血液系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型制備

Contents一.血栓形成的動(dòng)物模型二.DIC的動(dòng)物模型三.貧血的動(dòng)物模型第一頁，共八十頁。一.血栓形成的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型第二頁，共八十頁。在活體心血管系統(tǒng)內(nèi)血液成分形成固體質(zhì)塊的過程稱為血栓形成

(thrombosis)。第三頁，共八十頁。第四頁，共八十頁。血管的止血功能血液凝固反應(yīng)血小板的作用3．機(jī)體的止、凝血功能第五頁，共八十頁。血管壁的損傷：內(nèi)皮損傷，內(nèi)皮下基質(zhì)(ECM)裸露血流狀態(tài)的改變：血流緩慢或渦流形成血液性質(zhì)的改變：高凝狀態(tài)血栓形成的機(jī)理：第六頁，共八十頁。1.兔體外血栓形成模型造模原理：血流緩慢或有渦流,血小板進(jìn)入邊流,增加黏附于管壁的可能性凝血因子易于在局部堆積和活化，啟動(dòng)凝血過程血液接觸異物能使凝血系統(tǒng)和血小板激活第七頁，共八十頁。造模方法：Rabbitsanesthetizedwithintramuscularinjectionsof5mg/kgxylazine(甲苯噻嗪)and30mg/kgketaminehydrochloride,maintaineddilutedketamine(2mg/ml,IV)atarateof1.53mg/kg/hrMechanicalventilationviaatracheotomyBodytemperaturemonitoredwitharectalprobeandmaintainedat37°Cusingawater-jacketedheatingblanket.Extracorporealcirculation(ECC,4hrs)bycannulatingtheleftcarotidarteryforECCinflowandleftfemoralvein（orrightexternaljugularvein）forECCoutflow第八頁，共八十頁。15cm，1/4inchpolyurethane

catheter

15cm，1/4inch亞安酯catheter

8cm，3/8inch聚亞安酯catheter

頸總動(dòng)脈股靜脈造模方法第九頁，共八十頁。PlateletaggregationusingaChrono-Logopticalaggregometer.Obtain

PRPandPPPbycentrifugation,100%lighttransmissionsetbyPPPand0%byPRP模型評(píng)估和應(yīng)用第十頁，共八十頁。Flowcytometrydetection:PlateletactivationP-selectin(CD62P)expression,ActivatedGPIIb/IIIa(fibrinogenreceptor)LeukocyteactivationMonocyteMAC-1(CD11b/CD18)andCD14expressionNutrophilMAC-1andCD14expressionPlatelet-leukocyteadhesionPlateletmarker(CD61,CD42)andleukocytemarker(CD11b),doublestained模型評(píng)估和應(yīng)用第十一頁，共八十頁。Thrombusquantitation:Circuitsremovedafter4hrsonECCRinsedwithnormalsalineResidualthrombusinthelargertubingofECCphotographedImagequantitatedusingImageJimagingsoftware模型評(píng)估和應(yīng)用第十二頁，共八十頁。Biomaterials.2010Apr;31(10):2736.

模型評(píng)估和應(yīng)用第十三頁，共八十頁。造模原理：血小板接觸粗糙面發(fā)生粘附激活血小板因粘附而激活，因激活而聚集，形成白色血栓2.大鼠血栓形成模型第十四頁，共八十頁。造模方法：

麻醉后行氣管插管

分離一側(cè)頸總動(dòng)脈和另側(cè)頸外靜脈（股靜脈）

頸總動(dòng)脈和股靜脈之間接三段相連的聚乙烯管,

管中充滿肝素生理鹽水,中段內(nèi)放一段絲線

經(jīng)一定時(shí)間后取出沿絲線形成的血栓第十五頁，共八十頁。中段絲線頸總動(dòng)脈股靜脈造模方法第十六頁，共八十頁。模型評(píng)估和應(yīng)用：剝離沿絲線形成的血栓，直接稱量血栓,

