經(jīng)皮腎活檢術(shù)課件

經(jīng)皮腎活檢術(shù)最直接的診斷方法自體腎或移植腎病理診斷了解疾病發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后臨床研究的重要途徑經(jīng)皮腎活檢術(shù)最直接的診斷方法1腎活檢方法的沿革開放式腎活檢（openrenalbiopsy）直視下負(fù)壓式腎活檢經(jīng)皮腎活檢（percutaneousrenalbiopsy）經(jīng)典經(jīng)皮腎活檢為負(fù)壓吸引法（肝穿活檢術(shù)基礎(chǔ)發(fā)展）半自動(dòng)穿刺槍……腎活檢方法的沿革開放式腎活檢（openrenalbiop2適應(yīng)證彌漫性腎實(shí)質(zhì)損害原發(fā)或繼發(fā)性腎小球疾病腎小管間質(zhì)疾病腎血管性疾病遺傳、先天等疾病病因、病變程度、治療和預(yù)后等未解決或不明確者……適應(yīng)證彌漫性腎實(shí)質(zhì)損害3適應(yīng)證腎病綜合征腎炎綜合征急進(jìn)性腎炎綜合征各類持續(xù)性無癥狀尿檢異常（蛋白尿和/或鏡下血尿）非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的急性腎功能減退非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的慢性腎功能減退腎體積未萎縮（B超腎長經(jīng)：男性≥90mm，女性≥85mm）正常結(jié)構(gòu)尚未完全消失適應(yīng)證腎病綜合征4適應(yīng)證移植腎腎活檢各類非外科因素導(dǎo)致的移植腎腎功能減退、腎功能延遲恢復(fù)、疑及存在腎小管壞死、藥物性腎中毒、慢性排斥反應(yīng)及復(fù)發(fā)、新生或帶入的疾病適應(yīng)證移植腎腎活檢5禁忌證出血傾向和/或凝血功能障礙者活動(dòng)性感染性疾病急性腎盂腎炎、腎膿腫、腎結(jié)核等多囊腎孤立腎較大的腎腫瘤腎萎縮的慢性腎功能不全禁忌證出血傾向和/或凝血功能障礙者6禁忌證大量腹水未能控制的高血壓或低血壓未糾正的嚴(yán)重貧血（Hb≤80g/L）精神疾病或不能配合者禁忌證大量腹水7取組織不夠或空穿時(shí)可重復(fù)穿刺鉛是重金屬，鈾有放射性腎小球基底膜、腎小管基底膜、包曼囊壁4PBS50ml，置冰箱內(nèi)）亮綠SF0.蘇木素0.將分切后的腎組織即浸3.蛋白、免疫復(fù)合物染成桔紅色置Schiff試劑染5~10′10×目鏡中加25格測微器，在40×高倍鏡下，參照血球計(jì)數(shù)板算得每平方毫米內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞親和力強(qiáng)，對(duì)糖原、核蛋白，尤其微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)有較好的固定作用3%硫酸，用時(shí)現(xiàn)配，等量混合皮膚消毒液：1%普魯卡因或2%利多卡因局麻非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的慢性腎功能減退解剖顯微鏡、冰瓶一個(gè)，眼科平鑷兩把，直尺一把，雙面刀一片，蠟板一塊多聚甲醛固定時(shí)間稍長無妨流水沖洗，鏡下觀察細(xì)胞核呈蘭色，其余組織呈灰色純丙酮脫水45′（每15′換液1次）用手大魚際部（或手指）在體表進(jìn)針部位施壓,平車送患者回病房蒸餾水100ml操作步驟患者準(zhǔn)備消除其顧慮，爭取最佳配合（解釋腎活檢的必要性及安全性，簡要說明操作過程）交待相關(guān)注意事項(xiàng)，必須取得書面同意（告知腎活檢可能引起的各類并發(fā)癥）取組織不夠或空穿時(shí)可重復(fù)穿刺操作步驟患者準(zhǔn)備8操作步驟術(shù)前檢查測血壓>2次高血壓者積極控制血壓仔細(xì)檢查全身皮膚粘膜出血傾向選擇、處理進(jìn)針部位局部皮膚（備皮等）重點(diǎn)常規(guī)檢查血常規(guī)、出血時(shí)間、凝血時(shí)間（試管法）、凝血酶原時(shí)間、血塊收縮時(shí)間及血漿纖維蛋白原濃度操作步驟術(shù)前檢查9操作步驟患者準(zhǔn)備抗凝治療者術(shù)前停藥>3d，復(fù)查凝血指標(biāo)術(shù)前行雙腎B超了解腎臟圖象、確定穿刺部位受檢者術(shù)前12~24h內(nèi)排便劇烈性咳嗽、腹痛及腹瀉，推遲腎活檢操作步驟患者準(zhǔn)備10操作步驟患者準(zhǔn)備女性應(yīng)避開經(jīng)期（非急診腎活檢）腎衰者術(shù)前加強(qiáng)透析（CBP）控制血壓在理想范圍焦慮及不合作者酌情用鎮(zhèn)靜劑可能發(fā)生出血并發(fā)癥者術(shù)前維生素K及止血藥操作步驟患者準(zhǔn)備11操作步驟器械及藥品準(zhǔn)備穿刺針：國內(nèi)較多中心采用負(fù)壓吸引法，18號(hào)負(fù)壓穿刺針（Menghini穿刺針）負(fù)壓吸引裝置：20ml注射器聯(lián)接管、針卡深度固定卡長度測量尺等依B超測得皮腎距離選擇穿刺針長度操作步驟器械及藥品準(zhǔn)備依B超測得皮腎距離選擇穿刺針長度12操作步驟器械及藥品準(zhǔn)備穿刺針：其他活檢針有Framklin-Vim-silverance針或Tru-cut針。視操作者及單位經(jīng)驗(yàn)確定是否選用半自動(dòng)穿刺槍Tru-Cut腎活檢穿刺針操作步驟器械及藥品準(zhǔn)備Tru-Cut腎活檢穿刺針13操作步驟選擇B超探頭及穿刺針固定器可選矩陣或扇形探頭，穿刺針與固定器相匹配（固定器能將進(jìn)針途徑調(diào)整至合適的角度）術(shù)前消毒探頭及固定器（因B超定位及深度測定準(zhǔn)確，現(xiàn)無需探測針預(yù)定位）皮膚消毒液：1%普魯卡因或2%利多卡因局麻高溫高壓消毒鋪巾及敷料、一次性注射器（無需皮膚切口及皮膚縫合）穿刺針不得復(fù)用操作步驟選擇B超探頭及穿刺針固定器14操作步驟體位受檢者取俯臥位，腹部肋緣下（相當(dāng)于腎區(qū)位置）墊以5~10cm棉枕減少腎臟移動(dòng)。雙上肢置于兩側(cè)，頭向一側(cè)偏斜。平靜呼吸皮膚消毒1%碘伏消毒液（>2遍），消毒范圍上至肩胛下線，下至髂后上棘連線，兩側(cè)至腋后線鋪巾操作步驟體位15操作步驟穿刺點(diǎn)定位定位技術(shù)體表標(biāo)記經(jīng)驗(yàn)定位靜脈腎盂造影X線定位早期B超術(shù)前定位實(shí)時(shí)B超定位與引導(dǎo)CT定位操作步驟穿刺點(diǎn)定位16操作步驟測定穿刺距離B超固定架長度＋皮腎距離（B超）＋15~20mm（腎臟下移距離）+15mm（欲取組織）如：B超固定架長度＝40mm；皮腎距離＝50mm；腎臟下移距離＝20mm，欲取組織＝15mm，則穿刺距離＝120mm～125mm操作步驟測定穿刺距離17操作步驟局麻皮內(nèi)及沿進(jìn)針途徑皮下局麻將注射器造成負(fù)壓的同時(shí)先進(jìn)針，如無出血邊退出注射針，邊注射局麻藥操作步驟局麻1825%鹽酸，70%酒精）76g，加雙蒸水30ml再加8ml1NNaOH（NaOH須新鮮配制），搖之使乳白色液清亮DAB-H2O2顯色液置50ml量瓶內(nèi)混合，搖1′，間隔再搖，試劑全部溶解呈乳白色用解剖顯微鏡或放大鏡判斷腎組織部位（皮質(zhì)和髓質(zhì)，有無腎小球），及時(shí)與術(shù)者聯(lián)系3%硫酸，用時(shí)現(xiàn)配，等量混合合格的電鏡標(biāo)本應(yīng)有≥1個(gè)腎小球（注意取材準(zhǔn)確性）快速脫水（甩片），透明封片一般用梯度濃度的乙醇或丙酮脫水蒸餾水200mlMasson三色染色將細(xì)胞核染成黑色，胞漿及膠原纖維染成藍(lán)綠色，呈分枝小管狀或泡狀，膜完整蒸餾水200ml自體腎或移植腎病理診斷Masson三色染色1％過碘酸氧化15′急性腎盂腎炎、腎膿腫、腎結(jié)核等冰醋酸1.