免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件

免疫共沉淀(co|P)研究蛋白質(zhì)間相互作用的技術(shù)05級生化專業(yè):毛赟赟免疫共沉淀(co|P)1蛋白質(zhì)相互作用的類型有牢固型互作和暫時型互作兩種?；プ髁瓤梢詮?也可以弱牢固型互作以多亞基蛋白復(fù)合體常見,最好通過免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)、Pull-down或Far-western法研究令暫時型蛋白質(zhì)相互作用,被認(rèn)為是涉及到胞內(nèi)大部分生物過程,包括蛋白修飾、轉(zhuǎn)運、折疊、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞周期等,屬于開/閉性質(zhì),可以通過交聯(lián)或標(biāo)記轉(zhuǎn)移法來研究。胞內(nèi)研究蛋白質(zhì)互作的方法除上述方法外,還有蛋白芯片、核磁共振、質(zhì)譜、Ⅹ射線晶體衍射等蛋白質(zhì)相互作用的類型有牢固型互作和暫時型互作21Co-P的原理當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時,完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)Ⅹ的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。1Co-P的原理3裂解細(xì)胞和免疫共沉淀蛋白質(zhì)X復(fù)合物1復(fù)合物2復(fù)合物3免疫共沉淀檢測蛋白質(zhì)的原理和常見問題裂解細(xì)胞和免疫共沉淀蛋白質(zhì)X42方法1)收獲培養(yǎng)的細(xì)胞(1×107-1×108)冷PBS洗滌2次細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,冰浴30min冷2)將每毫升細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中,在微量離心機上4℃以最大速度離心15min3)收集上清(約30m),并加入30μg的適當(dāng)抗體,4℃搖動免疫沉淀物1h2方法5免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件6免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件7免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件8免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件9免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件10免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件11免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件12免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件13免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件14免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件15免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件16免疫共沉淀(co|P)研究蛋白質(zhì)間相互作用的技術(shù)05級生化專業(yè):毛赟赟免疫共沉淀(co|P)17蛋白質(zhì)相互作用的類型有牢固型互作和暫時型互作兩種?；プ髁瓤梢詮?也可以弱牢固型互作以多亞基蛋白復(fù)合體常見,最好通過免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)、Pull-down或Far-western法研究令暫時型蛋白質(zhì)相互作用,被認(rèn)為是涉及到胞內(nèi)大部分生物過程,包括蛋白修飾、轉(zhuǎn)運、折疊、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞周期等,屬于開/閉性質(zhì),可以通過交聯(lián)或標(biāo)記轉(zhuǎn)移法來研究。胞內(nèi)研究蛋白質(zhì)互作的方法除上述方法外,還有蛋白芯片、核磁共振、質(zhì)譜、Ⅹ射線晶體衍射等蛋白質(zhì)相互作用的類型有牢固型互作和暫時型互作181Co-P的原理當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時,完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)Ⅹ的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。1Co-P的原理19裂解細(xì)胞和免疫共沉淀蛋白質(zhì)X復(fù)合物1復(fù)合物2復(fù)合物3免疫共沉淀檢測蛋白質(zhì)的原理和常見問題裂解細(xì)胞和免疫共沉淀蛋白質(zhì)X202方法1)收獲培養(yǎng)的細(xì)胞(1×107-1×108)冷PBS洗滌2次細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,冰浴30min冷2)將每毫升細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中,在微量離心機上4℃以最大速度離心15min3)收集上清(約30m),并加入30μg的適當(dāng)抗體,4℃搖動免疫沉淀物1h2方法21免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件22免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件23免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件24免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件25免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件26免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件27免疫共沉淀研究蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)課件28免疫共