中成藥質(zhì)量標準研究制定技術(shù)要求課件

中成藥質(zhì)量標準研究制定技術(shù)要求中成藥質(zhì)量標準研究制定技術(shù)要求中成藥標準制定技術(shù)要求1中藥提取純化技術(shù)要求2中藥分析方法驗證內(nèi)容3報告內(nèi)容中成藥標準制定技術(shù)要求1中藥提取純化技術(shù)要求2中藥分析方法驗一、中成藥標準制定技術(shù)要求原則保證用藥安全科學、先進、規(guī)范、實用

繼承、發(fā)展、創(chuàng)新促進標準國際化一、中成藥標準制定技術(shù)要求原則保證用藥安全科學、先進、規(guī)范、方法學驗證中藥質(zhì)量標準方法學驗證指導原則（中國藥典2010年版一部）一、中成藥標準制定技術(shù)要求中藥標準制定《國家藥品標準》（第四版）中藥質(zhì)量標準研究制定技術(shù)要求一、中成藥標準制定技術(shù)要求中藥標準制定供起草用樣品的要求

研究用樣品應具有代表性，覆蓋面要廣，一般至少應收集15批以上樣品供研究用；

獨家生產(chǎn)的應不少于10批，多家企業(yè)生產(chǎn)的應盡量收集每家企業(yè)的樣品,5家以上企業(yè)生產(chǎn)的應至少收集5～10家企業(yè)生產(chǎn)的樣品樣品量除滿足起草研究、留樣觀察外，還應有不少于3倍檢驗量的樣品供復核用；供起草用樣品的要求研究用樣品應具有代表性，覆蓋面要廣，供起草用樣品的要求

對于具有多種不同規(guī)格的品種，應收齊全部規(guī)格的樣品試驗用樣品必須采用合格原輔料依法生產(chǎn)的樣品，收集的每批樣品均要有該企業(yè)的原輔料和成品的自檢報告及詳細生產(chǎn)工藝。注意供起草用樣品的要求對于具有多種不同規(guī)格的品種，應收齊全部規(guī)陰性樣品系指按處方除去被測定的藥味，按制法制備的樣品，注意應包括所有的輔料和工藝步驟，制成量應與原標準相符供起草用樣品的要求陰性對照樣品生產(chǎn)單位應盡可能提供研究單位自制陰性樣品系指按處方除去被測定的藥味，按制法制備的樣品，注意應中成藥質(zhì)量標準基本內(nèi)容中成藥質(zhì)量標準基本內(nèi)容：名稱處方制法性狀鑒別特征圖譜檢查浸出物指紋圖譜含量功能與主治用法與用量注意規(guī)格貯藏中成藥質(zhì)量標準基本內(nèi)容中成藥質(zhì)量標準基本內(nèi)容：指紋圖譜名稱

(1)、名稱應符合《中藥及天然藥物命名原則》。中國藥典已收載品種名稱原則上不作更改(2)、新增品種或原有品種名稱若不符合要求確需修改的，可提出申請，由國家藥典委員會經(jīng)過查詢后統(tǒng)一進行命名(3)、與藥典收載品種同方異名的應按藥典名稱進行規(guī)范，與藥典同名異方的應更名或按藥典規(guī)范處方名稱(1)、名稱應符合《中藥及天然藥物命名原則》。中國藥典處方(1)、處方排序按君、臣、佐、使，系列品種排序需統(tǒng)一(2)、成方制劑中含有現(xiàn)版藥典未收載的藥材和飲片，應同時制定藥材和飲片標準，并應符合中藥材和飲片標準制定有關(guān)技術(shù)要求(3)、飲片炮制方法如藥典沒有收載的應在標準后注明處方(1)、處方排序按君、臣、佐、使，系列品種排序需統(tǒng)一(2處方(4)、《中國藥典》成方制劑中原則上不再收載含有瀕危藥材的品種。屬于瀕危物種或若需減去或替換的藥材應按相關(guān)要求申報，經(jīng)批準后方可列入《中國藥典》(5)、處方藥味以提取物（浸膏）表述的，其制法如與藥典已收載的提取物標準相同，則應使用藥典提取物名稱，執(zhí)行該提取物標準；若與藥典標準不同或藥典未收載，則應將該提取物標準列于標準正文之下處方(4)、《中國藥典》成方制劑中原則上不再收載含有瀕危藥材（6）屬于藥典分列的品種或易混淆品種應注意核對和明確所用藥材品種，不同劑型的系列品種處方藥材品種應一致處方五味子、南五味子金銀花、山銀花葛根、粉葛前胡、紫花前胡黃柏、關(guān)黃柏（6）屬于藥典分列的品種或易混淆品種應注意核對和明確所用藥材制法（1）標準中的“制法”項作為一個法定的公共標準，對同品種要有其普適性，應按實際生產(chǎn)情況簡要表述工藝流程中的主要步驟（2）制法項內(nèi)容應符合藥典附錄制劑通則各劑型有關(guān)規(guī)定提取溶劑的名稱、提取方法、分離、濃縮、干燥等主要步驟并規(guī)定制成總量（除另有規(guī)定外，以1000為單位），不列詳細技術(shù)參數(shù)。但在起草說明中應列出全部的生產(chǎn)工藝流程和詳細技術(shù)參數(shù)。制法（1）標準中的“制法”項作為一個法定的公共標準，對同品種（3）成型工藝中僅用于調(diào)整制成量的淀粉、糊精等輔料可不固定用量制法（4）大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、水丸等通?？勺鳛橥煌鑴┑牟煌?guī)格列入同一品種項下（5）醇沉前的相對密度、測定溫度應列出，一般有一個可以規(guī)定范圍（6）注意同品種多廠家制法的統(tǒng)一，不同規(guī)格可折成制成不同量（3）成型工藝中僅用于調(diào)整制成量的淀粉、糊精等輔料可不固定用性狀（1）外觀性狀是對藥品的顏色和外表感官的描述（2）性狀項下應寫明品種的外觀形狀、色、嗅、味等（3）對制劑顏色的描述可根據(jù)實樣規(guī)定一定的范圍（4）注意按照丸劑通則的規(guī)定，根據(jù)制法和規(guī)格對蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、蠟丸、濃縮丸（蜜丸、水丸、水蜜丸）等準確分類并在性狀中明確。性狀（1）外觀性狀是對藥品的顏色和外表感官的描述（2）性狀項鑒別鑒別色譜鑒別理化鑒別顯微鑒別一般理化鑒別熒光鑒別光譜鑒別薄層色譜鑒別液相色譜鑒別氣相色譜鑒別特征圖譜鑒別鑒別鑒別色譜鑒別理化鑒別顯微鑒別一般理化鑒別熒光鑒別光譜鑒別鑒別(2)、制劑中各藥味的鑒別方法除前處理外，原則上應盡量與該藥材和飲片的專屬鑒別方法一致，如因其他成分干擾或制劑的提取方法不同，不能采用與該藥材相同的鑒別方法時，可采用其他鑒別方法，并在起草說明中予以闡明。（1)鑒別試驗應符合重現(xiàn)性、專屬性和耐用性的驗證要求，首先應建立君藥、貴重藥、易混淆藥的鑒別，并對每味藥材逐一進行鑒別研究。總體要求鑒別(2)、制劑中各藥味的鑒別方法除前處理外，原則上應盡量與鑒別(3)、系列品種其鑒別方法應保持一致(4)、處方中含多來源植物藥味的，若使用對照藥材進行鑒別時，應對對照藥材的適用性進行考察。若對照藥材與供試品圖譜差異較大，則不適合采用該對照藥材作鑒別對照，可考慮采用對照提取物及對照品進行鑒別?？傮w要求鑒別(3)、系列品種其鑒別方法應保持一致(4)、處方中含多來鑒別（1）應對處方中所有以粉末投料的藥材逐一進行研究（2）選擇特征性強、與處方中其它藥味無交叉干擾的顯微特征作為鑒別依據(jù)，如果確有干擾，可選用其他顯微特征或改用其他鑒別方法（3）所收載的特征應明顯、易于檢出對鏡檢出現(xiàn)概率低于60%的（制片5張，可檢出規(guī)定特征的應不少于3張），或鏡檢難度大的，且已有該藥材TLC鑒別的，可不作正文規(guī)定。對不易查見或無專屬性的顯微特征不要列入顯微鑒別鑒別（1）應對處方中所有以粉末投料的藥材逐一進行研究（3）所鑒別（4）對于多來源的藥材，應采用共有的組織、細胞或內(nèi)含物的特征（5）藥典成方制劑藥材粉末通常以細粉（小于180μm）投料，應注意顯微鑒別項下的特征的大小與藥材細度盡量相一致單一藥材粉末的主要特征有時不一定能作為鑒別依據(jù)，而某些較為次要的特征有時卻能起到重要的鑒別作用。因此在選取處方各藥味顯微特征時要考慮到其特征性顯微鑒別（6）對復方中含有原粉入藥的成方制劑，應選擇被檢藥材特有的與其它藥材區(qū)別大的特征鑒別（4）對于多來源的藥材，應采用共有的組織、細胞或內(nèi)含物的鑒別（1）應選擇專屬性強、反應明顯的顯色反應、沉淀反應等鑒別方法（2）必要時寫明化學反應式（4）盡量避免用于中藥復方制劑中共性成分的鑒別，關(guān)注陰性有無干擾理化鑒別（3）一般用于制劑中的礦物藥或某一化學成分的鑒別鑒別（1）應選擇專屬性強、反應明顯的顯色反應、沉淀反應等鑒別鑒別（1）薄層色譜具分離與鑒別特性，并具有直觀、承載信息大、專屬性強、快速、經(jīng)濟、操作簡便等優(yōu)點，是中成藥鑒別的首選方法。（2）新建立的薄層色譜應該圖譜清晰，斑點明顯，分離度、專屬性、重現(xiàn)性與耐用性符合要求，并需提供圖譜。薄層色譜鑒別（3）應盡量與該藥材和飲片的薄層色譜鑒別方法一致，如因其他成分干擾或制劑的提取方法不同，可增加提取、純化處理或展開劑優(yōu)化。鑒別（1）薄層色譜具分離與鑒別特性，并具有直觀、承載信息大、鑒別供試品溶液的制備：應盡可能除去干擾，同時方法盡量簡便，首先進行提取、純化選擇，如回流、超聲提取方法，溶劑、時間，酸堿處理，溶劑萃取，柱子純化等的選擇薄層板的選擇：吸附劑的比較，選硅膠G板還是GF254板對照品選擇：盡量采用以對照品和對照提取物或?qū)φ账幉耐瑫r進行對照。當對照品不易獲得時，可采用對照提取物或?qū)φ账幉臑閷φ招略霰由V鑒別要求鑒別供試品溶液的制備：應盡可能除去干擾，同時方法盡量簡便，首鑒別提取、純化選擇：提取方法回流、超聲或溶劑提取，溶劑選擇，酸堿處理，溶劑萃取，柱子純化薄層板的選擇：吸附劑的比較，選硅膠G板還是GF254板對照品選擇：盡量采用以對照品和對照提取物或?qū)φ账幉耐瑫r進行對照。當對照品不易獲得時，可采用對照提取物或?qū)φ账幉臑閷φ招略霰由V鑒別要求點樣量的選擇：不同點樣量比較鑒別提取、純化選擇：提取方法回流、超聲或溶劑提取，溶劑選擇，鑒別展開劑選擇：對三個以上的展開系統(tǒng)進行考察比較顯色條件選擇：日光、紫外光、顯色劑耐用性：不同廠牌的薄層板、相對溫度、濕度等新增薄層色譜鑒別要求陰性空白試驗：以證明其他藥味無干擾點樣量的選擇：不同點樣量比較鑒別展開劑選擇：對三個以上的展開系統(tǒng)進行考察比較顯色條件選擇原點位置原點位置溶劑前沿溶劑前沿T：25℃RH：51％12345678912345678溶劑前沿原點位置12345678照片9慶余辟瘟丹鑒別（2）TLC照片10鑒別（2）TLC展開劑比較薄層板：青島海洋硅膠G板

