地中海貧血基因檢測和結(jié)果分析課件

地中海貧血的實(shí)驗(yàn)室檢測和結(jié)果分析精選ppt1地中海貧血的實(shí)驗(yàn)室檢測和結(jié)果分析精選ppt1主要內(nèi)容一、什么是地中海貧血及分布二、地中海貧血的致病機(jī)制三、地中海貧血的基因診斷四、最新的地中海貧血檢測方法五、檢測結(jié)果分析及報(bào)告精選ppt2主要內(nèi)容一、什么是地中海貧血及分布精選ppt2一、什么是地中海貧血定義：由于珠蛋白基因發(fā)生缺陷，致使珠蛋白肽鏈合成減少或缺失，導(dǎo)致血紅蛋白的α鏈/非α鏈比例失衡，而引起的一組遺傳性溶血性疾病，亦稱海洋性貧血。

血紅蛋白?。河捎谥榈鞍谆虬l(fā)生缺陷，致使珠蛋白分子的一級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而導(dǎo)致血紅蛋白的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的一組遺傳性疾病?！畹刂泻Ｘ氀亲畛Ｒ姷难t蛋白病，珠蛋白合成障礙性貧血為國內(nèi)稱呼，國外不用。精選ppt3一、什么是地中海貧血定義：由于珠蛋白基因發(fā)生缺陷，致使珠蛋地中海貧血分類地中海貧血地中海貧血地中海貧血δ地中海貧血γ地中海貧血δ地中海貧血εγδ地中海貧血血紅蛋白變異體溶血性異常血紅蛋白（如HbS、C等）地中海貧血樣變異（如HbCS、E等）其他異常血紅蛋白（如HbM、Coimbra等）精選ppt4地中海貧血分類地中海貧血地中海貧血地中海貧血δ地地中海貧血分類1、按照一個單倍型上的-珠蛋白基因的功能缺陷定義0地貧（也有稱地貧1）：-珠蛋白基因完全基因記為--/喪失功能。

+地貧（也有稱地貧2）：-珠蛋白基因?；蛴洖?/留有部分功能。精選ppt5地中海貧血分類1、按照一個單倍型上的-珠蛋白基因的功能地中海貧血分類2、按照肽鏈內(nèi)切酶分型缺失型地貧：珠蛋白肽鏈存在片段缺失而造成功能缺陷非缺失型地貧：珠蛋白肽鏈上不存在缺失，而是（點(diǎn)突變）由于基因的點(diǎn)突變造成的肽鏈功能缺陷精選ppt6地中海貧血分類2、地中海貧血分類3、根據(jù)基因缺失或突變個數(shù)可分為：靜止型：缺失1個基因，基因型記為-/1個基因突變，基因型記為/T輕型：缺失2個基因，基因型記為：--/或-/-2個基因突變，基因型記為：

T/T

中間型：缺失3個基因，基因型記為：--/-缺失與突變混合，基因型為：--/T或純合突變重型：缺失4個基因，基因型記為：--/--缺失與突變混合，基因型為：--/T精選ppt7地中海貧血分類3、根據(jù)基因缺地中海貧血分類1、根據(jù)肽鏈的功能缺失0地貧：珠蛋白基因功能完全喪失，不能合成肽鏈＋地貧：珠蛋白基因尚保留部分功能2、根據(jù)臨床癥狀靜止型地貧：突變雜合子（N/+），中國人少見輕型型地貧：突變雜合子（N/+、0/N）中間型地貧：突變雙重雜合子/突變純合子（+/+、0/+）重型地貧：突變雙重雜合子/突變純合子（0/0、0/+）精選ppt8地中海貧血分類1、根據(jù)肽鏈的功能缺失精選ppt8中國人HPFH和δβ-地貧的基因突變類型及表型特征

突變類型缺失長度(kb，缺失型)

