藥品微生物檢驗現(xiàn)狀及藥典微生物檢查框架詳解演示文稿

藥品微生物檢驗現(xiàn)狀及年版藥典微生物檢查框架詳解演示文稿1第一頁，共四十頁。（優(yōu)選）藥品微生物檢驗現(xiàn)狀及年版藥典微生物檢查框架2第二頁，共四十頁。藥品質(zhì)量體系可控性安全性有效性圖1藥品質(zhì)量體系構(gòu)成與相互關(guān)系3中國藥品生物制品檢定所第三頁，共四十頁。醫(yī)藥產(chǎn)品是人類與疾病斗爭的工具。在世界各國的醫(yī)藥實踐中，由于藥品中污染微生物而引發(fā)的悲劇時有發(fā)生。藥品中污染的微生物通過微生物體及其分泌代謝產(chǎn)物導(dǎo)致機體過敏、中毒、感染等，嚴(yán)重的可以直接導(dǎo)致菌血癥危及生命。此外，某些藥品中污染微生物通過代謝活動改變藥物組成、破壞有效成份而造成療效改變或喪失。所以，世界各國高度重視藥品微生物檢查，無菌/微生物限度檢查均為各國藥典中的重要內(nèi)容。藥品微生物檢驗概況4中國藥品生物制品檢定所第四頁，共四十頁。我國開展藥品無菌檢查和微生物限度檢查已有數(shù)十年的歷史。新中國第一部藥典（1953年版）收載了無菌檢查法。我國開展藥品微生物限度檢查始于1972年。1978年頒發(fā)了第一個“藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)”。1995年版中國藥典收載微生物限度檢查法。2000年版中國藥典收載微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。2005年版中國藥典微生物限度檢查法引入方法驗證實驗要求。藥品微生物檢驗概況5中國藥品生物制品檢定所第五頁，共四十頁。在中央和各地政府有關(guān)部門的關(guān)懷和重視下，經(jīng)過我國藥品微生物檢驗工作者幾十年來的艱苦奮斗，我國藥品微生物檢驗工作不斷發(fā)展，標(biāo)準(zhǔn)不斷完善，逐步建立起了符合我國國情的藥品微生物檢驗標(biāo)準(zhǔn)體系。至2010版中國藥典，我國藥品無菌、微生物限度檢查方法和標(biāo)準(zhǔn)在科學(xué)性、合理性以及與國際接軌方面均有了長足進展，使我國藥品無菌和微生物限度檢查步入了一個嶄新的時期。藥品微生物檢驗概況6中國藥品生物制品檢定所第六頁，共四十頁。2006年7～8月發(fā)生了震驚全國的“欣弗事件”！2006年11月1日晚，肇事企業(yè)安徽華源生物藥業(yè)有限公司原總經(jīng)理裘祖貽，在公司辦公室自殺身亡。據(jù)推測，其自殺原因可能是承受不了“欣弗事件”的重壓?！靶栏ナ录敝两裼嗾鸩粩?，將對我國藥品微生物檢驗及控制工作產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響！“欣弗事件”！7中國藥品生物制品檢定所第七頁，共四十頁。技術(shù)落后、標(biāo)準(zhǔn)化程度低；重要性被忽視、事故頻繁！——標(biāo)準(zhǔn)進步與標(biāo)準(zhǔn)化滯后的矛盾藥品微生物檢驗現(xiàn)狀8中國藥品生物制品檢定所第八頁，共四十頁。藥品微生物檢驗的機遇與挑戰(zhàn)從“欣弗”到“刺五加”，頻繁的不良事件，把藥品微生物檢驗工作推到一個前所未有的關(guān)注高度，提供了發(fā)展的機遇；藥品質(zhì)量事故高發(fā)期，如何快速、準(zhǔn)確地獲得檢驗結(jié)果，又是對當(dāng)前藥品微生物檢驗工作的一個挑戰(zhàn)。9中國藥品生物制品檢定所第九頁，共四十頁。中心任務(wù)