濕重和干重方法簡(jiǎn)便可靠，應(yīng)用于檢測(cè)處理因素（如

藥物）對(duì)血小板粘附和聚集功能的影響第十七頁，共八十頁。3.兔腹主動(dòng)脈血栓形成模型造模原理:損傷血管內(nèi)膜,使內(nèi)皮下細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)裸露,促使血小板與ECM(主要是膠原纖維)接觸而被激活和黏附。同時(shí)裸露的膠原纖維激活Ⅻ因子以及損傷的內(nèi)皮細(xì)胞釋放出組織因子,啟動(dòng)了內(nèi)源性和外源性凝血過程,導(dǎo)致血栓形成。第十八頁，共八十頁。造模方法

標(biāo)記血小板：動(dòng)物麻

醉后分離一側(cè)

股靜脈和股動(dòng)脈

股靜脈

取血20ml,用111In標(biāo)記血小板,從耳緣靜脈注入標(biāo)記好的血小板第十九頁，共八十頁。損傷內(nèi)膜：經(jīng)股

動(dòng)脈插入Fogarty(5f)氣

囊導(dǎo)管至

胸、腹主動(dòng)脈交

界處,氣

囊充氣至80kPa

后下拉氣囊管10cm,放氣后重新插至交界

處,充氣下拉,反復(fù)6次,撤除導(dǎo)管,結(jié)扎動(dòng)脈血栓檢測(cè)：去內(nèi)

膜后1小時(shí)

靜脈注射0.5%伊文斯蘭5ml,然后靜注過量戊巴比妥鈉處死動(dòng)物,

分離主動(dòng)脈,截取上端5cm胸主動(dòng)脈和下

端10cm均勻蘭染的腹主動(dòng)脈,計(jì)數(shù)各動(dòng)脈

段的CPM值,充分干燥后稱重,計(jì)算每克干

重動(dòng)脈段上標(biāo)記的血小板數(shù)。造模方法第二十頁，共八十頁。通過CPM可準(zhǔn)確定量受損血管壁上粘附聚集的血小板可評(píng)估檢測(cè)處理因素對(duì)血小板粘附和聚集功能的影響應(yīng)用于血栓機(jī)制的研究和抗血栓藥物的篩選模型評(píng)估和應(yīng)用第二十一頁，共八十頁。4.冠狀動(dòng)脈血栓形成模型造模原理:直流電（1.5mA）刺激頸動(dòng)脈壁可使血管損傷,血管內(nèi)膜變得粗糙不平,引起血小板黏附、聚集和釋放反應(yīng),促進(jìn)凝血活性；同時(shí)，受損內(nèi)膜暴露膠原纖維激活內(nèi)源性凝血系統(tǒng),還可通過釋放組織因子激活外源性凝血系統(tǒng),導(dǎo)致動(dòng)脈管腔內(nèi)逐漸形成肉眼可見的混合血栓。第二十二頁，共八十頁。造模方法

犬經(jīng)麻醉、人工呼吸、開胸剪開心包膜,左房插管備注射

藥物用。

分離冠狀動(dòng)脈左旋支,用1.5mA直流電刺激左旋支6小時(shí)以

破壞血管壁,促進(jìn)血栓形成。

同時(shí)記錄冠脈血流量、動(dòng)脈血壓、心外膜電圖。6小時(shí)后處死動(dòng)物并從左心房插管注射20%活性藍(lán)

(1ml/5kg)以測(cè)定左室心肌梗塞的大小。

觀察血栓形成的百分率，并稱量血栓重量第二十三頁，共八十頁。模型評(píng)估和應(yīng)用該模型所形成的血栓組成和形態(tài)近似人冠狀動(dòng)脈，適用于冠狀動(dòng)脈急性血栓形成的機(jī)制、防治研究。第二十四頁，共八十頁。5.家兔耳緣靜脈血栓形成模型

血流速度變慢，促進(jìn)血液凝固

凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白單體

凝血酶使XIII激活，后者使纖維蛋白單體轉(zhuǎn)變

成纖維蛋白多聚體，導(dǎo)致血液凝固

凝血酶激活蛋白C導(dǎo)致tPA釋放，后者使纖溶酶

原激活

凝血酶同時(shí)能直接激活纖溶酶，使纖維蛋白多

聚體降解導(dǎo)致血栓溶解造模原理:第二十五頁，共八十頁。

家兔耳緣靜脈分離出2cm長(zhǎng)的靜脈段,用絲線同時(shí)結(jié)扎遠(yuǎn)

