抗腫瘤藥效評價課件

抗腫瘤藥的藥效學(xué)研究抗腫瘤藥的藥效學(xué)研究1抗腫瘤藥的藥效學(xué)研究抗腫瘤藥根據(jù)其作用原理大致可以分為以下幾類:細(xì)胞毒性藥生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑分化誘導(dǎo)劑化學(xué)預(yù)防藥逆轉(zhuǎn)腫痛耐藥性藥物抗腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移藥物的實(shí)驗(yàn)方法放療及化療增效劑抗腫瘤藥的藥效學(xué)研究21.細(xì)胞毒性藥的藥效學(xué)研究這類藥可以通過體外和體內(nèi)兩種方法來評價其療效:體外常用的方法:、噻唑藍(lán)實(shí)驗(yàn)法MTT法)、染料排斥試驗(yàn)、生長曲線法、集落形成法、SRB法體內(nèi)常用的方法:動物移植性腫瘤實(shí)驗(yàn)法1.細(xì)胞毒性藥的藥效學(xué)研究3MTT法的基本原理:四氮唑[MTT,3-(4,5dimethylibiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide是一種能接受氫原子的染料?；罴?xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲[月替formazan),而死的細(xì)胞則無此功能。用二甲基亞諷(DMSO)溶解甲月替]后,在一定波長下用酶標(biāo)儀測定光密度值,即可定量測出細(xì)胞的存活率。MTT法的基本原理:四氮唑[MTT,3-(4,54操作步驟:選用對數(shù)生長期的貼壁腫瘤細(xì)胞,用胰酶消化后,用含10%小牛血清的RPMI640培養(yǎng)基配成5000個/ml的細(xì)胞懸液,接種在96孔培養(yǎng)板中,每孔接種200μl,37℃,5%CO2培養(yǎng)24h2.實(shí)驗(yàn)組換新的含不同濃度被測樣品的培養(yǎng)基,對照組則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基每組設(shè)3-5平行孔,37℃,5%CO2培養(yǎng)45d操作步驟:53.棄去上清液,每孔加入200μl新鮮配制的含02mg/mMTT的無血清培養(yǎng)基.37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄上清,并加入200μDMSO,用微型超聲振蕩器混勻后,在酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長為570nm,參比波長為450mm測定光密度值3.棄去上清液,每孔加入200μl新鮮配制6結(jié)果評定:按下式計算藥物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率腫瘤細(xì)胞生長抑制率%=(1OD實(shí)驗(yàn)OD對照×100%以同一樣品的不同濃度對腫瘤細(xì)胞生長抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線,從中求出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50合成化合物或植物提取純品的IC5<10g/m1或植物粗提物的IC50<20g/m1時,則判斷樣品在體外對腫瘤細(xì)胞有殺傷作用結(jié)果評定:7染料排斥試驗(yàn)的基本原理活細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、臺盼藍(lán)、苯胺黑等的能力,而死細(xì)胞由于膜完整性的破壞,可被著色。因此培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中加入這些染料,一定時間后,對著色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),即可算出被殺死的細(xì)胞比例。染料排斥試驗(yàn)的基本原理8生長曲線法的基本原理:在最適條件下,腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈指數(shù)生長,如取細(xì)胞數(shù)的對數(shù)與培養(yǎng)時間作圖可得一條直線,故稱此時為對數(shù)生長期。隨著細(xì)胞密度不斷增高,由于代謝產(chǎn)物的積聚及營養(yǎng)物的消耗,細(xì)胞生長逐漸減慢以致停止,此時稱高坪期或穩(wěn)定期。因此藥物對細(xì)胞生長的影響可通過生長曲線反映出來。生長曲線法的基本原理:9集落形成法的基本原理:克隆原細(xì)胞具有持續(xù)增殖能力,當(dāng)單個細(xì)胞分裂6代或6代以上時,其后代所組成的群體(集落)便含50個以上細(xì)胞。通過集落計數(shù)可對克隆原細(xì)胞作定量分析。它反映了單個細(xì)胞的增殖潛力,故能較靈敏地測定抗癌藥的活性,日前被認(rèn)為是一種較理想的檢測方法。常用的集落形成法可分為貼壁法及半固體培養(yǎng)法兩種。