或受累基因(非缺失型)HbF(%)Gγ(%)其它種族缺失型Gγ+(Aγδβ)0-地貧中國型≈1009.3～21.283～100—廣州型＞4319.495—云南型～909.3～16.772～90—GγAγ-HPFH東南亞型29.7±0.514.1～27.057～63越南、柬埔寨人Aγ-HPFH-196(C→T)Aγ14.3～20.981～95意大利人GγAγδβ-地貧-29(A→G)β22.340—精選ppt9中國人HPFH和δβ-地貧的基因突變類型及表型特征突變類型世界地中海貧血的流行分布精選ppt10世界地中海貧血的流行分布精選ppt10廣西地中海貧血的流行分布853共5789例224例834例790例1033例1349例1559例Baise

Hezhou

Yulin

FangchengguangLiuzhouNanningXiong,etal.ClinGenet2010精選ppt11廣西地中海貧血的流行分布853共5789例224例834例7廣西地中海貧血的流行分布血紅蛋白病分組陽性樣本數(shù)%α-地中海貧血88615.32靜止型攜帶者3636.27α-地中海貧血特征4988.6HbH病250.43β-地中海貧血3706.39攜帶者2874.96復(fù)合α-地中海貧血791.36中間型地中海貧血40.07δ-地中海貧血90.16攜帶者60.1復(fù)合α-地中海貧血30.05血紅蛋白結(jié)構(gòu)變異220.38攜帶者170.29復(fù)合α-地中海貧血40.07復(fù)合β-地中海貧血10.02總計(jì)128722.25精選ppt12廣西地中海貧血的流行分布血紅蛋白病分組陽性樣本數(shù)%α-地引起珠蛋白表達(dá)降低的常見缺失突變類型分布––MC10kb0kb20kb30kb40kb–10kb3’HVRinterξHVR5’3’2

1

2

1

––THAI––BRIT––FIL––MED––SEA

–4.2–3.7–2.7––SPAN––HW–27.6–11.1–2.4精選ppt13引起珠蛋白表達(dá)降低的常見缺失突變類型分布––MC10kbBlackBelgianIndianMalaysian2GermanTurkishItalianGantoneseYunnaneseChineseS.E.AsianTaiwanese

0kb50kb100kb150kbGA

LCR引起地中海貧血常見的基因缺失突變類型分步精選ppt14Black012種見于中國人群的2/1珠蛋白基因點(diǎn)突變

CD31CD125EXONIEXONIIEXONIIIIVSIIVS

IIUTRUTR5’3’CD13CD59CD122CD142CD44CD49CD30

2

1MissensemutationMinideletionorinsersionTerminationmutationFrameshiftCD78CD74CD118精選ppt1512種見于中國人群的2/1珠蛋白基因點(diǎn)突變CD啟動子突變異常剪接起始密碼突變移碼突變無義突變3’UTR突變EXON1IVS1EXON2EXON3

IVS2顯性突變5’3’

46種見于中國南方人群的-珠蛋白基因點(diǎn)突變

精選ppt16啟動子突變EXON1IVS1EXON2EXO中國南方人群最為常見的地貧類型精選ppt17中國南方人群最為常見的地貧類型精選ppt17二、地中海貧血的致病機(jī)制

●胎兒血紅蛋白主要由兩條珠蛋白鏈、兩條珠蛋白鏈組成，還含有

γ鏈、?鏈、ζ鏈組成●成年人的血紅蛋白由兩條珠蛋白鏈和兩條珠蛋白鏈組成血紅蛋白紅細(xì)胞鏈鏈血紅素鐵鏈鏈精選ppt18二、地中海貧血的致病機(jī)制

●胎兒血紅蛋白主要由兩條珠蛋白鏈二、地中海貧血的致病機(jī)制11p15.3β珠蛋白基因簇16p13.3α珠蛋白基因簇HbA

HS40ζ

ψζψ2

ψ1

2

1θHS54321εGγAγψβδβ精選ppt19二、地中海貧血的致病機(jī)制11p15.3β珠蛋白基因簇16p1二、地中海貧血的致病機(jī)制人體不同發(fā)育時期的珠蛋白生成變化規(guī)律精選ppt20二、地中海貧血的致病機(jī)制人體不同發(fā)育時期的珠蛋白生成變化規(guī)律二、地中海貧血的致病機(jī)制靜態(tài)突變點(diǎn)突變片段突變動態(tài)突變