紗布及編號(hào)的膠布置培養(yǎng)皿備用5%甲苯胺蘭水溶液染色約1′（可加溫，見水汽停），水洗，鏡下定位操作步驟穿刺方法針芯插入針管內(nèi)穿刺針固定器的針槽及在實(shí)時(shí)B超引導(dǎo)下刺至腎包膜表面取出針芯，置入針卡，連接負(fù)壓裝置最佳穿刺（腎下極），囑患者屏氣，助手同步造負(fù)壓，術(shù)者快速進(jìn)針至預(yù)定深度，即刻快速拔出穿刺針（穿刺動(dòng)作以手腕運(yùn)動(dòng)為主，幅度不易過大，過程快捷）用負(fù)壓注射器中的生理鹽水推出腎組織25%鹽酸，70%酒精）操作步驟穿刺方法19操作步驟標(biāo)本長度腎組織長1.0~1.5cm（標(biāo)本過短腎小球數(shù)少，過長則易穿通腎臟，致包膜下血腫和/或肉眼血尿）通常1~2次取到足夠腎組織合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)取組織不夠或空穿時(shí)可重復(fù)穿刺操作步驟標(biāo)本長度20操作步驟送檢按要求分割腎組織及處理，即刻送檢行光鏡、免疫病理和電鏡檢查光鏡10％的中性福爾馬林溶液和/或升汞-苦味酸電鏡3.75%的冷戊二醛免疫熒光低溫生理鹽水紗布特殊要求者用相應(yīng)的固定液操作步驟送檢21操作步驟傷口處理腎穿刺術(shù)后傷口敷以紗布，膠布固定操作步驟傷口處理22注意事項(xiàng)用手大魚際部（或手指）在體表進(jìn)針部位施壓,平車送患者回病房自體腎活檢者施壓穿刺點(diǎn)1~3′移植腎活檢者壓迫穿刺點(diǎn)30′注意事項(xiàng)用手大魚際部（或手指）在體表進(jìn)針部位施壓,平車送患23注意事項(xiàng)小心平移患者上床，囑平臥位，嚴(yán)格腰部制動(dòng)4h（四肢可放松，緩慢小幅度活動(dòng)，嚴(yán)禁翻身及扭轉(zhuǎn)腰部）自體腎及移植腎活檢術(shù)后均需臥床12h（如無高血壓、腎功能不全等高危）因素常規(guī)監(jiān)測（術(shù)后6h內(nèi)）血壓、脈搏、尿色、膚色、出汗情況、腰腹部癥狀及體征注意事項(xiàng)小心平移患者上床，囑平臥位，嚴(yán)格腰部制動(dòng)4h（四肢24注意事項(xiàng)血壓下降或肉眼血尿者應(yīng)反復(fù)查血常規(guī)、血細(xì)胞比積腰腹部疼痛顯著者查B超,觀察有無腎包膜下血腫避免或及時(shí)處理便秘、腹瀉及劇烈咳嗽禁止劇烈運(yùn)動(dòng)或重體力勞動(dòng)（術(shù)后3周內(nèi)）注意事項(xiàng)血壓下降或肉眼血尿者應(yīng)反復(fù)查血常規(guī)、血細(xì)胞比積25并發(fā)癥及其處理腎出血肉眼血尿及腎周血腫嚴(yán)重者需腎切除尿潴留腰痛不適少見并發(fā)癥腎動(dòng)靜脈瘺感染誤傷其它臟器并發(fā)癥及其處理腎出血26并發(fā)癥及其處理血尿術(shù)后鏡下血尿(絕大多數(shù))肉眼血尿2~7％積極止血措施血細(xì)胞壓積↓>6%或Hb<2g/L或血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定，必須補(bǔ)液促尿液排出，保持泌尿道通暢，防止血凝塊堵塞尿道血細(xì)胞壓積及Hb繼續(xù)↓，及時(shí)輸血、選擇性腎動(dòng)脈介入栓塞或外科手術(shù)控制活動(dòng)性大出血并發(fā)癥及其處理血尿27并發(fā)癥及其處理腎周血腫腎活檢后3~5d低熱、腰痛（B超證實(shí)）腎周小血腫臥床休息自行消散（無后遺癥）較大血腫3月內(nèi)吸收嚴(yán)重大血腫處理同嚴(yán)重肉眼血尿者并發(fā)癥及其處理腎周血腫28合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)確診多普勒超聲檢查或腎動(dòng)脈造影常規(guī)監(jiān)測（術(shù)后6h內(nèi)）15mol/L（pH7.0g，玻棒攪勻，當(dāng)溶液呈深紫色時(shí)，即移入冷水中，促使冷卻，靜置過夜，過濾封閉保存，用前若加5％醋酸則染色更佳。焦慮及不合作者酌情用鎮(zhèn)靜劑腎活檢標(biāo)本免疫化學(xué)及免疫熒光染色制備技術(shù)切片厚度由干涉色估計(jì)，其顏色與厚度的關(guān)系如下取得標(biāo)本后，即平鋪在小蠟板上，迅速以鋒利的刀片將組織按規(guī)定分配，立即固定液固定。合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)急性腎盂腎炎、腎膿腫、腎結(jié)核等合格的電鏡標(biāo)本應(yīng)有≥1個(gè)腎小球（注意取材準(zhǔn)確性）受檢者術(shù)前12~24h內(nèi)排便置50ml量瓶內(nèi)混合，搖1′，間隔再搖，試劑全部溶解呈乳白色低倍下呈完整清晰的單層結(jié)構(gòu)，高倍下見雙層結(jié)構(gòu)合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)爭取在穿刺組織取出后0.材料來源豐富，操作簡便非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的急性腎功能減退受檢者取俯臥位，腹部肋緣下（相當(dāng)于腎區(qū)位置）墊以5~10cm棉枕減少腎臟移動(dòng)。病因、病變程度、治療和預(yù)后等未解決或不明確者銳利刀片切割組織1mm、2mm及4mm數(shù)段淡黃色結(jié)晶體，水溶液中性，具強(qiáng)揮發(fā)性和毒性。室溫和正常大氣情況下，配制簡單，操作方便，染色均勻技術(shù)工作是正確診斷的保證合格的電鏡標(biāo)本應(yīng)有≥1個(gè)腎小球（注意取材準(zhǔn)確性）蒸餾水200ml各種基底膜：腎小球基底膜、包曼囊壁和腎小管基底膜紗布及編號(hào)的膠布置培養(yǎng)皿備用加HRP-鏈霉素卵白素復(fù)合物（streptoavidin），室溫40′,PBS沖洗?；旌霞t液配制：Masson染液中加少許1%酸性品紅，比例需染片后定5%馬休黃（martiusyellow），95%酒精，2%磷鎢酸2mol/LNaH2PO4.受檢者取俯臥位，腹部肋緣下（相當(dāng)于腎區(qū)位置）墊以5~10cm棉枕減少腎臟移動(dòng)。5%馬休黃（martiusyellow），95%酒精，2%磷鎢酸置Schiff試劑染5~10′將蘇木素溶于酒精，傾入明礬液中，混合后蒸沸，加一氧化汞1.升汞-苦味酸混合固定，可行常規(guī)染色、各種特殊染色和酶標(biāo)抗體染色快速脫水（甩片），透明封片常規(guī)監(jiān)測（術(shù)后6h內(nèi)）鋨酸（osmiumtetroxideOSO4）另有火棉及碳膜（更堅(jiān)固）、微篩膜等，各有所長并發(fā)癥及其處理尿潴留協(xié)助排尿或行導(dǎo)尿術(shù)明顯肉眼血尿、尿中血凝塊多者，易尿路梗阻導(dǎo)致嚴(yán)重尿潴留,應(yīng)行經(jīng)皮膀胱穿刺導(dǎo)尿或三腔導(dǎo)尿管導(dǎo)尿及反復(fù)沖洗膀胱，直至腎出血中止合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)銳利刀片切割組織1mm、2mm及4m29并發(fā)癥及其處理動(dòng)靜脈瘺術(shù)后動(dòng)靜脈瘺者少數(shù)腎活檢后無法解釋的高血壓移植腎受者活檢部位聞及血管性雜音確診多普勒超聲檢查或腎動(dòng)脈造影多數(shù)患者1~2年內(nèi)自發(fā)緩解嚴(yán)重者栓塞治療（選擇性腎動(dòng)脈造影時(shí)采用）并發(fā)癥及其處理動(dòng)靜脈瘺30并發(fā)癥及其處理腎周疼痛輕度鈍痛，長時(shí)間、劇烈疼痛系血腫擴(kuò)大和/或尿路梗阻術(shù)后劇烈疼痛者，或無腎周痛但雙下肢內(nèi)側(cè)疼痛、或腹痛，且大量出汗者，嚴(yán)密觀察血壓、心率及時(shí)測血細(xì)胞比積及血紅蛋白濃度，及時(shí)處理嚴(yán)重出血者并發(fā)癥及其處理腎周疼痛31腎活檢標(biāo)本的初步處理

腎活檢標(biāo)本的初步處理32準(zhǔn)備工作生理鹽水浸透紗布（潮濕擰不出水）紗布及編號(hào)的膠布置培養(yǎng)皿備用清潔5ml小瓶，加光鏡固定液3ml（FAA固定液：福爾馬林10ml，冰醋酸5ml，95%乙醇85ml混勻），蓋塞緊后備用準(zhǔn)備工作生理鹽水浸透紗布（潮濕擰不出水）33準(zhǔn)備工作清潔5ml小瓶內(nèi)加冷電鏡固定液3ml置冰瓶（2.5%戊二醛10ml，雙蒸餾水40ml，混勻再加pH7.4PBS50ml，置冰箱內(nèi)）解剖顯微鏡、冰瓶一個(gè)，眼科平鑷兩把，直尺一把，雙面刀一片，蠟板一塊光鏡固定液小瓶常溫備用、電鏡固定液小瓶及培養(yǎng)皿均在腎穿刺術(shù)前數(shù)小時(shí)準(zhǔn)備，置冰瓶內(nèi)準(zhǔn)備工作清潔5ml小瓶內(nèi)加冷電鏡固定液3ml置冰瓶（2.5%34取材判斷皮質(zhì)組織皮髓交界組織皮質(zhì)-髓質(zhì)-皮質(zhì)組織僅取得髓質(zhì)組織則為取材不成功取材判斷皮質(zhì)組織35取材判斷判斷已取組織：腎組織，肌肉、脂肪、結(jié)締組織等用解剖顯微鏡或放大鏡判斷腎組織部位（皮質(zhì)和髓質(zhì)，有無腎小球），及時(shí)與術(shù)者聯(lián)系腎皮質(zhì)色淡，見分布不規(guī)則，朦朧的紅色小點(diǎn)（腎小球）。隨經(jīng)驗(yàn)積累，可肉眼判定立即置腎組織于蠟板上，迅速測量其長度（cm），記錄、分割，迅速固定取標(biāo)本部位、量重要。