把握機遇，——全面推進我國藥品微生物檢驗工作；迎接挑戰(zhàn)，——在突發(fā)、應(yīng)急檢驗中及時提供一個可靠的檢驗結(jié)論。10中國藥品生物制品檢定所第十頁，共四十頁。建立合理的藥品微生物風(fēng)險評價體系——企業(yè)：PAT(ProcessingAnalyticalTechnology)建立合理的上市藥品監(jiān)督抽驗機制——監(jiān)督管理部門：以不良反應(yīng)為先導(dǎo)的國家抽驗計劃建立完善的藥品微生物檢驗和控制體系——檢驗和質(zhì)控部門：樹立微生物檢驗新理念，檢測實驗微生物控制體系的認(rèn)證與監(jiān)管——生產(chǎn)部門：生產(chǎn)工藝驗證和執(zhí)行監(jiān)管藥品微生物檢驗現(xiàn)狀11中國藥品生物制品檢定所第十一頁，共四十頁。無菌/微生物限度檢查理念環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查靈敏度檢查有效的方法方法驗證SOP操作有效的結(jié)果可靠的結(jié)論結(jié)果判斷12中國藥品生物制品檢定所第十二頁，共四十頁。微生物檢驗與微生物控制的關(guān)系圖2藥品微生物控制、微生物檢驗與參數(shù)放行微生物檢驗微生物控制參數(shù)放行13中國藥品生物制品檢定所第十三頁，共四十頁。14中國藥品生物制品檢定所第十四頁，共四十頁。15中國藥品生物制品檢定所第十五頁，共四十頁。中國藥典2010年版框架2010年版《中國藥典》已經(jīng)編制完成，由中國醫(yī)藥科技出版社出版發(fā)行，2010年7月1日正式實施。2010年版《中國藥典》是新中國成立60年來組織編制的第九版藥典，新版藥典在總結(jié)歷版藥典的基礎(chǔ)上，充分利用近年來國內(nèi)外藥品標(biāo)準(zhǔn)資源，注重創(chuàng)新與發(fā)展，實事求是地反映了我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)和臨床用藥水平的發(fā)展現(xiàn)狀，為進一步加強藥品監(jiān)督管理提供了強有力的技術(shù)支撐。2010年版《中國藥典》分為三部出版，一部為中藥，二部為化學(xué)藥，三部為生物制品。一、二、三部共同采用的附錄分別在各部中予以收載，并盡可能做到統(tǒng)一協(xié)調(diào)、求同存異、體現(xiàn)特色。16中國藥品生物制品檢定所第十六頁，共四十頁。中國藥典2010年版框架2010年版《中國藥典》關(guān)于微生物檢查有以下主要特點：規(guī)定眼用制劑按無菌制劑要求，明確用于燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的外用劑型均按無菌要求。中藥橡膠膏劑首次提出不得檢出致病菌檢查要求。新增抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則、藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則、微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則、藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則等，以縮小附錄在微生物方面與國外藥典的差距。17中國藥品生物制品檢定所第十七頁，共四十頁。中國藥典2010年版框架USP31-Chart10MicrobiologicalTests<51>AntimicrobialEffectivenessTesting<55>BiologicalIndicators-ResistancePerformanceTests<61>MicrobialLimitTests(<62>)<71>SterilityTests<1111>MicrobiologicalAttributesofNonsterilePharmaceuticalProduct<1112>ApplicationofWaterActivityDeterminationtoNonsterilePharmaceuticalProduct<1116>MicrobiologicalEvalutionofCleanRoomsandOtherControlledEnvironments<1117>MicrobiologicalBestLaboratoryPractices<1223>ValidationofAlternativeMicrobiologicalMethods中國藥典2010年版無菌檢查法微生物限度檢查法滅菌法抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則18中國藥品生物制品檢定所第十八頁，共四十頁。抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則2010年版《中國藥典》一部附錄XVIIID2010年版《中國藥典》二部附錄XIXN19中國藥品生物制品檢定所第十九頁，共四十頁。抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則——目的如果藥物本身不含有充分的抗菌力，在正常儲存和使用過程中可能發(fā)生細(xì)菌污染和大量繁殖；對患者引起污染或造成藥物變質(zhì)。在生產(chǎn)過程中添加適合的防腐劑以保證藥品的質(zhì)量。所有防腐劑都具有一定的毒性，而且在貯存過程中其有效性有可能因藥物的活性成分提高或降低，為保證藥品的質(zhì)量和用藥安全，添加防腐劑的量應(yīng)根據(jù)制劑本身是否具抗菌活性，保持最低有效量。防腐劑效力的測定可為生產(chǎn)過程中添加防腐劑提供指導(dǎo)，隨著科學(xué)發(fā)展，新型防腐劑大量出現(xiàn)，防腐劑效力的測定更為重要；使生產(chǎn)者正確掌握產(chǎn)品中添加防腐劑的效力，有助于選擇合適的防腐劑，也可對防腐劑使用的正確性給予評價。第二十頁，共四十頁。抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則——國內(nèi)外現(xiàn)狀目前歐洲、美國、英國等國藥典均已在附錄中收載了防腐劑效力測定，雖然方法不同，但均采用了生物測定方法。我國藥典防腐劑效力測定目前還是空白，有必要經(jīng)過研究，制訂出科學(xué)、簡便、易行的測試方法收載于藥典附錄中。防腐劑效力的測定，不但為生產(chǎn)者提供正確的使用防腐劑的指導(dǎo)，而且可對使用防腐劑的正確性給予評價。第二十一頁，共四十頁。抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則——基本規(guī)定抑菌劑效力檢查法系用于測定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑的活性，以評價最終產(chǎn)品的抑菌效力，同時也可用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在研發(fā)階段制劑中抑菌劑的確定。如果藥物本身不具有充分的抗菌活性，那么應(yīng)根據(jù)制劑特性（如水溶液制劑）添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在正常貯藏和使用過程中可能發(fā)生的微生物污染和繁殖使藥物發(fā)生變質(zhì)而對使用者造成危害，尤其是多劑量包裝的制劑。在藥品生產(chǎn)過程中，抑菌劑不能用于替代藥品生產(chǎn)的GMP管理，不能作為非滅菌制劑降低微生物污染的唯一途徑，也不能作為控制多劑量包裝制劑滅菌前的生物負(fù)載的手段。22中國藥品生物制品檢定所第二十二頁，共四十頁。抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則——基本規(guī)定所有抑菌劑都具有一定的毒性，制劑中抑菌劑的量應(yīng)為最低有效量。同時，為保證用藥安全，最終包裝容器中的抑菌劑有效濃度應(yīng)低于對人體有害的濃度。在制劑通則中要求具有抗菌活性的制劑，不管是添加的抑菌劑，還是藥物本身具有抗菌活性，在藥物研發(fā)階段，均應(yīng)確認(rèn)其抗菌效力。抑菌劑的抗菌效力在貯存過程中有可能因藥物的成分或包裝容器等因素影響而提高或降低，因此，應(yīng)驗證最終容器中的抑菌劑效力在效期內(nèi)不因貯藏條件而降低。本試驗方法和抑菌劑抑菌效力判斷標(biāo)準(zhǔn)用于包裝未啟開的成品制劑。23中國藥品生物制品檢定所第二十三頁，共四十頁。抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則——實驗要點設(shè)計實驗方案；驗證計數(shù)測定方法；制備濃菌液（108cfu/ml）；原包裝接種；立即計數(shù)與第7、14、28天計數(shù)；計數(shù)結(jié)果的常用對數(shù)值比較；結(jié)果判斷。24中國藥品生物制品檢定所第二十四頁，共四十頁。藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則2010年版《中國藥典》一部附錄XVIIIE2010年版《中國藥典》二部附錄XIXO25中國藥品生物制品檢定所第二十五頁，共四十頁。藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則是為所采用的試驗方法能否替代藥典規(guī)定方法用于藥品微生物的檢驗提供指導(dǎo)。微生物檢驗的新技術(shù)基于微生物生長信息的檢驗技術(shù)，如生物發(fā)光技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、比濁法等；直接測定的被測介質(zhì)中活微生物的檢驗技術(shù)，如固相細(xì)胞計數(shù)法、流式細(xì)胞計數(shù)法等；基于微生物細(xì)胞所含有特定組成成分的分析技術(shù)，如脂肪酸測定技術(shù)、核酸擴增技術(shù)、基因指紋分析技術(shù)等。26中國藥品生物制品檢定所第二十六頁，共四十頁。藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則在生物技術(shù)和制藥行業(yè)中，對微生物質(zhì)量進行控制主要有兩方面的工作：過程監(jiān)控和成品放行。傳統(tǒng)方法的弱點是檢驗速度慢。利用傳統(tǒng)方法所得到的微生物質(zhì)量控制信息，只能作為產(chǎn)品放行評價的一部分內(nèi)容，而不能用于及時指導(dǎo)生產(chǎn)過程中的各工藝環(huán)節(jié)。替代方法的優(yōu)點是檢驗速度快，能夠?qū)ιa(chǎn)過程的關(guān)鍵工藝環(huán)節(jié)作出及時的微生物質(zhì)量評價。在醫(yī)藥行業(yè)完全有必要也有可能使用微生物檢驗的替代方法27中國藥品生物制品檢定所第二十七頁，共四十頁。參數(shù)定性檢驗定量檢驗準(zhǔn)確度－＋精密度－＋專屬性＋＋檢測限＋－定量限－＋線性－＋范圍－＋重現(xiàn)性＋＋耐用性＋＋驗證參數(shù)表注：＋表示需要開展－表示不需要開展藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則28中國藥品生物制品檢定所第二十八頁，共四十頁。驗證參數(shù)與國外藥典比較，這部分內(nèi)容有所不同。在定性檢驗的驗證中，借鑒了美國藥典的規(guī)定，需要開展的驗證參數(shù)為專屬性、檢測限、重現(xiàn)性和耐用性，放棄了歐洲藥典對準(zhǔn)確度和精密度的規(guī)定。在定量檢驗的的驗證中，借鑒了歐洲藥典的規(guī)定，除檢測限外，其他參數(shù)均需要驗證。29中國藥品生物制品檢定所第二十九頁，共四十頁。定性檢驗的方法驗證1、專屬性專屬性是指檢測樣品中可能存在的微生物種類的能力強調(diào)應(yīng)關(guān)注樣品存在對檢驗結(jié)果的影響研究表明，在使用依賴培養(yǎng)技術(shù)的替代方法時，樣品的存在會導(dǎo)致檢驗出現(xiàn)假陰性對于不依賴培養(yǎng)技術(shù)的替代方法，樣品的存在還可能導(dǎo)致檢驗出現(xiàn)假陽性對驗證數(shù)據(jù)可采用χ2檢驗30中國藥品生物制品檢定所第三十頁，共四十頁。定性檢驗的方法驗證2、檢測限檢測限是指在替代方法設(shè)定的檢驗條件下，樣品中能被檢出的微生物的最低數(shù)量，該數(shù)量是指在稀釋或培養(yǎng)之前初始樣品所含有的微生物數(shù)量，而不是指檢驗過程中某一環(huán)節(jié)的供試液中所含有的微生物數(shù)量驗證的關(guān)鍵是確定接種菌的最低數(shù)量，與國外藥典規(guī)定相同，要求該數(shù)量應(yīng)能夠在采用藥典方法檢驗時，有50％的檢出率對驗證數(shù)據(jù)可采用χ2檢驗31中國藥品生物制品檢定所第三十一頁，共四十頁。