堿基替換移碼突變串聯(lián)重復(fù)的三核苷酸序列隨著世代的傳遞而拷貝數(shù)逐代累加缺失重復(fù)重排基因突變的分子機(jī)制基因致病突變是地貧發(fā)生的分子基礎(chǔ)精選ppt21二、地中海貧血的致病機(jī)制靜態(tài)突變點(diǎn)突變片段突變動態(tài)突變二、地中海貧血的致病機(jī)制精選ppt22二、地中海貧血的致病機(jī)制精選ppt22三、地中海貧血基因分析1、Gap-PCR用于α和β等缺失型地貧的檢測ψα2ψα1ψξ1

α2α1θ1SEA3.74.2ABCDEFG原理：普通的酶無法擴(kuò)增出長距離的片段，通過設(shè)計(jì)出與缺失序列的兩側(cè)翼序列互補(bǔ)的引物，當(dāng)存在缺失時，由于肽鏈靠近從而擴(kuò)增出片段。精選ppt23三、地中海貧血基因分析1、Gap-PCR用于α和β等缺失精選ppt24精選ppt24三、地中海貧血基因分析2、PCR-RDB用于檢測α和β點(diǎn)突變PCR膜條雜交顯色精選ppt25三、地中海貧血基因分析2、PCR-RDB用于檢測α和精選ppt26精選ppt26三、地中海貧血基因分析地貧基因檢測的策略：α地貧：先檢測常見缺失型，然后檢測非缺失（點(diǎn)突變），最后是未知的缺失和突變位點(diǎn)。因?yàn)?gt;90%α地貧為常見的三種缺失型（--sea,-3.7,-4.2)。β地貧：先檢測點(diǎn)突變，然后檢測少見的缺失型。大部分β地貧都是點(diǎn)突變型。

精選ppt27三、地中海貧血基因分析地貧基因檢測的策略：精選ppt27血紅蛋白病的篩查及基因診斷的技術(shù)流程精選ppt28血紅蛋白病的篩查及基因診斷的技術(shù)流程精選ppt28遺傳咨詢

產(chǎn)前地貧攜帶者篩查策略同時正常產(chǎn)檢對象（孕婦及其配偶）α地貧分子診斷

知情同意選擇胎兒產(chǎn)前基因診斷血液五分類分析（關(guān)注MCV和MCH）+血紅蛋白電泳（HbA2)雙方某項(xiàng)指標(biāo)均同時降低一方正常，另一方的指標(biāo)降低地貧全套檢查異常的一方做地貧全套檢查α-地貧特征β-地貧特征ID雙方均為α-地貧特征一方為α-地貧特征，另一方為ID或β-地貧特征+-單純性ID或單純性β-地貧雙方均為β-地貧特征ID或β-地貧特征的一方做α地貧分子診斷

夫婦雙方基因診斷血R正常的一方做α地貧分子診斷

-單純性ID或單純性β-地貧-++僅異常血紅蛋白必要時測序或選擇其中一種地貧檢測精選ppt29遺傳咨詢產(chǎn)前地貧攜帶四、最新的地中海貧血檢測方法1、融鏈曲線分析法用于檢測α或β缺失和點(diǎn)突變Thongperm,etal.JournalofMolecularDiagnostics.2010XiongF,etal.JMolDiagn.2011ChristinaV，etal.ClinicalChemistry.2003原理：根據(jù)每條肽鏈都有自己的Tm值，從而可以通過溫度差來判斷精選ppt30四、最新的地中海貧血檢測方法1、融鏈曲線分析法用于檢測四、最新的地中海貧血檢測方法2、MLPA（多重連接探針擴(kuò)增）用于尋找未知缺失斷裂點(diǎn)Xiao-FengWei，etal.AnnHematol.2011精選ppt31四、最新的地中海貧血檢測方法2、MLPA（多重連接探針擴(kuò)增）四、最新的地中海貧血檢測方法3、毛細(xì)管電泳可以檢測α非缺失CS（HbCS)和

