新藥藥效學的思路和方法

新藥藥效學研究的思路和方法徐凌云2009-12-041主要內容新藥申報中藥理毒理研究內容及要求藥效學研究的一般原則和要求藥效學實驗要考慮的問題常用的參考書目2新藥研究的三個階段和審評尺度

安全性

有效性質量可控性藥學研究藥理毒理研究

臨床研究3新藥研究的法律法規(guī)及指導原則《中華人民共和國藥品管理法》（江澤民主席，2001-2-28)《中華人民共和國藥品管理法實施條例》（朱镕基總理，2002-8-4)《藥品注冊管理辦法》（局令第28號）

（邵明立局長，2007-7-10)指導原則……4《藥品注冊管理辦法》（局令第28號）附件1：中藥、天然藥物注冊分類及申報資料要求(33項)

附件2：化學藥品注冊分類及申報資料要求(32項)附件3：生物制品注冊分類及申報資料要求(18項)附件4：藥品補充申請注冊事項及申報資料要求附件5：藥品再注冊申報資料項目附件6：新藥監(jiān)測期期限表（說明：除以下情形的新藥不設立監(jiān)測期）

5新藥申報中藥理毒理研究內容及要求6藥理毒理研究資料內容藥理毒理研究資料綜述（中19/化16）主要藥效學試驗資料及文獻資料（20/17）一般藥理研究的試驗資料及文獻資料（21/18）急性毒性試驗資料及文獻資料（22/19）長期毒性試驗資料及文獻資料（23/20）

過敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮膚、粘膜、肌肉等）刺激性等主要與局部、全身給藥相關的特殊安全性試驗研究和文獻資料（24/21）7復方制劑中多種成份藥效、毒性、藥代動力學相互影響的試驗資料及文獻資料（無/22）致突變試驗資料及文獻資料（25/23）生殖毒性試驗資料及文獻資料（26/24）致癌試驗資料及文獻資料（27/25）依賴性試驗資料及文獻資料（23/26）非臨床藥代動力學試驗資料及文獻資料（28/27）

