植物組織培養(yǎng)課件第5章植物器官和組織培養(yǎng)

第五章植物器官和組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)1第五章植物器官和組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)11.植物器官培養(yǎng)1.營養(yǎng)器官的培養(yǎng)離體根（Root）培養(yǎng)離體莖（Stem）培養(yǎng)離體葉（Foliage）培養(yǎng)2.生殖器官的培養(yǎng)花（Flower）培養(yǎng)種子（Seed）培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室21.植物器官培養(yǎng)1.營養(yǎng)器官的培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林植物器官培養(yǎng)的概念與意義植物器官培養(yǎng)(Plantorganculture)主要指植物根、葉、莖、花及小果實等器官在離體條件下的無菌培養(yǎng)。特點：能保持器官所具有的特征性結(jié)構(gòu)。在組織培養(yǎng)研究中，常以器官作為外植體，研究較廣泛，在應(yīng)用上也卓有成效。通過器官培養(yǎng)可以快速大量地繁殖，目前這一技術(shù)已在生產(chǎn)上得到廣泛應(yīng)用。本章將介紹離體根的培養(yǎng)、莖的培養(yǎng)和葉的培養(yǎng)。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室3植物器官培養(yǎng)的概念與意義植物器官培養(yǎng)(Plantorgan1.1根的培養(yǎng)優(yōu)點：培養(yǎng)離體根具有生長迅速、代謝活躍及在已知條件下培養(yǎng)可根據(jù)需要增減培養(yǎng)基中的成分。多用于探索植物根系的生理及其代謝活動。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室41.1根的培養(yǎng)優(yōu)點：培養(yǎng)離體根具有生長迅速、代謝活躍及在已知番茄根的培養(yǎng)過程番茄種子經(jīng)常規(guī)表面消毒法消毒放置在盛有MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中萌發(fā)。待胚根伸長至一定長度后，從根尖一端切取10mm長接種于固體培養(yǎng)基中暗條件下培養(yǎng)4天至有側(cè)根發(fā)生7天后可以切下側(cè)根的根尖作為新的培養(yǎng)材料再進行擴大培養(yǎng)通過這種由單個直根衍生而來，并經(jīng)繼代培養(yǎng)而保持遺傳性一致的根的培養(yǎng)物，可稱為離體根的無性系。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室5番茄根的培養(yǎng)過程番茄種子經(jīng)常規(guī)表面消毒法消毒中南林業(yè)科技大學(xué)莖段培養(yǎng)指對植物的帶有一個以上定芽或不定芽的外植體（包括塊莖、球莖、鱗莖在內(nèi)的幼莖切段）進行離體培養(yǎng)技術(shù)。主要目的：進行植物離體快速繁殖，其次是研究莖細胞的分裂潛力和全能性以及誘導(dǎo)細胞變異和突變體的獲得等。優(yōu)點：容易成功、變異小、性狀均一、繁殖速度快。1.2莖的培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室6莖段培養(yǎng)指對植物的帶有一個以上定芽或不定芽月季莖段培養(yǎng)選擇優(yōu)良健壯月季當年生枝條中段(帶飽滿而未萌發(fā)的側(cè)芽)；在自來水下流水沖洗4-6h；用0.1％—0.15％HgCl2溶液消毒8～12min；無菌水沖洗4次；剪成1—2cm左右?guī)б秆浚ㄔ录疽秆吭谇o段上的位置也會影響嫩莖增殖的效果）的莖段接種；培養(yǎng)溫度21—25℃，每日光照12h。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室7月季莖段培養(yǎng)選擇優(yōu)良健壯月季當年生枝條中段(帶飽滿而未萌發(fā)1.3葉的培養(yǎng)很多植物如非洲紫羅蘭、香葉、天竺葵、秋海棠等的葉片具有很強的再生能力。由于取材方便，數(shù)量多且均一性較強，可以作為適宜的外植體。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室81.3葉的培養(yǎng)很多植物如非洲紫羅蘭、香葉、天竺葵、秋海棠等的培養(yǎng)過程葉片摘取后用水沖洗數(shù)小時至干凈；表面消毒，一般先用70％乙醇浸泡30秒，然后用0.1％HgCl2溶液浸泡數(shù)分鐘。平放在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。先形成愈傷組織，然后再分化出胚狀體、莖、葉和根。