如無腎小球或皮質(zhì)<1cm，考慮再次穿刺取材判斷判斷已取組織：腎組織，肌肉、脂肪、結(jié)締組織等36標(biāo)本分切法取組織長1.5cm~2.0cm最佳（1次）小鑷子將組織輕置蠟板上，鏡下觀察、量長度銳利刀片切割組織1mm、2mm及4mm數(shù)段先供電鏡標(biāo)本，要求皮質(zhì)1mm（腎小球1個(gè)）其次免疫病理，需組織約2mm（腎小球3~5個(gè)）余組織供光鏡（腎小球>10個(gè)）標(biāo)本分切法取組織長1.5cm~2.0cm最佳（1次）37標(biāo)本的處理免疫熒光及免疫酶標(biāo)分切后的組織迅速置預(yù)冷的培養(yǎng)皿內(nèi)的濕紗布中置冰瓶即送至恒溫冷凍切片機(jī)內(nèi)（<-30℃）進(jìn)行包埋、切片如不能即切片，標(biāo)本必須置-40℃~-70℃冰箱保存（保持抗原活性，防止抗原移位或流失），但放置時(shí)間不宜>2d標(biāo)本的處理免疫熒光及免疫酶標(biāo)38標(biāo)本的處理光鏡分切后的組織平放蠟板上（勿扭曲）小鑷子沾少許光鏡固定液于組織表面，約30″組織稍硬后，再將整條組織放入固定液內(nèi)（這樣固定的組織平整、不易彎曲，便于切出完整的切片）標(biāo)本的處理光鏡39標(biāo)本的處理電鏡將分切后的腎組織即浸3.75%的冷戊二醛固定液中，置冰瓶內(nèi)送至電鏡室標(biāo)本的處理電鏡40注意事項(xiàng)短時(shí)完成觀察和分切標(biāo)本，注意保持腎組織濕潤，切勿使其干涸解剖顯微鏡光源不宜太強(qiáng)，否則觀察組織易干涸，不易看清腎小球免疫熒光用的腎組織必須避免接觸固定液，尤其含酒精固定液（避免影響冰凍切片結(jié)果）；電鏡和光鏡固定液不得互相混淆動(dòng)作輕柔夾取未固定組織，勿牽扯組織，避免人為因素造成組織細(xì)胞變形注意事項(xiàng)短時(shí)完成觀察和分切標(biāo)本，注意保持腎組織濕潤，切勿使41腎活檢標(biāo)本光鏡檢查的制備技術(shù)

腎活檢標(biāo)本光鏡檢查的制備技術(shù)42組織固定固定液一般10％的中性福爾馬林溶液升汞-苦味酸混合固定，可行常規(guī)染色、各種特殊染色和酶標(biāo)抗體染色固定要求取得標(biāo)本后，即平鋪在小蠟板上，迅速以鋒利的刀片將組織按規(guī)定分配，立即固定液固定。如用戊二醛固定，固定時(shí)間最好不超過2h；多聚甲醛固定時(shí)間稍長無妨組織固定固定液43氧化汞0.視操作者及單位經(jīng)驗(yàn)確定是否選用半自動(dòng)穿刺槍清潔5ml小瓶，加光鏡固定液3ml（FAA固定液：福爾馬林10ml，冰醋酸5ml，95%乙醇85ml混勻），蓋塞緊后備用10×目鏡中加25格測微器，在40×高倍鏡下，參照血球計(jì)數(shù)板算得每平方毫米內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)注意防護(hù)、避免皮膚破損經(jīng)濟(jì)、易得、不受條件限制，固定效果接近戊二醛合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)預(yù)溫蒸餾水23ml電鏡和光鏡固定液不得互相混淆脫水后的標(biāo)本，移入包埋劑與純丙酮（1:1）>30′再移入2:1丙酮中3h→純包埋劑3h行光鏡、免疫病理和電鏡檢查蒸餾水100ml用超薄切片機(jī)將修好的包埋塊切成0.5′內(nèi)固定（保持生活狀態(tài)）自體腎活檢者施壓穿刺點(diǎn)1~3′05mol/LTris-Hcl（pH7.75%的冷戊二醛），將腎組織迅速置蠟板上固定液中，鋒利刀片切成1mm3小塊，移入小瓶中，確保組織塊全部浸沒在固定液中，加蓋，4℃固定75%冷戊二醛作預(yù)固定酒精脫水，二甲苯透明，封片移植腎活檢者壓迫穿刺點(diǎn)30′鋨酸（osmiumtetroxideOSO4）水洗后1％鹽酸分化（過一下）組織固定固定液配制1.脫水處理75%酒精：10′×2次90%伊紅酒精：10′95%酒精：10′優(yōu)質(zhì)無水乙醇：10′×2次2.透明用擦鏡紙將組織包好后，置氯仿10′×2次氧化汞44組織固定固定液配制3.浸蠟蠟缸130′蠟缸260′4.包埋5.切片普通切片，厚度1~2mm，烤片溫度60℃，10′銀染切片，厚度同普通切片，烤片溫度90℃，>40′組織固定固定液配制45HE染色切片常規(guī)脫蠟入水蘇木素染細(xì)胞核1~2′水洗后1％鹽酸分化（過一下）流水沖洗，鏡下觀察細(xì)胞核呈蘭色，其余組織呈灰色置伊紅染液20′左右如基底膜偏紅可在75％酒精缸中過一下酒精脫水，二甲苯透明，封片HE染色是觀察組織病變與否的最基本染色HE染色切片常規(guī)脫蠟入水HE染色是觀察組織病變與否的最基46蘇木素染液配制將蘇木素溶于酒精，傾入明礬液中，混合后蒸沸，加一氧化汞1.0g，玻棒攪勻，當(dāng)溶液呈深紫色時(shí)，即移入冷水中，促使冷卻，靜置過夜，過濾封閉保存，用前若加5％醋酸則染色更佳。一般新鮮配制時(shí)染2~5′蘇木素0.9g氧化汞0.5~1.0g純酒精10mlHAC12~13ml硫酸鋁鉀銨（鉀明礬）20g甘油10ml/100ml蒸餾水200ml蘇木素染液配制47伊紅酒精配制伊紅溶解后，用滴管滴入醋酸使呈糊狀，加數(shù)毫升蒸餾水即可，過濾，將濾出的沉渣在烤箱中烤干，溶于95％乙醇200ml中，備用伊紅（曙紅Y）1.0g蒸餾水10ml伊紅酒精配制48PAS染色切片常規(guī)脫蠟入水1％過碘酸氧化15′水洗后，過蒸餾水置Schiff試劑染5~10′流水沖洗>10′（觀察組織由淡紅色轉(zhuǎn)為玫瑰紅色）蘇木素淡染30″~2′水洗蘭化（必要時(shí)分化）酒精脫水，二甲苯透明，封片PAS染色將腎小球基底膜、腎小管基底膜以及系膜基質(zhì)染成紫紅色PAS染色切片常規(guī)脫蠟入水PAS染色將腎小球基底膜、腎小管49Schiff液配制蒸餾水煮沸冷卻至80℃，溶入堿性品紅，冷卻后過濾，至50℃時(shí)加鹽酸，25℃時(shí)再加偏重亞硫酸鈉，暗中貯放過夜，加活性碳，搖1′后過濾，液體透明，4℃暗瓶備用堿性品紅1gN鹽酸20ml偏重亞硫酸鈉（亞硫酸鹽）1g活性碳2g蒸餾水200mlSchiff液配制50PAS反應(yīng)陽性物質(zhì)物質(zhì)種類舉例物質(zhì)染色結(jié)果多糖糖原強(qiáng)陽性糖蛋白膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、血清白蛋白、球蛋白強(qiáng)陽性基底膜腎小球基底膜、腎小管基底膜、包曼囊壁中等強(qiáng)度淀粉樣物質(zhì)淀粉樣物質(zhì)弱陽性各種色素脂褐素中等強(qiáng)度軟骨

軟骨強(qiáng)陽性霉菌曲菌強(qiáng)陽性PAS反應(yīng)陽性物質(zhì)物質(zhì)種類舉例物質(zhì)染色結(jié)果多糖糖原強(qiáng)陽性糖蛋51Masson三色染色切片常規(guī)脫蠟入水天青石蘭染細(xì)胞核10′，水洗蘭化1％醋酸水溶液1′Masson紅染液10′左右1％醋酸水溶液1′0.5％亮綠，光鏡下控制，腎小球基底膜變綠快速脫水（甩片），透明封片Masson三色染色將細(xì)胞核染成黑色，胞漿及膠原纖維染成藍(lán)綠色，蛋白、免疫復(fù)合物染成桔紅色Masson三色染色切片常規(guī)脫蠟入水Masson三色染色52Masson紅染液配制變色酸2R（Chicmolocps2R）0.6g亮綠SF0.3g蒸餾水100ml磷鎢酸0.8g冰醋酸1.0mlMasson紅染液配制53Masson三色染色反應(yīng)陽性物質(zhì)物質(zhì)種類染色結(jié)果各種基底膜：腎小球基底膜、包曼囊壁和腎小管基底膜強(qiáng)陽性：藍(lán)綠色系膜基質(zhì)強(qiáng)陽性：藍(lán)綠色免疫復(fù)合物紅色淀粉樣物質(zhì)淡染的藍(lán)綠色膠原及纖維組織藍(lán)綠色Masson三色染色反應(yīng)陽性物質(zhì)物質(zhì)種類染色結(jié)果各種基底膜：54PAM染色切片常規(guī)脫蠟入水脫汞：30％含碘（3％）酒精5′脫碘：5％硫代硫酸鈉5′蒸餾水沖洗7~8次六胺銀染色，75℃，30~45′，鏡下觀察蒸餾水沖洗3％硫代硫酸鈉2~5′清水沖洗1％醋酸中過一下混合紅1h1％醋酸水洗1％淡綠，鏡下控制快速脫水（甩片），透明封片PAM染色切片常規(guī)脫蠟入水55六胺銀液配制：用時(shí)現(xiàn)配預(yù)溫蒸餾水23ml5%硼砂4.5ml4%硼酸0.2~0.4ml15%六次甲基四胺6ml10%硝酸銀0.7~0.75ml混合紅液配制：Masson染液中加少許1%酸性品紅，比例需染片后定六胺銀液配制：用時(shí)現(xiàn)配56PASM染色反應(yīng)陽性物質(zhì)物質(zhì)種類染色結(jié)果各種基底膜：腎小球基底膜、包曼囊壁和腎小管基底膜強(qiáng)陽性：黑色系膜基質(zhì)強(qiáng)陽性：黑色免疫復(fù)合物紅色淀粉樣物質(zhì)不嗜銀PASM染色反應(yīng)陽性物質(zhì)物質(zhì)種類染色結(jié)果各種基底膜：腎小球基57MSB染色切片脫蠟入水用蘇木素染細(xì)胞核水沖洗分化核（試劑：分化液中含0.25%鹽酸，70%酒精）水沖洗過95%酒精，然后0.5%馬休黃染2′，染液含：0.5%馬休黃（martiusyellow），95%酒精，2%磷鎢酸蒸餾水洗，然后1%麗春紅6R（brilliantcrystalscarlet）染10′（試劑內(nèi)含：1%麗春紅6R，2.5%醋酸）蒸餾水沖洗，再1%磷鎢酸作固定分化紅色染料5′0.5%苯胺蘭（solubleblue）染10′（試劑含：0.5%苯胺蘭，1%醋酸）1%醋酸洗，吸干，純酒精脫水，二甲苯透明，封片細(xì)胞核呈黑色；紅細(xì)胞呈黃色；蛋白呈紅色；結(jié)締組織呈蘭色MSB染色切片脫蠟入水細(xì)胞核呈黑色；紅細(xì)胞呈黃色；蛋白呈58高錳酸鉀-堿性剛果紅染色切片脫蠟入水高錳酸鉀-硫酸混合液處理3′，水洗，試劑含：5%高錳酸鉀0.3%硫酸，用時(shí)現(xiàn)配，等量混合5%草酸3′，水洗蘇木素染核2′，水洗，蘭化堿性剛果紅液10~20′（試劑含：1%NaOH0.3ml，80%酒精氯化鈉剛果紅飽和溶液30ml）快速純酒精脫水，透明，封片注意：切片厚度5m高錳酸鉀-堿性剛果紅染色切片脫蠟入水59腎活檢標(biāo)本免疫化學(xué)及免疫熒光染色制備技術(shù)