薄層板：青島海洋硅膠G板展開劑：甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水

展開劑：正丁醇－冰醋酸－水（6:3:1.5:1.5:0.3）

（7:1:2）1、缺黃連陰性1、缺黃連陰性

3－8慶余辟瘟丹樣品2、黃連對照藥材

2、9黃連對照藥材3－8、慶余辟瘟丹樣品照片11鑒別（2）TLC薄層板比較薄層板：MN硅膠G板

展開劑：甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水

（6:3:1.5:1.5:0.3）

1缺黃連陰性

2黃連對照藥材

3-8慶余辟瘟丹樣品慶余辟瘟丹原點位置原點位置溶劑前沿溶劑前沿T：25℃RH：51％1鑒別（1）使用對照藥材應保證藥材的主斑點在樣品中均有對應的斑點（可參照制法對藥材進行前處理），供試品色譜中不能只有對照藥材色譜中的1－2個次要斑點相對應。（2）盡可能采取一個供試液多項多維鑒別使用的薄層色譜方法，達到節(jié)約資源、保護環(huán)境、簡便實用的目的（4）對原方法的驗證注意原標準點樣量按手鋪板制定，現(xiàn)用市售薄層板點樣量過大分離度差，點樣量可減少薄層色譜鑒別（3）注意“過柱”的影響，不同品牌、不同批號的吸附劑吸附能力有的不同注意點鑒別（1）使用對照藥材應保證藥材的主斑點在樣品中均有對應的斑鑒別（1）處方中藥味有多種含揮發(fā)性成分時，盡可能在同一色譜條件下進行鑒別應根據(jù)待測樣品的性質(zhì)，選用合適的色譜柱、檢測器等，進行系統(tǒng)適應性試驗，考察分離度、專屬性、耐用性等（2）用揮發(fā)油對照提取物對照，相關(guān)組分峰應達到良好分離，保證結(jié)果的重現(xiàn)性氣相色譜鑒別鑒別（1）處方中藥味有多種含揮發(fā)性成分時，盡可能在同一色譜條鑒別處方中成分量低，薄層色譜有干擾時，可試研究用液相色譜鑒別應根據(jù)待測樣品的性質(zhì)選用適宜的色譜柱、流動相、檢測器等，考察分離度、重復性、專屬性與耐用性，選擇最佳色譜條件陰性空白試驗，確證其他藥味無干擾液相色譜鑒別專屬性峰純度試驗，確證無重疊峰鑒別處方中成分量低，薄層色譜有干擾時，可試研究用液相色譜鑒別鑒別特征圖譜是能夠體現(xiàn)中藥整體特性的圖譜或選取圖譜中某些重要的特征信息，作為控制中藥質(zhì)量的重要鑒別手段。列于鑒別項下供試品應呈現(xiàn)與對照品色譜峰保留時間相同的色譜峰，并呈現(xiàn)與對照藥材或?qū)φ仗崛∥锉Ａ魰r間相同的幾個色譜峰特征圖譜鑒別分析方法建立方法認證方法學驗證特征圖譜鑒別方法的建立鑒別特征圖譜是能夠體現(xiàn)中藥整體特性的圖譜或選取圖譜中某些重要特征圖譜方法建立色譜條件的優(yōu)化檢測方法選擇HPLC/UVHPLC/ELSD波長選擇*流動相選擇樣品的收集*藥材或飲片中成藥參照物的選擇洗脫方式比較流動相系統(tǒng)不同酸度比較GC供試品的制備對照品對照提取物特征圖譜方法建立色譜條件的優(yōu)化檢測方法選擇HPLC/UVHP特征圖譜方法認證特征圖譜是否具有代表性能否表征待測樣品所含成分的專屬性峰的確認找出不同藥材在圖中的特征峰特征峰專屬性考察類似產(chǎn)品的考察特征圖譜特征圖譜是否具有代表性能否表征待測樣品所含成分的專屬1234567S8910茵陳金銀花梔子黃芩苷特征峰的確認1234567S8910茵陳金銀花梔子黃芩苷特征峰的確認123456S