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室9培養(yǎng)過程葉片摘取后用水沖洗數(shù)小時至干凈；中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟2.植物組織培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)2.1植物分生組織培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室102.植物組織培養(yǎng)莖2.1植物分生組織培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟2.1.1植物病毒的危害植物病毒已超過500種，在果樹、蔬菜、花卉、林木以及農(nóng)作物上皆有發(fā)現(xiàn)，嚴重危害生產(chǎn)。侵染菊花的病毒和類病毒有19種之多，如：無子病毒(CAV)、輕斑駁病毒(CMMV)、矮化病毒(CSV)等；侵染康乃馨的病毒有11種之多，如：斑駁病毒(CaMV)、食環(huán)病毒(CERV)、環(huán)斑病毒(CRV)等。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室112.1.1植物病毒的危害植物病毒已超過500種，在果樹、蔬菜中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室12中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室121886年，德國農(nóng)業(yè)化學(xué)家邁爾在荷蘭的接種試驗(煙草花葉病是一種傳染性疾病)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室131886年，德國農(nóng)業(yè)化學(xué)家邁爾在荷蘭的接種試驗中南林業(yè)科被病毒感染的植物中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室14被病毒感染的植物中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室12.1.2植物病毒的特性及其侵染大多植物病毒不經(jīng)種子傳播，因此可從輕度染病植株上采集種子，不會將病毒傳至下一代。但是?；詮姷牟《境猓缍诡惒《究呻S著種子傳播。對于有性生殖退化，僅能用無性繁殖方法繁殖的植物，一旦染病則毫無辦法。人們認識到利用莖尖培養(yǎng)可以脫除病毒，并大幅度地提高作物(植物)產(chǎn)量和品質(zhì)。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室152.1.2植物病毒的特性及其侵染大多植物病毒不經(jīng)種子傳播，因2.1.3植物脫毒的原理及方法莖尖培養(yǎng)脫毒法；熱處理脫毒法；微體嫁接離體培養(yǎng)脫毒法；珠心組織脫毒法。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室162.1.3植物脫毒的原理及方法莖尖培養(yǎng)脫毒法；中南林業(yè)莖尖培養(yǎng)脫毒法莖尖培養(yǎng)脫除病毒的依據(jù)：病毒在植物體內(nèi)分布是不均一的，越接近生長點，病毒濃度越稀，因此有可能采用小的莖尖離體培養(yǎng)而脫除植物病毒。莖尖培養(yǎng)脫毒分子機理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可進入植物細胞。當植物細胞分裂時，病毒DNA隨著復(fù)制。因此，植物細胞分裂和病毒繁殖之間存在相互競爭，在迅速分裂的植物細胞中，是正常核蛋白合成占優(yōu)勢，而在植物細胞伸長期間，是病毒核蛋白合成占優(yōu)勢。生長點、分生組織細胞是活躍分裂的細胞。其分裂速度比病毒DNA復(fù)制速度快，故采用旺盛分裂的生長錐(頂端分生組織)離體培養(yǎng)，就有可能脫除植物病毒。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室17莖尖培養(yǎng)脫毒法莖尖培養(yǎng)脫除病毒的依據(jù)：病毒在植物體內(nèi)分布是不熱處理脫毒法利用莖尖培養(yǎng)方法脫除植物病毒，對多數(shù)植物是可行的。但需切取0.2-0.5mm的小莖尖培養(yǎng)，不僅需高超的剝離技術(shù)，同時對培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成，滲透壓等要求也很高。再者，莖尖培養(yǎng)周期長，因植物品種而異一般需0.5-2年。為了克服莖尖培養(yǎng)脫毒法帶來的弊病，提高脫毒效率，故創(chuàng)造了熱處理脫毒法。