腎活檢標(biāo)本免疫化學(xué)及免疫熒光染色制備技術(shù)60免疫化學(xué)染色試劑PBS：0.01mol/L（pH7.4用于稀釋抗體，沖洗切片）A液0.2mol/LNa2HPO4：Na2HPO412H2O35.82g/500mlDW（蒸餾水）B液0.2mol/LNaH2PO4.Na2HPO412H2O15.6g/500mlDWA液40.5ml，B液9.5ml，加8.8gNaCl，DW稀釋至1000ml免疫化學(xué)染色試劑PBS：0.01mol/L（pH7.61免疫化學(xué)染色試劑PBS緩沖液0.15mol/L（pH7.2）Na2HPO4·12H2O96.695gKH2PO47.145gNaCl10.625gDW溶解至5000ml免疫化學(xué)染色試劑PBS緩沖液0.15mol/L（pH7.62免疫化學(xué)染色試劑Tris-Hcl緩沖液0.05mol/LpH7.60.2mol/LTris250ml＋

0.1mol/LHcl389ml，再加DW至1000ml三羥甲基氨基甲烷（Tris）0.2mol/L：24.3g＋DW液至1000mlHcl0.1mol/L：濃Hcl8.8ml＋DW至1000ml免疫化學(xué)染色試劑Tris-Hcl緩沖液0.05mol/L63免疫化學(xué)染色試劑DAB-H2O2顯色液DAB3mg＋0.05mol/LTris-Hcl（pH7.6）緩沖液5ml＋8ml3%H2O2，充分混勻，用前配制免疫化學(xué)染色試劑DAB-H2O2顯色液64免疫化學(xué)染色試劑蘇木素染液蘇木素1g無水酒精10ml鉀明礬（硫酸鋁鉀）15g蒸餾水200ml氧化汞0.5g冰醋酸10ml甘油10ml/500ml先溶解明礬，再將蘇木素溶于酒精傾入明礬液，混勻后煮沸，加氧化汞0.5g，玻棒攪至深紫色即移入冷水，靜置過夜，過濾＋甘油密封保存，用時(shí)加冰醋酸免疫化學(xué)染色試劑蘇木素染液65金黃色70~9010×目鏡中加25格測微器，在40×高倍鏡下，參照血球計(jì)數(shù)板算得每平方毫米內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)將注射器造成負(fù)壓的同時(shí)先進(jìn)針，如無出血邊退出注射針，邊注射局麻藥冰醋酸10ml明顯肉眼血尿、尿中血凝塊多者，易尿路梗阻導(dǎo)致嚴(yán)重尿潴留,應(yīng)行經(jīng)皮膀胱穿刺導(dǎo)尿或三腔導(dǎo)尿管導(dǎo)尿及反復(fù)沖洗膀胱，直至腎出血中止多用戊二醛作前（預(yù)）固定，鋨酸后固定不影響細(xì)胞滲透壓，故對(duì)緩沖液滲透壓要求高加特異性抗體（一抗）室溫孵育2h，PBS沖洗禁止劇烈運(yùn)動(dòng)或重體力勞動(dòng)（術(shù)后3周內(nèi)）皮內(nèi)及沿進(jìn)針途徑皮下局麻磷鎢酸0.腎活檢標(biāo)本的初步處理用手大魚際部（或手指）在體表進(jìn)針部位施壓,平車送患者回病房分子較大，滲透力弱，組織塊若>1mm3，固定效果差，引起固定不均勻5%苯胺蘭，1%醋酸）置Schiff試劑染5~10′PASM染色反應(yīng)陽性物質(zhì)0g，玻棒攪勻，當(dāng)溶液呈深紫色時(shí)，即移入冷水中，促使冷卻，靜置過夜，過濾封閉保存，用前若加5％醋酸則染色更佳。內(nèi)外膜完整，基本平行，可見核孔混合紅液配制：Masson染液中加少許1%酸性品紅，比例需染片后定分切后的組織迅速置預(yù)冷的培養(yǎng)皿內(nèi)的濕紗布中腎組織冰凍切片免疫熒光直接法染色腎組織冰凍切片吹干加適當(dāng)稀釋度抗體-FITC（IgG、IgA、IgM、C3、C4、Clq……），置濕盒避光室溫40′取出后流水沖洗，吹干50％緩沖甘油（0.5mol/L碳酸鹽緩沖液pH9.0~9.5）封片熒光顯微鏡下觀察金黃色70~90腎組織冰凍切片免疫66腎組織免疫酶標(biāo)染色石蠟切片脫蠟、入水0.05％胰蛋白酶微波消化或高溫高壓修復(fù)抗原10％小牛血清封閉加特異性抗體（一抗）室溫孵育2h，PBS沖洗加生物素（biotin）標(biāo)記的抗一抗抗體，室溫40′，PBS沖洗加HRP-鏈霉素卵白素復(fù)合物（streptoavidin），室溫40′,PBS沖洗?；?~6步用Envision復(fù)合物代替，室溫40′，PBS沖洗DAB-H2O2顯色，鏡下觀察，至現(xiàn)棕色陽性結(jié)果，即水洗蘇木素復(fù)染，水洗，吹干樹膠封片（1/3樹膠+2/3二甲苯）鏡下觀察腎組織免疫酶標(biāo)染色石蠟切片脫蠟、入水67結(jié)果判斷腎小球觀察并計(jì)錄切片中所有腎小球中陽性細(xì)胞總數(shù)，再以此總數(shù)除以每份切片中腎小球個(gè)數(shù)，得出每個(gè)腎小球內(nèi)陽性細(xì)胞相對(duì)平均值，分別記錄球內(nèi)陽性細(xì)胞最高、最低值腎間質(zhì)10×目鏡中加25格測微器，在40×高倍鏡下，參照血球計(jì)數(shù)板算得每平方毫米內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)腎小管分別計(jì)數(shù)皮、髓質(zhì)各50個(gè)腎小管，求其百分?jǐn)?shù)結(jié)果判斷腎小球68腎活檢標(biāo)本電子顯微鏡超薄切片制備技術(shù)

腎活檢標(biāo)本電子顯微鏡超薄切片制備技術(shù)69制備技術(shù)取材固定脫水浸透包埋切片染色……制備技術(shù)取材70取材快爭取在穿刺組織取出后0.5′內(nèi)固定（保持生活狀態(tài)）小組織塊大小<1mm3（固定液對(duì)組織穿透力弱）準(zhǔn)合格的電鏡標(biāo)本應(yīng)有≥1個(gè)腎小球（注意取材準(zhǔn)確性）取材快71取材低溫操作避免組織自溶（停止血供組織和細(xì)胞內(nèi)各種酶活力變化）需在0~4℃操作（夏季將組織放冰塊上），所用器械應(yīng)先預(yù)冷避免拉傷牽拉和擠壓組織直接影響觀察效果（選鋒利器械取材），操作時(shí)勿牽拉或擠壓組織取材低溫操作72取材步驟將蠟板置冰塊上，滴上冷（4℃）的電鏡固定液（3.75%的冷戊二醛），將腎組織迅速置蠟板上固定液中，鋒利刀片切成1mm3小塊，移入小瓶中，確保組織塊全部浸沒在固定液中，加蓋，4℃固定取材步驟73固定固定方式（物理和化學(xué)固定）生物組織和細(xì)胞的固定多選化學(xué)方法一定的化學(xué)試劑和細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)發(fā)生化學(xué)結(jié)合形成交聯(lián)，穩(wěn)定蛋白質(zhì)，保存脂肪、糖類、藉此來固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，盡可能保存細(xì)胞活體狀態(tài)時(shí)超微結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)固定固定方式（物理和化學(xué)固定）74固定固定劑的選擇理想的固定劑應(yīng)具備：能迅速、均勻地滲入到組織內(nèi)部；較好的穩(wěn)定各種結(jié)構(gòu)成分；保存一定的酶活力；不使細(xì)胞收縮或膨脹；無人工假象，保證電鏡圖象真實(shí)性固定劑的pH值，滲透壓及電解質(zhì)也與其固定效果有直接的關(guān)系固定固定劑的選擇75固定常用固定劑戊二醛（glutaraldehydeC5H8O2）組織結(jié)構(gòu)細(xì)膩，成份喪失少。