微生物與潔凈作業(yè)知識課件

微生物與

潔凈作業(yè)知識貴州天地藥業(yè)有限責任公司1微生物與

潔凈作業(yè)知識1第一部分微生物知識第一章微生物概論一、什么是微生物微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不見的微小生物的總稱。包括屬于原核類的細菌、放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體和藍細菌（過去稱藍藻或藍綠藻），屬于真核類的真菌（酵母菌和霉菌）、原生動物和顯微藻類，以及屬于非細胞類的病毒、類病毒和朊病毒等。微生物千姿百態(tài)，有些是腐敗性的，即引起食品氣味和組織結(jié)構發(fā)生不良變化。當然有些微生物是有益的，它們可用來生產(chǎn)如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必須通過顯微鏡放大約1000倍才能看到。比如中等大小的細菌，1000個疊加在一起只有句號那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐敗的牛奶中約有5千萬個細菌，或者講每毫升牛奶中細菌總數(shù)約為50億。也就是一滴牛奶中可有含有50億個細菌。2第一部分微生物知識2二、微生物的分類

根據(jù)微生物有無細胞基本結(jié)構、分化程度、化學組成等特點，可分為三大類。1.非細胞型微生物無細胞結(jié)構，無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，由單一核酸（DNA/RNA）和蛋白質(zhì)衣殼組成，必須在活細胞內(nèi)增殖。病毒屬于此類微生物。2.原核細胞型微生物細胞核分化程度低，只有DNA盤繞而成的擬核，無核仁和核膜。這類微生物包括細菌、衣原體、支原體、立克次體、螺旋體和放線菌。3.真核細胞型微生物細胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色體，能進行有絲分裂。如真菌、藻類等。3二、微生物的分類3三、微生物的作用及危害1.微生物的作用絕大多數(shù)微生物對人和動物是有益的，已廣泛應用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥、釀造、化工、制革、石油等行業(yè)，發(fā)揮了越來越重要的作用。例如與我們?nèi)粘Ｉ蠲芮邢嚓P的如酸奶、酒類、抗生素、疫苗等。2.微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及動、植物發(fā)生病害，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物。如人類的許多傳染病（感冒、傷寒、痢疾、結(jié)核、脊髄灰質(zhì)炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。從藥品生產(chǎn)的衛(wèi)生學而言，微生物對藥品的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格的重要因素。4三、微生物的作用及危害4第二章微生物的類群和形態(tài)結(jié)構微生物種類繁多，人們研究得最多、也較深入的主要有細菌、放線菌、藍細菌、支原體、立克次體、古菌、真菌、顯微藻類、原生動物、病毒、類病毒和朊病毒等。現(xiàn)擇要介紹如下：一、細菌細菌是一類細胞細而短（細胞直徑約0.5μm-5μm）、結(jié)構簡單、細胞壁堅韌以二等分裂方式繁殖和水生性較強的原核微生物，分布廣泛。2.細菌的特殊結(jié)構特殊結(jié)構是指某些細菌具有的結(jié)構，包括莢膜、鞭毛、菌毛和芽孢，其中芽孢抵抗力最強，滅菌就以殺滅芽孢為依據(jù)。5第二章微生物的類群和形態(tài)結(jié)構微生物種類繁多，人們研究得1.細菌的形態(tài)與基本結(jié)構觀察細菌最常用的儀器是光學顯微鏡，其大小可以用測微尺在顯微鏡下測量，一般以微米為單位。細菌按其形態(tài)不同，主要分為球菌、桿菌和螺形菌三類。（1）球菌多數(shù)球菌直徑在1微米左右，外觀呈球形或近似球形。由于繁殖時分裂平面不同可形成不同的排列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。（2）桿菌形態(tài)多數(shù)呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多數(shù)呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈狀桿菌、球桿菌等。（3）螺形菌菌體彎曲，呈弧形或螺旋形。如幽門螺桿菌。細菌雖小，仍具有一定的細胞結(jié)構和功能。細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)和核質(zhì)等各種細菌都有，是細菌的基本結(jié)構。61.細菌的形態(tài)與基本結(jié)構62.細菌的特殊結(jié)構特殊結(jié)構是指某些細菌具有的結(jié)構，包括莢膜、鞭毛、菌毛和芽孢，其中芽孢抵抗力最強，滅菌就以殺滅芽孢為依據(jù)。什么是芽孢？某些細菌在一定的環(huán)境條件下，胞質(zhì)脫水濃縮，菌體內(nèi)部形成一個圓形或橢圓形小體積稱芽孢。芽孢的特點：①芽孢是細菌的休眠狀態(tài)，無繁殖能力。芽孢不直接引起疾??；②當環(huán)境適宜時，芽孢又能發(fā)育成細菌的繁殖體，大量繁殖而致?。虎垡粋€細菌只能形成一個芽孢，一個芽孢只能形成一個繁殖體；④芽孢抵抗力極強在自然界克存活幾年甚至幾十年，滅菌以殺滅芽孢為依據(jù)；⑤根據(jù)芽孢的大小、形態(tài)、和在菌體內(nèi)的位置，可鑒別細菌。72.細菌的特殊結(jié)構788992.細菌的繁殖二分裂繁殖是細菌最普遍、最主要的繁殖方式。其繁殖速度很快，大多數(shù)細菌約20—30分鐘繁殖一代，少數(shù)細菌繁殖速度較慢，需18小時才可繁殖一代。細菌的繁殖條件：①豐富的營養(yǎng)物質(zhì)：包括水分、無機鹽類、蛋白胨、糖及生長因子；②合適的酸堿度：大多數(shù)致病菌最適pH7.2--7.6；③恰當?shù)臏囟?大多數(shù)致病菌最適生長溫度37℃；④足夠的氣體：主要是氧氣和二氧化碳。102.細菌的繁殖10細菌細胞分裂的電鏡超薄切片圖

桿菌二分裂過程模式圖11細菌細胞分裂的電鏡超薄切片圖

桿菌二分裂過程模式圖11二、

真菌真菌是一類有細胞壁，無葉綠素，以寄生或腐生方式生存，少數(shù)為單細胞，多數(shù)為多細胞，能進行無性或有性繁殖的一類真核細胞型微生物。真菌包括單細胞與多細胞兩類。單細胞真菌呈圓形或卵圓形，稱為酵母菌；多細胞真菌由菌絲和孢子組成，并交織成團，稱絲狀菌或霉菌。真菌生長的最適的溫度為22～28℃，最適的pH值為4.0～6.0。其繁殖能力強，但生長速度比細菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌對熱的抵抗力不強，一般加熱60~70℃1小時即被殺死，但對干燥、日光、紫外線和一些化學消毒劑有抵抗力，對2.5％碘酒、10％甲醛則較敏感。12二、真菌12三、

