紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會(huì)使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險(xiǎn)?！ぜs翰遜4、權(quán)力會(huì)奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘燃t細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會(huì)使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險(xiǎn)。——塞·約翰遜4、權(quán)力會(huì)奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘燃t細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定概述：血液由血漿和血細(xì)胞兩部分組成。通過(guò)循環(huán)系統(tǒng)與全身各個(gè)組織器官密切聯(lián)系參與機(jī)體各項(xiàng)生理功能活動(dòng)，維持機(jī)體正常新陳代謝和內(nèi)環(huán)境平衡。在病理情況下，血液系統(tǒng)疾病除直接累及血液外，也可以影響全身組織器官，而各組織器官的病變也可直接或間接地引起學(xué)液發(fā)生變化，臨床上較多的檢驗(yàn)項(xiàng)目是通過(guò)血液標(biāo)本的檢驗(yàn)來(lái)了解機(jī)體的變化。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少1紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理2紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理3紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理4紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理5一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論（一）RBC來(lái)源、生成、壽命及衰亡

紅細(xì)胞系祖細(xì)胞早幼、中幼和（BFU-E和FU-E）晚幼各發(fā)育階段骨髓造血干細(xì)胞骨髓原紅細(xì)胞（CFU-S）促紅細(xì)胞生成素3~5次分裂（Erythropoietion，EPO）網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞從骨髓益出至外周血的全過(guò)程約需5天時(shí)間一個(gè)原紅細(xì)胞最終可生成8~16個(gè)成熟紅細(xì)胞紅細(xì)胞的生存時(shí)間為120天珠蛋白參與再造血衰亡的RBC鐵膽紅素，參與膽紅素代謝一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論6（二）

RBC的生理機(jī)能（見(jiàn)課件）

（三）Hb的組成及結(jié)構(gòu)

珠蛋白（含兩對(duì)肽鏈）血紅蛋白（Hb）亞鐵血紅素（Fe+4個(gè)卟啉）（二）RBC的生理機(jī)能（見(jiàn)課件）7

α2β2（成人主要Hb，簡(jiǎn)稱HbA占90%）α鏈（141AA）珠蛋白

組合形式

α2δ2（成人次要β鏈（146AA）Hb，HbA2占1~3%）

α2γ2（胎兒主要Hb，HbF占2%以下）

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理8紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理9二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（一）原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)（用已校準(zhǔn)的一次性微量采血管或Hb吸管，吸取全血20ul加到3.8ml稀釋液內(nèi)混勻），滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤內(nèi)，然后于顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的RBC數(shù)，經(jīng)過(guò)換算即可求得每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)10（二）試劑枸櫞酸鈉（2Na3C6H5O7·11H2O），3克甲醛（40%）1ml以上溶解后加蒸餾水100ml此配方克服了傳統(tǒng)的Hayem液的缺點(diǎn)。（三）操作見(jiàn)課件（二）試劑11（四）參考值RBC（×1012/L）Hb（g/L）男：4.0~5.5120~160女：3.5~5.0110~150

新生兒：6.0~7.0170~200（四）參考值12（五）臨床意義升高：相對(duì)升高——與脫水有關(guān)（吐、瀉、汗、尿、灼、癌）絕對(duì)升高——與乏氧有關(guān)生理性（高原、胎兒、新生兒、運(yùn)動(dòng)、精神因素）病理性（心肺疾患、真性紅細(xì)胞增多癥）降低：生理性降低——妊娠、嬰幼兒、老年人病理性降低——生成降低、原料不足、造血障礙、丟失增多（失血）、破壞增多（溶血）

由于各種病因?qū)е轮車t細(xì)胞減少，即病理性貧血其貧血的病因?qū)W分類見(jiàn)第9頁(yè)“表2-1”（五）臨床意義13三、血紅蛋白測(cè)定（一）血紅蛋白測(cè)定方法改良沙利（Sahli）氏法托爾克維斯脫（Tallgvist）氏法光電比色法硫酸銅溶液比重法酸化（堿化）光電比色法氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測(cè)定法十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）測(cè)定法堿羥高鐵血紅素（AHD-575）法上機(jī)分析

三、血紅蛋白測(cè)定14（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法

原理：血紅蛋白被高鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]氧化成高鐵血紅蛋白（Hi）再與氰離子（CN-）結(jié)合，生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋（hemigl-obinCyanide，簡(jiǎn)稱HiCN）。氰化高鐵血紅蛋白在波長(zhǎng)540nm處有吸收峰，可用校準(zhǔn)的高精度分光光度計(jì)進(jìn)行直接定量測(cè)定?；蛴肏iCN參考液進(jìn)行比色測(cè)定。