βE地貧HbAHbEHbA2CanLiao,etal.EuropeanJournalofHaematology.2010精選ppt32四、最新的地中海貧血檢測方法3、毛細(xì)管電泳可以檢測四、最新的地中海貧血檢測方法4、DHPLC（變性高效液相色譜）用于缺失型和突變型地貧都可以李倩，南方醫(yī)科大學(xué)論文，2010精選ppt33四、最新的地中海貧血檢測方法4、DHPLC（變性高效液相色譜四、最新的地中海貧血檢測方法5、基因序列測定（PCR+毛細(xì)管電泳）用于未知突變位點(diǎn)或確定缺失片段的位置

由于儀器比較貴重，技術(shù)要求高，目前尚未在臨床一線推廣，只在科研實(shí)驗(yàn)室里開展。AzamAmirianMSc，etal.ArchivesofIranianMedicine.2011精選ppt34四、最新的地中海貧血檢測方法5、基因序列測定（PCR+毛細(xì)管四、最新的地中海貧血檢測方法6、母體血漿中胎兒游離核酸的測定嚴(yán)提珍，國際輸血及血液學(xué)雜志，2009精選ppt35四、最新的地中海貧血檢測方法6、母體血漿中胎兒游離核酸的測定嚴(yán)提珍，國際輸血及血液學(xué)雜志，2009精選ppt36嚴(yán)提珍，國際輸血及血液學(xué)雜志，2009精選ppt36五、檢測結(jié)果分析及報(bào)告

（一）地貧基因診斷1、--SEA/2、/3、/

4、--SEA/-4.25、--SEA/-4.26、--SEA/-3.7

7、/8、

--SEA/9、DNAMarkerα缺失型地貧電泳結(jié)果123456789精選ppt37五、檢測結(jié)果分析及報(bào)告

（一）地貧基因診斷1、--SEAα非缺失雜交結(jié)果CS純合WS雜合未檢測到6種突變（注意不是正常）精選ppt38α非缺失雜交結(jié)果CS純合WS雜合（注意不是正常）精選ppt341-42N654N-28N71-72N17NEN31N27/28M41-42M654M-28M71-72M17MEM31MIVS-I-1M43M-32M-29M-30M14-15MCAPIntMIVS-I-5M–28/NIVS-II-654/N

CD17/N

CD41–42/N–28/–28CD17/IVS-II-654ABCDEFβ–地中海貧血點(diǎn)突變分析結(jié)果精選ppt3941-42N654N-28N71-72N17NEN31N2血涂片染色（包涵體）CornelisLH，OrphanetJournalofRareDiseases，2010精選ppt40血涂片染色（包涵體）CornelisLH，Orphane五、檢測結(jié)果分析及報(bào)告

（三）基因診斷報(bào)告單1、臨床地貧基因報(bào)告

主要是常規(guī)試劑可以檢測到的類型，一般都會包括被測樣本的信息，檢測方法，檢測試劑，檢測者的簽名，診斷結(jié)果以及臨床提示。2、臨床科研報(bào)告

由于常規(guī)檢測不到，但是患者又必須進(jìn)一步檢測確定的罕見或未知地貧類型。報(bào)告信息只包括被測樣本信息，檢測方法，檢測試劑，診斷結(jié)果及臨床提示，沒有檢測者的簽名（不承擔(dān)法律后果）。精選ppt41五、檢測結(jié)果分析及報(bào)告

（三）基因診斷報(bào)告單精選ppt41地貧基因分析診斷報(bào)告單（alpha地貧）精選ppt42地貧基因分析診斷報(bào)告單（alpha地貧）精選ppt42新修改的報(bào)告單精選ppt43新修改的報(bào)告單精選ppt43α珠蛋白基因缺失和發(fā)生的三聯(lián)體基因座的分子機(jī)制精選ppt44α珠蛋白基因缺失和發(fā)生的三聯(lián)體基因座的分子機(jī)制精選ppt44謝謝精選ppt45謝謝精選ppt45地中海貧血的實(shí)驗(yàn)室檢測和結(jié)果分析精選ppt46地中海貧血的實(shí)驗(yàn)室檢測和結(jié)果分析精選ppt1主要內(nèi)容一、什么是地中海貧血及分布二、地中海貧血的致病機(jī)制三、地中海貧血的基因診斷四、最新的地中海貧血檢測方法五、檢測結(jié)果分析及報(bào)告精選ppt47主要內(nèi)容一、什么是地中海貧血及分布精選ppt2一、什么是地中海貧血定義：由于珠蛋白基因發(fā)生缺陷，致使珠蛋白肽鏈合成減少或缺失，導(dǎo)致血紅蛋白的α鏈/非α鏈比例失衡，而引起的一組遺傳性溶血性疾病，亦稱海洋性貧血。