心端和近心端,并用血管夾夾住兩側(cè)分枝以阻止血流流入用針頭抽去該段血液,注入凝血酶(20NIH凝血酶單位/毫升)

松開血管夾使血液流入,再夾住分枝使靜脈段內(nèi)形成血塊撤去血管夾,放開結(jié)扎線,用透射光觀察血栓消失及血流恢

復(fù)時(shí)間造模方法：第二十六頁，共八十頁。模型評(píng)估和應(yīng)用本模型形成的血栓為紅色血栓方法簡(jiǎn)便主要用于溶栓藥物溶栓作用的觀察。第二十七頁，共八十頁。二.DIC的動(dòng)物模型第二十八頁，共八十頁。第二十九頁，共八十頁。

彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)是一種由不同原因引起的以全身性血管內(nèi)凝血系統(tǒng)激活為特征的獲得性綜合征，表現(xiàn)為先發(fā)生廣泛性微血栓形成，繼而因大量凝血因子和血小板被消耗（有時(shí)伴有纖溶亢進(jìn)），導(dǎo)致多部位出血、休克、器官功能障礙及微血管病性溶血性貧血。第三十頁，共八十頁。實(shí)驗(yàn)對(duì)象：成年家兔，雌雄隨機(jī)

1.家兔DIC模型的復(fù)制第三十一頁，共八十頁。

造模原理正常體內(nèi)循環(huán)血液中不含組織因子，當(dāng)組織損傷或內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞激活時(shí)，組織因子能釋放或暴露于循環(huán)血液?jiǎn)?dòng)外源性凝血過程。兔腦粉含有組織因子，靜脈注射兔腦粉后通過激活外源性凝血途徑引起DIC.第三十二頁，共八十頁。兔腦粉浸液的制備：健康成年家兔安樂處死后,即刻開顱摘取兔腦，除去血管、腦膜和其它結(jié)締組織，用PBS洗凈后，置于研缽中伴丙酮研磨成粥狀懸液，靜置數(shù)分鐘后棄上清液，再加入丙酮研磨重復(fù)前述步驟多次，直至腦組織完全脫水成白色粉末，置4oC保存待用。造模方法：第三十三頁，共八十頁。稱重后，用20%烏拉坦4ml/kg耳緣靜脈注射麻醉

動(dòng)物用生理鹽水配制4％兔腦粉溶液，按2ml／kg體重計(jì)算兔腦粉溶液，加生理鹽水稀釋至20m1后，由耳緣靜脈緩慢注入（10min）。分別于注入兔腦粉溶液前15min、注入后15min和45min，記錄家兔的血壓和呼吸，并取血置于有肝素的注射器中，以測(cè)定3P試驗(yàn)、PT、纖維蛋白原、血小板計(jì)數(shù)。造模方法復(fù)制DIC模型：第三十四頁，共八十頁。凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè)定①P試液配制：取兔腦粉0.2g，加入5mlNS充分混勻，置C37oC恒溫水浴箱內(nèi)孵育1hr，孵育期間用玻璃棒攪拌3至4次，孵育后混勻、離心(1000rpmx5min）,取上清液與等量氯化鈣（0.025mol／L）溶液混勻。取被檢血漿0.1ml，置于小試管內(nèi)放于37℃水浴中。②取待測(cè)血漿0.1ml加入P試液0.2ml，輕輕地側(cè)動(dòng)，直至液體停止流動(dòng)或出現(xiàn)粗顆粒，即為凝血酶原時(shí)間.③重復(fù)3次，取平均值,家兔正常值為6～8sec。造模方法檢查急性DIC的幾種血液學(xué)常規(guī)方法：第三十五頁，共八十頁。血小板計(jì)數(shù)吸取20μl全血加入到0.38ml血小板稀釋液中混勻，用滴管將上述混懸液一小滴滴入血球計(jì)數(shù)板內(nèi)，靜置15min后，用高倍鏡計(jì)數(shù)。數(shù)5個(gè)方格內(nèi)之血小板數(shù)，乘以1000，即得每立方毫米血小板數(shù)。造模方法第三十六頁，共八十頁。魚精蛋白副凝實(shí)驗(yàn)(3P實(shí)驗(yàn))①取全血置于EP管中，離心（5000rpmx3min）后，取上清液即血漿。②取血漿0.4ml置于試管中，加入0.1ml1%硫酸魚精蛋白液混勻。③室溫下靜置30min后搖動(dòng)試管，出現(xiàn)白色纖維或凝塊者為陽性，均勻渾濁而沒有出現(xiàn)白色纖維者為陰性。造模方法第三十七頁，共八十頁。血清纖維蛋白(原)含量測(cè)定(飽和鹽水法)①取血漿0.5m1置于12X100mm的試管中，加入飽和氯化鈉溶液4.5m1，充分混勻，置于37℃水浴中孵育3min，取血后再次混勻，用721型分光光度計(jì)比色，測(cè)定光密度.②以生理鹽水代替飽和氯化鈉溶液，進(jìn)行同樣操作作為對(duì)照。③對(duì)照管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)出光密度(波長(zhǎng)520mm)后，按下式計(jì)算纖維蛋白原含量：測(cè)定管光密度

