血液實驗課件

實驗一影響血液凝固的因素實驗二出血時間和凝血時間的測定實驗三ABO血型的鑒定背景知識見《生理學(xué)》教材第三章P58-74頁血小板生理生理性止血的基本過程血液凝固血型與紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞血型輸血原則目的原理動物藥品器材方法與步驟注意事項結(jié)果與分析目的原理動物藥品一、血液凝固（bloodcoagulation）血液由流體狀態(tài)變?yōu)椴荒芰鲃拥哪z凍狀凝塊的過程稱為血液凝固，簡稱血凝?？扇苄岳w維蛋白原不可溶性纖維蛋白多聚體本質(zhì)：[相關(guān)知識]2、凝血酶形成二、血液凝固過程1、凝血酶原酶復(fù)合物形成3、纖維蛋白形成纖維蛋白形成纖維蛋白原纖維蛋白單體纖維蛋白多聚體ⅩⅢⅩⅢaCa2+Ca2+凝血酶形成ⅡaⅡⅩ外源性凝血組織損傷釋放ⅢCa2+ⅢⅦa凝血酶原酶復(fù)合物形成Ⅹ

ⅩaⅤaⅨⅨaⅫⅫa內(nèi)源性凝血激肽釋放酶前激肽釋放酶ⅪⅪaPL

ⅧaCa2+PLCa2+接觸異物接觸異物Ca2+Ca2+通過與FII、FVII、FIX、FX結(jié)合并使其發(fā)生變構(gòu)，暴露出與磷脂結(jié)合的部位來參與凝血。因此Ca2+在血凝過程中具有很重要的作用。三、Ca2+在血液凝固中的作用肝素在體內(nèi)和體外都有抗凝作用，主要通過增加抗凝血酶的活性而發(fā)揮間接抗凝作用，使血液不凝。五、肝素在凝血過程中的作用[動物]家兔，2～3kg，雌雄均可[藥品]

肝素、草酸鉀、2%氯化鈣溶液、肺組織浸液、富血小板血漿、少血小板血漿、生理鹽水、石蠟油[器材]小燒杯、帶橡皮刷的玻璃棒或竹簽、清潔小試管10支、水浴裝置一套、冰塊、棉花、移液器（1ml、0.2ml）表7-2內(nèi)源性凝血與外源性凝血的觀察1號試管2號試管3號試管富血小板血漿(ml)0.2------------少血小板血漿(ml)------0.20.2生理鹽水(ml)0.20.2------肺組織浸液(ml)------------0.2CaCl2(ml)0.20.20.2血液凝固時間(s)*比較血液凝固的時間(1與2比，2與3比)，分析產(chǎn)生差別原因取小試管7支，編號并按表7-4準(zhǔn)備后，取家兔頸動脈血，每管1ml,在加3滴2%

CaCl2溶液時立即計時，每15″傾斜試管一次，以觀察血液是否凝固，至血液呈凝膠狀不再流動時記錄血凝時間。2.觀察影響血液凝固的理化因素實驗條件加抗凝血加CaCl2凝血時間粗糙面⑴試管內(nèi)加棉花1ml3滴⑵試管內(nèi)涂石蠟油1ml3滴溫度⑶試管置37℃水浴1ml3滴⑷試管置冰浴1ml3滴⑸加肝素0.2ml1ml3滴⑹加草酸鉀0.2ml1ml3滴⑺對照管1ml3滴表7-4影響血凝的理化因素3.示教：觀察纖維蛋白原在凝血過程中的作用取血10ml，注入兩個小燒杯中，一杯靜置，另一杯用試管刷輕輕攪拌，幾分鐘后試管刷上結(jié)成紅色血團(tuán)，用水沖洗，觀察纖維蛋白的形狀，比較兩杯的血凝情況。1．每試管口徑大小及取血量應(yīng)基本一致，判斷試管傾斜角度（45o）、間隔時間（15s/次）、標(biāo)準(zhǔn)（血液不見流動）都應(yīng)一致。2．采血有先有后，計時不應(yīng)統(tǒng)一要求，各組和個人應(yīng)分別單獨計時。3．棉花不要壓試管太緊，要松軟。4．用石蠟油將試管表面全部潤滑后，將石蠟油倒入水池中。5．取血前先準(zhǔn)備好冰塊，取完血后立即把第3號試管放入水浴鍋，4號試管放入裝有冰塊的燒杯中。[注意事項]出血時間是指從針刺使毛細(xì)血管破損，血液自行流出到自行停止的時間。紙片法正常值：1~3分鐘