8藥理毒理研究資料內容

藥理毒理研究資料綜述

藥理研究資料

主要藥效、作用機理研究、藥代動力學毒理研究資料一般藥理、急毒、長毒、局部毒性、遺傳毒性、生殖毒性、致癌性9化學藥品注冊分類

1、未在國內外上市銷售的藥品（分6個亞類）。

2、改變給藥途徑尚未在國內外上市銷售的制劑。

3、已在國外上市銷售但尚未在國內上市銷售的藥品（分4個亞類）。

104、、改變變已已上上市市銷銷售售鹽鹽類類藥藥物物的的酸酸根根、、堿堿基基（（或或者者金金屬屬元元素素）），，但但不不改改變變其其藥藥理理作作用用的的原原料料藥藥及及其其制制劑劑。。5、改變國內已已上市銷售售藥品的劑劑型，但不不改變給藥藥途徑的制制劑。6、已有國家藥藥品標準的的原料藥或或者制劑。。11新藥申報對對藥理毒理理研究資料料的要求不同注冊分分類的藥物物所要求提提供的藥理理毒理研究究資料的內內容是不同同的。（化化藥分６類類，中藥分分９類）例：雷公藤內酯酯微乳凝膠膠化化藥1.6類HES130/0.4氯化鈉鈉注射液化化藥3.1蛋白琥珀酸酸鐵原料藥藥化化藥3.1蛋白琥珀酸酸鐵口服液液化化藥６類立題和文獻獻調研非常常重要12化藥注冊分分類及申報報資料項目目要求資料分類資料項目注冊分類及資料項目123456化學藥品藥理毒理研究資料16++++++17+*16±*18--18+*16±*18--19+*16±*18--20+*16±*18--21*19*19*19*19*19*1922*13-----23+±±±--24+±±±--25*8-*8*8--26*9-----27+*20*20+*20-13化藥注冊分分類與第17號資料料注冊分類１１，必須提供供。注冊分類2，必須提供供。所采用用的給藥途途徑應當與與臨床擬用用途徑一致致。注冊分類３３，可用文獻獻資料代替替試驗資料料。注冊分類４４，提供與已已上市銷售售藥物比較較的主要藥藥效學試驗驗資料。如如果改變已已上市銷售售鹽類藥物物的酸根、、堿基（或或者金屬元元素）而制制成的藥物物已在國外外上市銷售售，則按注注冊分類3的申報資資料要求辦辦理。（如雙氯酚酚酸鈉片雙雙氯氯酚酸鉀片片）注冊分類５５、６，可免此號號資料。14藥效學研究究的一般原原則和要求求15藥效學研究究的一般原原則隨機（randomization））對照（control）重復（replication）16隨機原則完全隨機化化法配對隨機法法：先將動動物按性別別、體重、、窩別或其其他因素加加以配對。。區(qū)組隨機法法：將全部部動物按性性別、體重重、及其他他條件分成成若干組。。如實驗需需要分兩個個組17區(qū)組隨機法法0－4入A組，5－－9入B組組，則查隨隨機數字表表A：8例；；B：12例將最后4個個原來都屬屬B組的數數字，按單單數入A組組，偶數入入B組的原原則，這樣樣A、B兩兩組都有10例動物物。隨機數05278427416838515696…分組ABABBAABAABBABBABBBB…18對照原則沒有比較就就沒有區(qū)別別。所謂“對照照”，即設設立非處理理因素相同同、而處理理因素與試試驗組不一一樣的一組組對象。實驗組與對對照組的實實驗動物在在種屬、性性別、窩別別、體重、、健康狀況況等方面要要盡可能相相同。對照有多種種形式。19重復原則一是在同樣樣條件能將將實驗結果果重復出來來，即具有有重現性；；（抗腫瘤實驗驗要重復三三批動物試試驗）另一意思是是在實驗中中應有足夠夠的動物數數或實驗次次數，即應應具有一定定的樣本數數。20藥效學研究究的常用方方法體內試驗法法（重現性較體體外實驗差差，但接近近人體情況況，是藥物物有效性必必須評價的的內容。）