×1000=mg%0.5造模方法第三十八頁，共八十頁。動(dòng)物死后觀察各臟器的變化造模方法尸檢第三十九頁，共八十頁。2.小鼠DIC模型的復(fù)制第四十頁，共八十頁。Shwartzmanreaction:ageneralizedreactionfollowingtwointravenousinjectionsofendotoxingiven24hoursapartandmarkedbywidespreadhemorrhage,reducednumbersofwhitebloodcellsandplatelets,renalnecrosis,anddeathoftheanimal—calledalsogeneralizedShwartzmanreaction第四十一頁，共八十頁。

造模原理：感染是DIC發(fā)生的最常見的原因，而單核吞噬系統(tǒng)功能障礙是DIC發(fā)生的重要誘因之一，第一次注射小劑量致敏內(nèi)毒素能導(dǎo)致單核吞噬系統(tǒng)功能障礙，當(dāng)24小時(shí)后第二次注射亞致死量?jī)?nèi)毒素即可誘發(fā)DIC.第四十二頁，共八十頁。二、實(shí)驗(yàn)對(duì)象和材料實(shí)驗(yàn)對(duì)象：

10Weekold,femaleC57Bl/6mice第四十三頁，共八十頁。Twoconsecutiveinjections:alowdoseendotoxinpriminginjectionof5μgSerratiamarcescens(靈

桿菌)LPS(in40μl,Sigma)orsterilesalinecontrol(no-priming)wasgiveninthefoot(intradermally)24hlaterbyanintravenousLPSchallenge(300μgSerratiamarcescens