專屬性考察6、金雀異黃素S、5-甲基蜂蜜曲菌素烏靈膠囊與近似產(chǎn)品指紋比較烏靈膠囊金水寶膠囊至靈膠囊百令膠囊寧心寶膠囊123456S123456S專屬性考察6、金雀異黃素S、5-甲基蜂色譜柱考察不同儀器考察不同流速考察不同柱溫考察溶液的穩(wěn)定性重復性重現(xiàn)性精密度耐用性方法學驗證不同pH考察色譜柱考察不同儀器考察不同流速考察不同柱溫考察溶液的穩(wěn)定性重檢查(1)按照制劑通則明確各品種需規(guī)定的檢查項目并制定限度值。如：相對密度、pH值、乙醇量、總固體、軟化點、黏附力、折光率、噴射速率、噴射試驗、注射劑安全性檢查等（2）根據(jù)各品種的情況制定相應的檢查項，如：熾灼殘渣、重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留量、有毒有害物質(zhì)、有機溶劑殘留量、樹脂降解產(chǎn)物檢查等（3）當藥典附錄中檢查方法有多種并列時，應明確使用第幾法，并說明理由檢查(1)按照制劑通則明確各品種需規(guī)定的檢查項目并制定限度檢查(4)藥典未收載的劑型應根據(jù)其劑型特點和用藥需要制定相應的檢查項目(5)單一成分的制劑或中西合方制劑中的化學藥必要時應檢查含量均勻度(6)含有毒性藥材的制劑，原則上應制訂有關(guān)毒性成分的檢查項目，以確保用藥安全(7)使用含有礦物藥、可能被重金屬和有害元素污染的中藥飲片（如地龍）生產(chǎn)的中藥制劑，或生產(chǎn)過程可能造成相應污染的中藥制劑，原則上應采用鉛、鎘、砷、汞、銅檢查法檢查并制定相應的限度檢查(4)藥典未收載的劑型應根據(jù)其劑型特點和用藥需要制定相應檢查(8)中藥注射劑應制定鉛、鎘、砷、汞、銅檢查項，含雄黃，朱砂的制劑應采用專屬性的方法對可溶性砷、汞進行檢查并制定限度(9)使用乙酸乙酯、甲醇、三氯甲烷等有機溶媒萃取、分離、重結(jié)晶等工藝的中藥制劑應進行殘留溶劑檢查并規(guī)定限量(10)工藝中使用吸附樹脂進行分離純化的制劑，應控制樹脂中殘留致孔劑和降解產(chǎn)物。根據(jù)吸附樹脂的種類、型號規(guī)定檢查項目，主要有苯、二甲苯、甲苯、苯乙烯、二乙基苯等檢查(8)中藥注射劑應制定鉛、鎘、砷、汞、銅檢查項，含雄黃指紋圖譜指紋圖譜是基于圖譜的整體信息，用于中藥質(zhì)量的整體評價，確保其內(nèi)在質(zhì)量的均一、穩(wěn)定相關(guān)性在建立成方制劑特征圖譜或指紋圖譜時還應同時建立藥材和飲片、中間體的相應圖譜。并須對三者間的相關(guān)性進行分析，應具相關(guān)性指紋圖譜分析方法建立方法認證方法學驗證指紋圖譜方法的建立數(shù)據(jù)處理和評價指紋圖譜指紋圖譜是基于圖譜的整體信息，用于中藥質(zhì)量的整體評價浸出物或總固體（1）可根據(jù)成方制劑中主要成分的理化性質(zhì)選擇合適的溶劑有針對性的對某一類成分進行浸出物測定，應注意避免輔料的干擾（2）含糖等輔料多的劑型對浸出物的測定有一定影響，一般不采用乙醇或甲醇作為浸出溶劑，可根據(jù)所含成分選用合適的溶劑（3）酒劑、注射液等要求進行總固體測定，含糖或其它輔料應先除去再測定浸出物或總固體（1）可根據(jù)成方制劑中主要成分的理化性質(zhì)選擇合含量測定。

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首選制劑處方中的君藥、臣藥、起主要藥效作用的活性成分、類別成分或組分、貴細藥及毒性藥材中的有效成分、有毒成分測定成分的選定上述藥味的有效成分不明確或無專屬性方法進行測定時，可選擇其他藥味進行含量測定若處方中含有化學藥成分必須進行含量測定，并規(guī)定上下限含量測定。。首選制劑處方中的君藥、臣藥、起主要藥效作用的含量測定。

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盡可能建立多指標含量測定測定成分的選定或測定單一有效成分后再測定其類別成分總量，如總黃酮、總生物堿、總皂苷、總鞣質(zhì)等同一類別的成分或可相互轉(zhuǎn)化的成分可分別測定其單個成分的含量合并計算總量，如人參皂苷類、苦參堿和氧化苦參堿等HPLC的梯度洗脫，同一色譜條件同時測定多個成分含量測定。。盡可能建立多指標含量測定測定成分的選定或測定含量測定。

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成方制劑所測定的成分應盡量與藥材測定成分相對應測定成分的選定系列品種質(zhì)量標準的檢測方法及指標應盡可能統(tǒng)一測定成分應注意避免測定分解產(chǎn)物、不穩(wěn)定成分、非專屬性成分或微量成分含量測定。。成方制劑所測定的成分應盡量與藥材測定成分相對含量測定。

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根據(jù)成分性質(zhì)選擇專屬性、重現(xiàn)性、實用性好的方法如HPLC、GC等測定方法的選定檢測器的選擇，如蒸發(fā)光散射檢測器等檢測儀器的應用，擴大了紫外區(qū)無吸收成分的檢測范圍多指標含量測定一測多評方法以對照提取物為對照雙波長測定含量測定。。。根據(jù)成分性質(zhì)選擇專屬性、重現(xiàn)性、實用性好脫水穿心蓮對照品溶液色譜圖（254nm）消炎利膽片色譜圖（254nm）陰性樣品溶液色譜圖（254nm）穿心蓮對照品溶液色譜圖（225nm）消炎利膽片色譜圖（225nm）陰性樣品溶液色譜圖（225nm）消炎利膽片穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯雙波長的含量測定脫水穿心蓮對照品溶液色譜圖（254nm）消炎利膽片色譜圖（2含量測定。

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含量限度應根據(jù)中藥制劑實測結(jié)果與原料藥材的含量情況確定，至少應有15批以上樣品數(shù)據(jù)為依據(jù)含量限度確定檢測方法與藥典規(guī)定不同的或藥典藥材中無相應含量測定項的應提供至少3批以上的原料藥材含量數(shù)據(jù)，以便計算轉(zhuǎn)移率原粉入藥的轉(zhuǎn)移率一般要求在90%以上含量測定。。。。含量限度應根據(jù)中藥制劑實測結(jié)果與原料含量測定。