其結(jié)構(gòu)式為O-CH-CH2-CH2-CH2-CH-O，一般配成3.75%的溶液（pH7.2~7.4）置4℃冰箱中備用，標(biāo)本固定時(shí)間4℃2h主要優(yōu)點(diǎn)組織穿透力較強(qiáng)、較快與細(xì)胞親和力強(qiáng)，對(duì)糖原、核蛋白，尤其微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)有較好的固定作用能保存某些酶活性，適于行細(xì)胞化學(xué)研究在其冷溶液中組織塊可保存數(shù)周至數(shù)月，微細(xì)結(jié)構(gòu)無改變?nèi)秉c(diǎn)無“電子染色”作用，單獨(dú)固定的標(biāo)本反差很弱對(duì)脂質(zhì)作用很差，脫水后大部分脂質(zhì)被抽取不影響細(xì)胞滲透壓，故對(duì)緩沖液滲透壓要求高固定常用固定劑76固定常用固定劑鋨酸（osmiumtetroxideOSO4）又稱四氧化鋨。淡黃色結(jié)晶體，水溶液中性，具強(qiáng)揮發(fā)性和毒性。是貴重、優(yōu)良的電鏡標(biāo)本固定劑（后固定）。固定時(shí)間因組織不同而異，一般1~2h/4℃鋨酸主要優(yōu)點(diǎn)強(qiáng)氧化劑，對(duì)氮具很強(qiáng)親和力，幾乎能和所有細(xì)胞成份結(jié)合，保存細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)能與不飽和脂肪酸結(jié)合，形成脂肪-鋨酸復(fù)合物（唯一能固定脂類的固定劑）較好地保存核蛋白密度高，產(chǎn)生良好的電子反差，彌補(bǔ)戊二醛固定的不足對(duì)緩沖液要求不嚴(yán)格固定時(shí)間合適時(shí)，固定組織不變硬、變脆及收縮和膨脹，便于超薄切片固定常用固定劑77固定常用的固定劑鋨酸（osmiumtetroxideOSO4）鋨酸缺點(diǎn)分子較大，滲透力弱，組織塊若>1mm3，固定效果差，引起固定不均勻?qū)μ窃?、核酸及微管固定差，不適行細(xì)胞化學(xué)工作標(biāo)本長時(shí)停留在固定液中組織變脆，造成切片困難揮發(fā)性和毒性大，對(duì)人體有害固定常用的固定劑78固定雙固定法多用戊二醛作前（預(yù)）固定，鋨酸后固定固定液用量一般為標(biāo)本的40倍醛類和鋨酸混合后會(huì)起氧化還原反應(yīng)，形成還原鋨沉淀。因此，標(biāo)本經(jīng)戊二醛作固定后必須磷酸緩沖液充分浸泡清洗固定雙固定法79固定其他固定液4%多聚甲醛經(jīng)濟(jì)、易得、不受條件限制，固定效果接近戊二醛高錳酸鉀磷脂類固定效好，適于保存細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)常規(guī)腎穿組織一般不采這兩種固定液固定其他固定液80固定的步驟常規(guī)用3.75%冷戊二醛作預(yù)固定4℃固定2h或過夜0.1mol/L的磷酸緩沖液充分清洗后1%鋨酸后固定一般4℃固定1.5~2h固定的步驟常規(guī)用3.75%冷戊二醛作預(yù)固定81脫水一般用梯度濃度的乙醇或丙酮脫水脫水液量與組織塊比>20:1倍，室溫操作脫水后包埋前可加入環(huán)氧丙烷（propyleneoxide）作中間溶劑（便于包埋劑滲透）可在70%乙醇脫水過程中加醋酸鈾行組織塊染（提高樣品反差）脫水一般用梯度濃度的乙醇或丙酮脫水82脫水丙酮脫水，由低濃度始，逐漸增加濃度30%、50%、70%、90%、100%逐漸遞增，每級(jí)10~15′純丙酮脫水45′（每15′換液1次）脫水應(yīng)充分，否則包埋劑浸透不全、聚合不好等，影響切片質(zhì)量脫水丙酮脫水，由低濃度始，逐漸增加濃度83浸透、包埋及聚合理想的包埋劑粘度較低，易滲入組織，與組織不起化學(xué)反應(yīng)，能溶于脫水劑聚合均勻、充分，不產(chǎn)生體積收縮軟、硬度適中，易切片透明度好，不產(chǎn)生前景反應(yīng)材料來源豐富，操作簡便多用環(huán)氧樹脂Epon812浸透、包埋及聚合理想的包埋劑84浸透、包埋及聚合配制包埋劑注意事項(xiàng)配制成分準(zhǔn)確無誤，尤其DMP-30攪拌充分，依次按時(shí)加入；需緩慢加入DMP-30，至少攪拌10′使其充分混合加硬化劑時(shí)勿加溫，以免提早聚合操作時(shí)注意防潮（相對(duì)濕度<40%），在密閉操作箱內(nèi)進(jìn)行，避免包埋介質(zhì)混濁，聚合不勻，硬度和彈性不當(dāng)?shù)冉?、包埋及聚合配制包埋劑注意事?xiàng)85浸透、包埋及聚合浸泡、包埋、聚合浸泡脫水后的標(biāo)本，移入包埋劑與純丙酮（1:1）>30′再移入2:1丙酮中3h→純包埋劑3h包埋取藥用透明膠囊（1號(hào)或2號(hào)、內(nèi)放標(biāo)本號(hào)），烤干，注入包埋劑，置樣品于膠囊中（樣品逐漸下沉膠囊底部），移入37℃烤箱（12~24h）→45℃12h→60℃12~24h聚合聚合好的膠囊微黃（棕）色、透明、均勻、無氣泡；組織塊膠囊底中心浸透、包埋及聚合浸泡、包埋、聚合86修塊定位修塊樣品夾固定包埋塊，解剖顯微鏡下修去頂部及周圍包埋劑，暴露組織，組織塊修成上下邊緣平行（梯形、長方形或正方形等）四面錐體組織塊表面平整，大小約1mm2，切去一角留作記號(hào)，以便定位修塊定位修塊87修塊定位定位電鏡僅能觀察某（幾）個(gè)細(xì)胞形態(tài)及內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)，超薄切片亦只能切0.04~0.09mm2大小，故定位重要腎穿刺組織定位如定不到腎小球則影響診斷修塊定位定位88修塊定位步驟用超薄切片機(jī)將修好的包埋塊切成0.5~1mm的薄切片甲苯胺蘭染色、光鏡觀察選合適的小球及病變部位，修去多余組織（選鋒利刀片修，組織邊要直，角要銳，便于超薄切片）甲苯胺蘭染色：0.5%甲苯胺蘭水溶液染色約1′（可加溫，見水汽停），水洗，鏡下定位修塊定位步驟89超薄切片載網(wǎng)與支持膜載網(wǎng)具透明支持膜的銅網(wǎng)，圓形，直徑多為3mm，網(wǎng)孔50~300目不等，有正方形、圓形、單孔，依試驗(yàn)不同自行選擇多用Formvar（聚乙烯醇縮甲醛）支持膜（機(jī)械強(qiáng)度和透明度好）另有火棉及碳膜（更堅(jiān)固）、微篩膜等，各有所長切片是樣品制備過程中技術(shù)性較強(qiáng)的一環(huán)超薄切片載網(wǎng)與支持膜切片是樣品制備過程中技術(shù)性較強(qiáng)的一環(huán)90超薄切片切片刀玻璃刀厚70-90nm，硬度適宜；用專門的制刀機(jī)制刀（干凈，角度合乎標(biāo)準(zhǔn)，刀口銳利等），玻璃刀的優(yōu)劣直接影響超薄切片質(zhì)量鉆石刀更優(yōu)良，可切出40-90nm的切片，使用壽命長，但價(jià)格昂貴超薄切片切片刀91超薄切片超薄切片機(jī)多種型號(hào)，瑞典LeicaEMUC6型超薄切片機(jī)多用，用途廣（半薄和超薄切片，控制切片厚度50~200nm，依需要自動(dòng)控制，切出厚度均勻的連續(xù)切片帶）超薄切片超薄切片機(jī)92超薄切片超薄切片超薄切片質(zhì)量與玻璃刀、架刀角度、收集槽液面、組織塊硬度、組織固定、脫水、包埋過程及包埋塊修整，切片機(jī)性能和操作者的責(zé)任心等因素有密切關(guān)系操作基本過程：開機(jī)-固定組織塊→架刀→手動(dòng)修塊→注水槽→自動(dòng)連續(xù)切片→收集片→撈片超薄切片厚度50~70nm，切片越薄，分辨率越高，對(duì)比度則越低切片環(huán)境溫度20℃、濕度<60%為佳超薄切片超薄切片93超薄切片超薄切片切片厚度由干涉色估計(jì)，其顏色與厚度的關(guān)系如下干涉色切片厚度（nm）灰色<50銀白色50~70

金黃色70~90紫色>90選灰色和銀白色的切片撈于有膜銅網(wǎng)（或鎳網(wǎng)）（支持膜厚約10~20nm，無結(jié)構(gòu)，耐電子轟擊，不起化學(xué)反應(yīng)）超薄切片超薄切片94染色染色要求理想染色劑能增強(qiáng)反差選擇性地使重金屬常沉淀在一定部位保持微細(xì)結(jié)構(gòu)的完整性不與固定劑發(fā)生不良反應(yīng)室溫和正常大氣情況下，配制簡單，操作方便，染色均勻目前采用的是醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重染色，以達(dá)互補(bǔ)作用染色染色要求目前采用的是醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重染色，以達(dá)互95染色D又稱醋酸雙氧鈾，結(jié)構(gòu)式UO2（CH3COO）2.2H2O，它可和大多數(shù)細(xì)胞成份結(jié)合，易與核糖核酸顆粒反應(yīng)，降低組織類脂提取PH值影響醋酸鈾結(jié)合到生物各種基質(zhì)上的能力，pH>3.5時(shí)，雙氧鈾離子對(duì)DNA的親和力增加染色D96染色檸檬酸鉛密度很大，對(duì)各種細(xì)胞都有親和力，可提高反差鉛鹽與核蛋白和糖原結(jié)合，幾乎浸染所有細(xì)胞成份，提高切片反差暴露空氣易形成不溶性碳酸鉛，染液混濁、切片污染（鈉石灰置操作箱中，吸收CO2避免污染）染色檸檬酸鉛97染色檸檬酸鉛液配制高純度或AR、GR的