集落形成法的基本原理:10抗腫瘤藥效評價課件11抗腫瘤藥效評價課件12抗腫瘤藥效評價課件13抗腫瘤藥效評價課件14抗腫瘤藥效評價課件15抗腫瘤藥效評價課件16抗腫瘤藥效評價課件17抗腫瘤藥效評價課件18抗腫瘤藥效評價課件19抗腫瘤藥效評價課件20抗腫瘤藥效評價課件21抗腫瘤藥效評價課件22抗腫瘤藥效評價課件23抗腫瘤藥效評價課件24抗腫瘤藥效評價課件25抗腫瘤藥效評價課件26抗腫瘤藥效評價課件27抗腫瘤藥效評價課件28抗腫瘤藥效評價課件29抗腫瘤藥效評價課件30抗腫瘤藥效評價課件31抗腫瘤藥效評價課件32抗腫瘤藥效評價課件33抗腫瘤藥效評價課件34抗腫瘤藥效評價課件35抗腫瘤藥效評價課件36抗腫瘤藥效評價課件37抗腫瘤藥效評價課件38抗腫瘤藥效評價課件39抗腫瘤藥效評價課件40抗腫瘤藥效評價課件41抗腫瘤藥效評價課件42抗腫瘤藥效評價課件43抗腫瘤藥效評價課件44抗腫瘤藥效評價課件45抗腫瘤藥效評價課件46抗腫瘤藥的藥效學(xué)研究抗腫瘤藥的藥效學(xué)研究47抗腫瘤藥的藥效學(xué)研究抗腫瘤藥根據(jù)其作用原理大致可以分為以下幾類:細(xì)胞毒性藥生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑分化誘導(dǎo)劑化學(xué)預(yù)防藥逆轉(zhuǎn)腫痛耐藥性藥物抗腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移藥物的實(shí)驗(yàn)方法放療及化療增效劑抗腫瘤藥的藥效學(xué)研究481.細(xì)胞毒性藥的藥效學(xué)研究這類藥可以通過體外和體內(nèi)兩種方法來評價其療效:體外常用的方法:、噻唑藍(lán)實(shí)驗(yàn)法MTT法)、染料排斥試驗(yàn)、生長曲線法、集落形成法、SRB法體內(nèi)常用的方法:動物移植性腫瘤實(shí)驗(yàn)法1.細(xì)胞毒性藥的藥效學(xué)研究49MTT法的基本原理:四氮唑[MTT,3-(4,5dimethylibiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide是一種能接受氫原子的染料?；罴?xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲[月替formazan),而死的細(xì)胞則無此功能。用二甲基亞諷(DMSO)溶解甲月替]后,在一定波長下用酶標(biāo)儀測定光密度值,即可定量測出細(xì)胞的存活率。MTT法的基本原理:四氮唑[MTT,3-(4,550操作步驟:選用對數(shù)生長期的貼壁腫瘤細(xì)胞,用胰酶消化后,用含10%小牛血清的RPMI640培養(yǎng)基配成5000個/ml的細(xì)胞懸液,接種在96孔培養(yǎng)板中,每孔接種200μl,37℃,5%CO2培養(yǎng)24h2.實(shí)驗(yàn)組換新的含不同濃度被測樣品的培養(yǎng)基,對照組則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基每組設(shè)3-5平行孔,37℃,5%CO2培養(yǎng)45d操作步驟:513.棄去上清液,每孔加入200μl新鮮配制的含02mg/mMTT的無血清培養(yǎng)基.37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄上清,并加入200μDMSO,用微型超聲振蕩器混勻后,在酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長為570nm,參比波長為450mm測定光密度值3.棄去上清液,每孔加入200μl新鮮配制52結(jié)果評定:按下式計算藥物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率腫瘤細(xì)胞生長抑制率%=(1OD實(shí)驗(yàn)OD對照×100%以同一樣品的不同濃度對腫瘤細(xì)胞生長抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線,從中求出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50合成化合物或植物提取純品的IC5<10g/m1或植物粗提物的IC50<20g/m1時,則判斷樣品在體外對腫瘤細(xì)胞有殺傷作用結(jié)果評定:53染料排斥試驗(yàn)的基本原理活細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、臺盼藍(lán)、苯胺黑等的能力,而死細(xì)胞由于膜完整性的破壞,可被著色。因此培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中加入這些染料,一定時間后,對著色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),即可算出被殺死的細(xì)胞比例。染料排斥試驗(yàn)的基本原理54生長曲線法的基本原理:在最適條件下,腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈指數(shù)生長,如取細(xì)胞數(shù)的對數(shù)與培養(yǎng)時間作圖可得一條直線,故稱此時為對數(shù)生長期。隨著細(xì)胞密度不斷增高,由于代謝產(chǎn)物的積聚及營養(yǎng)物的消耗,細(xì)胞生長逐漸減慢以致停止,此時稱高坪期或穩(wěn)定期。因此藥物對細(xì)胞生長的影響可通過生長曲線反映出來。生長曲線法的基本原理:55集落形成法的基本原理:克隆原細(xì)胞具有持續(xù)增殖能力,當(dāng)單個細(xì)胞分裂6代或6代以上時,其后代所組成的群體(集落)便含50個以上細(xì)胞。通過集落計數(shù)可對克隆原細(xì)胞作定量分析。它反映了單個細(xì)胞的增殖潛力,故能較靈敏地測定抗癌藥的活性,日前被認(rèn)為是一種較理想的檢測方法。常用的集落形成法可分為貼壁法及半固體培養(yǎng)法兩種。集落形成法的基本原理:56抗腫瘤藥效評價課件57抗腫瘤藥效評價課件58抗腫瘤藥效評價課件59抗腫瘤藥效評價課件60抗腫瘤藥效評價課件61抗腫瘤藥效評價課件62抗腫瘤藥效評價課件63抗腫瘤藥效評價課件64抗腫瘤藥效評價課件65抗腫瘤藥效評價課件66抗腫瘤藥效評價課件67抗腫瘤藥效評價課件68抗腫瘤藥效評價課件69抗腫瘤藥效評價課件70抗腫瘤藥效評價課件71抗腫瘤藥效評價課件72抗腫瘤藥效評價課件73抗腫瘤藥效評價課件74抗腫瘤藥效評價課件75抗腫瘤藥效評價課件76抗腫瘤藥效評價課件77抗腫