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有毒成分及中西藥復方制劑中化學藥品的含量應規(guī)定上下限含量限度確定上下限幅度應根據(jù)測試方法、品種情況、轉(zhuǎn)移率及標示量確定，一般應在±10%～±20%之間中藥注射液大類成分的含量限度也應規(guī)定上下限含量測定。。。有毒成分及中西藥復方制劑中化學藥品的含量規(guī)格應根據(jù)劑型、品種的特點和臨床用法與用量制定規(guī)范合理的規(guī)格，并提供相應依據(jù)片劑（糖衣片規(guī)定片芯重量）、膠囊劑、栓劑、合劑、注射劑、噴霧劑、氣霧劑等劑型應規(guī)定每個制劑單位的重（裝）量單劑量包裝的制劑應規(guī)定每個包裝單位的裝量。如顆粒劑、散劑、丸劑等以丸數(shù)服用的丸劑、滴丸劑應規(guī)定每丸或每10丸的重量單體成分或有效部位、組分制劑可規(guī)定每個制劑單位的標示含量規(guī)格應根據(jù)劑型、品種的特點和臨床用法與用量制定規(guī)范合理的規(guī)格中成藥標準制定技術(shù)要求1中藥提取純化技術(shù)要求2中藥分析方法驗證內(nèi)容3報告內(nèi)容中成藥標準制定技術(shù)要求1中藥提取純化技術(shù)要求2中藥分析方法驗二、中藥提取純化技術(shù)要求中藥提取純化方法是中藥分析方法的重要組成部分，是得到準確可靠分析結(jié)果的重要保證。以確保提取效率、準確性和耐用性符合要求中藥分析方法的建立應充分優(yōu)化供試樣品的提取、純化方法，最大程度富集待測成分，排除干擾二、中藥提取純化技術(shù)要求中藥提取純化方法是中藥分析方法的重要二、中藥提取純化技術(shù)要求中藥提取純化方法提取方法純化方法冷浸加熱回流索氏提取超聲提取水蒸氣蒸餾法液-液萃取柱色譜分離純化沉淀衍生化二、中藥提取純化技術(shù)要求中藥提取純化方法提取方法純化方法冷浸提取方法的選擇樣品的性狀待測成分的理化性質(zhì)不同工藝的不同待測成分的含量選擇3種提取方法平行試驗提取方法的選擇應根據(jù)提取方法的選擇樣品的性狀選擇3種提取方法的選擇應根據(jù)提取方法的選擇

檢測儀器的選擇檢測器的選擇檢測波長的選擇流動相或展開劑的選擇測定指標的選擇提取方法的選擇前應進行以下初步試驗選擇提取方法的選擇

檢測儀器的選擇提取方法的選擇前應進行以下初步提取方法的選擇提取方法加熱回流索氏提取超聲提取冷浸水蒸氣蒸餾法提取方法的選擇提取方法加熱回流提取條件的選擇加熱回流超聲提取冷浸溶劑種類溶劑用量提取時間提取次數(shù)索氏提取溶劑種類提取時間水蒸氣蒸餾法浸泡時間蒸餾時間提取條件的選擇加熱回流溶劑種類索氏提取溶劑種類水蒸氣蒸餾法浸提取條件的選擇選用3種有一定極性差的對待測成分溶解性好且較少溶解雜質(zhì)的溶劑提取水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醚、石油醚等，亦可選擇適當溶劑、適量比例混合溶劑種類提取條件的選擇選用3種有一定極性差的對待測成分溶解性好且較少

依次選用不同的溶劑量，從低到高，平行操作，最終選用待測成分含量不再增加的溶劑量溶劑用量提取條件的選擇依次選用不同的溶劑量，從低到高，平行操作，最終選用待測成分依次增加提取時間，最終選用待測成分含量不再增加的提取時間。至少3個時間提取時間提取次數(shù)依次增加提取次數(shù)，最終選用待測成分含量不再增加的提取次數(shù)提取條件的選擇依次增加提取時間，最終選用待測成分含量不再增加的提取時間。至提取條件的選擇對溫度和pH敏感的待測成分

平行試驗法正交試驗法還應考察溫度和pH值的影響比較方式提取條件的選擇對溫度和pH敏感的待測成分平行試驗法還應考察溫地黃藥材中麥角甾苷含量測定

提取方式的選擇提取方式相當于樣品的麥角甾苷峰面積超聲45min446加熱回流1.5h562索氏提取6h558結(jié)果表明對麥角甾苷的提取效率來說，加熱回流比超聲提取法要好，與索氏提取無顯著差異，由于索氏提取時間較長，考慮方法便捷性和效率，因此選用加熱回流作為地黃藥材中麥角甾苷的提取方法地黃藥材中麥角甾苷含量測定

提取方式的選擇提取方式相當于樣品地黃藥材中麥角甾苷含量測定

的提取溶劑的選擇提取溶劑相當于樣品的麥角甾苷峰面積水52050%甲醇616甲醇602結(jié)果表明，甲醇和50%甲醇提取率相差不大，T檢驗無顯著差異，考慮操作及溶劑回收方便，因此選用甲醇作為提取溶媒地黃藥材中麥角甾苷含量測定

的提取溶劑的選擇提取溶劑相當于樣地黃藥材中麥角甾苷含量測定

溶劑用量的選擇

提取溶劑用量（ml）相當于1g樣品的麥角甾苷峰面積2053250562100578結(jié)果表明，溶劑50倍量提取和溶劑100倍提取無顯著性差異，而顯著高于20倍量，因此選用甲醇50ml，作為最佳提取溶劑量。地黃藥材中麥角甾苷含量測定

溶劑用量的選擇提取溶劑用量（m地黃藥材中麥角甾苷含量測定

提取時間的選擇

提取時間（min）相當于1g樣品的麥角甾苷峰面積305346053090527結(jié)果表明，加入甲醇50ml，加熱回流提取30min，60min，90min時，對麥角甾苷的含量無顯著性差異，因此選擇提取時間為30min。地黃藥材中麥角甾苷含量測定

提取時間的選擇提取時間（min分離純化方法的選擇液-液萃取柱色譜分離純化沉淀純化方法分離純化方法的選擇液-液萃取純化方法液-液萃取法條件選擇液-液萃取法

萃取溶劑萃取的用量萃取的次數(shù)液-液萃取法條件選擇萃取溶劑萃取溶劑的選擇常被選用的溶劑有甲醇、乙醇、正丁醇等堿性條件下用三氯甲烷提取生物堿，乙酸乙酯可提取黃酮化合物，乙醚或石油醚可提取脂溶性化合物或揮發(fā)性成分石油醚可除去脂肪油等親脂性色素；預測成分溶解度的性質(zhì)，經(jīng)反復處理，使其轉(zhuǎn)溶于親脂性溶劑和親水性溶劑之間，以除去水溶性雜質(zhì)和脂溶性雜質(zhì)能與酸性染料或大分子酸形成離子對，能溶于有機溶劑的性質(zhì)，利用離子對的萃取與雜質(zhì)分開萃取溶劑的選擇常被選用的溶劑有甲醇、乙醇、正丁醇等預測成分溶固液萃取法條件選擇

柱色譜分離純化法固定相選擇洗脫劑選擇固定相的種類固定相的用量洗脫劑的種類洗脫劑的配比洗脫劑的用量洗脫順序固液萃取法條件選擇柱色譜分離純化法固定相選擇洗脫劑選擇固定固液萃取法條件選擇

氧化鋁、聚酰胺、大孔樹脂、離子交換樹脂、活性炭、硅烷化硅膠（C18、C8）、氨基鍵合相、硅膠等等

常用的固定相

柱容量考察成分的吸附與過載來確定固定相的用量固定相的用量或選用2種混合裝柱固液萃取法條件選擇氧化鋁、聚酰胺、大孔樹脂、離子交換樹脂、固液萃取法條件選擇

商品固相萃取柱不同品牌的提取效率批號的提取效率固液萃取法條件選擇商品固相萃取柱不同品牌的提取效率沉淀法不同沉淀試劑沉淀試劑用量沉淀法試劑使雜質(zhì)沉淀，保留溶液試劑使預測定成分沉淀，然后濾取沉淀，棄去濾液沉淀方式沉淀法不同沉淀試劑沉淀法試劑使雜質(zhì)沉淀，保留溶液沉淀方式提取方法聯(lián)用冷浸＋超聲處理加熱回流＋沉淀法提取方法聯(lián)用中成藥標準制定技術(shù)要求1中藥提取純化技術(shù)要求2中藥分析方法驗證內(nèi)容3報告內(nèi)容中成藥標準制定技術(shù)要求1中藥提取純化技術(shù)要求2中藥分析方法驗驗證項目鑒別試驗限量檢查殘留物、添加劑含量測定中藥制劑溶出度、釋放度指紋圖譜三、中藥分析方法驗證內(nèi)容驗證項目鑒別試驗三、中藥分析方法驗證內(nèi)容提取效率準確度精密度（重復性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性檢測限定量限線性范圍耐用性驗證內(nèi)容提取效率驗證內(nèi)容在建立中藥定量分析方法時應對提取效率進行考察，以保證中藥定量分析方法的準確。提取效率ExtractEfficiency提取效率系指用所建立的方法可將待測成分有效提取的程度，一般用確定的提取方法所得結(jié)果與增加提取次數(shù)等完全提取方法所得結(jié)果的相對偏差表示。在建立中藥定量分析方法時應對提取效率進行考察，以保證中藥定量提取方法類型完全提取法（索氏提取法、多次回流提取法等）平衡提取法（單次超聲提取、單次回流提取等）提取效率提取方法類型完全提取法（索氏提取法、多次回流提取法等）平衡提完全提取還應選擇1至2種比規(guī)定溶劑極性稍大的溶劑同法操作，將選定溶劑測得結(jié)果與考察溶劑測得結(jié)果進行比較，選定溶劑的提取效率不得少于95%。