血紅蛋白?。河捎谥榈鞍谆虬l(fā)生缺陷，致使珠蛋白分子的一級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而導(dǎo)致血紅蛋白的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的一組遺傳性疾病?！畹刂泻Ｘ氀亲畛Ｒ姷难t蛋白病，珠蛋白合成障礙性貧血為國內(nèi)稱呼，國外不用。精選ppt48一、什么是地中海貧血定義：由于珠蛋白基因發(fā)生缺陷，致使珠蛋地中海貧血分類地中海貧血地中海貧血地中海貧血δ地中海貧血γ地中海貧血δ地中海貧血εγδ地中海貧血血紅蛋白變異體溶血性異常血紅蛋白（如HbS、C等）地中海貧血樣變異（如HbCS、E等）其他異常血紅蛋白（如HbM、Coimbra等）精選ppt49地中海貧血分類地中海貧血地中海貧血地中海貧血δ地地中海貧血分類1、按照一個單倍型上的-珠蛋白基因的功能缺陷定義0地貧（也有稱地貧1）：-珠蛋白基因完全基因記為--/喪失功能。

+地貧（也有稱地貧2）：-珠蛋白基因?；蛴洖?/留有部分功能。精選ppt50地中海貧血分類1、按照一個單倍型上的-珠蛋白基因的功能地中海貧血分類2、按照肽鏈內(nèi)切酶分型缺失型地貧：珠蛋白肽鏈存在片段缺失而造成功能缺陷非缺失型地貧：珠蛋白肽鏈上不存在缺失，而是（點(diǎn)突變）由于基因的點(diǎn)突變造成的肽鏈功能缺陷精選ppt51地中海貧血分類2、地中海貧血分類3、根據(jù)基因缺失或突變個數(shù)可分為：靜止型：缺失1個基因，基因型記為-/1個基因突變，基因型記為/T輕型：缺失2個基因，基因型記為：--/或-/-2個基因突變，基因型記為：

T/T

中間型：缺失3個基因，基因型記為：--/-缺失與突變混合，基因型為：--/T或純合突變重型：缺失4個基因，基因型記為：--/--缺失與突變混合，基因型為：--/T精選ppt52地中海貧血分類3、根據(jù)基因缺地中海貧血分類1、根據(jù)肽鏈的功能缺失0地貧：珠蛋白基因功能完全喪失，不能合成肽鏈＋地貧：珠蛋白基因尚保留部分功能2、根據(jù)臨床癥狀靜止型地貧：突變雜合子（N/+），中國人少見輕型型地貧：突變雜合子（N/+、0/N）中間型地貧：突變雙重雜合子/突變純合子（+/+、0/+）重型地貧：突變雙重雜合子/突變純合子（0/0、0/+）精選ppt53地中海貧血分類1、根據(jù)肽鏈的功能缺失精選ppt8中國人HPFH和δβ-地貧的基因突變類型及表型特征

突變類型缺失長度(kb，缺失型)

或受累基因(非缺失型)HbF(%)Gγ(%)其它種族缺失型Gγ+(Aγδβ)0-地貧中國型≈1009.3～21.283～100—廣州型＞4319.495—云南型～909.3～16.772～90—GγAγ-HPFH東南亞型29.7±0.514.1～27.057～63越南、柬埔寨人Aγ-HPFH-196(C→T)Aγ14.3～20.981～95意大利人GγAγδβ-地貧-29(A→G)β22.340—精選ppt54中國人HPFH和δβ-地貧的基因突變類型及表型特征突變類型世界地中海貧血的流行分布精選ppt55世界地中海貧血的流行分布精選ppt10廣西地中海貧血的流行分布853共5789例224例834例790例1033例1349例1559例Baise