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室18熱處理脫毒法利用莖尖培養(yǎng)方法脫除植物病毒，對多數(shù)植物是可行的熱處理脫除植物病毒的原理:病毒是DNA大分子，病毒進入植物細胞后，隨植物細胞的DNA一起復(fù)制。熱處理并不能殺死病毒，只能鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去侵染的能力。熱處理是一種物理效應(yīng)，與冷處理一樣，它可以加速植物細胞的分裂，使植物細胞在與病毒繁殖的競爭中取勝。已在生產(chǎn)實踐中得到應(yīng)用。如：果樹作物；蔬菜作物；花卉植物。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室19熱處理脫除植物病毒的原理:病毒是DNA大分子，病毒進入植物細微體嫁接離體培養(yǎng)脫毒法把極小(<0.2mm)莖尖，作為接穗嫁接到實生苗砧木上(種子實生苗不帶毒)。然后連同砧木一起在培養(yǎng)基上培養(yǎng)。故可用很小的莖尖來培養(yǎng)，消除病毒的幾率大，獲得無病毒苗的可能性大。微體嫁接脫毒技術(shù)已在柑橘、蘋果上成功。如蘋果莖陷病毒(Stemgroovingvirus)需培養(yǎng)<0.2mm莖尖才可脫毒。<0.2mm莖尖對培養(yǎng)基要求高，培養(yǎng)難度大，用熱處理也難以脫除。1980年用微體嫁接法，獲得無蘋果莖陷毒植株。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室20微體嫁接離體培養(yǎng)脫毒法把極小(<0.2mm)莖尖，作為接穗嫁中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室21中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室21珠心組織培養(yǎng)脫毒法有人認為病毒是通過維管組織傳播的，而珠心組織與維管組織沒有直接聯(lián)系，故可以通過珠心組織培養(yǎng)獲得無病毒植株。柑橘、葡萄通過珠心組織培養(yǎng)獲得無病毒植株。還有化學(xué)療法、冷療法和通過愈傷組織、游離細胞或原生質(zhì)體培養(yǎng)消除病毒。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室22珠心組織培養(yǎng)脫毒法有人認為病毒是通過維管組織傳播的，而珠心組2.1.4無病毒植物的鑒定通過莖尖分生組織培養(yǎng)、熱處理脫毒法、微體嫁接法而培養(yǎng)成的植株，不一定都是無病毒植株。用于病毒檢測的方法有如下3種：

1血清鑒定法；2生物鑒定法(敏感植物或指示植物)；3電子顯微鏡鑒定法。采用單一鑒定法并不十分可靠。特別是對一些特異性病毒，單一鑒定方法可靠性更差。最好三種方法同時鑒定，可以獲得理想的結(jié)果。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室232.1.4無病毒植物的鑒定通過莖尖分生組織培養(yǎng)、熱處理脫毒法2.2植物愈傷組織培養(yǎng)1.先芽后根2.先根后芽3.根芽同時發(fā)生1.2.3.中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室242.2植物愈傷組織培養(yǎng)1.先芽后根2.先根后芽3.根芽同時發(fā)2.3植物薄層組織培養(yǎng)對植物的薄細胞層組織進行離體培養(yǎng)的技術(shù)。植物薄層組織培養(yǎng)是研究離體組織形態(tài)發(fā)生機理和影響因素、遺傳變異產(chǎn)生機理的良好實驗體系。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室252.3植物薄層組織培養(yǎng)對植物的薄細胞層組織進行離體培養(yǎng)的技術(shù)第五章植物器官和組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)26第五章植物器官和組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)11.植物器官培養(yǎng)1.營養(yǎng)器官的培養(yǎng)離體根（Root）培養(yǎng)離體莖（Stem）培養(yǎng)離體葉（Foliage）培養(yǎng)2.生殖器官的培養(yǎng)花（Flower）培養(yǎng)種子（Seed）培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室271.植物器官培養(yǎng)1.營養(yǎng)器官的培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林植物器官培養(yǎng)的概念與意義植物器官培養(yǎng)(Plantorganculture)主要指植物根、葉、莖、花及小果實等器官在離體條件下的無菌培養(yǎng)。特點：能保持器官所具有的特征性結(jié)構(gòu)。