（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法15而幻燈片12而幻燈片1216試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見(jiàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)）

靜置操作：血液20ul+轉(zhuǎn)化液5ml———比色5分鐘計(jì)算：64458Hb（g/L）=測(cè)定吸光度（A）×————×25144×1000=A×367.764458是目前國(guó)際公認(rèn)的血紅蛋白平均分子量44是1965年國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）公布的血紅蛋白摩爾吸光度。251是稀釋倍數(shù)試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見(jiàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)）17（三）注意事項(xiàng)：必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線HiCN試劑不能貯存于塑料瓶中，應(yīng)放40C冰箱不能圖工作方便不顧質(zhì)量管理要求遇到白細(xì)胞數(shù)過(guò)多或異常球蛋白增高的血標(biāo)本，HiCN比色液會(huì)出現(xiàn)渾濁，可離心取上清夜或向比色液中加少許NaCL（約0.25g）或碳酸鉀（0.1g）氰化鉀是劇毒品，應(yīng)妥善保管，配試劑時(shí)要按劇毒品管理程序操作若用分光光度計(jì)作精度定量測(cè)定，分光光度計(jì)的波長(zhǎng)和吸光度需校正，帶寬應(yīng)小于1nm，比色杯光徑1.00cm，允許誤差為0.5%（0.995~1.005cm），測(cè)定溫度200C~250C。（三）注意事項(xiàng)：18HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)（1）波峰540nm±1nm，波谷504~502nm（2）A540/A504應(yīng)在1.59~1.63之間（3）A750＜0.002（4）棕色容器保存，穩(wěn)定期長(zhǎng)，40C下至少保存6年（5）無(wú)菌試驗(yàn)（包括厭氧培養(yǎng)）陰性（6）測(cè)定精度＜±0.1%(7)定值由指定多個(gè)參考實(shí)驗(yàn)室測(cè)定廢液處理（1）按每升HiCN廢液加次氯酸鈉溶液40ml，充分混勻，敞開(kāi)容器，置室溫3小時(shí)。（2）用“84”消毒液40ml代替（3）鹼性硫酸亞鐵懸液40m/每升HiCN廢液HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)19（四）方法學(xué)評(píng)價(jià)

Sahli法HiCN測(cè)定法操作簡(jiǎn)便，但誤差較大。操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定可靠。不能轉(zhuǎn)化生理或病理中全除SHb外，其余各種Hb均可很快地轉(zhuǎn)部的Hb，對(duì)Hbco、Hbred化為HiCN.轉(zhuǎn)化很慢或轉(zhuǎn)化不完全.Hb轉(zhuǎn)化時(shí)間較長(zhǎng)，5分鐘HiCN在540nm處吸收峰較寬，可用一轉(zhuǎn)化88%，10分鐘轉(zhuǎn)化95%般分光光度計(jì)進(jìn)行比色。2小時(shí)才基本轉(zhuǎn)化完畢。終點(diǎn)反應(yīng)不明顯，比色過(guò)顯色快而穩(wěn)定，因此HiCN液可制成程不易標(biāo)準(zhǔn)化。在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間（至少6年）內(nèi)穩(wěn)定不變的標(biāo)準(zhǔn)液，這對(duì)進(jìn)行質(zhì)量控制較為有利。有摩爾消光系數(shù)可通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定吸光度值直接計(jì)算測(cè)定誤差小.

（四）方法學(xué)評(píng)價(jià)20

SDS-Hb測(cè)定法AHD-575測(cè)定法優(yōu)點(diǎn)：無(wú)劇毒試劑單一，操作簡(jiǎn)操作簡(jiǎn)單單，易行，無(wú)毒、呈色穩(wěn)定，可用氯化血紅素作標(biāo)準(zhǔn)品。缺點(diǎn)：本身質(zhì)量差無(wú)消光系數(shù)無(wú)標(biāo)準(zhǔn)SDS-Hb測(cè)定法21

堿羥高鐵血紅素（AHD-575）法[原理]：非離子化去垢劑堿性溶液（AHD試劑）能使血紅素，血紅蛋白及其衍生物全部轉(zhuǎn)化為一種穩(wěn)定堿性羥高鐵血紅素，在575nm處有一特征性的吸收峰。[試劑]：任選一種轉(zhuǎn)化液TritonX-10025g皂素1g＋Brig-3525g＋0.1NNaOH1000mL聚乙二醇辛基苯基醚（乳化劑0P）25ml堿羥高鐵血紅素（22[操作]：取血20ul加到上述任一轉(zhuǎn)化液3ml中，充分混勻，靜置3分鐘，于分光光度計(jì)（帶寬應(yīng)小于8nm）波長(zhǎng)575nm處，用光徑1.000cm比色杯，以轉(zhuǎn)化液調(diào)零，讀取吸光度（A）值。[計(jì)算]：64438Hb（g/L）=測(cè)定管吸光度（A）×————×151=A×349.76958×46958:氯化血紅素摩爾消光系數(shù)64458：目前國(guó)際公認(rèn)的血紅蛋白分子量4：一個(gè)分子Hb含有4個(gè)血紅素151：稀釋倍數(shù)[操作]：23THANKSTHANKS24謝謝你的閱讀知識(shí)就是財(cái)富豐富你的人生71、既然我已經(jīng)踏上這條道路，那么，任何東西都不應(yīng)妨礙我沿著這條路走下去。——康德