LPS)(in100μl).MicereceivingtwoendotoxininjectionswilldevelopaShwartzmanreaction.No-primingcontrolsrepresentasingle-doseendotoxemiamodel.Miceweresacrificedatbaselinelevels(t=-24h),24hoursafterpriming(t=0h),2hoursafterchallenge(t=2h)and6hoursafterchallenge(t=6h).Eachgroupcontained8mice.復(fù)制DIC模型第四十四頁，共八十頁。Thrombiformationinliverandlung.Formationof(micro-)thrombiafterLPSchallengewithandwithout24hoursoflowdoseendotoxinpriming.(a)Representsthenumberofthrombiinliver.(b)Demonstratesthenumberofthrombiin10microscopicfields(25×)inlungtissue.(mean±SE)第四十五頁，共八十頁。Hepatic(ischemic)necrosis.Necroticareasintheliverwerescoredfor10microscopicfields(25×)usinghaematoxylinandeosinstainedsections(mean±SE)第四十六頁，共八十頁。LPS-inducedkidneyandliverdamage.(a)Creatininelevelsinplasmaofmicerepresentingkidneyfailure.(b+c)Transaminaseleakageintoplasmareflectsacutecellularandmitochondrialhepaticinjury(mean±SE)第四十七頁，共八十頁。三.貧血的動(dòng)物模型貧血是指人體外周血紅細(xì)胞容量減少，低于正常范圍下限的一種常見的臨床癥狀。第四十八頁，共八十頁。1、缺鐵性貧血?jiǎng)游锬Ｐ驮炷Ｔ恚喝辫F性貧血（irondeficiencyanemia，IDA）是指各種原因引起的缺鐵導(dǎo)致紅細(xì)胞生成減少而導(dǎo)致的貧血。通過低鐵飼料喂養(yǎng)動(dòng)物使鐵攝入減少，外加多次少量放血使鐵丟失，造成體內(nèi)鐵的缺乏。第四十九頁，共八十頁。造模方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選用4周齡SD大鼠，雌雄不拘，體重65g左右，HGB≥130g/L。建模方法：采用EDTA浸泡處理以去除飼料中的鐵（低鐵飼料）后喂養(yǎng)動(dòng)物。采用去離子水作為動(dòng)物飲水，以排除飲水中鐵離子的影響。在低鐵飼料飼喂2周后進(jìn)行，常用尾靜脈放血法，1～1.5ml/次，2次/周。第五十頁，共八十頁。飼料中的含鐵量是誘導(dǎo)IDA模型的關(guān)鍵：（1）飼喂含鐵量<15.63mg/Kg的飼料35天，SD大鼠出現(xiàn)典型IDA表現(xiàn)；（2）飼喂含鐵40.30mg/Kg的飼料SD大鼠出現(xiàn)缺鐵，但并不表現(xiàn)貧血癥狀。模型指標(biāo)：（1）HGB≤100g/L；（2）血象：紅細(xì)胞體積較正常紅細(xì)胞偏小，大小不一，中心淡染區(qū)擴(kuò)大，MCV減小、MCHC降低；（3）血清鐵降低，<10μmol/L，血清總鐵結(jié)合力增高，>60μmol/L。用于缺鐵性貧血藥物作用和缺鐵性貧血機(jī)制的研究，但不適用于鐵吸收不良相關(guān)的防治研究。模型評(píng)估和應(yīng)用第五十一頁，共八十頁。2、溶血性貧血?jiǎng)游锬Ｐ?/p>

溶血性貧血(hemolyticanemia,)是一種常見的貧血類型，是指由于某種原因使紅細(xì)胞存活期縮短(15-20天），破壞增加，超過了骨髓代償能力（6-8倍）所引起的一類貧血，是常見的造血系統(tǒng)疾病。第五十二頁，共八十頁。

造模原理：動(dòng)物注射一定量的乙酰苯肼(acetylphenylhydrazine,APH)，APH是一種強(qiáng)氧化劑，能特異性地對(duì)紅細(xì)胞起緩慢而進(jìn)行性地氧化損傷作用，尤其是干擾紅細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，促進(jìn)血紅蛋白變性而形成海氏小體，也可直接破壞紅細(xì)胞的膜蛋白和脂類，使膜溶解破裂，紅細(xì)胞崩解，造成溶血性貧血。第五十三頁，共八十頁。造模方法：

小鼠第1、4、7天皮下注射APH生

理

鹽水溶液0.2g/kg、0.1g/kg、0.2g/kg，第9天造模成功，其

他給藥方法也可以造成此模型。

大鼠

第1、4天

皮

下

注射APH生理鹽水溶液0.16g/kg、0.08g/kg，第8天造模成功；或兩次劑

量均為0.2g/kg，第10天造模成功。

家兔以2％APH生理鹽水溶液給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮下或

肌內(nèi)注

射2～3次，劑量為0.1g/kg，即可建立溶

血性貧血模型。第五十四頁，共八十頁。外周血血紅蛋白和紅細(xì)胞進(jìn)行性下降；網(wǎng)織紅細(xì)胞、海氏小體和白細(xì)胞總數(shù)則顯著增多。本方法建模周期短，操作簡(jiǎn)便，模型動(dòng)物癥狀和外周血象、血細(xì)胞的生化學(xué)變化與人類溶血性貧血基本相似，為研究實(shí)驗(yàn)性溶血性貧血提供了一種簡(jiǎn)易模型。模型評(píng)估和應(yīng)用第五十五頁，共八十頁。3.失血性貧血?jiǎng)游锬Ｐ驮炷Ｔ恚杭毙允а筘氀?posthemorrhagicanemia)是快速大量出血引起的貧血；慢性失血后貧血是由于長(zhǎng)期中度出血所致的小細(xì)胞性貧血。通過人為放血導(dǎo)致動(dòng)物血容量和血細(xì)胞的減少，從而導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)短期的貧血特征，以此制作失血性貧血模型。第五十六頁，共八十頁。造模方法：