提取效率完全提取應在規(guī)定的提取次數(shù)上增加1次至2次，測定結(jié)果與選定次數(shù)提取所得的含量值相比，相對偏差不得大于5%。完全提取還應選擇1至2種比規(guī)定溶劑極性稍大的溶劑同法操作，將木芙蓉葉蘆丁含量加熱回流提取效率的比較

回流次數(shù)2次3次相對平均偏差含量％0.850.871.2%比較了加熱回流2次和3次時的含量，及高極性溶劑以考察方法的提取效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)木芙蓉葉蘆丁含量用稀乙醇加熱回流2次法基本上可以將待測成分都提取出來

溶劑稀乙醇70%乙醇提取效率含量％0.850.8698.8%木芙蓉葉蘆丁含量加熱回流提取效率的比較回流次數(shù)2次3次相對平衡提取效率也可采用不同溶劑不同方法或多次提取的方法進行驗證。將選定方法測得結(jié)果與考察方法測得結(jié)果進行比較，選定方法的提取效率不得少于95%。

提取效率采用平衡提取法進行中藥分析時，可采用規(guī)定的溶劑提取后，藥渣再以相同體積的溶劑提取若干次，用適宜方法測定殘留量，與規(guī)定的方法測定結(jié)果相比，相對偏差應不大于5%平衡提取效率也可采用不同溶劑不同方法或多次提取的方法進行驗證養(yǎng)胃顆粒芍藥苷含量超聲提取效率的比較

批號超聲次數(shù)含量（mg/袋）相對平均偏差1011011次36.6---2次35.71.2%*3次35.71.2%*比較了超聲1次、2次和3次時的含量，以考察方法的提取效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥典采用的超聲1次法基本上可以將待測成分都提取出來

養(yǎng)胃顆粒芍藥苷含量超聲提取效率的比較批號超聲次數(shù)含量（mg

專屬性（Specificity）一種分析方法缺乏專屬性時，可由其他輔助的分析方法作補充。專屬性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正確測定出被測成分的特性。鑒別試驗、限量檢查、含量測定等方法均應考察其專屬性

專屬性（Specificity）一種分析方法缺乏專屬性時（a）黃連纖維束

（b）吳茱萸非腺毛左金丸顯微圖左金丸由黃連和吳茱萸兩味中藥組成，因黃連及吳茱萸均有石細胞，故分別用黃連纖維束與吳茱萸非腺毛的特征作為顯微鑒別（a）黃連纖維束（b）吳茱萸非腺毛左金丸顯微圖左金丸由黃連12345678910111.空白陰性2～6.供試品7.枳殼對照藥材（中檢所，121008-200505）8.柚皮苷對照品（中檢所，111730-200603）9－11供試品通樂顆粒中枳殼的薄層色譜鑒別

12345678婦樂顆粒大黃含測HPLC專屬性色譜圖大黃酚、大黃素對照品缺大黃空白樣品婦樂顆粒樣品婦樂顆粒大黃含測HPLC專屬性色譜圖大黃酚、大黃素對照品缺大專屬性驗證陰性干擾試驗色譜純度試驗易混淆試驗

專屬性（Specificity）專屬性驗證陰性干擾試驗專屬性（Specificity）如果處方中2味或2味以上藥味含同一化學成分需要鑒別或測定，則應分別配制不含各單一味藥及均不含這些藥味的溶液作為空白溶液。陰性干擾試驗

空白陰性樣品制備：取不含擬測定藥味的群藥，按照該藥品的制備工藝制成空白陰性樣品（注意加入全部輔料），再按擬定的樣品制備方法制成空白陰性樣品溶液薄層色譜法目測空白陰性樣品在與對照品相應的位置上應不出現(xiàn)相同顏色的斑點其它色譜法（GC/HPLC/TLCS）空白陰性樣品色譜圖在相應保留時間（或位置）處應無色譜峰，含量測定若有色譜峰出現(xiàn)，一般干擾峰面積應在供試品色譜峰面積5％以下如果處方中2味或2味以上藥味含同一化學成分需要鑒別或測定，則溶劑前沿T:13℃RH：65％Merck板（UV365nm）12345678 910111.缺味2—9.供試品10.何首烏對照藥材11大黃素對照品溶劑前沿T:13℃RH：65％Merck板（氨蒸氣熏后）12345678 91011通樂顆粒何首烏的薄層色譜專屬性圖溶劑前沿1234567缺補骨脂樣品HPLC圖腰痛片HPLC圖異補骨脂素HPLC圖補骨脂素HPLC圖腰痛片中補骨脂素與異補骨脂素專屬性試驗缺補骨脂樣品HPLC圖腰痛片異補骨脂素HPLC圖補骨脂素HP含量及限量須采用二極管陣列檢測器進行峰純度檢查，還可采用質(zhì)譜檢測對峰化學結(jié)構(gòu)進行確認。色譜純度試驗

應采用多個溶劑系統(tǒng)驗證其專屬性，一般可采用2-3個展開劑或流動相進行考察。薄層色譜法還可采用二維展開等技術(shù)考察色譜斑點純度。除需鑒別的成分外不得分離出其他色譜峰或色譜斑點。含量及限量須采用二極管陣列檢測器進行峰純度檢查，還可采用質(zhì)譜峰純度考察圖試驗中采用二極管陣列檢測器對樣品中待測色譜峰進行了色譜峰純度檢查，結(jié)果顯示1號色譜峰未檢測到雜質(zhì)，2號色譜峰檢測到雜質(zhì)峰純度考察圖試驗中采用二極管陣列檢測器對樣品中待測色譜峰進行對于多來源樣品或有類似組分可能影響判定的，必要時應采用適宜方法驗證其專屬性

易混淆試驗對于多來源樣品或有類似組分可能影響判定的，必要時應采用適宜方薏苡仁薄層色譜鑒別照片薏苡仁對照藥材

2、3、4薏苡仁樣品1234薏苡仁中淀粉粒顯微特征圖藥典薏苡仁有3個鑒別：1、顯微鑒別2、薄層鑒別3、指紋鑒別薏苡仁薄層色譜鑒別照片薏苡仁對照藥材1

薏苡仁油與不同油類指紋圖譜比較色譜圖橄欖油薏苡仁油大豆油薏苡仁油與不同油類指紋圖譜比較色譜圖橄欖油薏苡仁油大豆油94

薏苡仁油與不同油類指紋圖譜比較色譜圖麻油食用油鴉膽子油薏苡仁油不同油類與薏苡仁油指紋比較色譜圖（2）94薏苡仁油麻油食用油鴉膽子油薏苡仁油不同油類與薏苡仁線性（Linearity）

線性系指在設計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與供試品中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

線性（Linearity）線性系指在設計的范圍內(nèi)，測試結(jié)線性試驗方法制備梯度濃度對照品溶液，以相同體積點樣或進樣測定峰面積值，制備標準曲線，并以峰面積值與對照品濃度（或量）作線性回歸，計算線性方程和相關(guān)系數(shù)。線性測定的濃度一般最好達到10倍以上，其最低濃度可約為定量限濃度，至少制備5個濃度的供試品。2.制備同一濃度的對照品溶液，以不同體積點樣或進樣測定，同法處理。線性試驗方法制備梯度濃度對照品溶液，以相同體積點樣或進樣測定相關(guān)系數(shù)：HPLC-UV、GC：R＞0.995，HPLC-ELSD：R＞0.990；TLCS：R＞0.99線性數(shù)據(jù)要求：