病毒病毒屬非細胞型微生物，在自然界分布非常廣泛，可在人、動物、植物、真菌和細菌中寄居并引起感染。病毒是體積最小、結(jié)構最簡單的微生物，它僅有一種核酸（DNA或RNA）作其遺傳物質(zhì)。病毒必須在宿主活細胞內(nèi)寄生，依靠細胞提供的能量、營養(yǎng)物質(zhì)及生物大分子合成機制，完成病毒的復制過程。病毒與人類的關系極為密切，人類的傳染病約75％是由病毒引起的。有些病毒傳染性強，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。13三、病毒13理化因素對病毒的影響（1）物理因素①溫度多數(shù)病毒耐冷不耐熱。在干冰溫度（-70℃）和液氮溫度（-196℃）下，病毒感染性可保持數(shù)月甚至數(shù)年。在50～60℃30分鐘，100℃幾秒鐘即可滅活。②pH多數(shù)病毒在pH5~9范圍內(nèi)穩(wěn)定，強酸或強堿條件下可被滅活。③射線X射線、γ射線和紫外線都能滅活病毒。（2）化學因素主要有化學消毒劑、抗生素及中草藥等。除強酸、強堿消毒劑外，酚類、氧化劑、鹵素類、醇類等對病毒均有滅活作用。14理化因素對病毒的影響14第三章微生物的營養(yǎng)一、微生物的營養(yǎng)要求微生物生長繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要有水、碳源、氮源、無機鹽和生長因子等。1.水水是各種生物細胞必需的，是良好的溶劑，微生物的新陳代謝過程中的一切生化反應都離不開水的作用。2.碳源碳源是合成菌體成分的原料，也是微生物獲取能量的主要來源。整體上看來，微生物可以利用的碳源范圍極廣，分為有機碳源和無機碳源兩大類。凡必須利用有機碳源的微生物就是異養(yǎng)微生物，凡能利用無機碳源的微生物就是自養(yǎng)微生物。糖類是最廣泛利用的碳源。15第三章微生物的營養(yǎng)一、微生物的營養(yǎng)要求153.氮源氮源主要是供給合成菌體結(jié)構的原料，很少作為能源利用。與碳源相似，微生物作為一個整體來說，能利用的氮源種類十分廣泛。某些微生物（如固氮菌）能利用空氣中分子態(tài)的氮或利用無機氮化物如銨鹽、硝酸鹽合成有機氮化物。4.無機鹽類無機鹽主要可為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素。微生物需要的無機鹽類很多，主要有P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等，其主要功能為構成菌體成分；調(diào)節(jié)滲透壓；作為某些酶的成分，并能激活酶的活性等。5.生長因子有些微生物雖然供給它適合的碳源氮源和無機鹽類，仍不能生長，還要供給一定量的所謂“生長因子”。其種類很多，主要是B族維生素的化合物等。生長因子可以從酵母浸出液、血液或血清中獲得。163.氮源16第四章微生物的生長和繁殖一、微生物的生長和繁殖微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷地吸收營養(yǎng)物質(zhì)，并按照自己的代謝方式進行代謝活動，如果同化作用大于異化作用，則細胞質(zhì)的量不斷增加，體積得以加大，于是表現(xiàn)為生長。簡單地說，生長就是有機體的細胞組分與結(jié)構在量方面的增加。單細胞微生物如細菌，生長往往伴隨著細胞數(shù)目的增加。當細胞增長到一定程度時，就以二分裂方式，形成兩個基本相似的子細胞，子細胞又重復以上過程。在單細胞微生物中，由于細胞分裂而引起的個體數(shù)目的增加，稱為繁殖。在一般情況下，當環(huán)境條件適合，生長與繁殖始終是交替進行的。從生長到繁殖是一個由量變到質(zhì)變的過程，這個過程就是發(fā)育。微生物處于一定的物理、化學條件下，生長發(fā)育正常，繁殖速率也高；如果某一或某些環(huán)境條件發(fā)生改變，并超出了微生物可以適應的范圍時，就會對機體產(chǎn)生抑制乃至殺滅作用。17第四章微生物的生長和繁殖一、微生物的生長和繁殖17二、細菌純培養(yǎng)的群體生長規(guī)律(1)延遲期：少量細菌接種到新鮮培養(yǎng)基后，一般不立即進行繁殖，生長速度近于零。因此在開始一段時間，細菌數(shù)幾乎保持不變，甚至稍有減少。這段時間被稱為延遲期，又稱為遲緩期、調(diào)整期或滯留適應期。處于延遲期細菌細胞的特點是分裂遲緩、代謝活躍。延遲期的長短與菌種、種齡、接種量和培養(yǎng)基成分有關。

(2)對數(shù)期：對數(shù)期又稱指數(shù)期。這一階段突出特點是細菌數(shù)以幾何級數(shù)增加，代時穩(wěn)定，細菌數(shù)目的增加與原生質(zhì)總量的增加，與菌液混濁度的增加均呈正相關性。

(3)穩(wěn)定期：又稱恒定期或最高生長期。處于穩(wěn)定期的微生物，新增殖的細胞數(shù)與老細胞的死亡數(shù)幾乎相等，整個培養(yǎng)物中二者處于動態(tài)平衡，此時生長速度又逐漸趨向零。穩(wěn)定期的細胞內(nèi)開始積累貯藏物，如肝糖、異染顆粒、脂肪粒等，大多數(shù)芽孢細菌也在此階段形成芽孢。如果為了獲得大量菌體，就應在此階段收獲，因這時細胞總數(shù)最高；這一時期也是發(fā)酵過程積累代謝產(chǎn)物的重要階段，某些放線菌抗生素的大量形成也在此時期。

(4)衰亡期：穩(wěn)定期后如再繼續(xù)培養(yǎng)，細菌死亡率逐漸增加，以致死亡數(shù)大大超過新生數(shù)，群體中活菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)了“負生長”，此階段叫衰亡期。18二、細菌純培養(yǎng)的群體生長規(guī)律18第五章熱原一、什么是熱原？熱原：指微量即能引起恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)的總稱。是微生物的代謝產(chǎn)物，大多數(shù)細菌都能產(chǎn)生，致熱能力最強的是革蘭陰性桿菌所產(chǎn)生的熱原，真菌和病毒也能產(chǎn)生熱原。

熱原是微生物產(chǎn)生的一種內(nèi)毒素，它存在于細菌的細胞膜和固體膜之間。內(nèi)毒素是由磷脂、脂多糖和蛋白質(zhì)所組成的復合物，其中脂多糖是內(nèi)毒素的主要成分，具有特別強的熱原活性，因而大致可以認為“內(nèi)毒素=熱原=脂多糖”。

