動(dòng)相一般在高壓下通過柱，因而要求填充介質(zhì)具有高的機(jī)械強(qiáng)度。現(xiàn)在使用的羥基磷灰石，尤其是球型顆?？梢栽?5MPa壓力下使用，通過強(qiáng)化方法制備的羥基磷灰石既所謂陶瓷羥基磷灰石可在幾十兆帕以上的壓力下使用。粒子大小、形狀和孔隙填充介質(zhì)的粒子大小、形狀以及表面結(jié)構(gòu)與HPLC柱的理論塔板數(shù)直接相關(guān)，通常要求有高的理論塔板數(shù)。球型羥基磷灰石顆粒大小、性質(zhì)和孔隙可滿足HPLC柱的要求。3）化學(xué)和熱穩(wěn)定性色譜過程是流動(dòng)相與固定相既填充介質(zhì)之間頻繁強(qiáng)烈接觸中完成的，因此要求填充介質(zhì)在流動(dòng)相中有很好的化學(xué)穩(wěn)定性。羥基磷灰石是磷酸鈣鹽中最穩(wěn)定的相，在中性或堿性水相中非常穩(wěn)定。羥基磷灰石在1400