Hezhou

Yulin

FangchengguangLiuzhouNanningXiong,etal.ClinGenet2010精選ppt56廣西地中海貧血的流行分布853共5789例224例834例7廣西地中海貧血的流行分布血紅蛋白病分組陽性樣本數(shù)%α-地中海貧血88615.32靜止型攜帶者3636.27α-地中海貧血特征4988.6HbH病250.43β-地中海貧血3706.39攜帶者2874.96復(fù)合α-地中海貧血791.36中間型地中海貧血40.07δ-地中海貧血90.16攜帶者60.1復(fù)合α-地中海貧血30.05血紅蛋白結(jié)構(gòu)變異220.38攜帶者170.29復(fù)合α-地中海貧血40.07復(fù)合β-地中海貧血10.02總計(jì)128722.25精選ppt57廣西地中海貧血的流行分布血紅蛋白病分組陽性樣本數(shù)%α-地引起珠蛋白表達(dá)降低的常見缺失突變類型分布––MC10kb0kb20kb30kb40kb–10kb3’HVRinterξHVR5’3’2

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––THAI––BRIT––FIL––MED––SEA

–4.2–3.7–2.7––SPAN––HW–27.6–11.1–2.4精選ppt58引起珠蛋白表達(dá)降低的常見缺失突變類型分布––MC10kbBlackBelgianIndianMalaysian2GermanTurkishItalianGantoneseYunnaneseChineseS.E.AsianTaiwanese

0kb50kb100kb150kbGA

LCR引起地中海貧血常見的基因缺失突變類型分步精選ppt59Black012種見于中國人群的2/1珠蛋白基因點(diǎn)突變

CD31CD125EXONIEXONIIEXONIIIIVSIIVS

IIUTRUTR5’3’CD13CD59CD122CD142CD44CD49CD30

2

1MissensemutationMinideletionorinsersionTerminationmutationFrameshiftCD78CD74CD118精選ppt6012種見于中國人群的2/1珠蛋白基因點(diǎn)突變CD啟動子突變異常剪接起始密碼突變移碼突變無義突變3’UTR突變EXON1IVS1EXON2EXON3

IVS2顯性突變5’3’

46種見于中國南方人群的-珠蛋白基因點(diǎn)突變

精選ppt61啟動子突變EXON1IVS1EXON2EXO中國南方人群最為常見的地貧類型精選ppt62中國南方人群最為常見的地貧類型精選ppt17二、地中海貧血的致病機(jī)制

●胎兒血紅蛋白主要由兩條珠蛋白鏈、兩條珠蛋白鏈組成，還含有

γ鏈、?鏈、ζ鏈組成●成年人的血紅蛋白由兩條珠蛋白鏈和兩條珠蛋白鏈組成血紅蛋白紅細(xì)胞鏈鏈血紅素鐵鏈鏈精選ppt63二、地中海貧血的致病機(jī)制

●胎兒血紅蛋白主要由兩條珠蛋白鏈二、地中海貧血的致病機(jī)制11p15.3β珠蛋白基因簇16p13.3α珠蛋白基因簇HbA

HS40ζ

ψζψ2

ψ1

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1θHS54321εGγAγψβδβ精選ppt64二、地中海貧血的致病機(jī)制11p15.3β珠蛋白基因簇16p1二、地中海貧血的致病機(jī)制人體不同發(fā)育時期的珠蛋白生成變化規(guī)律精選ppt65二、地中海貧血的致病機(jī)制人體不同發(fā)育時期的珠蛋白生成變化規(guī)律二、地中海貧血的致病機(jī)制靜態(tài)突變點(diǎn)突變片段突變動態(tài)突變