19第五章熱原19二、熱原的基本性質(zhì)1、耐熱性在通常的滅菌條件下，熱原往往不能被破壞，一般采用180℃，3-4h;250℃,30-45min或650℃，1min可徹底破壞熱原。2、濾過性熱原直徑約為1-5um，可通過一般濾器，甚至是微孔濾膜，孔徑小于1nm的超濾膜可除去絕大部分甚至全部熱原。3、水溶性熱原可溶于水。4、不揮發(fā)性熱原具有不揮發(fā)性，但可溶于水蒸氣所夾帶的霧滴而帶入蒸餾水中，因此，蒸餾水器上附有隔沫裝置。5、被吸附性熱原可以被活性炭，離子交換樹脂，石棉濾板等吸附。6、其他熱原能被強酸、強堿、強氧化劑、超聲波等破壞。20二、熱原的基本性質(zhì)20三、污染熱原的途徑1、從溶媒中帶入溶媒常是注射劑中污染熱原的主要途徑。通常蒸餾器結(jié)構不合理，操作不當，注射用水貯放時間過長，均易導致注射用水含有熱原。2、從原輔料中帶入有些原料本身容易滋生微生物，如果貯存時間過長或包裝損壞，均易污染熱原。3、從容器、用具、管道與設備中帶入配制注射劑的容器、用具、管道、濾器等，使用前清洗不徹底或滅菌不完全，均可污染熱原。4、制備過程中污染環(huán)境的潔凈級別達不到規(guī)定要求、或操作時間過長、滅菌不及時或滅菌不徹底、包裝不嚴密等，都可能使注射劑污染熱原。5、從輸液器中帶入有時輸液本生不含熱原，但還是發(fā)生熱原反應，一般就是由于輸液用具污染熱原而發(fā)生的熱原反應。21三、污染熱原的途徑21四、除去熱原的方法1、高溫法耐熱器具潔凈后用250℃干熱滅菌30min以上可以破壞熱原。2、酸堿法玻璃器具可采用重鉻酸鉀硫酸清潔液或稀氫氧化鈉處理破壞熱原。3、吸附法活性炭具有較強的吸附熱原作用，同時兼有脫色助濾作用。應選用針用規(guī)格活性炭，常用量為0.1%-0.5%。此外，活性炭與白陶土合用也可除去熱原。4、離子交換法熱原分子含有帶負電荷的磷酸根與羧酸根，強堿性陰離子交換樹脂可吸附除去溶劑中的熱原。5、凝膠濾過法用二乙氨基乙基葡聚糖凝膠濾過可除去熱原。6、反滲透法選用三醋酸纖維素膜或聚酰胺膜進行反滲透可除去熱原。7、超濾法3.0—15nm的超濾膜能除去熱原。22四、除去熱原的方法22第六章消毒與滅菌下列術語常用于表示物理或化學方法對微生物的殺滅程度。消毒：殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含細菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑制體內(nèi)或體外細菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細菌的繁殖。防腐：防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法，細菌一般不死亡。同一種化學藥品在高濃度時為消毒劑，低濃度時常為防腐劑。消毒與滅菌的方法一般可分為物理學方法和化學方法兩大類。23第六章消毒與滅菌下列術語常用于表示物理或化學方一、物理消毒滅菌法用于消毒滅菌的物理因素有熱力、輻射、過濾等。1.熱力滅菌法熱力滅菌法分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類，相同溫度下，后者的滅菌效力比前者大。高溫對細菌具有明顯的致死作用，因此最常用于消毒與滅菌。多數(shù)無芽孢的細菌經(jīng)55～60℃作用30～60分鐘后死亡。經(jīng)80℃濕熱5～10分鐘可殺死所有細菌繁殖體、真菌和酵母菌。細菌芽孢對高溫有很強的抵抗力，例如炭疽芽孢桿菌的芽孢，耐受5～15分鐘的煮沸，而肉毒梭菌的芽孢則需煮沸3～5小時才死亡。如：葡萄糖注射液為121℃、12min、FO值≥12，氯化鈉注射液為121℃、15min、FO值≥15，治療性品種為121℃、10min、FO值≥10。24一、物理消毒滅菌法242.輻射滅菌法（1）紫外線作用于DNA，使細菌DNA的復制和轉(zhuǎn)錄受到干擾，導致細菌變異或死亡。波長在265-266nm殺菌效果最強，主要用于室內(nèi)空氣和工作臺面的消毒。（2）電離輻射對各種細菌均有致死作用。常用于大量一次性醫(yī)用塑料制品的消毒和食品的消毒。（3）微波是一種波長為1mm～1m的電磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜及陶瓷等物質(zhì)，但不能穿透金屬表面。多用于檢驗室用品、無菌室的用具的消毒。3.濾過除菌法用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去,以達到除菌目的。濾菌器含有微細小孔＜0.22微米,只允許液體或氣體通過,而大于孔徑的細菌等顆粒不能通過。適用范圍：血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。252.輻射滅菌法25二.化學消毒滅菌法許多化學藥物能影響微生物的化學組成、物理結(jié)構和生理活性，從而發(fā)揮防腐、消毒及滅菌的作用。潔凈室(區(qū))應定期消毒，使用的消毒劑不得對設備、物料和成品產(chǎn)生污染。消毒劑品種應定期更換，防止產(chǎn)生耐藥菌株。

影響消毒劑作用效果的因素：①消毒劑的性質(zhì)、濃度及作用時間；②細菌的種類和生活狀態(tài)；③環(huán)境因素，如有機物的含量、溫度、濕度及酸堿度等。

26二.化學消毒滅菌法26常用消毒劑的種類和用途類別作用機制常用種類用途酚類蛋白變性，細胞膜損傷石炭酸地面、器具表面、皮膚消毒醇類蛋白變性乙醇皮膚、體溫計消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮膚消毒表面活性劑蛋白變性，細胞膜損傷新潔而滅手術洗手、浸泡手術器械27常用消毒劑的種類和用途類別作用機制常用種類用途酚類蛋白變性，第二部分潔凈作業(yè)知識28第二部分潔凈作業(yè)知識28一、潔凈室1.1、潔凈室的含義：潔凈室是需要對塵粒及微生物數(shù)量進行控制的房間（區(qū)域），該房間（區(qū)域）的建造結(jié)構、裝備及使用不僅能夠截留粒子而且會盡可能地減少粒子向該房間（區(qū)域）介入，并且，可根據(jù)需要對該房間（區(qū)域）的溫度、濕度以及壓差等參數(shù)進行控制。

1.2、潔凈室對藥品生產(chǎn)的意義：藥品，特別是靜脈注射的藥品，必須確保不受微生物的污染。懸浮在空氣中的微生物大都依附在塵埃粒子表面，進入潔凈室的空氣，若不除塵控制微生物粒子，藥品的質(zhì)量就難以保證；藥品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的各種粉塵必須除去，以防止藥物的交叉污染和污染大氣環(huán)境。藥品生產(chǎn)中也會產(chǎn)生有害、高溫、高濕的氣體，需要及時排除，以保證生產(chǎn)人員的健康，保證生產(chǎn)不受影響，保證產(chǎn)品質(zhì)量。調(diào)節(jié)控制空氣至合適的溫度和濕度，不僅是為生產(chǎn)人員提供舒適的生產(chǎn)勞動環(huán)境，而且也是藥品生產(chǎn)質(zhì)量保證的需要。29一、潔凈室29潔凈度級別塵粒最大允許數(shù)（粒/m3）微生物最大允許數(shù)≥0.5μm≥5μm浮游菌（cfu/m3）沉降菌（cfu/皿）100級3500005110000級35000020001003100000級35000002000050010300000級10500000600001000151.3、潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級別1.3.11998版GMP對藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）的空氣潔凈度劃分為100級、10000級、100000級、300000級四個級別，具體劃分詳見下表：30潔凈度級別塵粒最大允許數(shù)（粒/m3）微生物最大允許數(shù)≥0.51.3.22010版GMP對藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）的空氣潔凈度劃分為A級、B級、C級、D級四個級別，具體劃分詳見下表：潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米靜態(tài)動態(tài)≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μmA級352020352020B級3520293520002900C級3520002900352000029000D級352000029000不作規(guī)定不作規(guī)定311.3.22010版GMP對藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）的空氣潔凈度級別浮游菌cfu/m3沉降菌(φ90mm)cfu/4h表面微生物接觸碟(φ55mm)cfu/碟5指手套cfu/手套A級＜1＜1＜1＜1B級10555C級1005025－D級20010050－微生物監(jiān)測的動態(tài)標準32潔凈度級別浮游菌cfu/m3沉降菌(φ90mm)表面微生物1.4、潔凈室（區(qū)）的送風量和換氣次數(shù)1.4.11998版GMP送風量計算：單向流（層流）潔凈室送風量=潔凈室斷面面積(㎡)×風速亂流（非單向流）潔凈室送風量=潔凈室容積（

m3)×換氣次數(shù)（次/h）換氣次數(shù)：10000級潔凈室換氣次數(shù)n≥25次/h；100000級潔凈室換氣次數(shù)n≥15次/h；300000級潔凈室換氣次數(shù)n≥12次/h；

1.4.22010版GMP送風量計算：單向流（層流）潔凈室送風量=潔凈室斷面面積(㎡)×風速亂流（非單向流）潔凈室送風量=潔凈室容積（m3)×換氣次數(shù)（次/h）

潔凈區(qū)生產(chǎn)環(huán)境的空氣換氣次數(shù)應根據(jù)熱量平衡及風量平衡計算，并加以驗證。331.4、潔凈室（區(qū)）的送風量和換氣次數(shù)33項