定性檢驗的方法驗證3、重現(xiàn)性重現(xiàn)性是指相同的樣品在正常的實驗條件（如實驗場所、實驗人員、儀器、試劑的批次等）發(fā)生變化時，所得檢驗結(jié)果的精密度，反映了微生物檢驗方法在檢驗結(jié)果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力驗證的關(guān)鍵是使接種菌的量在檢測限以上評價驗證結(jié)果時，應(yīng)排除樣品均一性的影響對驗證數(shù)據(jù)可采用χ2檢驗32中國藥品生物制品檢定所第三十二頁，共四十頁。定性檢驗的方法驗證4、耐用性耐用性是指當(dāng)方法參數(shù)有小的刻意變化時，檢驗結(jié)果不受影響的能力，為方法正常使用時的可靠性提供依據(jù)對替代方法進行耐用性評價，確定方法操作的關(guān)鍵注意點在開展了上述評價后，可以不必比較替代方法的耐用性與藥典方法的差異對驗證數(shù)據(jù)可采用χ2檢驗33中國藥品生物制品檢定所第三十三頁，共四十頁。定量檢驗的方法驗證1、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度是指替代方法的檢驗結(jié)果與藥典方法檢驗結(jié)果的一致程度。準(zhǔn)確度的確認(rèn)應(yīng)在檢驗的范圍內(nèi)。通常用微生物的回收率（％）來表示準(zhǔn)確度。驗證的菌濃度應(yīng)該在檢測范圍內(nèi)，并且至少應(yīng)該有5種濃度以上，每種濃度重復(fù)檢驗5次。替代方法的回收率應(yīng)該達(dá)到70％以上當(dāng)替代方法并不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁來進行定量時，可能出現(xiàn)回收率高于藥典方法的情況。對驗證數(shù)據(jù)應(yīng)進行必要的數(shù)學(xué)處理，如對數(shù)轉(zhuǎn)換，然后對上述數(shù)據(jù)采用t檢驗分析處理。34中國藥品生物制品檢定所第三十四頁，共四十頁。定量檢驗的方法驗證2、精密度精密度是指在檢驗范圍內(nèi)，對同一個均勻的樣品多次重復(fù)取樣，其檢驗結(jié)果的一致程度。微生物定量檢驗的精密度通常采用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）來表示。驗證的菌濃度應(yīng)該在檢測范圍內(nèi)，并且至少應(yīng)該有5種濃度以上，每種濃度重復(fù)檢驗10次。可以接受的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于35％。在該項目上，USP的規(guī)定是15％～35％，研究表明，當(dāng)含菌濃度在30～300cfu/ml時，計數(shù)結(jié)果的RSD完全可能在15％以內(nèi)，因此，指導(dǎo)原則中對該指標(biāo)作了修改。替代方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于藥典方法。對驗證數(shù)據(jù)可采用t檢驗分析處理。處理時，應(yīng)分別評價每種濃度下兩種方法計數(shù)結(jié)果的差異以及兩種方法在不同濃度下獲得的RSD值的差異。35中國藥品生物制品檢定所第三十五頁，共四十頁。定量檢驗的方法驗證3、專屬性專屬性是指通過檢測適宜的試驗菌，以證明檢驗方法與其設(shè)定目的相適應(yīng)的能力。例如，菌落計數(shù)平皿法其設(shè)定目的在于檢出一定數(shù)量的微生物，則其專屬性驗證應(yīng)證明當(dāng)樣品中存在一定數(shù)量的試驗菌時，通過平皿法檢驗，能夠檢出試驗菌，而樣品的存在不會對結(jié)果造成影響。驗證的關(guān)鍵是合理評價樣品的存在對檢驗結(jié)果的影響，當(dāng)替代方法不依賴微生物生長出菌落或出現(xiàn)混濁就可以定量時，這種評價顯得尤為必要。對驗證數(shù)據(jù)可采