72、家庭成為快樂(lè)的種子在外也不致成為障礙物但在旅行之際卻是夜間的伴侶?！魅_

73、堅(jiān)持意志偉大的事業(yè)需要始終不渝的精神?！鼱柼?/p>

74、路漫漫其修道遠(yuǎn)，吾將上下而求索。——屈原

75、內(nèi)外相應(yīng)，言行相稱?！n非謝謝你的閱讀知識(shí)就是財(cái)富71、既然我已經(jīng)踏上這條道路，那么，25紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少遇到抵抗。——塞·約翰遜2、權(quán)力會(huì)使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險(xiǎn)?！ぜs翰遜4、權(quán)力會(huì)奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘燃t細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會(huì)使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險(xiǎn)。——塞·約翰遜4、權(quán)力會(huì)奴化一切。——塔西佗5、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走。——莎士比紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定概述：血液由血漿和血細(xì)胞兩部分組成。通過(guò)循環(huán)系統(tǒng)與全身各個(gè)組織器官密切聯(lián)系參與機(jī)體各項(xiàng)生理功能活動(dòng)，維持機(jī)體正常新陳代謝和內(nèi)環(huán)境平衡。在病理情況下，血液系統(tǒng)疾病除直接累及血液外，也可以影響全身組織器官，而各組織器官的病變也可直接或間接地引起學(xué)液發(fā)生變化，臨床上較多的檢驗(yàn)項(xiàng)目是通過(guò)血液標(biāo)本的檢驗(yàn)來(lái)了解機(jī)體的變化。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少26紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理27紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理28紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理29紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理30一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論（一）RBC來(lái)源、生成、壽命及衰亡

紅細(xì)胞系祖細(xì)胞早幼、中幼和（BFU-E和FU-E）晚幼各發(fā)育階段骨髓造血干細(xì)胞骨髓原紅細(xì)胞（CFU-S）促紅細(xì)胞生成素3~5次分裂（Erythropoietion，EPO）網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞從骨髓益出至外周血的全過(guò)程約需5天時(shí)間一個(gè)原紅細(xì)胞最終可生成8~16個(gè)成熟紅細(xì)胞紅細(xì)胞的生存時(shí)間為120天珠蛋白參與再造血衰亡的RBC鐵膽紅素，參與膽紅素代謝一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論31（二）

RBC的生理機(jī)能（見(jiàn)課件）

（三）Hb的組成及結(jié)構(gòu)

珠蛋白（含兩對(duì)肽鏈）血紅蛋白（Hb）亞鐵血紅素（Fe+4個(gè)卟啉）（二）RBC的生理機(jī)能（見(jiàn)課件）32

α2β2（成人主要Hb，簡(jiǎn)稱HbA占90%）α鏈（141AA）珠蛋白

組合形式

α2δ2（成人次要β鏈（146AA）Hb，HbA2占1~3%）

α2γ2（胎兒主要Hb，HbF占2%以下）

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理33紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定課件整理34二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（一）原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)（用已校準(zhǔn)的一次性微量采血管或Hb吸管，吸取全血20ul加到3.8ml稀釋液內(nèi)混勻），滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤內(nèi)，然后于顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的RBC數(shù)，經(jīng)過(guò)換算即可求得每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)35（二）試劑枸櫞酸鈉（2Na3C6H5O7·11H2O），3克甲醛（40%）1ml以上溶解后加蒸餾水100ml此配方克服了傳統(tǒng)的Hayem液的缺點(diǎn)。（三）操作見(jiàn)課件（二）試劑36（四）參考值RBC（×1012/L）Hb（g/L）男：4.0~5.5120~160女：3.5~5.0110~150

新生兒：6.0~7.0170~200（四）參考值37（五）臨床意義升高：相對(duì)升高——與脫水有關(guān)（吐、瀉、汗、尿、灼、癌）絕對(duì)升高——與乏氧有關(guān)生理性（高原、胎兒、新生兒、運(yùn)動(dòng)、精神因素）病理性（心肺疾患、真性紅細(xì)胞增多癥）降低：生理性降低——妊娠、嬰幼兒、老年人病理性降低——生成降低、原料不足、造血障礙、丟失增多（失血）、破壞增多（溶血）