目標準要求材料及裝修標準潔凈室內(nèi)表面應平整、光滑、無裂逢、接口嚴密、無顆粒脫落、防霉、防靜電、避免眩光并耐受清洗和消毒、墻壁與地面交界處宜成弧形或采取其它措施，以減少灰塵積聚和便于清潔。溫度溫度與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應，無特殊要求時，溫度應控制在18～26℃。濕度濕度與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應，無特殊要求時，濕度應控制在45～65%。1.5、潔凈室（區(qū)）內(nèi)部分參數(shù)控制要求34項目標準要求材料及裝修標準潔凈室內(nèi)表面應平整項

目標準要求照明主要工作室的照度宜為≥300Lx，對照度有特殊要求的生產(chǎn)部位要設置局部照明（例如質(zhì)控室可見異物抽檢）。壓差1998版GMP空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應大于5帕，潔凈室（區(qū)）與室外大氣的靜壓差大于10帕，并應有指示壓差的裝置。2010版GMP潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同級別潔凈區(qū)之間的壓差應不低于10帕斯卡。必要時，相同潔凈度級別的不同功能區(qū)域（操作間）之間也應當保持適當?shù)膲翰钐荻?。噪聲動態(tài)測試時室內(nèi)噪聲級應≤70dBA;空態(tài)測試時亂流潔凈室噪聲級應≤60dBA，層流潔凈室噪聲級應≤65dBA。潔凈室（區(qū)）內(nèi)部分參數(shù)控制要求35項目標準要求照明主要工作室的照度宜為≥30項

目標準要求新風量進入潔凈室的空氣必須經(jīng)凈化處理，潔凈室內(nèi)應供給的新風量，其數(shù)值應取下列風量中的最大值：①亂流潔凈室總送風量的10%，平流潔凈室總送風量的2%；②補償室內(nèi)排風和保持室內(nèi)正壓值所需的新風量；③保證室內(nèi)每人每小時的新風量≥40m3。潔凈區(qū)域人數(shù)根據(jù)潔凈區(qū)域空間大小與新風量，保證室內(nèi)每人每小時的新風量≥，制定潔凈區(qū)域各房間能夠容納多少人。潔凈室（區(qū)）內(nèi)部分參數(shù)控制要求36項目標準要求新風量進入潔凈室的空氣必須經(jīng)凈化二、污染潔凈室（區(qū)）潔凈度的因素。2.1、來自外部的污染物質(zhì)。

a.大氣污染

b.大氣中的微生物2.2、潔凈室內(nèi)的污染源主要來自四個方面：a.作業(yè)人員；b.水c.建筑圍護結(jié)構、設施的產(chǎn)塵，這里包括墻、頂棚、地面和一些裸露管線的產(chǎn)塵；d.設備及產(chǎn)品生產(chǎn)過程的產(chǎn)塵。37二、污染潔凈室（區(qū)）潔凈度的因素。37污染發(fā)生源粒狀污染物有害氣體備注人體粉塵、皮屑、污垢、細菌、纖維、化妝品體臭、CO2、氨、水蒸氣吸煙粉塵（焦油、尼古丁等）二甲基硝酸銨等CO、CO2、NO、NO2、甲醛、丙烯醛、碳氫化合物在潔凈室內(nèi)禁止吸煙，在一般空調(diào)房間內(nèi)也不宜吸煙辦公設備紙張、家具的纖維及塵粒臭氧、氨、溶劑揮發(fā)物（VOC）2.2.1、室內(nèi)發(fā)生污染空氣的主要物質(zhì)，見下表：38污染發(fā)生源粒狀污染物有害氣體備注人體粉塵、皮屑、污垢、細菌、污染發(fā)生源粒狀污染物有害氣體備注機械運轉(zhuǎn)設備轉(zhuǎn)動設備磨損的粉塵、纖維、碳化油脂等潤滑油揮發(fā)物燃燒器具煙塵CO、CO2、SO2、NO2、碳氫化合物等建筑材料細菌、霉菌、壁虱、石棉纖維、玻璃纖維、粉塵等甲醛、氡氣、溶劑、粘接劑中有機溶劑揮發(fā)物（VOC）清洗、滅菌材料噴射劑（氟化碳氫化合物）、殺菌劑、防霉劑、溶劑、洗滌劑的揮發(fā)物39污染發(fā)生源粒狀污染物有害氣體備注機械運轉(zhuǎn)設備轉(zhuǎn)動設備磨損的粉2.3、人員與室內(nèi)空氣污染2.3.1、作業(yè)人員的發(fā)塵量：潔凈室內(nèi)的塵源，主要來自生產(chǎn)工藝設備運轉(zhuǎn)發(fā)塵，產(chǎn)品和材料運送過程中發(fā)塵，潔凈室內(nèi)建筑內(nèi)表面等的發(fā)塵和人員產(chǎn)塵。來自生產(chǎn)設備運轉(zhuǎn)中的塵粒有的可通過局部排風裝置排除；按潔凈室的管理規(guī)定，產(chǎn)品和材料均應進行清潔，在運送過程中的發(fā)塵量與人體發(fā)塵量相比是很少的；潔凈室內(nèi)表面只要嚴格按規(guī)定進行清掃、清潔，其發(fā)塵量也可控制到很少。潔凈室的塵源主要來自操作人員的發(fā)塵，即使按“人凈程序”進行了人身凈化，潔凈室內(nèi)人員產(chǎn)塵仍是主要污染源。在潔凈生產(chǎn)環(huán)境內(nèi)，工作人員的發(fā)塵量多少與其穿著的潔凈工作服種類、形式和潔凈服的著裝材質(zhì)類型有關，與工作人員在潔凈室內(nèi)的活動、動作的幅度等因素有關。2.3.2、人體發(fā)菌量：生物潔凈室，包括制藥工業(yè)、生物制品工廠、醫(yī)院的手術室等，必須控制人體的發(fā)菌量，人體的細菌散發(fā)量與服裝、人員的活動及場所等因素有關。402.3、人員與室內(nèi)空氣污染40三、潔凈室（區(qū)）的衛(wèi)生管理要求3.1、人員衛(wèi)生3.1.1、穿戴要求：①根據(jù)各生產(chǎn)區(qū)域的規(guī)定穿戴工作服，并遵守凈化程序。②穿戴潔凈工作服時，應先戴口罩后再穿潔凈服，然后對著鏡子檢查穿戴工作服的情況，要求帽子要包蓋全部頭發(fā)，口罩要遮住口鼻、胡須、衣服要拉（扣）好，鞋帶系好等。③在10000級和100000級（B級和C級）空氣潔凈度級別的潔凈區(qū)工作，每班洗一次潔凈服、潔凈工作鞋和口罩。④更換下來的工作服應分區(qū)域堆放，裝入專用容器中，標記明顯。⑤不同潔凈區(qū)域的工作服不能同時在同一洗衣機內(nèi)洗滌。⑥潔凈的工作服應存放在與使用工作服潔凈度級別一致的區(qū)域內(nèi)存放。41三、潔凈室（區(qū)）的衛(wèi)生管理要求413.1.2、個人衛(wèi)生：①隨時注意保持個人清潔衛(wèi)生，做到“五勤”：勤剪指甲，勤理發(fā)剃須，勤換衣服，勤洗澡洗頭、勤洗手。②工作前洗干凈手，不涂抺化妝品，上崗時不佩戴飾物、手表。③不攜帶個人物品進入生產(chǎn)區(qū)，不在生產(chǎn)區(qū)內(nèi)吃東西及吸煙。生產(chǎn)區(qū)內(nèi)的飲水間要干凈、整齊，對生產(chǎn)不造成污染。④潔凈室內(nèi)隨時注意保持手的清潔（上塞人員、膠塞漂洗人員需戴上經(jīng)清洗并消毒過的乳膠手套后操作），手或手套在消毒以后，不能接觸與工作無關的物品，嚴禁裸手直接接觸藥品及與藥品直接接觸的物料、設備、容器表面。一旦手或乳膠手套接觸到與工作無關的物品，例如工作臺臺面、玻璃瓶瓶身、盛裝丁基膠塞或中間品的容器具表面、門鎖、潔凈服以及口罩等，均應對手或手套進行重新清洗與消毒后，方可繼續(xù)操作。423.1.2、個人衛(wèi)生：423.2、潔凈室（區(qū)）環(huán)境衛(wèi)生要求：①按規(guī)定清潔消毒或滅菌（設備、設施及清潔工具）；嚴格執(zhí)行人凈物凈管理制度。②正確使用緩沖室、傳遞柜、傳遞窗等緩沖設施，規(guī)范工作行為。③嚴格控制進入潔凈區(qū)的人數(shù)。④潔凈室設施設備及清潔工具要符合GMP要求。⑤嚴格執(zhí)行人流、物流管理規(guī)定。433.2、潔凈室（區(qū)）環(huán)境衛(wèi)生要求：433.3、物料衛(wèi)生要求①投入生產(chǎn)的原輔料必須符合藥用標準。②進入潔凈區(qū)的物料，嚴格執(zhí)行物凈操作。③根據(jù)工藝規(guī)程選用合適的工藝用水。④與藥品直接接觸的壓縮空氣、干燥空氣、惰性氣體等應經(jīng)凈化處理，并符合要求443.3、物料衛(wèi)生要求443.4、設備衛(wèi)生①生產(chǎn)結(jié)束，按規(guī)定清潔設備。②更換品種時，徹底清潔設備。③備品、備件定置管理，進入潔凈區(qū)的備品備件從物流通道進入。④對于產(chǎn)塵較大的工序或設備，要采取捕塵措施。453.4、設備衛(wèi)生45463.5、生產(chǎn)過程的衛(wèi)生要求①各車間、工序、崗位、容器具、設施設備等均應按相應的清潔操作規(guī)程進行清潔、消毒。②實行定置管理，保持良好的生產(chǎn)秩序。③設備、設施均應有衛(wèi)生狀態(tài)標示，關鍵工序應在規(guī)定的時間內(nèi)完成。④按規(guī)定清場。463.5、生產(chǎn)過程的衛(wèi)生要求四、潔凈室（區(qū)）的作業(yè)程序4.1、人員進出潔凈室（區(qū)）的標準程序：人員進入潔凈區(qū)操作人員更衣程序（流程圖）進出穿（脫）一般生產(chǎn)區(qū)工作鞋穿（脫）潔凈工作鞋（潔凈拖鞋）脫（穿）一般生產(chǎn)區(qū)工作服洗