小鼠:

眼眶后靜脈叢放血6～8滴(約0.5ml)，隔日

放血1次，連續(xù)5次可形成慢性失血性貧血模型。

每天剪尾放血0.5ml，連續(xù)7天，也可造成貧血。

大鼠:

大鼠剪尾放血1.5～2ml，隔日1次，連續(xù)5

次，可形成慢性失血性貧血。

家兔或犬:

從動(dòng)物靜脈或者動(dòng)脈采集全血容量的1/3，每天1次，反復(fù)幾次，即可造成失血性貧血

動(dòng)物模型。第五十七頁，共八十頁。模型評(píng)估和應(yīng)用：通過較短時(shí)間內(nèi)向體外大量放血，造成急性失血性貧血。也可通過反復(fù)多次放血，造成慢性失血性貧血。該方法操作簡(jiǎn)單，指標(biāo)明確，但樣本間失血量較難控制完全一致。該模型用于一般失血性貧血的發(fā)病機(jī)制及其新藥藥效學(xué)篩選研究。第五十八頁，共八十頁。4、再生障礙性貧血?jiǎng)游锬Ｐ驮偕系K性貧血（aplasticanemia），簡(jiǎn)稱再障，系多種病因引起的造血系統(tǒng)退行性變，紅骨髓總?cè)萘坎粩鄿p少，黃骨髓不斷增加，造血衰竭，以全血細(xì)胞減少為主要表現(xiàn)的一組綜合征。建模方法包括化學(xué)建模、物理建模及免疫介導(dǎo)等。再障的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。第五十九頁，共八十頁。

化學(xué)方法建模：造模原理：化學(xué)藥物的毒副作用抑制骨髓造血功能，誘導(dǎo)再生障礙性貧血。腺嘌呤可導(dǎo)致腎臟病變，使促紅細(xì)胞生成素（EPO）分泌不足，進(jìn)而導(dǎo)致紅系和巨核系造血障礙。白消安可選擇性抑制骨髓。苯類化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后，在骨髓富集（可達(dá)血清濃度的20倍），對(duì)骨髓有較強(qiáng)的抑制作用，可導(dǎo)致再障。第六十頁，共八十頁。腺嘌呤致大鼠腎性貧血模型：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SD大鼠，雌雄不拘。利用飼喂含腺嘌呤0.75%，投飼量300mg/kg/d，連續(xù)喂養(yǎng)6-7周，獲得腎衰竭貧血模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物紅細(xì)胞、血紅蛋白及紅細(xì)胞壓積等主要紅系指標(biāo)均、血小板均顯著下降。第六十一頁，共八十頁。白消安致骨髓抑制的再障模型：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠、SD大鼠、家兔，雌雄不拘。建模方法：白消安（馬利蘭）（1）口服給藥，15mg/kg/周或30mg/kg/周，總給藥劑量達(dá)到120-150mg/kg時(shí)，可致家兔的再障，出現(xiàn)全血細(xì)胞減少、淋巴細(xì)胞比值增加、骨髓黃化和骨髓纖維化。（2）一次性給藥，20-35mg/kg腹腔注射，可致大鼠再障。（3）小鼠每天腹腔注射15mg/kg，持續(xù)8-9天，停藥60天后，可使骨髓造血功能抑制。出現(xiàn)血細(xì)胞減少和骨髓有核細(xì)胞降低，建模穩(wěn)定、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活率高。第六十二頁，共八十頁。苯致骨髓抑制的再障模型：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：CD1小鼠、家兔。建模方法：苯類化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后，在骨髓富集（可達(dá)血清濃度的20倍），對(duì)骨髓有較強(qiáng)的抑制作用，可導(dǎo)致再障。（1）皮下注射給藥，苯與玉米油1:1混合物，4.0ml/kg，3次/周，共給藥25次，可致CD1小鼠再障，表現(xiàn)為全血細(xì)胞減少、骨髓黃化、脂肪細(xì)胞等非造血細(xì)胞數(shù)目增多，骨髓間質(zhì)血竇充血、出血伴水腫。（2）皮下注射給藥，純苯，天，3次/周，連續(xù)給藥2-3周，可致全血細(xì)胞減少、造血細(xì)胞減少。第六十三頁，共八十頁。化學(xué)毒物誘導(dǎo)再障動(dòng)物模型與人類再生障礙性貧血有相似之處，該模型成功率高，結(jié)果穩(wěn)定，但造模時(shí)間過長(zhǎng)，易造成骨髓永久損害?？勺髟偕系K性貧血的發(fā)病機(jī)制研究、疾病進(jìn)展研究和治療藥物篩選的動(dòng)物模型。模型評(píng)估和應(yīng)用第六十四頁，共八十頁。