應列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖相關(guān)系數(shù)：線性數(shù)據(jù)要求：范圍（Range）范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

考察的區(qū)間應盡可能覆蓋日后樣品可能的含量范圍.范圍（Range）范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測以標示量規(guī)定含量限度的，應考察標示含量80%和120%的范圍范圍對于僅規(guī)定含量下限的，至少應在限度的50%和150%進行考察。對于規(guī)定含量區(qū)間的，應在低限含量的8050%和高限含量的120150%進行考察以標示量規(guī)定含量限度的，應考察標示含量80%和120%的范圍范圍范圍可結(jié)合回收率試驗進行,具體試驗方法可以在回收率測定的高限和低限至少平行測定3-6份，分別計算回收率和精密度，應符合規(guī)定。試驗方法有含量上下限的，應同時進行重復性和準確度考察范圍還可結(jié)合重復性試驗進行，至少應進行3個濃度9份樣品的試驗，應符合規(guī)定。范圍范圍可結(jié)合回收率試驗進行,具體試驗方法可以在回收率測范圍驗證試驗過程中除取樣量和進樣量可改變外，一般不得改動實驗操作中的規(guī)定如溶劑體積、提取時間、萃取次數(shù)等。

如實驗結(jié)果證明的范圍區(qū)間不合適，應根據(jù)樣品情況改變考察區(qū)間或改變標準中樣品的前處理條件，并經(jīng)驗證，使適合日后樣品可能的含量范圍。范圍驗證試驗過程中除取樣量和進樣量可改變外，一般不得改動金蚧片淫羊藿苷含量范圍試驗取樣量(g)樣品含量(mg)加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0.18950.81860.83621.637097.999.21.050.18770.81090.83621.640499.20.18740.80960.83621.6525100.80.18760.81040.83621.634298.51.16375.02704.95009.932499.199.30.951.13634.90874.95009.8686100.21.15314.98144.95009.852498.41.15924.98144.95009.852497.91.15354.98324.95009.918499.71.14244.93524.95009.9100100.5按限度的50%和300％考察測定范圍的準確度．結(jié)果表明，本法在限度濃度50%～300%范圍內(nèi)能夠準確測定金蚧片淫羊藿苷含量范圍試驗取樣量樣品含量加入量測得量回收率平

精密度（Precision）

精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度(離散程度)

精密度

重復性(Repeatability)

中間精密度(Intermediateprecision)

重現(xiàn)性(Reproducibility)

精密度（Precision）精密度系指在規(guī)定的測試條精密度（Precision）取同一供試品溶液，在同一薄層板上點6-12個相同量的斑點,依法測定，測板內(nèi)峰面積積分值的RSD取同一供試品溶液，在不同的6塊薄層板上點相同量的斑點，依法測定，測異板峰面積積分值的RSD同板精密度試驗異板精密度試驗

薄層掃描（TLCS）應進行以下試驗試驗方法精密度（Precision）取同一供試品溶液，在同一薄層板上重復性(Repeatability)

重復性:在相同操作條件下，由同一個分析人員在較短的間隔時間內(nèi)測定所得結(jié)果的精密度重復性(Repeatability)重復性:在相同操作條重復性(Repeatability)在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個測定結(jié)果進行評價；或設計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液進行測定，用9個測定結(jié)果進行評價。其中間濃度一般為供試品的取樣量，其它2個濃度至少為測定濃度的50%和150%，如含量限度以標示量表示的，須用9個測定結(jié)果進行評價，分別以標示量的80％、100％和120％的濃度進行測定。

試驗方法重復性(Repeatability)在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度一般應滿足以下規(guī)定相對標準偏差(RSD%)：HPLC、GC＜3%TLCS、HPLC-ELSD＜5%重復性(Repeatability)測定數(shù)據(jù)的精度要求一般應滿足以下規(guī)定重復性(Repeatability)測定數(shù)重復性(Repeatability)生丹顆粒中補骨脂素測定－重復性1取樣量（mg）補骨脂素量（mg）含量

(mg/g）含量平均值(mg/g）平均值(mg/g）含量（mg/袋）RSD（％）5.00540.31150.062230.063350.063250.6320.370.32270.064475.00660.31890.063700.062980.31170.062265.01440.31790.063400.063480.31870.063565.00660.31770.063460.063480.31790.063505.00380.31570.063090.063270.31750.063455.01450.31660.063140.062950.31470.06276重復性(Repeatability)生丹顆粒中補骨脂素測定－生丹顆粒中補骨脂素測定－重復性2取樣量（mg）補骨脂素量（mg）含量

(mg/g）含量平均值(mg/g）平均值(mg/g）含量（mg/袋）RSD（％）2.50780.15090.060170.060030.061860.6192.820.15020.059892.50420.14720.058780.058700.14680.058622.50260.15140.060500.06046

0.15120.060425.00540.31150.062230.063350.32270.064475.00660.31890.063700.062980.31170.062265.01440.31790.063400.063480.31870.063567.50200.45700.060920.061630.46770.062347.5024

0.47480.063290.062840.46810.062397.51020.48080.064020.063260.46950.06251生丹顆粒中補骨脂素測定－重復性2取樣量（mg）補骨脂素量（m生丹顆粒中補骨脂素測定︱重復性3取樣量（mg）補骨脂素量（mg）含量

(mg/g）含量平均值(mg/g）平均值(mg/g）含量（mg/袋）RSD（％）1.25710.07810.062130.062010.064530.645

4.000.07780.06189

1.25000.07820.062560.062080.07700.06160

1.25940.08050.063920.063880.08040.063845.00540.31150.062230.063350.32270.064475.00660.31890.063700.062980.31170.062265.01440.31790.063400.063480.31870.06356

12.46280.83090.066670.067830.85980.06899

12.64540.84530.066850.065860.82030.06487

12.42530.84770.068220.069330.87520.07044生取樣量（mg）補骨脂素量（mg）含量含量平均值含量RSD（3種重復性試驗方法比較評價方法補骨脂素含量（mg/g）RSD（%）6份0.063250.379份0.061862.829份0.064534.00AVERAGE（mg/g）0.06321RSD（%）2.11結(jié)果表明九份不同濃度的RSD高于六份同濃度的RSD。3種重復性試驗方法比較評價方法補骨脂素含量（mg/g）RS重復性(Repeatability)同板重復性板間重復性薄層掃描（TLCS）重復性重復性(Repeatability)同板重復性薄層掃描（T中間精密度(Intermediateprecision)考察的目的：考察隨機變動因素對精密度的影響考察的變動因素:不同時間不同分析人員不同設備至少2-3人采用同一設備或同一人采用2-3臺不同設備，對同一批樣品測定含量。計算不同操作者或不同設備測定的含量平均值和相對標準偏差。不能僅考察不同分析時間的測定結(jié)果。

有重現(xiàn)性考察的，可以免做中間精密度。在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員,用不同設備測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度。中間精密度(Intermediateprecision)考重現(xiàn)性(Reproducibility)重現(xiàn)性系指在不同實驗室由不同分析人員、不同設備測定結(jié)果之間的精密度

目前階段，該項試驗可采用起草和復核試驗的測定數(shù)據(jù)進行評價。但應由起草單位根據(jù)復核所的復核數(shù)據(jù)，報送兩個實驗室之間的相對標準偏差?？疾斓哪康模寒敺治龇椒▽⒈环ǘ藴什捎脮r，應進行重現(xiàn)性試驗重現(xiàn)性(Reproducibility)重現(xiàn)性系指在不同實驗起草單位與復核實驗室的數(shù)據(jù)計算相對偏差，一般不得過10%。如采用薄層掃描法，可適當放寬為不得過15%若前處理方法操作復雜或含量極低可視情況適當放寬。