手穿（脫）潔凈工作服手消毒緩沖間脫（穿）生活鞋脫（穿）生活服穿（脫）一般生產(chǎn)區(qū)工作服潔凈區(qū)脫（穿）一般生產(chǎn)區(qū)工作鞋47四、潔凈室（區(qū)）的作業(yè)程序進出穿（脫）一般生產(chǎn)區(qū)工作鞋穿（脫4.2、物料進出潔凈室（區(qū)）標準程序484.2、物料進出潔凈室（區(qū)）標準程序484.3意外情況處理1、潔凈區(qū)出現(xiàn)設備故障，由操作人員立即報告工段長，工段長了解情況后，通知設備管理室并報告車間主任。2、維修工必須遵守潔凈室管理制度，以及設備維修的有關規(guī)定，對設備進行維修。維修期間，操作工必須在場確保產(chǎn)品質(zhì)量不受影響。3、潔凈區(qū)通風系統(tǒng)出現(xiàn)故障或停電，按以下原則要求進行：①不要打開通往低潔凈級區(qū)的門。②工段長立即向車間主任報告，并通知設備管理室；潔凈區(qū)人員盡可能減少走動。③灌裝工段的灌裝操作要立即停止。④確定在5分鐘內(nèi)停電，操作人員要在原地靜候。⑤若故障時間較長（超過5分鐘），則人員應緩慢離開潔凈室。⑥故障排除后若故障造成不同潔凈級區(qū)間壓差下跌甚至出現(xiàn)負壓，則必須待壓差正常后再運行15分鐘，方能開始生產(chǎn)。⑦故障排除后灌裝工段生產(chǎn)現(xiàn)場的藥液、玻璃瓶與丁基膠塞應視情形而進行回收或銷毀。494.3意外情況處理49微生物與

潔凈作業(yè)知識貴州天地藥業(yè)有限責任公司50微生物與

潔凈作業(yè)知識1第一部分微生物知識第一章微生物概論一、什么是微生物微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不見的微小生物的總稱。包括屬于原核類的細菌、放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體和藍細菌（過去稱藍藻或藍綠藻），屬于真核類的真菌（酵母菌和霉菌）、原生動物和顯微藻類，以及屬于非細胞類的病毒、類病毒和朊病毒等。微生物千姿百態(tài)，有些是腐敗性的，即引起食品氣味和組織結(jié)構發(fā)生不良變化。當然有些微生物是有益的，它們可用來生產(chǎn)如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必須通過顯微鏡放大約1000倍才能看到。比如中等大小的細菌，1000個疊加在一起只有句號那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐敗的牛奶中約有5千萬個細菌，或者講每毫升牛奶中細菌總數(shù)約為50億。也就是一滴牛奶中可有含有50億個細菌。51第一部分微生物知識2二、微生物的分類