體外試驗法法血清藥理學學：將受試藥物物經口給與與動物后，，取其血清清作為藥源源加入體外外反應系統(tǒng)統(tǒng)中研究其其藥理作用用。該方法法的干擾因因素太多，，其應用的可靠靠性存在爭爭議。新藥藥效學學試驗以體體內實驗為為主，體外外實驗為輔輔。21藥效學研究究的常用給給藥方法預防性給藥藥治療性給藥藥（常用））防治結合的的給藥方式式22新藥藥效學學研究的要要求（１））證實主要治治療作用及及較重要的的其他治療療作用。主要的藥效效作用要明明確，并力力求反映量量效和（或或）時效關關系。藥效學實驗驗要盡量反反映受試藥藥物的特點點（包括作作用強度、、作用時間間、作用特特點等）。。創(chuàng)新藥或類類別高的中中藥的藥效效學研究要要盡可能揭揭示藥物的的作用機制制。23新藥藥效學學研究的要要求（２））體內、體外外實驗方法法相結合；；以體內實實驗為主。。分清主次，，突出重點點。主要作作用設１～～３項，每每項選做２２～３種實實驗方法。。其他作用用（輔助療療效）酌情情做２～５５項，每項項選做１～～２種實驗驗方法。宜選用１種種以上動物物進行藥效效試驗；每每一方面藥藥理作用要要選用２～～３種動物物模型或細細胞模型來來做。24新藥藥效學學研究的要要求（３））局部用藥發(fā)發(fā)揮全身作作用的，盡盡可能進行行體內透皮皮吸收試驗驗，以了解解藥物吸收收程度及速速度等，有有助于評價價藥效。中藥材新的的藥用部位位，以人工工方法動物物體內的制制取物和引引種（養(yǎng)殖殖藥材）的的藥效學試試驗，均應應與原藥材材進行對比比試驗。以中藥療效效為主的中中藥或化藥藥復方制劑劑，需做復復方制劑及及組方中的的中藥部分分、化藥部部分三者在在藥效／毒毒理方面的的對比試驗驗，也叫拆方研究．25新藥藥效學學研究的要要求（4））中藥及其復復方要從多多方面反映映新藥的藥藥效（如抗抗腫瘤中藥藥：抗癌、、扶正、增增效、減毒毒等）。有時藥效不不夠明顯或或僅見作用用趨勢，統(tǒng)統(tǒng)計學處理理無顯著差差異，應如如實上報作作為參考，，但僅適用用于輔助療療效。傳統(tǒng)中藥的的藥效學研研究要在中中醫(yī)藥理論論指導下，，按照疾病病的中醫(yī)癥癥候造模。。26主要藥效學學試驗資料料及文獻資資料（中20/化17））內容體外藥效學學試驗體內藥效學學試驗作用機制研研究原則先體外，后后體內；先先重要，后后次要試驗方案依依據、條件件簡介試驗結果、、分析、評評價27主要藥效學學資料最終終評價評述體外/內試驗主主要結果預測可能提提示的臨床床意義藥物作用的的起效和持持續(xù)時間活性強度，，量效關系系有效劑量（（IC50或ED50）等結果是否支支持擬定的的適應證/功能主治治？作用機理研研究能否確確認？不能確認或或有矛盾的的試驗結果果如何處理理？28主要藥效學學資料常見見問題（解釋，補補做）對使用特殊殊溶媒未設設對照不進進行解釋藥效未反映映量效關系系或時效關關系的原因因不分析陽性藥未顯顯示應有的的療效的原原因不清數據未進行行統(tǒng)計學處處理或選擇擇方法不妥妥藥物的特點點未分析、、總結結果缺乏專專業(yè)分析、、討論、評評價29藥效學實驗驗要考慮的的問題30對受試藥物物的要求如果用原料料或中藥提提取物做試試驗，要求求符合暫定定的質量標標準。如果用制劑劑做試驗，，要求處方方固定，制制備工藝、、藥品質量量標準應基基本穩(wěn)定。。要向藥理毒毒理研究者者提供書面面的受試藥藥物的質檢檢報告。藥效、毒理理應采用同同一批號的的受試藥物物。原則上上要求中試試樣品。不同給藥途途徑對受試試物的要求求不一樣。。問題131如何選取動動物模型？？要求：公認性；與與臨床疾病病的相似性性。類型：自發(fā)性動物物模型（難得）及誘發(fā)性性或實驗性性動物模型型（常見）兩大類。。