重現(xiàn)性建立的分析方法至少要有一家不同的實驗室進行復核起草單位與復核實驗室的數(shù)據(jù)計算相對偏差，一般不得過10%。重**市藥品檢驗所***省藥品檢驗所批號芍藥苷含量（mg/丸）芍藥苷含量（mg/丸）相對平均偏差（％）712164213.014.03.70712224712.513.12.34812534410.310.92.83812534511.312.13.42參芍片的芍藥苷含量測定重現(xiàn)性結(jié)果**市藥品***省藥品批號芍藥苷含量（mg/丸）芍藥苷含量相準確度(Accuracy)系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，有時也稱真實度，一般用回收率(%)表示。

以加入對照品測定的回收率表示，一般有空白回收（制劑空白）和加樣回收測定的方法（中藥材、復方制劑等）以經(jīng)典方法的測定值作為真值，建立方法的測定數(shù)據(jù)與之比較（該法適用于化學單體藥物）準確度(Accuracy)系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參準確度(Accuracy)在加樣回收試驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標準曲線線性范圍之內(nèi)；加入的對照品的量要適當，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差回收率%=（C-A）/B×100%

式中A為供試品所含被測成分量；

B為加入對照品量；

C為實測值。準確度(Accuracy)在加樣回收試驗中須注意對照品的加入準確度(Accuracy)同一樣品，制備相同濃度的6份樣品（樣品取樣量減半，以1：1比例加入對照品）試驗方法同一樣品，制備3個濃度的供試品，每個濃度分別制備3份供試液，對照品的加入有以下3種方式：準確度(Accuracy)同一樣品，制備相同濃度的6份樣品（準確度(Accuracy)取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），設計3個濃度，按不同比例加入對照品。中間濃度一般按1：1比例加入，低、高濃度可選0.5：1、1.5：1的比例。加入的對照品的量要適當，保證供試品溶液的濃度（或量）在考察的線性范圍內(nèi)。按標示量計算的組分，可參照化學藥品測定方法，取9份樣品，按0.8：1、1：1、1：1.2的比例加入對照品（樣品取樣量減半）取3個不同量的樣品各3份，每個取樣量分別按1：1比例加入對照品，中間取樣量為供試品減半的量，其他高低濃度至少為所取樣品含量的50%和150%，也可以選擇范圍的最高、最低點進行測定。準確度(Accuracy)取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量準確度(Accuracy)

供試品取樣量樣品中待測成分含有量對照品加入量測定量回收率計算值（%）相對標準偏差（RSD%）

報告的數(shù)據(jù)準確度(Accuracy)供試品取樣量報告的數(shù)據(jù)痕量分析含量<0.01%回收率70%-130%微量分析含量0.01%-1%回收率90%-110%常量分析含量>1%回收率95%-105%回收率具體要求視樣品含量范圍不同而定準確度(Accuracy)痕量分析回收率70%-130%微量分析回收率90%-110準確度(Accuracy)一般應滿足以下規(guī)定相對標準偏差（RSD%）HPLC/GC＜3%

TLCS＜5%，

測定數(shù)據(jù)的精度要求：準確度(Accuracy)一般應滿足以下規(guī)定TLCS＜5%感冒清熱顆粒中葛根素含量測定－回收率1編號樣品含量(ug)加入葛根素的量(mg)測得葛根素總量回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)18819301853104.5297.223.712877178597.633875176495.594884176794.955883177395.76878176194.95感冒清熱顆粒中葛根素含量測定－回收率1編號樣品含量(ug)加準確度(Accuracy)感冒清熱顆粒中葛根素含量測定－回收率2編號樣品含量(ug)加入葛根素的量(mg)測得葛根素總量回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)1881

1853104.52

2877

930178597.6399.25

4.71

3875176495.597881

134198.92

8882465134098.4997.71.799883

132895.7

10885

224097.13

118841395225498.2197.510.6212881

223797.2

將序號1-3,7-12進行統(tǒng)計分析，結(jié)果平均回收率為98.15，RSD=2.65%。準確度(Accuracy)感冒清熱顆粒中葛根素含量測定－回收準確度(Accuracy)感冒清熱顆粒中葛根素含量測定－回收率3編號樣品含量(ug)加入葛根素的量(mg)測得葛根素總量回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)1881

1853104.52

2877930

178597.6399.25

4.71

3875176495.5913228

45396.98

1422823245396.9897.991.7815229

461100

161322

265695.63

1713211395264094.5595.030.58181319

264394.91

將序號1-3，13-18進行統(tǒng)計分析，結(jié)果平均回收率為97.42，RSD=3.13%。準確度(Accuracy)感冒清熱顆粒中葛根素含量測定－回收3種回收率試驗方法比較1、同量同加

2、同量異加

3、異量同加3種回收率試驗方法比較1、同量同加

2、同量異加

3、異量同檢測限

（LimitofDetection，LOD)

檢測限系指供試品中被測物能被檢測出的最低量。

試驗方法：直觀法儀器法（信噪比法）檢測限

（LimitofDetection，LOD)檢測限試驗方法1、目測法

主要用于非儀器方法。采用直接觀察理化反應的顏色、濁度，薄層色譜的斑點顏色、熒光強度等方法，判斷方法的檢出限量。理化反應

采用被測物或已知被測物含量的樣品，配制一系列低濃度溶液，按擬定方法試驗，以目測可明顯觀測到的顏色或濁度樣品的濃度或量作為檢出限。薄層色譜法

采用被測物質(zhì)的對照品，或已知被測物含量的樣品，配制成一系列低濃度溶液，按擬定的方法試驗，目測比較斑點顏色或熒光強度等，以目測可明顯觀測到斑點的濃度或量作為檢出限。檢測限試驗方法1、目測法主要用于非儀器方法。采用直接觀2、信噪比法

適用于能顯示基線噪音的分析方法，主要為各種色譜法等儀器方法。檢測限試驗方法可采用被測物質(zhì)的對照品，或已知被測物含量的樣品，配制成一系列低濃度溶液，按擬定的方法試驗，記錄上述樣品和空白樣品的基線噪音，并進行比較。以樣品峰高高度明顯大于3倍或2倍空白樣品基線高度的相應濃度（或量）作為檢出限。2、信噪比法適用于能顯示基線噪音的分析方法，主要為各種定量限

（LimitofQuantitative,LOQ）

定量限系指供試品中被測成分能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應具一定準確度和精密度。

一般以10倍于噪音的對照品溶液重復點樣或進樣5-6次，計算重復點樣或進樣的峰面積值的RSD%。當RSD%＜3%（薄層掃描法）或＜2%（高效液相色譜法/氣相色譜法）的濃度（或量）為方法的定量限。若RSD%較大，應重新調(diào)整對照品溶液的濃度，進行測定。試驗方法定量限

（LimitofQuantitative,LO

耐用性（Robustness）耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)開始研究分析方法時，就應考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應在方法中寫明經(jīng)試驗，應說明小的變動能否通過設計的系統(tǒng)適用性試驗，以確保方法有效

耐用性（Robustness）耐用性系指在測定條件有小的

耐用性

HPLC、GC

溶液的穩(wěn)定性

：一般應在配制后0～24小時內(nèi)選擇6個時間點進樣。

峰面積相對標準偏差RSD≤3%

穩(wěn)定性試驗耐用性

HPLC、GC穩(wěn)定性試驗

TLCS斑點的穩(wěn)定性：顯色之后0～4小時之內(nèi)4～6個時間點掃描斑點的峰面積

相對標準偏差RSD≤5%溶液的穩(wěn)定性：對照品和供試品溶液配制后0～24小時內(nèi)選擇6個時間點

相對標準偏差RSD≤5%耐用性穩(wěn)定性試驗TLCS耐用性穩(wěn)定性試驗時間峰面積平均峰面積RSD(%)0602.43181h603.63102h606.76733.5h609.8906607.74640.617h608.755114h609.792420h612.9564健胃片穩(wěn)定性試驗測定結(jié)果時間峰面積平均峰面積RSD(%)0602.43181h603分離純化的耐用性