根據(jù)微生物有無細胞基本結(jié)構、分化程度、化學組成等特點，可分為三大類。1.非細胞型微生物無細胞結(jié)構，無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，由單一核酸（DNA/RNA）和蛋白質(zhì)衣殼組成，必須在活細胞內(nèi)增殖。病毒屬于此類微生物。2.原核細胞型微生物細胞核分化程度低，只有DNA盤繞而成的擬核，無核仁和核膜。這類微生物包括細菌、衣原體、支原體、立克次體、螺旋體和放線菌。3.真核細胞型微生物細胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色體，能進行有絲分裂。如真菌、藻類等。52二、微生物的分類3三、微生物的作用及危害1.微生物的作用絕大多數(shù)微生物對人和動物是有益的，已廣泛應用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥、釀造、化工、制革、石油等行業(yè)，發(fā)揮了越來越重要的作用。例如與我們?nèi)粘Ｉ蠲芮邢嚓P的如酸奶、酒類、抗生素、疫苗等。2.微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及動、植物發(fā)生病害，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物。如人類的許多傳染?。ǜ忻?、傷寒、痢疾、結(jié)核、脊髄灰質(zhì)炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。從藥品生產(chǎn)的衛(wèi)生學而言，微生物對藥品的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格的重要因素。53三、微生物的作用及危害4第二章微生物的類群和形態(tài)結(jié)構微生物種類繁多，人們研究得最多、也較深入的主要有細菌、放線菌、藍細菌、支原體、立克次體、古菌、真菌、顯微藻類、原生動物、病毒、類病毒和朊病毒等?，F(xiàn)擇要介紹如下：一、細菌細菌是一類細胞細而短（細胞直徑約0.5μm-5μm）、結(jié)構簡單、細胞壁堅韌以二等分裂方式繁殖和水生性較強的原核微生物，分布廣泛。2.細菌的特殊結(jié)構特殊結(jié)構是指某些細菌具有的結(jié)構，包括莢膜、鞭毛、菌毛和芽孢，其中芽孢抵抗力最強，滅菌就以殺滅芽孢為依據(jù)。54第二章微生物的類群和形態(tài)結(jié)構微生物種類繁多，人們研究得1.細菌的形態(tài)與基本結(jié)構觀察細菌最常用的儀器是光學顯微鏡，其大小可以用測微尺在顯微鏡下測量，一般以微米為單位。細菌按其形態(tài)不同，主要分為球菌、桿菌和螺形菌三類。（1）球菌多數(shù)球菌直徑在1微米左右，外觀呈球形或近似球形。由于繁殖時分裂平面不同可形成不同的排列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。（2）桿菌形態(tài)多數(shù)呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多數(shù)呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈狀桿菌、球桿菌等。（3）螺形菌菌體彎曲，呈弧形或螺旋形。如幽門螺桿菌。細菌雖小，仍具有一定的細胞結(jié)構和功能。細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)和核質(zhì)等各種細菌都有，是細菌的基本結(jié)構。551.細菌的形態(tài)與基本結(jié)構62.細菌的特殊結(jié)構特殊結(jié)構是指某些細菌具有的結(jié)構，包括莢膜、鞭毛、菌毛和芽孢，其中芽孢抵抗力最強，滅菌就以殺滅芽孢為依據(jù)。什么是芽孢？某些細菌在一定的環(huán)境條件下，胞質(zhì)脫水濃縮，菌體內(nèi)部形成一個圓形或橢圓形小體積稱芽孢。芽孢的特點：①芽孢是細菌的休眠狀態(tài)，無繁殖能力。芽孢不直接引起疾??；②當環(huán)境適宜時，芽孢又能發(fā)育成細菌的繁殖體，大量繁殖而致??；③一個細菌只能形成一個芽孢，一個芽孢只能形成一個繁殖體；④芽孢抵抗力極強在自然界克存活幾年甚至幾十年，滅菌以殺滅芽孢為依據(jù)；⑤根據(jù)芽孢的大小、形態(tài)、和在菌體內(nèi)的位置，可鑒別細菌。562.細菌的特殊結(jié)構75785892.細菌的繁殖二分裂繁殖是細菌最普遍、最主要的繁殖方式。其繁殖速度很快，大多數(shù)細菌約20—30分鐘繁殖一代，少數(shù)細菌繁殖速度較慢，需18小時才可繁殖一代。細菌的繁殖條件：①豐富的營養(yǎng)物質(zhì)：包括水分、無機鹽類、蛋白胨、糖及生長因子；②合適的酸堿度：大多數(shù)致病菌最適pH7.2--7.6；③恰當?shù)臏囟?大多數(shù)致病菌最適生長溫度37℃；④足夠的氣體：主要是氧氣和二氧化碳。592.細菌的繁殖10細菌細胞分裂的電鏡超薄切片圖

桿菌二分裂過程模式圖60細菌細胞分裂的電鏡超薄切片圖

桿菌二分裂過程模式圖11二、

真菌真菌是一類有細胞壁，無葉綠素，以寄生或腐生方式生存，少數(shù)為單細胞，多數(shù)為多細胞，能進行無性或有性繁殖的一類真核細胞型微生物。真菌包括單細胞與多細胞兩類。單細胞真菌呈圓形或卵圓形，稱為酵母菌；多細胞真菌由菌絲和孢子組成，并交織成團，稱絲狀菌或霉菌。真菌生長的最適的溫度為22～28℃，最適的pH值為4.0～6.0。其繁殖能力強，但生長速度比細菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌對熱的抵抗力不強，一般加熱60~70℃1小時即被殺死，但對干燥、日光、紫外線和一些化學消毒劑有抵抗力，對2.5％碘酒、10％甲醛則較敏感。61二、真菌12三、

病毒病毒屬非細胞型微生物，在自然界分布非常廣泛，可在人、動物、植物、真菌和細菌中寄居并引起感染。病毒是體積最小、結(jié)構最簡單的微生物，它僅有一種核酸（DNA或RNA）作其遺傳物質(zhì)。病毒必須在宿主活細胞內(nèi)寄生，依靠細胞提供的能量、營養(yǎng)物質(zhì)及生物大分子合成機制，完成病毒的復制過程。病毒與人類的關系極為密切，人類的傳染病約75％是由病毒引起的。有些病毒傳染性強，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。62三、病毒13理化因素對病毒的影響（1）物理因素①溫度多數(shù)病毒耐冷不耐熱。在干冰溫度（-70℃）和液氮溫度（-196℃）下，病毒感染性可保持數(shù)月甚至數(shù)年。在50～60℃30分鐘，100℃幾秒鐘即可滅活。②pH多數(shù)病毒在pH5~9范圍內(nèi)穩(wěn)定，強酸或強堿條件下可被滅活。③射線X射線、γ射線和紫外線都能滅活病毒。（2）化學因素主要有化學消毒劑、抗生素及中草藥等。除強酸、強堿消毒劑外，酚類、氧化劑、鹵素類、醇類等對病毒均有滅活作用。63理化因素對病毒的影響14第三章微生物的營養(yǎng)一、微生物的營養(yǎng)要求微生物生長繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要有水、碳源、氮源、無機鹽和生長因子等。1.水水是各種生物細胞必需的，是良好的溶劑，微生物的新陳代謝過程中的一切生化反應都離不開水的作用。2.碳源碳源是合成菌體成分的原料，也是微生物獲取能量的主要來源。整體上看來，微生物可以利用的碳源范圍極廣，分為有機碳源和無機碳源兩大類。凡必須利用有機碳源的微生物就是異養(yǎng)微生物，凡能利用無機碳源的微生物就是自養(yǎng)微生物。糖類是最廣泛利用的碳源。64第三章微生物的營養(yǎng)一、微生物的營養(yǎng)要求153.氮源氮源主要是供給合成菌體結(jié)構的原料，很少作為能源利用。與碳源相似，微生物作為一個整體來說，能利用的氮源種類十分廣泛。某些微生物（如固氮菌）能利用空氣中分子態(tài)的氮或利用無機氮化物如銨鹽、硝酸鹽合成有機氮化物。4.無機鹽類無機鹽主要可為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素。微生物需要的無機鹽類很多，主要有P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等，其主要功能為構成菌體成分；調(diào)節(jié)滲透壓；作為某些酶的成分，并能激活酶的活性等。5.生長因子有些微生物雖然供給它適合的碳源氮源和無機鹽類，仍不能生長，還要供給一定量的所謂“生長因子”。其種類很多，主要是B族維生素的化合物等。生長因子可以從酵母浸出液、血液或血清中獲得。653.氮源16第四章微生物的生長和繁殖一、微生物的生長和繁殖微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷地吸收營養(yǎng)物質(zhì)，并按照自己的代謝方式進行代謝活動，如果同化作用大于異化作用，則細胞質(zhì)的量不斷增加，體積得以加大，于是表現(xiàn)為生長。簡單地說，生長就是有機體的細胞組分與結(jié)構在量方面的增加。單細胞微生物如細菌，生長往往伴隨著細胞數(shù)目的增加。當細胞增長到一定程度時，就以二分裂方式，形成兩個基本相似的子細胞，子細胞又重復以上過程。在單細胞微生物中，由于細胞分裂而引起的個體數(shù)目的增加，稱為繁殖。在一般情況下，當環(huán)境條件適合，生長與繁殖始終是交替進行的。從生長到繁殖是一個由量變到質(zhì)變的過程，這個過程就是發(fā)育。微生物處于一定的物理、化學條件下，生長發(fā)育正常，繁殖速率也高；如果某一或某些環(huán)境條件發(fā)生改變，并超出了微生物可以適應的范圍時，就會對機體產(chǎn)生抑制乃至殺滅作用。66第四章微生物的生長和繁殖一、微生物的生長和繁殖17二、細菌純培養(yǎng)的群體生長規(guī)律(1)延遲期：少量細菌接種到新鮮培養(yǎng)基后，一般不立即進行繁殖，生長速度近于零。因此在開始一段時間，細菌數(shù)幾乎保持不變，甚至稍有減少。這段時間被稱為延遲期，又稱為遲緩期、調(diào)整期或滯留適應期。處于延遲期細菌細胞的特點是分裂遲緩、代謝活躍。延遲期的長短與菌種、種齡、接種量和培養(yǎng)基成分有關。