由于各種病因?qū)е轮車t細(xì)胞減少，即病理性貧血其貧血的病因?qū)W分類見(jiàn)第9頁(yè)“表2-1”（五）臨床意義38三、血紅蛋白測(cè)定（一）血紅蛋白測(cè)定方法改良沙利（Sahli）氏法托爾克維斯脫（Tallgvist）氏法光電比色法硫酸銅溶液比重法酸化（堿化）光電比色法氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測(cè)定法十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）測(cè)定法堿羥高鐵血紅素（AHD-575）法上機(jī)分析

三、血紅蛋白測(cè)定39（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法

原理：血紅蛋白被高鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]氧化成高鐵血紅蛋白（Hi）再與氰離子（CN-）結(jié)合，生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋（hemigl-obinCyanide，簡(jiǎn)稱HiCN）。氰化高鐵血紅蛋白在波長(zhǎng)540nm處有吸收峰，可用校準(zhǔn)的高精度分光光度計(jì)進(jìn)行直接定量測(cè)定?；蛴肏iCN參考液進(jìn)行比色測(cè)定。

（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法40而幻燈片12而幻燈片1241試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見(jiàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)）

靜置操作：血液20ul+轉(zhuǎn)化液5ml———比色5分鐘計(jì)算：64458Hb（g/L）=測(cè)定吸光度（A）×————×25144×1000=A×367.764458是目前國(guó)際公認(rèn)的血紅蛋白平均分子量44是1965年國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）公布的血紅蛋白摩爾吸光度。251是稀釋倍數(shù)試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見(jiàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)）42（三）注意事項(xiàng)：必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線HiCN試劑不能貯存于塑料瓶中，應(yīng)放40C冰箱不能圖工作方便不顧質(zhì)量管理要求遇到白細(xì)胞數(shù)過(guò)多或異常球蛋白增高的血標(biāo)本，HiCN比色液會(huì)出現(xiàn)渾濁，可離心取上清夜或向比色液中加少許NaCL（約0.25g）或碳酸鉀（0.1g）氰化鉀是劇毒品，應(yīng)妥善保管，配試劑時(shí)要按劇毒品管理程序操作若用分光光度計(jì)作精度定量測(cè)定，分光光度計(jì)的波長(zhǎng)和吸光度需校正，帶寬應(yīng)小于1nm，比色杯光徑1.00cm，允許誤差為0.5%（0.995~1.005cm），測(cè)定溫度200C~250C。（三）注意事項(xiàng)：43HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)（1）波峰540nm±1nm，波谷504~502nm（2）A540/A504應(yīng)在1.59~1.63之間（3）A750＜0.002（4）棕色容器保存，穩(wěn)定期長(zhǎng)，40C下至少保存6年（5）無(wú)菌試驗(yàn)（包括厭氧培養(yǎng)）陰性（6）測(cè)定精度＜±0.1%(7)定值由指定多個(gè)參考實(shí)驗(yàn)室測(cè)定廢液處理（1）按每升HiCN廢液加次氯酸鈉溶液40ml，充分混勻，敞開(kāi)容器，置室溫3小時(shí)。（2）用“84”消毒液40ml代替（3）鹼性硫酸亞鐵懸液40m/每升HiCN廢液HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)44（四）方法學(xué)評(píng)價(jià)

Sahli法HiCN測(cè)定法操作簡(jiǎn)便，但誤差較大。操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定可靠。不能轉(zhuǎn)化生理或病理中全除SHb外，其余各種Hb均可很快地轉(zhuǎn)部的Hb，對(duì)Hbco、Hbred化為HiCN.轉(zhuǎn)化很慢或轉(zhuǎn)化不完全.Hb轉(zhuǎn)化時(shí)間較長(zhǎng)，5分鐘HiCN在540nm處吸收峰較寬，可用一轉(zhuǎn)化88%，10分鐘轉(zhuǎn)化95%般分光光度計(jì)進(jìn)行比色。2小時(shí)才基本轉(zhuǎn)化完畢。終點(diǎn)反應(yīng)不明顯，比色過(guò)顯色快而穩(wěn)定，因此HiCN液可制成程不易標(biāo)準(zhǔn)化。在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間（至少6年）內(nèi)穩(wěn)定不變的標(biāo)準(zhǔn)液，這對(duì)進(jìn)行質(zhì)量控制較為有利。有摩爾消光系數(shù)可通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定吸光度值直接計(jì)算測(cè)定誤差小.

（四）方法學(xué)評(píng)價(jià)45

SDS-Hb測(cè)定法AH