很多動物模模型有待改改進、完善善，更多的的有待于創(chuàng)創(chuàng)新建立。。問題232動物模型自發(fā)性動物物模型：突突變系的遺遺傳疾病和和近交系的的腫瘤模型型，如高血糖小鼠鼠、肥胖癥小小鼠、高血血壓大鼠等等。實驗性動物物模型：通通過化學、、物理、生生物等因素素，人工誘誘發(fā)器官、、組織或全全身性損害害，如動物物發(fā)熱模型型、動物佐佐劑性關節(jié)節(jié)炎模型、、四氧嘧啶所所致糖尿病病大鼠等。33實驗動物實驗動物的的三個特殊殊要求人工培育，，遺傳背景景清楚生活環(huán)境設設施應達國國標中的等等級標準專門用于科科研、教學學、生產、、檢定、實驗驗等常用實驗動動物小鼠、大鼠鼠、豚鼠、、地鼠（倉倉鼠）、兔、犬、猴猴、貓、小小型豬、雞雞等。34如何選擇實實驗動物？？１選用與實驗驗動物模型型要求相適適應的實驗驗動物規(guī)格格（年齡、體重重、性別等等）如二甲苯致致耳廓腫試試驗，雄性性，25~30g；抗抗炎試驗多多選用雄性性動物。２無特殊要要求的，選選成年健康康動物，各各種動物體體重為：小小鼠，18~22g；大大鼠，150g~250g；；家兔，1.5~2.5kg；比格犬犬，8~10kg；；每一批動動物體重相相差不超過過±20%。３選用解剖剖、生理特特點符合實實驗目的要要求的實驗驗動物。同同品種不同同品系的動動物存在特特殊的反應應，應注意意選擇應用用。如Wistar大鼠、、SD大鼠鼠等。問題335４選用與人的的機能、代代謝、機構構和疾病特特點相似的的動物。（（獼猴、犬、、貓、豬等等）５選用人獸共共患疾病的的實驗動物物和傳統(tǒng)應應用的實驗驗動物（SARS:果子貍,禽禽流感：雞雞）６實驗動物的的選擇和應應用需注意意符合相應應的國際規(guī)規(guī)范（GLP、3R原則）36動物實驗應應注意的問問題遵循國際““３Ｒ”原原則替代（replacement）減少（reduction））優(yōu)化（refinement）善待動物自我保護37觀察指標如如何選擇？？特異性：如治療類類風濕關節(jié)節(jié)炎藥，抗抗炎、鎮(zhèn)痛痛、免疫調調節(jié)等?？陀^性：盡量使用儀儀器。敏感性：量化性：對質反應指指標采用計計分法，定定量組織學學方法，人人為地進行行定量或半半定量。重現性：指標穩(wěn)定定，重現性性好。問題438如何確定藥藥效學試驗驗的劑量？？臨床等效劑劑量：根據體表面面積折算法法在同等體體表面積單單位時的劑劑量。（適用于安全全系數小的的藥物如抗抗癌藥等））根據臨床用用量的體重重計算（常用）：：根據人用用劑量按體體重計算。。根據半數致致死量（LD50））計算：可用其1/20～～1/10做為有效效劑量的預預摸。根據文獻估估計劑量問題539考慮長毒劑劑量設計：藥效試驗驗高劑量組組應低于長長毒試驗的的中劑量組組或低劑量量組，為此此藥效試驗驗的高劑量量組，不宜宜超過人用用量的20倍(指大大鼠試驗)。根據預試驗驗測定劑量量：通過預試試驗找出最最小有效量量，再做正正式試驗。。預試驗應應以等效劑劑量為標準準進行預摸摸。正式實實驗時常常常以等效劑劑量作為中中劑量，大大、中、小小劑量差為為2～3的的等比級數數為宜。40如何設置劑劑量組？主要藥效學學試驗應設設三個劑量量組，犬與與猴等大動動物可設2個劑量組組；通常按等比比數原則，，整體動物物劑量按2倍或3.16倍遞增，離離體器官劑劑量按3倍或10倍遞增；安全范圍較小小的藥物（如如抗腫瘤藥物物）可采用等等差級數分組組；化藥和純度比比較高的1、、5、7類中中藥新藥應盡盡量作出量-效和時-效效關系。進行藥效對比比時，一般選選用中效劑量量。問題641不同種屬動物物和人用劑量量