(2)對數(shù)期：對數(shù)期又稱指數(shù)期。這一階段突出特點是細菌數(shù)以幾何級數(shù)增加，代時穩(wěn)定，細菌數(shù)目的增加與原生質(zhì)總量的增加，與菌液混濁度的增加均呈正相關性。

(3)穩(wěn)定期：又稱恒定期或最高生長期。處于穩(wěn)定期的微生物，新增殖的細胞數(shù)與老細胞的死亡數(shù)幾乎相等，整個培養(yǎng)物中二者處于動態(tài)平衡，此時生長速度又逐漸趨向零。穩(wěn)定期的細胞內(nèi)開始積累貯藏物，如肝糖、異染顆粒、脂肪粒等，大多數(shù)芽孢細菌也在此階段形成芽孢。如果為了獲得大量菌體，就應在此階段收獲，因這時細胞總數(shù)最高；這一時期也是發(fā)酵過程積累代謝產(chǎn)物的重要階段，某些放線菌抗生素的大量形成也在此時期。

(4)衰亡期：穩(wěn)定期后如再繼續(xù)培養(yǎng)，細菌死亡率逐漸增加，以致死亡數(shù)大大超過新生數(shù)，群體中活菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)了“負生長”，此階段叫衰亡期。67二、細菌純培養(yǎng)的群體生長規(guī)律18第五章熱原一、什么是熱原？熱原：指微量即能引起恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)的總稱。是微生物的代謝產(chǎn)物，大多數(shù)細菌都能產(chǎn)生，致熱能力最強的是革蘭陰性桿菌所產(chǎn)生的熱原，真菌和病毒也能產(chǎn)生熱原。

熱原是微生物產(chǎn)生的一種內(nèi)毒素，它存在于細菌的細胞膜和固體膜之間。內(nèi)毒素是由磷脂、脂多糖和蛋白質(zhì)所組成的復合物，其中脂多糖是內(nèi)毒素的主要成分，具有特別強的熱原活性，因而大致可以認為“內(nèi)毒素=熱原=脂多糖”。

68第五章熱原19二、熱原的基本性質(zhì)1、耐熱性在通常的滅菌條件下，熱原往往不能被破壞，一般采用180℃，3-4h;250℃,30-45min或650℃，1min可徹底破壞熱原。2、濾過性熱原直徑約為1-5um，可通過一般濾器，甚至是微孔濾膜，孔徑小于1nm的超濾膜可除去絕大部分甚至全部熱原。3、水溶性熱原可溶于水。4、不揮發(fā)性熱原具有不揮發(fā)性，但可溶于水蒸氣所夾帶的霧滴而帶入蒸餾水中，因此，蒸餾水器上附有隔沫裝置。5、被吸附性熱原可以被活性炭，離子交換樹脂，石棉濾板等吸附。6、其他熱原能被強酸、強堿、強氧化劑、超聲波等破壞。69二、熱原的基本性質(zhì)20三、污染熱原的途徑1、從溶媒中帶入溶媒常是注射劑中污染熱原的主要途徑。通常蒸餾器結(jié)構不合理，操作不當，注射用水貯放時間過長，均易導致注射用水含有熱原。2、從原輔料中帶入有些原料本身容易滋生微生物，如果貯存時間過長或包裝損壞，均易污染熱原。3、從容器、用具、管道與設備中帶入配制注射劑的容器、用具、管道、濾器等，使用前清洗不徹底或滅菌不完全，均可污染熱原。4、制備過程中污染環(huán)境的潔凈級別達不到規(guī)定要求、或操作時間過長、滅菌不及時或滅菌不徹底、包裝不嚴密等，都可能使注射劑污染熱原。5、從輸液器中帶入有時輸液本生不含熱原，但還是發(fā)生熱原反應，一般就是由于輸液用具污染熱原而發(fā)生的熱原反應。70三、污染熱原的途徑21四、除去熱原的方法1、高溫法耐熱器具潔凈后用250℃干熱滅菌30min以上可以破壞熱原。2、酸堿法玻璃器具可采用重鉻酸鉀硫酸清潔液或稀氫氧化鈉處理破壞熱原。3、吸附法活性炭具有較強的吸附熱原作用，同時兼有脫色助濾作用。應選用針用規(guī)格活性炭，常用量為0.1%-0.5%。此外，活性炭與白陶土合用也可除去熱原。4、離子交換法熱原分子含有帶負電荷的磷酸根與羧酸根，強堿性陰離子交換樹脂可吸附除去溶劑中的熱原。5、凝膠濾過法用二乙氨基乙基葡聚糖凝膠濾過可除去熱原。6、反滲透法選用三醋酸纖維素膜或聚酰胺膜進行反滲透可除去熱原。7、超濾法3.0—15nm的超濾膜能除去熱原。71四、除去熱原的方法22第六章消毒與滅菌下列術語常用于表示物理或化學方法對微生物的殺滅程度。消毒：殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含細菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑制體內(nèi)或體外細菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細菌的繁殖。防腐：防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法，細菌一般不死亡。同一種化學藥品在高濃度時為消毒劑，低濃度時常為防腐劑。消毒與滅菌的方法一般可分為物理學方法和化學方法兩大類。72第六章消毒與滅菌下列術語常用于表示物理或化學方一、物理消毒滅菌法用于消毒滅菌的物理因素有熱力、輻射、過濾等。1.熱力滅菌法熱力滅菌法分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類，相同溫度下，后者的滅菌效力比前者大。高溫對細菌具有明顯的致死作用，因此最常用于消毒與滅菌。多數(shù)無芽孢的細菌經(jīng)55～60℃作用30～60分鐘后死亡。經(jīng)80℃濕熱5～10分鐘可殺死所有細菌繁殖體、真菌和酵母菌。細菌芽孢對高溫有很強的抵抗力，例如炭疽芽孢桿菌的芽孢，耐受5～15分鐘的煮沸，而肉毒梭菌的芽孢則需煮沸3～5小時才死亡。如：葡萄糖注射液為121℃、12min、FO值≥12，氯化鈉注射液為121℃、15min、FO值≥15，治療性品種為121℃、10min、FO值≥10。73一、物理消毒滅菌法242.輻射滅菌法（1）紫外線作用于DNA，使細菌DNA的復制和轉(zhuǎn)錄受到干擾，導致細菌變異或死亡。波長在265-266nm殺菌效果最強，主要用于室內(nèi)空氣和工作臺面的消毒。（2）電離輻射對各種細菌均有致死作用。常用于大量一次性醫(yī)用塑料制品的消毒和食品的消毒。（3）微波是一種波長為1mm～1m的電磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜及陶瓷等物質(zhì)，但不能穿透金屬表面。多用于檢驗室用品、無菌室的用具的消毒。3.濾過除菌法用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去,以達到除菌目的。濾菌器含有微細小孔＜0.22微米,只允許液體或氣體通過,而大于孔徑的細菌等顆粒不能通過。適用范圍：血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。742.輻射滅菌法25二.化學消毒滅菌法許多化學藥物能影響微生物的化學組成、物理結(jié)構和生理活性，從而發(fā)揮防腐、消毒及滅菌的作用。潔凈室(區(qū))應定期消毒，使用的消毒劑不得對設備、物料和成品產(chǎn)生污染。消毒劑品種應定期更換，防止產(chǎn)生耐藥菌株。