硝酸鉛1.33g，檸檬酸鈉［Na3（C6H5O7）.2H2O］1.76g，加雙蒸水30ml置50ml量瓶內(nèi)混合，搖1′，間隔再搖，試劑全部溶解呈乳白色再加8ml1NNaOH（NaOH須新鮮配制），搖之使乳白色液清亮再加雙蒸水至總量50ml，必要時(shí)可過濾染色檸檬酸鉛液配制98染色染色步驟取一蠟板，滴飽和醋酸鈾上清（純水或70%乙醇配制均可）切片的銅網(wǎng)面靠在液面，室溫15~30′或更長雙蒸水洗凈鈾液，濾紙吸干再置另一滴檸檬鉛液蠟板，室溫5~15′雙蒸水洗凈，濾干，置干凈培皿，備用染色染色步驟99注意事項(xiàng)要求試劑純度高（AR級(jí)或GB級(jí)）器皿清潔，以免污染鋨酸易揮發(fā)，應(yīng)在通風(fēng)櫥中操作（其蒸汽有劇毒，對(duì)眼、鼻粘膜刺激）注意防護(hù)、避免皮膚破損鉛是重金屬，鈾有放射性DMP-30為劇毒品環(huán)氧樹脂有致癌性應(yīng)在干燥箱中操作，以保持聚合塊干燥（尤其Epon812）注意事項(xiàng)要求試劑純度高（AR級(jí)或GB級(jí)）100判斷電鏡標(biāo)本固定良好的標(biāo)準(zhǔn)部位標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞膜低倍下呈完整清晰的單層結(jié)構(gòu)，高倍下見雙層結(jié)構(gòu)核膜內(nèi)外膜完整，基本平行，可見核孔線粒體飽滿，外膜完整光滑，內(nèi)嵴連續(xù)，內(nèi)、外膜間保持一定距離，沒有腫脹或收縮粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池完整，膜上核糖體可辨，沒有脫落或丟失滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈分枝小管狀或泡狀，膜完整高爾基復(fù)合體扁平囊成堆疊排列，膜完整核內(nèi)含物核仁、核液及染色質(zhì)保存完好，層次清楚可辨糖原顆粒致密，保存良好，沒有丟失細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)呈精細(xì)顆粒狀，分布均勻，未見明顯的空白區(qū)判斷電鏡標(biāo)本固定良好的標(biāo)準(zhǔn)部位標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞膜低倍下呈完整清晰的單101小結(jié)按指南要求安全開展腎活檢確保取材符合要求技術(shù)工作是正確診斷的保證小結(jié)按指南要求安全開展腎活檢102謝謝！謝謝！103適應(yīng)證彌漫性腎實(shí)質(zhì)損害原發(fā)或繼發(fā)性腎小球疾病腎小管間質(zhì)疾病腎血管性疾病遺傳、先天等疾病病因、病變程度、治療和預(yù)后等未解決或不明確者……適應(yīng)證彌漫性腎實(shí)質(zhì)損害104適應(yīng)證腎病綜合征腎炎綜合征急進(jìn)性腎炎綜合征各類持續(xù)性無癥狀尿檢異常（蛋白尿和/或鏡下血尿）非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的急性腎功能減退非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的慢性腎功能減退腎體積未萎縮（B超腎長經(jīng)：男性≥90mm，女性≥85mm）正常結(jié)構(gòu)尚未完全消失適應(yīng)證腎病綜合征105適應(yīng)證移植腎腎活檢各類非外科因素導(dǎo)致的移植腎腎功能減退、腎功能延遲恢復(fù)、疑及存在腎小管壞死、藥物性腎中毒、慢性排斥反應(yīng)及復(fù)發(fā)、新生或帶入的疾病適應(yīng)證移植腎腎活檢106準(zhǔn)備工作生理鹽水浸透紗布（潮濕擰不出水）紗布及編號(hào)的膠布置培養(yǎng)皿備用清潔5ml小瓶，加光鏡固定液3ml（FAA固定液：福爾馬林10ml，冰醋酸5ml，95%乙醇85ml混勻），蓋塞緊后備用準(zhǔn)備工作生理鹽水浸透紗布（潮濕擰不出水）107腎活檢標(biāo)本電子顯微鏡超薄切片制備技術(shù)

腎活檢標(biāo)本電子顯微鏡超薄切片制備技術(shù)108取材快爭取在穿刺組織取出后0.5′內(nèi)固定（保持生活狀態(tài)）小組織塊大小<1mm3（固定液對(duì)組織穿透力弱）準(zhǔn)合格的電鏡標(biāo)本應(yīng)有≥1個(gè)腎小球（注意取材準(zhǔn)確性）取材快109固定雙固定法多用戊二醛作前（預(yù)）固定，鋨酸后固定固定液用量一般為標(biāo)本的40倍醛類和鋨酸混合后會(huì)起氧化還原反應(yīng)，形成還原鋨沉淀。因此，標(biāo)本經(jīng)戊二醛作固定后必須磷酸緩沖液充分浸泡清洗固定雙固定法110染色染色要求理想染色劑能增強(qiáng)反差選擇性地使重金屬常沉淀在一定部位保持微細(xì)結(jié)構(gòu)的完整性不與固定劑發(fā)生不良反應(yīng)室溫和正常大氣情況下，配制簡單，操作方便，染色均勻目前采用的是醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重染色，以達(dá)互補(bǔ)作用染色染色要求目前采用的是醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重染色，以達(dá)互111經(jīng)皮腎活檢術(shù)最直接的診斷方法自體腎或移植腎病理診斷了解疾病發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后臨床研究的重要途徑經(jīng)皮腎活檢術(shù)最直接的診斷方法112腎活檢方法的沿革開放式腎活檢（openrenalbiopsy）直視下負(fù)壓式腎活檢經(jīng)皮腎活檢（percutaneousrenalbiopsy）經(jīng)典經(jīng)皮腎活檢為負(fù)壓吸引法（肝穿活檢術(shù)基礎(chǔ)發(fā)展）半自動(dòng)穿刺槍……腎活檢方法的沿革開放式腎活檢（openrenalbiop113適應(yīng)證彌漫性腎實(shí)質(zhì)損害原發(fā)或繼發(fā)性腎小球疾病腎小管間質(zhì)疾病腎血管性疾病遺傳、先天等疾病病因、病變程度、治療和預(yù)后等未解決或不明確者……適應(yīng)證彌漫性腎實(shí)質(zhì)損害114適應(yīng)證腎病綜合征腎炎綜合征急進(jìn)性腎炎綜合征各類持續(xù)性無癥狀尿檢異常（蛋白尿和/或鏡下血尿）非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的急性腎功能減退非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的慢性腎功能減退腎體積未萎縮（B超腎長經(jīng)：男性≥90mm，女性≥85mm）正常結(jié)構(gòu)尚未完全消失適應(yīng)證腎病綜合征115適應(yīng)證移植腎腎活檢各類非外科因素導(dǎo)致的移植腎腎功能減退、腎功能延遲恢復(fù)、疑及存在腎小管壞死、藥物性腎中毒、慢性排斥反應(yīng)及復(fù)發(fā)、新生或帶入的疾病適應(yīng)證移植腎腎活檢116禁忌證出血傾向和/或凝血功能障礙者活動(dòng)性感染性疾病急性腎盂腎炎、腎膿腫、腎結(jié)核等多囊腎孤立腎較大的腎腫瘤腎萎縮的慢性腎功能不全禁忌證出血傾向和/或凝血功能障礙者117禁忌證大量腹水未能控制的高血壓或低血壓未糾正的嚴(yán)重貧血（Hb≤80g/L）精神疾病或不能配合者禁忌證大量腹水118取組織不夠或空穿時(shí)可重復(fù)穿刺鉛是重金屬，鈾有放射性腎小球基底膜、腎小管基底膜、包曼囊壁4PBS50ml，置冰箱內(nèi)）亮綠SF0.蘇木素0.將分切后的腎組織即浸3.