之間如何何換算？方法1按公斤體重換換算B種動物劑量量（mg/kg)=w××A種動物劑劑量（mg/kg)例：已知小鼠鼠對某藥的最最大耐受量為為20mg/kg，計計算家兔的給給藥劑量。查表1，A種種動物為小鼠鼠，B種動物物為家兔，交交叉點為折算系數w=0.37，故家兔給藥藥劑量為0.37×20mg/kg=7.4mg/kg1.5kg家家兔用藥量為為11.1mg。問題742表１動物與人人體的每公斤斤體重等效劑劑量折算系數數表折算系數小鼠大鼠豚鼠兔貓犬人(0.02kg)(0.2kg)(0.4kg)(1.5kg)(2kg)(12kg)(60kg)B種動物或成人小鼠(0.02kg)1.001.401.602.702.204.809.01大鼠(0.2kg)0.701.001.141.882.303.606.25豚鼠(0.４kg)0.610.871.001.652.053.005.55兔(1.5kg)0.370.520.601.001.231.763.30貓(2kg)0.300.420.480.811.001.442.70犬(12kg)0.210.280.340.560.681.001.80人(60kg)0.110.160.180.300.370.531.0043表2

不同動動物劑量折算算系數動物種類小鼠大鼠豚鼠家兔

貓猴犬人K(折算系數)10.710.620.370.300.310.210.11簡化倍數97643321注：不同種類類動物等效劑劑量分別相當當于人臨床劑劑量的2~9倍。誤差允許范范圍為0.5~1倍。44怎樣給動物麻麻醉？不同的麻醉劑劑有不同的藥藥理作用和副副作用，應根根據實驗要求求與動物種類類而加以選擇擇。麻醉深度的控控制是順利完完成實驗獲得得正確實驗結結果的保證。。麻醉期間要采采取保溫措施施。靜脈注射必須須緩慢，肌緊緊張和痛覺消消失應停止注注射。多用腹腹腔注射。麻醉深度不夠夠，要經過一一段時間才能能補充麻醉劑劑。補加劑量量不超過原注注射量的1/4~1/5。問題945常用局部麻醉醉劑普魯卡因：毒性小，見見效快，0.5%～1%用于局部部浸潤麻醉；；利多卡因：見效快，組組織穿透性好好，1%～～2%用于大大動物神經干干阻滯麻醉，，0.25%～0.5%用于局部部浸潤麻醉。。46常用全身麻醉醉劑乙醚：安全度大，麻麻醉深度易于于掌握，麻醉醉后恢復快。。適用于各種動動物，尤其是是做慢性實驗驗的動物。戊巴比妥鈉：：一次給藥的有有效時間可延延續(xù)3h~5h，毒性小，便便宜。常配成成3%生理鹽水溶溶液，可加溫溶解解，在常溫下下放置1～2月不失藥效效。適用于急急性動物實驗驗。狗，iv或ip30~35mg/kg，貓、兔、鼠鼠ip40～45mg/kg。。47如何設立對照照組？正常對照組模型對照組陽性模型陽性藥上市銷售的已已知有效的同同類藥物原劑型對照問題1048陽性對照藥的的選擇要求可比性：藥效肯定的同同類中藥或化化學藥，要求求作用（或主主治）相同，，給藥途徑盡盡量一致。合法性：應用《藥典》》或部頒標準準收載，或近近來批準生產產的合法藥物物。擇優(yōu)性：選用目前醫(yī)學學界公認有效效的代表藥。。問題1149一個受試藥可可能有幾個陽陽性對照藥；；陽性藥可設一一個或多個劑劑量組；給藥時間和給給藥途徑既要要考慮受試藥藥物能完全發(fā)發(fā)揮作用，也也要兼顧陽性性對照藥的作作用特點，不不強求同步一一致。模型陽性藥必必須作出陽性性結果，否則則有理由懷疑疑所選方法和和指標的可信信度。50每組樣本量如如何確定？小動物（大鼠鼠、小鼠、蛙蛙）：10～30例，計量資資料≥10例例,計數資料料≥30例；；中等動物（兔兔、豚鼠）：8～12例例。計量資料料≥6例,計計數資料≥20例；大動物（犬、、貓、猴）：5～15例例。避免干擾因素素：動物、儀儀器、藥物。。問題1251如何進行數據據統(tǒng)計？定量資料：又稱量反應資資料（如血壓壓、尿量、體體溫、血液生生化測定值等等）。多采用t檢驗和方差檢檢驗。定性資料：又稱質反應資資料，（如死死或不死,驚驚厥出現或不不出現等），，試驗結果常常用百分率表表示。采用“卡方””檢驗。分級資料：也稱為有序的的計量資料，，（如藥效的的持續(xù)時間、、病理程度按按等級劃分的的資料等）。。常采用秩和法法及Ridit法等非參數統(tǒng)統(tǒng)計分析方法法。問題1352數據在Χ±3s之外的屬異常常數據，要分分析原因。使用方差分析析，要進行方方差齊性檢驗驗。如兩組的的S相差一倍以上上即為方差不不齊。使用t檢驗，要進行行正態(tài)性檢驗驗。如均數兩兩側之差大于于2×√n，，即為明顯偏偏態(tài)。有無不定值。。有＜10，，＞30等不不定值的資料料時，不宜用用均數作t檢驗．可改用用中位數表達達。作Mann—whitney秩秩和檢驗，等等級和檢驗，，或序值法檢檢驗。53有無時序關系系。有用藥前前及用藥后(包括各時間間)的資料