影響消毒劑作用效果的因素：①消毒劑的性質(zhì)、濃度及作用時間；②細菌的種類和生活狀態(tài)；③環(huán)境因素，如有機物的含量、溫度、濕度及酸堿度等。

75二.化學消毒滅菌法26常用消毒劑的種類和用途類別作用機制常用種類用途酚類蛋白變性，細胞膜損傷石炭酸地面、器具表面、皮膚消毒醇類蛋白變性乙醇皮膚、體溫計消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮膚消毒表面活性劑蛋白變性，細胞膜損傷新潔而滅手術洗手、浸泡手術器械76常用消毒劑的種類和用途類別作用機制常用種類用途酚類蛋白變性，第二部分潔凈作業(yè)知識77第二部分潔凈作業(yè)知識28一、潔凈室1.1、潔凈室的含義：潔凈室是需要對塵粒及微生物數(shù)量進行控制的房間（區(qū)域），該房間（區(qū)域）的建造結(jié)構、裝備及使用不僅能夠截留粒子而且會盡可能地減少粒子向該房間（區(qū)域）介入，并且，可根據(jù)需要對該房間（區(qū)域）的溫度、濕度以及壓差等參數(shù)進行控制。

1.2、潔凈室對藥品生產(chǎn)的意義：藥品，特別是靜脈注射的藥品，必須確保不受微生物的污染。懸浮在空氣中的微生物大都依附在塵埃粒子表面，進入潔凈室的空氣，若不除塵控制微生物粒子，藥品的質(zhì)量就難以保證；藥品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的各種粉塵必須除去，以防止藥物的交叉污染和污染大氣環(huán)境。藥品生產(chǎn)中也會產(chǎn)生有害、高溫、高濕的氣體，需要及時排除，以保證生產(chǎn)人員的健康，保證生產(chǎn)不受影響，保證產(chǎn)品質(zhì)量。調(diào)節(jié)控制空氣至合適的溫度和濕度，不僅是為生產(chǎn)人員提供舒適的生產(chǎn)勞動環(huán)境，而且也是藥品生產(chǎn)質(zhì)量保證的需要。78一、潔凈室29潔凈度級別塵粒最大允許數(shù)（粒/m3）微生物最大允許數(shù)≥0.5μm≥5μm浮游菌（cfu/m3）沉降菌（cfu/皿）100級3500005110000級35000020001003100000級35000002000050010300000級10500000600001000151.3、潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級別1.3.11998版GMP對藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）的空氣潔凈度劃分為100級、10000級、100000級、300000級四個級別，具體劃分詳見下表：79潔凈度級別塵粒最大允許數(shù)（粒/m3）微生物最大允許數(shù)≥0.51.3.22010版GMP對藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）的空氣潔凈度劃分為A級、B級、C級、D級四個級別，具體劃分詳見下表：潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米靜態(tài)動態(tài)≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μmA級352020352020B級3520293520002900C級3520002900352000029000D級352000029000不作規(guī)定不作規(guī)定801.3.22010版GMP對藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）的空氣潔凈度級別浮游菌cfu/m3沉降菌(φ90mm)cfu/4h表面微生物接觸碟(φ55mm)cfu/碟5指手套cfu/手套A級＜1＜1＜1＜1B級10555C級1005025－D級20010050－微生物監(jiān)測的動態(tài)標準81潔凈度級別浮游菌cfu/m3沉降菌(φ90mm)表面微生物1.4、潔凈室（區(qū)）的送風量和換氣次數(shù)1.4.11998版GMP送風量計算：單向流（層流）潔凈室送風量=潔凈室斷面面積(㎡)×風速亂流（非單向流）潔凈室送風量=潔凈室容積（

m3)×換氣次數(shù)（次/h）換氣次數(shù)：10000級潔凈室換氣次數(shù)n≥25次/h；100000級潔凈室換氣次數(shù)n≥15次/h；300000級潔凈室換氣次數(shù)n≥12次/h；

1.4.22010版GMP送風量計算：單向流（層流）潔凈室送風量=潔凈室斷面面積(㎡)×風速亂流（非單向流）潔凈室送風量=潔凈室容積（m3)×換氣次數(shù)（次/h）

潔凈區(qū)生產(chǎn)環(huán)境的空氣換氣次數(shù)應根據(jù)熱量平衡及風量平衡計算，并加以驗證。821.4、潔凈室（區(qū)）的送風量和換氣次數(shù)33項

目標準要求材料及裝修標準潔凈室內(nèi)表面應平整、光滑、無裂逢、接口嚴密、無顆粒脫落、防霉、防靜電、避免眩光并耐受清洗和消毒、墻壁與地面交界處宜成弧形或采取其它措施，以減少灰塵積聚和便于清潔。溫度溫度與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應，無特殊要求時，溫度應控制在18～26℃。濕度濕度與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應，無特殊要求時，濕度應控制在45～65%。1.5、潔凈室（區(qū)）內(nèi)部分參數(shù)控制要求83項目標準要求材料及裝修標準潔凈室內(nèi)表面應平整項

目標準要求照明主要工作室的照度宜為≥300Lx，對照度有特殊要求的生產(chǎn)部位要設置局部照明（例如質(zhì)控室可見異物抽檢）。壓差1998版GMP空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應大于5帕，潔凈室（區(qū)）與室外大氣的靜壓差大于10帕，并應有指示壓差的裝置。2010版GMP潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同級別潔凈區(qū)之間的壓差應不低于10帕斯卡。必要時，相同潔凈度級別的不同功能區(qū)域（操作間）之間也應當保持適當?shù)膲翰钐荻取Ｔ肼晞討B(tài)測試時室內(nèi)噪聲級應≤70dBA;空態(tài)測試時亂流潔凈室噪聲級應≤60dBA，層流潔凈室噪聲級應≤65dBA。潔凈室（區(qū)）內(nèi)部分參數(shù)控制要求84項目標準要求照明主要工作室的照度宜為≥30項

目標準要求新風量進入潔凈室的空氣必須經(jīng)凈化處理，潔凈室內(nèi)應供給的新風量，其數(shù)值應取下列風量中的最大值：①亂流潔凈室總送風量的10%，平流潔凈室總送風量的2%；②補償室內(nèi)排風和保持室內(nèi)正壓值所需的新風量；③保證室內(nèi)每人每小時的新風量≥40m3。潔凈區(qū)域人數(shù)根據(jù)潔凈區(qū)域空間大小與新風量，保證室內(nèi)每人每小時的新風量≥，制定潔凈區(qū)域各房間能夠容納多少人。潔凈室（區(qū)）內(nèi)部分參數(shù)控制要求85項目標準要求新風量進入潔凈室的空氣必須經(jīng)凈化二、污染潔凈室（區(qū)）潔凈度的因素。2.1、來自外部的污染物質(zhì)。

a.大氣污染

b.大氣中的微生物2.2、潔凈室內(nèi)的污染源主要來自四個方面：a.作業(yè)人員；b.水c.建筑圍護結(jié)構、設施的產(chǎn)塵，這里包括墻、頂棚、地面和一些裸露管線的產(chǎn)塵；d.設備及產(chǎn)品生產(chǎn)過程的產(chǎn)塵。86二、污染潔凈室（區(qū)）潔凈度的因素。37污染發(fā)生源粒狀污染物有害氣體備注人體粉塵、皮屑、污垢、細菌、纖維、化妝品體臭、CO2、氨、水蒸氣吸煙粉塵（焦油、尼古丁等）二甲基硝酸銨等CO、CO2、NO、NO2、甲醛、丙烯醛、碳氫化合物在潔凈室內(nèi)禁止吸煙，在一般空調(diào)房間內(nèi)也不宜吸煙辦公設備紙張、家具的纖維及塵粒臭氧、氨、溶劑揮發(fā)物（