在組織培養(yǎng)研究中，常以器官作為外植體，研究較廣泛，在應(yīng)用上也卓有成效。通過器官培養(yǎng)可以快速大量地繁殖，目前這一技術(shù)已在生產(chǎn)上得到廣泛應(yīng)用。本章將介紹離體根的培養(yǎng)、莖的培養(yǎng)和葉的培養(yǎng)。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室28植物器官培養(yǎng)的概念與意義植物器官培養(yǎng)(Plantorgan1.1根的培養(yǎng)優(yōu)點：培養(yǎng)離體根具有生長迅速、代謝活躍及在已知條件下培養(yǎng)可根據(jù)需要增減培養(yǎng)基中的成分。多用于探索植物根系的生理及其代謝活動。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室291.1根的培養(yǎng)優(yōu)點：培養(yǎng)離體根具有生長迅速、代謝活躍及在已知番茄根的培養(yǎng)過程番茄種子經(jīng)常規(guī)表面消毒法消毒放置在盛有MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中萌發(fā)。待胚根伸長至一定長度后，從根尖一端切取10mm長接種于固體培養(yǎng)基中暗條件下培養(yǎng)4天至有側(cè)根發(fā)生7天后可以切下側(cè)根的根尖作為新的培養(yǎng)材料再進行擴大培養(yǎng)通過這種由單個直根衍生而來，并經(jīng)繼代培養(yǎng)而保持遺傳性一致的根的培養(yǎng)物，可稱為離體根的無性系。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室30番茄根的培養(yǎng)過程番茄種子經(jīng)常規(guī)表面消毒法消毒中南林業(yè)科技大學(xué)莖段培養(yǎng)指對植物的帶有一個以上定芽或不定芽的外植體（包括塊莖、球莖、鱗莖在內(nèi)的幼莖切段）進行離體培養(yǎng)技術(shù)。主要目的：進行植物離體快速繁殖，其次是研究莖細胞的分裂潛力和全能性以及誘導(dǎo)細胞變異和突變體的獲得等。優(yōu)點：容易成功、變異小、性狀均一、繁殖速度快。1.2莖的培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室31莖段培養(yǎng)指對植物的帶有一個以上定芽或不定芽月季莖段培養(yǎng)選擇優(yōu)良健壯月季當年生枝條中段(帶飽滿而未萌發(fā)的側(cè)芽)；在自來水下流水沖洗4-6h；用0.1％—0.15％HgCl2溶液消毒8～12min；無菌水沖洗4次；剪成1—2cm左右?guī)б秆浚ㄔ录疽秆吭谇o段上的位置也會影響嫩莖增殖的效果）的莖段接種；培養(yǎng)溫度21—25℃，每日光照12h。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室32月季莖段培養(yǎng)選擇優(yōu)良健壯月季當年生枝條中段(帶飽滿而未萌發(fā)1.3葉的培養(yǎng)很多植物如非洲紫羅蘭、香葉、天竺葵、秋海棠等的葉片具有很強的再生能力。由于取材方便，數(shù)量多且均一性較強，可以作為適宜的外植體。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室331.3葉的培養(yǎng)很多植物如非洲紫羅蘭、香葉、天竺葵、秋海棠等的培養(yǎng)過程葉片摘取后用水沖洗數(shù)小時至干凈；表面消毒，一般先用70％乙醇浸泡30秒，然后用0.1％HgCl2溶液浸泡數(shù)分鐘。平放在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。先形成愈傷組織，然后再分化出胚狀體、莖、葉和根。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室34培養(yǎng)過程葉片摘取后用水沖洗數(shù)小時至干凈；中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟2.植物組織培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)2.1植物分生組織培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室352.植物組織培養(yǎng)莖2.1植物分生組織培養(yǎng)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟2.1.1植物病毒的危害植物病毒已超過500種，在果樹、蔬菜、花卉、林木以及農(nóng)作物上皆有發(fā)現(xiàn)，嚴重危害生產(chǎn)。侵染菊花的病毒和類病毒有19種之多，如：無子病毒(CAV)、輕斑駁病毒(CMMV)、矮化病毒(CSV)等；侵染康乃馨的病毒有11種之多，如：斑駁病毒(CaMV)、食環(huán)病毒(CERV)、環(huán)斑病毒(CRV)等。