醫(yī)學檢驗本科班分子生物學檢驗技術試卷

醫(yī)學檢驗本科班分子生物學檢驗技術試卷醫(yī)學檢驗本科班分子生物學檢驗技術試卷醫(yī)學檢驗本科班分子生物學檢驗技術試卷資料僅供參考文件編號：2022年4月醫(yī)學檢驗本科班分子生物學檢驗技術試卷版本號：A修改號：1頁次：1.0審核：批準:發(fā)布日期：醫(yī)學檢驗本班《分子生物學檢驗技術》試卷選擇題（在備選答案中選擇一個最佳答案,每題2分,共20分）:1.在核酸提取時,常需要使用氯化鈉,醋酸鈉等鹽溶液,真正的目的是（）A.中和核酸的負離子,使其易于沉淀B.調(diào)節(jié)PH值C.保持核算的完整性D.提高核酸的濃度E.無特定目的2.在一個DNA分子中,如G所占摩爾比為%,則A所占摩爾比為（）A.%B.%C.%D.%E.無法計算3.下列那項不是擴增反應所必需的（）A.引物和模板B.dNTPC.Mg++D.DNaseE.緩沖液4.下列那項是分子生物學技術形成的理論基礎（）A.基因結(jié)構(gòu)與功能的關系B.基因結(jié)構(gòu)變異與疾病的關系C.病原微生物的基因結(jié)構(gòu)特征D.基因的表達.調(diào)控與疾病的關系E.以上皆是5.分子生物學檢驗技術主要包括那些技術（）A.核酸分子雜交技術B.DNA測序技術C.PCR技術D.DNA重組技術E.以上全是6.下列哪項檢測需應用分子生物學檢驗技術（）A.肝功能檢測B.乙肝兩對半檢測C.乙肝病毒DNA(HBV-DNA)檢測D.腫瘤細胞培養(yǎng)E.病原微生物培養(yǎng)7.在核酸的分離純化過程中,為保證其一級結(jié)構(gòu)的完整性,應采?。ǎ〢.盡量簡化分離步驟,縮短提取時間B.適當延長提取時間C.在37攝氏度條件下進行D.加入Mg++,Ca++等二價金屬離子E.以上全是8.有一核酸樣品,測得A260/A280=,請問該樣品屬于哪類核酸樣品（）A.DNAB.RNAC.是DNA,但有蛋白質(zhì)污染D.是RNA,但有蛋白質(zhì)污染E.DNA和RNA9.在RNA提取和純化過程中,為避免Rnase污染而導致RNA的降解,應采?。ǎ〢.在潔凈的實驗室里操作B.帶手套和口罩C.所用器材高壓消毒或DEPC處理D.冰浴下操作E.以上皆是10.隨機引物標記法全程標記DNA時,需選用下列哪種酶（）A.DNA多聚酶I的Kelnow片段B.TaqDNA聚合酶C.限制性內(nèi)切酶D.DNA連接酶E.末端轉(zhuǎn)移酶判斷題：(你認為下列敘述正確的請在題后括號內(nèi)打√,錯誤的打×，每題2分,共6分)1.雙脫氧核酸鏈終止法是最常用的DNA測序技術（）2.TapDNA聚合酶的作用是催化DNA合成，但由于缺乏3’→53.采用加熱煮沸法可使RNase完全失活（）三：填空題(每空格2分,共24分):1.在選擇核酸的分離純化方法，應遵循的總原則是：一是保證核酸（一級結(jié)構(gòu)的完整性）；二是盡可能（排除其他分子的污染，保證核酸樣品的純度）。2.在PCR反應中，Mg++是個至關重要的因素，濃度（過低）會降低酶的活性，濃度（過高）又會導致非特異性擴增。3.用于核酸雜交的普通硝酸纖維素膜最大的優(yōu)點是（本底低），因而最容易檢測雜交信號，缺點是（脆性大）易破裂，且隊＜５００bp的核酸結(jié)合力低。4．整個核酸雜交反應主要由（預雜交）、（雜交）和（洗脫）三個步驟組成。5.轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或尼龍膜上的核酸，其與濾膜的結(jié)合是松散的，需做進一步的固定，常用的固定方法是（烘烤）、（紫外線固定）和（堿固定）。名詞解釋：(每題4分,共20分):1.融點曲線分析技術：是根據(jù)野生型序列和突變序列因不同Tm而產(chǎn)生不同的融點曲線而設計的。2.探針:指所有能與特定的靶分子發(fā)生特異性的相互作用，并可以被檢測的分子。3.Tm值：DNA熔解溫度，指把DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)降解一半時的溫度。4.轉(zhuǎn)染:將外源DNA直接導入真核生物細胞的過程稱為轉(zhuǎn)染。5.轉(zhuǎn)化:將重組的DNA分子導入細菌，使其在細菌體內(nèi)擴增及表達的過程稱為轉(zhuǎn)化。問答題:（每題10分，共30分）1.簡述限制性內(nèi)切酶的定義、命名原則和分類。答：定義：限制性內(nèi)切酶是能識別和水解雙鏈DNA分子內(nèi)特異序列的核酸水解酶類。命名：通常由3個斜體字母表示，第1個大寫字母為來源微生物的屬名第1個字母，第2、第3個小寫子母取微生物種名的頭兩個字母。分類：根據(jù)酶分子組成及裂解方式的不同，將限制性內(nèi)切酶分3類，Ⅰ類和Ⅲ類限制性內(nèi)切酶在同一酶分子中兼有修飾（甲基化）作用和依賴于ATP的限制水解活性，Ⅱ類限制性內(nèi)切酶能識別并水解特異性的核苷酸序列是DNA重組技術中最重要的工具。2.PCR引物的設計應遵循哪些原則。答：1.用于PCR反應的引物需要兩條，分別設在被擴增目的的片段的兩端，并分別與模版正負鏈序列互補。2.引物的長度一般以18-25個核苷酸為宜，引物過長容易產(chǎn)生寡核苷酸的鏈內(nèi)互補，形成發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)，影響引物和模板之間的互補。3.兩條引物之間尤其在3’端的序列不能有互補，以免形成引物二聚體。4.引物的堿基組成應平衡，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積。擴增中的退火溫度是根據(jù)引物的Tm值而決定的，兩條引物的Tm值不能差太大。6.根據(jù)需要，可在合成引物時于其5’端加修飾成分。3.試述實時熒光PCR水解探針法的實驗原理？

答：原理：PCR反應體系中除有兩條引物外還需要一條熒光素標記的探針。探針的5’端和3’端分別標記熒光報告基團R和熒光淬滅基團Q，當探針完整時R基團與Q基團分別位于探針的兩端，Q基團抑制R