物理方法建模造模原理：放射物質(zhì)產(chǎn)生的高能射線可穿透機(jī)體，起DNA損傷，干擾DNA復(fù)制，阻斷有絲分裂，對(duì)造血干細(xì)胞等分裂增值活躍的細(xì)胞有強(qiáng)抑制作用，可使動(dòng)物造血干細(xì)胞和袓細(xì)胞減少，破壞骨髓造血細(xì)胞的增殖能力。第六十五頁，共八十頁。造模方法--外部照射建模法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠，雌雄不拘。建模方法：γ射線等高能射線可穿透機(jī)體，起DNA損傷，絲分裂，對(duì)造血干細(xì)胞等分裂增值活躍的細(xì)胞有強(qiáng)抑制作用。使用鈷60等放射性同位素，照射劑量3-4Gy（戈瑞），可使造血干細(xì)胞數(shù)量減少；亞致死劑量（6.0Gy）照射以后，可致小鼠全血再障，維持時(shí)間較長(zhǎng)，但輻照的劑量不好控制，稍大易致小鼠死亡，稍低則個(gè)別小鼠不易達(dá)到造血抑制效果。第六十六頁，共八十頁。造模方法--內(nèi)部照射建模法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠，雌雄不拘。建模方法：放射性同位素153Sm（釤）、89Sr（鍶）、32P（32磷）、186Re(186錸)、188Re(188錸)、105Rh（105銠）、177LU（177镥）和60Co（60鈷），能產(chǎn)生β射線及親骨性特點(diǎn)，進(jìn)入人體后對(duì)造血組織進(jìn)行內(nèi)照射。將32磷給小鼠一次靜脈注射1.4mCi/kg體重可致再障；氯化鍶，按每克體重6或2μCi（居里）腹腔注射給予11~12周齡的小鼠，6μCi組動(dòng)物于35d后全部死亡．2μCi組動(dòng)物全部存活。6μCi組的小鼠于21d后股骨骨髓顯示為脂肪髓。全血細(xì)胞減少，骨髓有核細(xì)胞數(shù)和CFU-S產(chǎn)率都減少。第六十七頁，共八十頁。本模型與人類再生障礙性貧血相似，該模型成功率高，結(jié)果穩(wěn)定，但需要特殊設(shè)備及防護(hù)，亦為防護(hù)照射損傷的研究提供了良好實(shí)驗(yàn)方法。模型評(píng)估和應(yīng)用第六十八頁，共八十頁。謝謝！第六十九頁，共八十頁。血管內(nèi)皮損傷

損傷的因素：感染、免疫因素、機(jī)械性損傷、化學(xué)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的作用促血栓形成機(jī)制：內(nèi)皮屏障缺失:暴露內(nèi)皮下粘附分子，促血小板聚集內(nèi)皮下的膠原纖維暴露，從而激活Ⅻ因子，內(nèi)源性凝血系統(tǒng)被激活。內(nèi)皮促凝作用增強(qiáng)：表達(dá)組織因子,激活外凝系統(tǒng)抗