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室362.1.1植物病毒的危害植物病毒已超過500種，在果樹、蔬菜中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室37中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室121886年，德國農(nóng)業(yè)化學(xué)家邁爾在荷蘭的接種試驗(煙草花葉病是一種傳染性疾病)中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室381886年，德國農(nóng)業(yè)化學(xué)家邁爾在荷蘭的接種試驗中南林業(yè)科被病毒感染的植物中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室39被病毒感染的植物中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室12.1.2植物病毒的特性及其侵染大多植物病毒不經(jīng)種子傳播，因此可從輕度染病植株上采集種子，不會將病毒傳至下一代。但是?；詮姷牟《境?，如豆類病毒可隨著種子傳播。對于有性生殖退化，僅能用無性繁殖方法繁殖的植物，一旦染病則毫無辦法。人們認識到利用莖尖培養(yǎng)可以脫除病毒，并大幅度地提高作物(植物)產(chǎn)量和品質(zhì)。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室402.1.2植物病毒的特性及其侵染大多植物病毒不經(jīng)種子傳播，因2.1.3植物脫毒的原理及方法莖尖培養(yǎng)脫毒法；熱處理脫毒法；微體嫁接離體培養(yǎng)脫毒法；珠心組織脫毒法。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室412.1.3植物脫毒的原理及方法莖尖培養(yǎng)脫毒法；中南林業(yè)莖尖培養(yǎng)脫毒法莖尖培養(yǎng)脫除病毒的依據(jù)：病毒在植物體內(nèi)分布是不均一的，越接近生長點，病毒濃度越稀，因此有可能采用小的莖尖離體培養(yǎng)而脫除植物病毒。莖尖培養(yǎng)脫毒分子機理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可進入植物細胞。當植物細胞分裂時，病毒DNA隨著復(fù)制。因此，植物細胞分裂和病毒繁殖之間存在相互競爭，在迅速分裂的植物細胞中，是正常核蛋白合成占優(yōu)勢，而在植物細胞伸長期間，是病毒核蛋白合成占優(yōu)勢。生長點、分生組織細胞是活躍分裂的細胞。其分裂速度比病毒DNA復(fù)制速度快，故采用旺盛分裂的生長錐(頂端分生組織)離體培養(yǎng)，就有可能脫除植物病毒。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室42莖尖培養(yǎng)脫毒法莖尖培養(yǎng)脫除病毒的依據(jù)：病毒在植物體內(nèi)分布是不熱處理脫毒法利用莖尖培養(yǎng)方法脫除植物病毒，對多數(shù)植物是可行的。但需切取0.2-0.5mm的小莖尖培養(yǎng)，不僅需高超的剝離技術(shù)，同時對培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成，滲透壓等要求也很高。再者，莖尖培養(yǎng)周期長，因植物品種而異一般需0.5-2年。為了克服莖尖培養(yǎng)脫毒法帶來的弊病，提高脫毒效率，故創(chuàng)造了熱處理脫毒法。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室43熱處理脫毒法利用莖尖培養(yǎng)方法脫除植物病毒，對多數(shù)植物是可行的熱處理脫除植物病毒的原理:病毒是DNA大分子，病毒進入植物細胞后，隨植物細胞的DNA一起復(fù)制。熱處理并不能殺死病毒，只能鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去侵染的能力。熱處理是一種物理效應(yīng)，與冷處理一樣，它可以加速植物細胞的分裂，使植物細胞在與病毒繁殖的競爭中取勝。已在生產(chǎn)實踐中得到應(yīng)用。如：果樹作物；蔬菜作物；花卉植物。中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟林育種與栽培重點實驗室44熱處理脫除植物病毒的原理:病毒是DNA大分子，病毒進入植物細微體嫁接離體培養(yǎng)脫毒法把極小(<0.2mm)莖尖，作為接穗嫁接到實生苗砧木上(種子實生苗不帶毒)。然后連同砧木一起在培養(yǎng)基上培養(yǎng)。故可用很小的莖尖來培養(yǎng)，消除病毒的幾率大，獲得無病毒苗的可能性大。微體嫁接脫毒技術(shù)已在柑橘、蘋果上成功。如蘋果莖陷病毒(Stemgroovingvirus)需培養(yǎng)<0.2mm莖尖才可脫毒