堿基替換移碼突變串聯(lián)重復(fù)的三核苷酸序列隨著世代的傳遞而拷貝數(shù)逐代累加缺失重復(fù)重排基因突變的分子機(jī)制基因致病突變是地貧發(fā)生的分子基礎(chǔ)精選ppt66二、地中海貧血的致病機(jī)制靜態(tài)突變點(diǎn)突變片段突變動態(tài)突變二、地中海貧血的致病機(jī)制精選ppt67二、地中海貧血的致病機(jī)制精選ppt22三、地中海貧血基因分析1、Gap-PCR用于α和β等缺失型地貧的檢測ψα2ψα1ψξ1

α2α1θ1SEA3.74.2ABCDEFG原理：普通的酶無法擴(kuò)增出長距離的片段，通過設(shè)計(jì)出與缺失序列的兩側(cè)翼序列互補(bǔ)的引物，當(dāng)存在缺失時，由于肽鏈靠近從而擴(kuò)增出片段。精選ppt68三、地中海貧血基因分析1、Gap-PCR用于α和β等缺失精選ppt69精選ppt24三、地中海貧血基因分析2、PCR-RDB用于檢測α和β點(diǎn)突變PCR膜條雜交顯色精選ppt70三、地中海貧血基因分析2、PCR-RDB用于檢測α和精選ppt71精選ppt26三、地中海貧血基因分析地貧基因檢測的策略：α地貧：先檢測常見缺失型，然后檢測非缺失（點(diǎn)突變），最后是未知的缺失和突變位點(diǎn)。因?yàn)?gt;90%α地貧為常見的三種缺失型（--sea,-3.7,-4.2)。β地貧：先檢測點(diǎn)突變，然后檢測少見的缺失型。大部分β地貧都是點(diǎn)突變型。

精選ppt72三、地中海貧血基因分析地貧基因檢測的策略：精選ppt27血紅蛋白病的篩查及基因診斷的技術(shù)流程精選ppt73血紅蛋白病的篩查及基因診斷的技術(shù)流程精選ppt28遺傳咨詢

產(chǎn)前地貧攜帶者篩查策略同時正常產(chǎn)檢對象（孕婦及其配偶）α地貧分子診斷

知情同意選擇胎兒產(chǎn)前基因診斷血液五分類分析（關(guān)注MCV和MCH）+血紅蛋白電泳（HbA2)雙方某項(xiàng)指標(biāo)均同時降低一方正常，另一方的指標(biāo)降低地貧全套檢查異常的一方做地貧全套檢查α-地貧特征β-地貧特征ID雙方均為α-地貧特征一方為α-地貧特征，另一方為ID或β-地貧特征+-單純性ID或單純性β-地貧雙方均為β-地貧特征ID或β-地貧特征的一方做α地貧分子診斷

夫婦雙方基因診斷血R正常的一方做α地貧分子診斷

-單純性ID或單純性β-地貧-++僅異常血紅蛋白必要時測序或選擇其中一種地貧檢測精選ppt74遺傳咨詢產(chǎn)前地貧攜帶四、最新的地中海貧血檢測方法1、融鏈曲線分析法用于檢測α或β缺失和點(diǎn)突變Thongperm,etal.JournalofMolecularDiagnostics.2010XiongF,etal.JMolDiagn.2011ChristinaV，etal.ClinicalChemistry.2003原理：根據(jù)每條肽鏈都有自己的Tm值，從而可以通過溫度差來判斷精選ppt75四、最新的地中海貧血檢測方法1、融鏈曲線分析法用于檢測四、最新的地中海貧血檢測方法2、MLPA（多重連接探針擴(kuò)增）用于尋找未知缺失斷裂點(diǎn)Xiao-FengWei，etal.AnnHematol.2011精選ppt76四、最新的地中海貧血檢測方法2、MLPA（多重連接探針擴(kuò)增）四、最新的地中海貧血檢測方法3、毛細(xì)管電泳可以檢測α非缺失CS（HbCS)和

βE地貧HbAHbEHbA2CanLiao,etal.EuropeanJournalofHaematology.2010精選ppt77四、最新的地中海貧血檢測方法3、毛細(xì)管電泳可以檢測四、最新的地中海貧血檢測方法4、DHPLC（變性高效液相色譜）用于缺失型和突變型地貧都可以李倩，南方醫(yī)科大學(xué)論文，2010精選ppt78四、最新的地中海貧血檢測