蛋白、免疫復(fù)合物染成桔紅色置Schiff試劑染5~10′10×目鏡中加25格測微器，在40×高倍鏡下，參照血球計(jì)數(shù)板算得每平方毫米內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞親和力強(qiáng)，對(duì)糖原、核蛋白，尤其微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)有較好的固定作用3%硫酸，用時(shí)現(xiàn)配，等量混合皮膚消毒液：1%普魯卡因或2%利多卡因局麻非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的慢性腎功能減退解剖顯微鏡、冰瓶一個(gè)，眼科平鑷兩把，直尺一把，雙面刀一片，蠟板一塊多聚甲醛固定時(shí)間稍長無妨流水沖洗，鏡下觀察細(xì)胞核呈蘭色，其余組織呈灰色純丙酮脫水45′（每15′換液1次）用手大魚際部（或手指）在體表進(jìn)針部位施壓,平車送患者回病房蒸餾水100ml操作步驟患者準(zhǔn)備消除其顧慮，爭取最佳配合（解釋腎活檢的必要性及安全性，簡要說明操作過程）交待相關(guān)注意事項(xiàng)，必須取得書面同意（告知腎活檢可能引起的各類并發(fā)癥）取組織不夠或空穿時(shí)可重復(fù)穿刺操作步驟患者準(zhǔn)備119操作步驟術(shù)前檢查測血壓>2次高血壓者積極控制血壓仔細(xì)檢查全身皮膚粘膜出血傾向選擇、處理進(jìn)針部位局部皮膚（備皮等）重點(diǎn)常規(guī)檢查血常規(guī)、出血時(shí)間、凝血時(shí)間（試管法）、凝血酶原時(shí)間、血塊收縮時(shí)間及血漿纖維蛋白原濃度操作步驟術(shù)前檢查120操作步驟患者準(zhǔn)備抗凝治療者術(shù)前停藥>3d，復(fù)查凝血指標(biāo)術(shù)前行雙腎B超了解腎臟圖象、確定穿刺部位受檢者術(shù)前12~24h內(nèi)排便劇烈性咳嗽、腹痛及腹瀉，推遲腎活檢操作步驟患者準(zhǔn)備121操作步驟患者準(zhǔn)備女性應(yīng)避開經(jīng)期（非急診腎活檢）腎衰者術(shù)前加強(qiáng)透析（CBP）控制血壓在理想范圍焦慮及不合作者酌情用鎮(zhèn)靜劑可能發(fā)生出血并發(fā)癥者術(shù)前維生素K及止血藥操作步驟患者準(zhǔn)備122操作步驟器械及藥品準(zhǔn)備穿刺針：國內(nèi)較多中心采用負(fù)壓吸引法，18號(hào)負(fù)壓穿刺針（Menghini穿刺針）負(fù)壓吸引裝置：20ml注射器聯(lián)接管、針卡深度固定卡長度測量尺等依B超測得皮腎距離選擇穿刺針長度操作步驟器械及藥品準(zhǔn)備依B超測得皮腎距離選擇穿刺針長度123操作步驟器械及藥品準(zhǔn)備穿刺針：其他活檢針有Framklin-Vim-silverance針或Tru-cut針。視操作者及單位經(jīng)驗(yàn)確定是否選用半自動(dòng)穿刺槍Tru-Cut腎活檢穿刺針操作步驟器械及藥品準(zhǔn)備Tru-Cut腎活檢穿刺針124操作步驟選擇B超探頭及穿刺針固定器可選矩陣或扇形探頭，穿刺針與固定器相匹配（固定器能將進(jìn)針途徑調(diào)整至合適的角度）術(shù)前消毒探頭及固定器（因B超定位及深度測定準(zhǔn)確，現(xiàn)無需探測針預(yù)定位）皮膚消毒液：1%普魯卡因或2%利多卡因局麻高溫高壓消毒鋪巾及敷料、一次性注射器（無需皮膚切口及皮膚縫合）穿刺針不得復(fù)用操作步驟選擇B超探頭及穿刺針固定器125操作步驟體位受檢者取俯臥位，腹部肋緣下（相當(dāng)于腎區(qū)位置）墊以5~10cm棉枕減少腎臟移動(dòng)。雙上肢置于兩側(cè)，頭向一側(cè)偏斜。平靜呼吸皮膚消毒1%碘伏消毒液（>2遍），消毒范圍上至肩胛下線，下至髂后上棘連線，兩側(cè)至腋后線鋪巾操作步驟體位126操作步驟穿刺點(diǎn)定位定位技術(shù)體表標(biāo)記經(jīng)驗(yàn)定位靜脈腎盂造影X線定位早期B超術(shù)前定位實(shí)時(shí)B超定位與引導(dǎo)CT定位操作步驟穿刺點(diǎn)定位127操作步驟測定穿刺距離B超固定架長度＋皮腎距離（B超）＋15~20mm（腎臟下移距離）+15mm（欲取組織）如：B超固定架長度＝40mm；皮腎距離＝50mm；腎臟下移距離＝20mm，欲取組織＝15mm，則穿刺距離＝120mm～125mm操作步驟測定穿刺距離128操作步驟局麻皮內(nèi)及沿進(jìn)針途徑皮下局麻將注射器造成負(fù)壓的同時(shí)先進(jìn)針，如無出血邊退出注射針，邊注射局麻藥操作步驟局麻12925%鹽酸，70%酒精）76g，加雙蒸水30ml再加8ml1NNaOH（NaOH須新鮮配制），搖之使乳白色液清亮DAB-H2O2顯色液置50ml量瓶內(nèi)混合，搖1′，間隔再搖，試劑全部溶解呈乳白色用解剖顯微鏡或放大鏡判斷腎組織部位（皮質(zhì)和髓質(zhì)，有無腎小球），及時(shí)與術(shù)者聯(lián)系3%硫酸，用時(shí)現(xiàn)配，等量混合合格的電鏡標(biāo)本應(yīng)有≥1個(gè)腎小球（注意取材準(zhǔn)確性）快速脫水（甩片），透明封片一般用梯度濃度的乙醇或丙酮脫水蒸餾水200mlMasson三色染色將細(xì)胞核染成黑色，胞漿及膠原纖維染成藍(lán)綠色，呈分枝小管狀或泡狀，膜完整蒸餾水200ml自體腎或移植腎病理診斷Masson三色染色1％過碘酸氧化15′急性腎盂腎炎、腎膿腫、腎結(jié)核等冰醋酸1.紗布及編號(hào)的膠布置培養(yǎng)皿備用5%甲苯胺蘭水溶液染色約1′（可加溫，見水汽停），水洗，鏡下定位操作步驟穿刺方法針芯插入針管內(nèi)穿刺針固定器的針槽及在實(shí)時(shí)B超引導(dǎo)下刺至腎包膜表面取出針芯，置入針卡，連接負(fù)壓裝置最佳穿刺（腎下極），囑患者屏氣，助手同步造負(fù)壓，術(shù)者快速進(jìn)針至預(yù)定深度，即刻快速拔出穿刺針（穿刺動(dòng)作以手腕運(yùn)動(dòng)為主，幅度不易過大，過程快捷）用負(fù)壓注射器中的生理鹽水推出腎組織25%鹽酸，70%酒精）操作步驟穿刺方法130操作步驟標(biāo)本長度腎組織長1.0~1.5cm（標(biāo)本過短腎小球數(shù)少，過長則易穿通腎臟，致包膜下血腫和/或肉眼血尿）通常1~2次取到足夠腎組織合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)取組織不夠或空穿時(shí)可重復(fù)穿刺操作步驟標(biāo)本長度131操作步驟送檢按要求分割腎組織及處理，即刻送檢行光鏡、免疫病理和電鏡檢查光鏡10％的中性福爾馬林溶液和/或升汞-苦味酸電鏡3.75%的冷戊二醛免疫熒光低溫生理鹽水紗布特殊要求者用相應(yīng)的固定液操作步驟送檢132操作步驟傷口處理腎穿刺術(shù)后傷口敷以紗布，膠布固定操作步驟傷口處理133注意事項(xiàng)用手大魚際部（或手指）在體表進(jìn)針部位施壓,平車送患者回病房自體腎活檢者施壓穿刺點(diǎn)1~3′移植腎活檢者壓迫穿刺點(diǎn)30′注意事項(xiàng)用手大魚際部（或手指）在體表進(jìn)針部位施壓,平車送患134注意事項(xiàng)小心平移患者上床，囑平臥位，嚴(yán)格腰部制動(dòng)4h（四肢可放松，緩慢小幅度活動(dòng)，嚴(yán)禁翻身及扭轉(zhuǎn)腰部）自體腎及移植腎活檢術(shù)后均需臥床12h（如無高血壓、腎功能不全等高危）因素常規(guī)監(jiān)測（術(shù)后6h內(nèi)）血壓、脈搏、尿色、膚色、出汗情況、腰腹部癥狀及體征注意事項(xiàng)小心平移患者上床，囑平臥位，嚴(yán)格腰部制動(dòng)4h（四肢135注意事項(xiàng)血壓下降或肉眼血尿者應(yīng)反復(fù)查血常規(guī)、血細(xì)胞比積腰腹部疼痛顯著者查B超,觀察有無腎包膜下血腫避免或及時(shí)處理便秘、腹瀉及劇烈咳嗽禁止劇烈運(yùn)動(dòng)或重體力勞動(dòng)（術(shù)后3周內(nèi)）注意事項(xiàng)血壓下降或肉眼血尿者應(yīng)反復(fù)查血常規(guī)、血細(xì)胞比積136并發(fā)癥及其處理腎出血肉眼血尿及腎周血腫嚴(yán)重者需腎切除尿潴留腰痛不適少見并發(fā)癥腎動(dòng)靜脈瘺感染誤傷其它臟器并發(fā)癥及其處理腎出血137并發(fā)癥及其處理血尿術(shù)后鏡下血尿(絕大多數(shù))肉眼血尿2~7％積極止血措施血細(xì)胞壓積↓>6%或Hb<2g/L或血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定，必須補(bǔ)液促尿液排出，保持泌尿道通暢，防止血凝塊堵塞尿道血細(xì)胞壓積及Hb繼續(xù)↓，及時(shí)輸血、選擇性腎動(dòng)脈介入栓塞或外科手術(shù)控制活動(dòng)性大出血并發(fā)癥及其處理血尿138并發(fā)癥及其處理腎周血腫腎活檢后3~5d低熱、腰痛（B超證實(shí)）腎周小血腫臥床休息自行消散（無后遺癥）較大血腫3月內(nèi)吸收嚴(yán)重大血腫處理同嚴(yán)重肉眼血尿者并發(fā)癥及其處理腎周血腫139合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)確診多普勒超聲檢查或腎動(dòng)脈造影常規(guī)監(jiān)測（術(shù)后6h內(nèi)）15mol/L（pH7.0g，玻棒攪勻，當(dāng)溶液呈深紫色時(shí)，即移入冷水中，促使冷卻，靜置過夜，過濾封閉保存，用前若加5％醋酸則染色更佳。焦慮及不合作者酌情用鎮(zhèn)靜劑腎活檢標(biāo)本免疫化學(xué)及免疫熒光染色制備技術(shù)切片厚度由干涉色估計(jì)，其顏色與厚度的關(guān)系如下取得標(biāo)本后，即平鋪在小蠟板上，迅速以鋒利的刀片將組織按規(guī)定分配，立即固定液固定。