生理性止血的過程

包括血管收縮、血小板血栓形成和纖維蛋白凝塊的形成和纖維組織增生，長入血凝塊達(dá)到永久止血。

[對象]人[藥品]75%酒精棉球[器材]采血針、載玻片、濾紙條、秒表1．出血時間的測定(1)以75%酒精棉球消毒耳垂或中指指端腹側(cè)，待酒精自然揮發(fā)后，用消毒采血針刺入上述部位2～3mm深，讓血液自然流出，切勿擠壓，從血流流出算起計算時間。(2)每隔半分鐘用濾紙吸干流出的血流一次，直到吸不到血液為止。(3)記錄開始出血到止血的時間，或以濾紙上的血點數(shù)×0.5分鐘來計算，其結(jié)果即為出血時間（分）。[方法與步驟]1.出血時間的測定2.凝血時間的測定[結(jié)果]受試者姓名出血時間解釋受試者姓名凝血時間解釋[注意事項]1．各種用具嚴(yán)格消毒。2．針刺手指或耳垂不宜過淺，深度2～3mm使血可自然流出為宜。如針刺部位深度不夠，流血量太少不能用力擠壓局部，應(yīng)重新針刺。3．用濾紙吸血時，注意不要用濾紙觸及皮膚傷口，以免影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。4．測定凝血時，應(yīng)嚴(yán)格每隔半分鐘用大頭針挑血一次，不可太頻繁，同時每次挑動血液要按一定方向和順序進(jìn)行，以免破壞纖維蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而造成不凝的假象。實驗三ABO血型的鑒定[目的]

學(xué)習(xí)ABO血型鑒定的實驗方法，加深對ABO血型劃分的理解。[原理]用已知的血清凝集素(抗A凝集素、抗B凝集素)來確定未知的紅細(xì)胞膜上的凝集原（A凝集原和B凝集原）的種類，從而鑒定ABO血型。血型紅細(xì)胞膜上的抗原血清中的抗體A型血A抗原抗BB型血B抗原抗AAB型血AB抗原——O型血——抗A和抗B各種血型的抗原和抗體分布情況血型的鑒定原理含B抗原的紅細(xì)胞+抗B抗體紅細(xì)胞凝集反應(yīng)抗BRh血型的臨床意義輸血溶血新生兒溶血輸血原則1、血型鑒定是安全輸血的前提.2、輸血前必須進(jìn)行交叉配血試驗(cross-matchtest）凝集凝集不凝集不凝集交叉配血試驗交叉配血的主側(cè):供血者紅細(xì)胞+受血者血清交叉配血的次側(cè):供血者血清+受血者紅細(xì)胞

配血不合,不能輸血配血相合,可以輸血緊急情況少量緩慢輸血,密切觀察,如有輸血反應(yīng),立即停止不凝集[對象]人[藥品]抗A抗體和抗B抗體，生理鹽水[器材]采血針、凹玻片、75%酒精棉球顯微鏡1．取雙凹片一塊，用蠟筆在兩端分別寫上A、B字樣，在兩側(cè)凹內(nèi)分別滴一滴抗A抗體和抗B抗體。2．用鑷子夾取75%酒精棉球，消毒指端或耳垂及采血針，用采血針采一滴血，用玻片一角刮取少許血液在抗A抗體中搖勻，在再用玻片另一角刮取少許在抗B抗體中搖勻。3．將玻片輕輕轉(zhuǎn)動數(shù)次，使血液血清充分混合，放置10～15min后肉眼觀察有無凝集現(xiàn)象，若肉眼不能判斷是否凝集，應(yīng)放在顯微鏡下觀察，鑒定結(jié)果。[方法與步驟]血液實驗結(jié)果分析表7-2內(nèi)源性凝血與外源性凝血的觀察1號試管2號試管3號試管富血小板血漿(ml)0.2------------少血小板血漿(ml)------0.20.2生理鹽水(ml)0.20.2------肺組織浸液(ml)------------0.2CaCl2(ml)0.20.20.2血液凝固時間(s)*比較血液凝固的時間(1與2比，2與3比)，分析產(chǎn)生差別原因1號試管與2號試管凝血時間對比現(xiàn)象：（）號試管快于（）號試管原因：結(jié)論：血小板（）血液凝固

2號試管與3號試管凝血時間對比現(xiàn)象：（）號試管快于（）號試管原因：結(jié)論：外源性凝血（）內(nèi)源性凝血

實驗條件加抗凝血加CaCl2凝血時間粗糙面⑴試管內(nèi)加棉花1ml3滴⑵試管內(nèi)涂石蠟油1ml3滴溫度⑶試管置37℃水浴1ml3滴⑷試管置冰浴1ml3滴⑸加肝素0.2ml1ml3滴⑹加草酸鉀0.2ml1ml3滴⑺對照管1ml3滴表7-4影響血凝的理化因素1號試管與2號試管凝血時間對比現(xiàn)象：（）號試管快于（）號試管原因：結(jié)論：接觸面越（）血液凝固越（）

3號試管與4號試管凝血時間對比現(xiàn)象：（）號試管快于（）號試管原因：結(jié)論：酶的（）溫度，能（）血液凝固

5號試管凝血時間現(xiàn)象：原因：結(jié)論：肝素具有（）作用6號試管凝血時間現(xiàn)象：原因：結(jié)論：草酸鉀具有（）作用示教靜止燒杯：攪拌的燒杯：