固液萃取法：應考察至少2～3個品牌或廠家的柱填料或固相萃取小柱的適用性，考察樣品分離純化的效果，其測定結(jié)果應無顯著差異。分離純化的耐用性

固液萃取法：

不同品牌C18小柱相似度比較結(jié)果

序號生產(chǎn)公司型號相似度1Phenomenex公司strataC18－E1.0002Agilent公司BondIIODSC181.0003天津開發(fā)區(qū)富集色譜技術(shù)發(fā)展公司BondEluteC18樣品凈化柱0.9994瓦里安公司BondElut-C181.0005Alltech公司Extract-cleancolumnsC181.000比較結(jié)果認為：五種小柱的提取液的指紋圖譜一致，說明該固相萃取條件適用強不同品牌C18小柱相似度比較結(jié)果序號生產(chǎn)公司型號相似度1不同批號固相萃取小柱處理結(jié)果

C18小柱批號1號峰2號峰3號峰4號峰5號峰6號峰7號峰8號峰9號峰峰面積百分比S201-91.452.0824.243.5948.644.363.635.956.12S201-261.522.1824.153.7448.154.483.675.976.12相對平均偏差（％）2.4%2.3%0.2%2.0%0.5%1.4%0.5%0.2%0.0%結(jié)果顯示兩批固相萃取小柱有較好的重現(xiàn)性，其相似度均為1.000。不同批號固相萃取小柱處理結(jié)果C18小柱批號1號峰2號峰3耐用性（薄層色譜法）采用擬定的色譜條件，考察至少2～3個品牌或廠家的薄層板，對須鑒別成分斑點和雜質(zhì)斑點的分離效果薄層板的考察

固定一種品牌的薄層板，在低相對濕度（RH）15~30％和高相對濕度75~90％各考察1個相對濕度，需鑒別成分斑點和雜質(zhì)斑點的分離效果。固定一種品牌的薄層板，在5℃~35℃考察高低2個溫度，需鑒別成分斑點和雜質(zhì)斑點的分離效果。溫度考察

濕度考察

耐用性（薄層色譜法）采用擬定的色譜條件，考察至少2～3個品牌延胡索薄層色譜不同薄層板比較

硅膠預制薄層板（TLCpre-coatedplateSILG-25，MN批號：412351用1％氫氧化鈉溶液浸漬改性硅膠預制薄層板（煙臺市化學工業(yè)研究所生產(chǎn)日期：2004年12月31日用1％氫氧化鈉溶液浸漬改性）

高效硅膠預制薄層板（煙臺市化學工業(yè)研究所生產(chǎn)日期：2005年1月21日用1％氫氧化鈉溶液浸漬改性）

延胡索薄層色譜不同薄層板比較硅膠預制薄層板（TLCpre煙臺板mn板青島板感冒清熱顆粒柴胡薄層鑒別不同薄層板比較煙臺板mn板青島板感冒清熱顆粒柴胡薄層鑒別不同薄層板比較高濕RH:80%、20℃低溫5℃、RH:60%RH:60%、20℃感冒清熱顆粒柴胡薄層鑒別不同溫濕度比較高濕RH:80%、低溫5℃、RH:60%RH:60%、20耐用性（液相色譜法）至少考察3支不同品牌的色譜柱，含量測定結(jié)果RSD不得大于5%。如有可能，應考察同一品牌至少3個批次的色譜柱的分離效果，結(jié)果RSD不得大于3%?？疾煸谒_定pH值附近至少相差0.1－0.5的變化對分析效果的影響，說明pH值變化對分析的影響趨勢和程度流動相pH值的考察

不同色譜柱的考察

耐用性（液相色譜法）至少考察3支不同品牌的色譜柱，含量測定結(jié)不同色譜柱

的考察

AgilentExtendC18色譜柱ShimpackVP-ODS色譜柱AlltechC18色譜柱Discovery?C18色譜柱Dikma-C18色譜柱比較5根不同品牌C18柱：均能較好地分離主要色譜峰，不同色譜柱

的考察AgilentExtendC18色譜不同酸度對色

譜的影響考察

乙腈－0.02%磷酸溶液乙腈－0.03%磷酸溶液乙腈－0.04%磷酸溶液乙腈－0.0265%磷酸溶液不同酸度對色

譜的影響考察乙腈－0.02%磷酸溶液乙腈－0耐用性（液相色譜法）流動相的組成比例的變化柱溫流速檢測波長樣品溶液穩(wěn)定性耐用性（液相色譜法）流動相的組成比例的變化20℃25℃30℃35℃40℃不同柱溫對色譜分離和保留時間有影響。以30℃時，分離度最佳，故選擇柱溫為30℃不同柱溫的考察

20℃25℃30℃35℃40℃不同柱溫對色譜分離和保留時間有0.7ml/min0.8ml/min0.9ml/min1.0ml/min不同流速對分離度和保留時間有影響，流速為0.7～0.8

ml/min時均能有較好的分離能力。不同流速的考察

0.7ml/min0.8ml/min0.9ml/min1.0典型的變動因素（氣相色譜法）不同品牌或批號的色譜柱不同氣體流速的比較不同的初始溫度的比較不同升溫速度的比較不同進樣口溫度的比較不同檢測器溫度的比較若采用分流進樣的，可考察分流比對測定結(jié)果的影響頂空進樣的，可考察平衡的時間及溫度對測定結(jié)果的影響。分別進樣3-5針，計算含量，相對標準偏差（RSD）不得大于5%。典型的變動因素（氣相色譜法）不同品牌或批號的色譜柱150含量測定結(jié)果的精密度要求測定方法相對平均偏差（%）容量法不得大于2氮測定法不得大于3紫外-可見分光光度法對照品比較法不得大于2比色法不得大于3薄層色譜掃描法不得大于5高效液相色譜法不得大于2蒸發(fā)光散射檢測不得大于5氣相色譜法不得大于2150含量測定結(jié)果的精密度要求測定方法相對平均偏差（%）容量需驗證的分析方法類型

①已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間精密度。

②重現(xiàn)性只有在該分析方法將被法定標準采用時做。

③如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補充。需驗證的分析方法類型①已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間精密度。ThankYou!ThankYou!中成藥質(zhì)量標準研究制定技術(shù)要求中成藥質(zhì)量標準研究制定技術(shù)要求中成藥標準制定技術(shù)要求1中藥提取純化技術(shù)要求2中藥分析方法驗證內(nèi)容3報告內(nèi)容中成藥標準制定技術(shù)要求1中藥提取純化技術(shù)要求2中藥分析方法驗一、中成藥標準制定技術(shù)要求原則保證用藥安全科學、先進、規(guī)范、實用

繼承、發(fā)展、創(chuàng)新促進標準國際化一、中成藥標準制定技術(shù)要求原則保證用藥安全科學、先進、規(guī)范、方法學驗證中藥質(zhì)量標準方法學驗證指導原則（中國藥典2010年版一部）一、中成藥標準制定技術(shù)要求中藥標準制定《國家藥品標準》（第四版）中藥質(zhì)量標準研究制定技術(shù)要求一、中成藥標準制定技術(shù)要求中藥標準制定供起草用樣品的要求

研究用樣品應具有代表性，覆蓋面要廣，一般至少應收集15批以上樣品供研究用；

獨家生產(chǎn)的應不少于10批，多家企業(yè)生產(chǎn)的應盡量收集每家企業(yè)的樣品,5家以上企業(yè)生產(chǎn)的應至少收集5～10家企業(yè)生產(chǎn)的樣品樣品量除滿足起草研究、留樣觀察外，還應有不少于3倍檢驗量的樣品供復核用；供起草用樣品的要求研究用樣品應具有代表性，覆蓋面要廣，供起草用樣品的要求

對于具有多種不同規(guī)格的品種，應收齊全部規(guī)格的樣品試驗用樣品必須采用合格原輔料依法生產(chǎn)的樣品，收集的每批樣品均要有該企業(yè)的原輔料和成品的自檢報告及詳細生產(chǎn)工藝。注意供起草用樣品的要求對于具有多種不同規(guī)格的品種，應收齊全部規(guī)陰性樣品系指按處方除去被測定的