合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)急性腎盂腎炎、腎膿腫、腎結(jié)核等合格的電鏡標(biāo)本應(yīng)有≥1個(gè)腎小球（注意取材準(zhǔn)確性）受檢者術(shù)前12~24h內(nèi)排便置50ml量瓶內(nèi)混合，搖1′，間隔再搖，試劑全部溶解呈乳白色低倍下呈完整清晰的單層結(jié)構(gòu)，高倍下見雙層結(jié)構(gòu)合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)爭取在穿刺組織取出后0.材料來源豐富，操作簡便非單純腎后（梗阻）因素導(dǎo)致的急性腎功能減退受檢者取俯臥位，腹部肋緣下（相當(dāng)于腎區(qū)位置）墊以5~10cm棉枕減少腎臟移動(dòng)。病因、病變程度、治療和預(yù)后等未解決或不明確者銳利刀片切割組織1mm、2mm及4mm數(shù)段淡黃色結(jié)晶體，水溶液中性，具強(qiáng)揮發(fā)性和毒性。室溫和正常大氣情況下，配制簡單，操作方便，染色均勻技術(shù)工作是正確診斷的保證合格的電鏡標(biāo)本應(yīng)有≥1個(gè)腎小球（注意取材準(zhǔn)確性）蒸餾水200ml各種基底膜：腎小球基底膜、包曼囊壁和腎小管基底膜紗布及編號(hào)的膠布置培養(yǎng)皿備用加HRP-鏈霉素卵白素復(fù)合物（streptoavidin），室溫40′,PBS沖洗?；旌霞t液配制：Masson染液中加少許1%酸性品紅，比例需染片后定5%馬休黃（martiusyellow），95%酒精，2%磷鎢酸2mol/LNaH2PO4.受檢者取俯臥位，腹部肋緣下（相當(dāng)于腎區(qū)位置）墊以5~10cm棉枕減少腎臟移動(dòng)。5%馬休黃（martiusyellow），95%酒精，2%磷鎢酸置Schiff試劑染5~10′將蘇木素溶于酒精，傾入明礬液中，混合后蒸沸，加一氧化汞1.升汞-苦味酸混合固定，可行常規(guī)染色、各種特殊染色和酶標(biāo)抗體染色快速脫水（甩片），透明封片常規(guī)監(jiān)測（術(shù)后6h內(nèi)）鋨酸（osmiumtetroxideOSO4）另有火棉及碳膜（更堅(jiān)固）、微篩膜等，各有所長并發(fā)癥及其處理尿潴留協(xié)助排尿或行導(dǎo)尿術(shù)明顯肉眼血尿、尿中血凝塊多者，易尿路梗阻導(dǎo)致嚴(yán)重尿潴留,應(yīng)行經(jīng)皮膀胱穿刺導(dǎo)尿或三腔導(dǎo)尿管導(dǎo)尿及反復(fù)沖洗膀胱，直至腎出血中止合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)銳利刀片切割組織1mm、2mm及4m140并發(fā)癥及其處理動(dòng)靜脈瘺術(shù)后動(dòng)靜脈瘺者少數(shù)腎活檢后無法解釋的高血壓移植腎受者活檢部位聞及血管性雜音確診多普勒超聲檢查或腎動(dòng)脈造影多數(shù)患者1~2年內(nèi)自發(fā)緩解嚴(yán)重者栓塞治療（選擇性腎動(dòng)脈造影時(shí)采用）并發(fā)癥及其處理動(dòng)靜脈瘺141并發(fā)癥及其處理腎周疼痛輕度鈍痛，長時(shí)間、劇烈疼痛系血腫擴(kuò)大和/或尿路梗阻術(shù)后劇烈疼痛者，或無腎周痛但雙下肢內(nèi)側(cè)疼痛、或腹痛，且大量出汗者，嚴(yán)密觀察血壓、心率及時(shí)測血細(xì)胞比積及血紅蛋白濃度，及時(shí)處理嚴(yán)重出血者并發(fā)癥及其處理腎周疼痛142腎活檢標(biāo)本的初步處理

腎活檢標(biāo)本的初步處理143準(zhǔn)備工作生理鹽水浸透紗布（潮濕擰不出水）紗布及編號(hào)的膠布置培養(yǎng)皿備用清潔5ml小瓶，加光鏡固定液3ml（FAA固定液：福爾馬林10ml，冰醋酸5ml，95%乙醇85ml混勻），蓋塞緊后備用準(zhǔn)備工作生理鹽水浸透紗布（潮濕擰不出水）144準(zhǔn)備工作清潔5ml小瓶內(nèi)加冷電鏡固定液3ml置冰瓶（2.5%戊二醛10ml，雙蒸餾水40ml，混勻再加pH7.4PBS50ml，置冰箱內(nèi)）解剖顯微鏡、冰瓶一個(gè)，眼科平鑷兩把，直尺一把，雙面刀一片，蠟板一塊光鏡固定液小瓶常溫備用、電鏡固定液小瓶及培養(yǎng)皿均在腎穿刺術(shù)前數(shù)小時(shí)準(zhǔn)備，置冰瓶內(nèi)準(zhǔn)備工作清潔5ml小瓶內(nèi)加冷電鏡固定液3ml置冰瓶（2.5%145取材判斷皮質(zhì)組織皮髓交界組織皮質(zhì)-髓質(zhì)-皮質(zhì)組織僅取得髓質(zhì)組織則為取材不成功取材判斷皮質(zhì)組織146取材判斷判斷已取組織：腎組織，肌肉、脂肪、結(jié)締組織等用解剖顯微鏡或放大鏡判斷腎組織部位（皮質(zhì)和髓質(zhì)，有無腎小球），及時(shí)與術(shù)者聯(lián)系腎皮質(zhì)色淡，見分布不規(guī)則，朦朧的紅色小點(diǎn)（腎小球）。隨經(jīng)驗(yàn)積累，可肉眼判定立即置腎組織于蠟板上，迅速測量其長度（cm），記錄、分割，迅速固定取標(biāo)本部位、量重要。如無腎小球或皮質(zhì)<1cm，考慮再次穿刺取材判斷判斷已取組織：腎組織，肌肉、脂肪、結(jié)締組織等147標(biāo)本分切法取組織長1.5cm~2.0cm最佳（1次）小鑷子將組織輕置蠟板上，鏡下觀察、量長度銳利刀片切割組織1mm、2mm及4mm數(shù)段先供電鏡標(biāo)本，要求皮質(zhì)1mm（腎小球1個(gè)）其次免疫病理，需組織約2mm（腎小球3~5個(gè)）余組織供光鏡（腎小球>10個(gè)）標(biāo)本分切法取組織長1.5cm~2.0cm最佳（1次）148標(biāo)本的處理免疫熒光及免疫酶標(biāo)分切后的組織迅速置預(yù)冷的培養(yǎng)皿內(nèi)的濕紗布中置冰瓶即送至恒溫冷凍切片機(jī)內(nèi)（<-30℃）進(jìn)行包埋、切片如不能即切片，標(biāo)本必須置-40℃~-70℃冰箱保存（保持抗原活性，防止抗原移位或流失），但放置時(shí)間不宜>2d標(biāo)本的處理免疫熒光及免疫酶標(biāo)149標(biāo)本的處理光鏡分切后的組織平放蠟板上（勿扭曲）小鑷子沾少許光鏡固定液于組織表面，約30″組織稍硬后，再將整條組織放入固定液內(nèi)（這樣固定的組織平整、不易彎曲，便于切出完整的切片）標(biāo)本的處理光鏡150標(biāo)本的處理電鏡將分切后的腎組織即浸3.75%的冷戊二醛固定液中，置冰瓶內(nèi)送至電鏡室標(biāo)本的處理電鏡151注意事項(xiàng)短時(shí)完成觀察和分切標(biāo)本，注意保持腎組織濕潤，切勿使其干涸解剖顯微鏡光源不宜太強(qiáng)，否則觀察組織易干涸，不易看清腎小球免疫熒光用的腎組織必須避免接觸固定液，尤其含酒精固定液（避免影響冰凍切片結(jié)果）；電鏡和光鏡固定液不得互相混淆動(dòng)作輕柔夾取未固定組織，勿牽扯組織，避免人為因素造成組織細(xì)胞變形注意事項(xiàng)短時(shí)完成觀察和分切標(biāo)本，注意保持腎組織濕潤，切勿使152腎活檢標(biāo)本光鏡檢查的制備技術(shù)

腎活檢標(biāo)本光鏡檢查的制備技術(shù)153組織固定固定液一般10％的中性福爾馬林溶液升汞-苦味酸混合固定，可行常規(guī)染色、各種特殊染色和酶標(biāo)抗體染色固定要求取得標(biāo)本后，即平鋪在小蠟板上，迅速以鋒利的刀片將組織按規(guī)定分配，立即固定液固定。如用戊二醛固定，固定時(shí)間最好不超過2h；多聚甲醛固定時(shí)間稍長無妨組織固定固定液154氧化汞0.視操作者及單位經(jīng)驗(yàn)確定是否選用半自動(dòng)穿刺槍清潔5ml小瓶，加光鏡固定液3ml（FAA固定液：福爾馬林10ml，冰醋酸5ml，95%乙醇85ml混勻），蓋塞緊后備用10×目鏡中加25格測微器，在40×高倍鏡下，參照血球計(jì)數(shù)板算得每平方毫米內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)注意防護(hù)、避免皮膚破損經(jīng)濟(jì)、易得、不受條件限制，固定效果接近戊二醛合格組織應(yīng)包括皮質(zhì)和髓質(zhì)預(yù)溫蒸餾水23ml電鏡和光鏡固定液不得互相混淆脫水后的標(biāo)本，移入包埋劑與純丙酮（1:1）>30′再移入2:1丙酮中3h→純包埋劑3h行光鏡、免疫病理和電鏡檢查蒸餾水100ml用超薄切片機(jī)將修好的包埋塊切成0.5′內(nèi)固定（保持生活狀態(tài)）自體腎活檢者施壓穿刺點(diǎn)1~3′05mol/LTris-Hcl（pH7.75%的冷戊二醛），將腎組織迅速置蠟板上固定液中，鋒利刀片切成1mm3小塊，移入小瓶中，確保組織塊全部浸沒在固定液中，加蓋，4℃固定75%冷戊二醛作預(yù)固定酒精脫水，二甲苯透明，封片移植腎活檢者壓迫穿刺點(diǎn)30′鋨酸（osmiumtetroxideOSO4）水洗后1％鹽酸分化（過一下）組織固定固定液配制1.脫水處理75%酒精：10′×2次