葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查

4葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查TYYGROUPsystemofficeroom【TYYUA16H-TYY-TYYYUA8Q8-實(shí)驗(yàn)二葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查一、目的要求.掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、操作方法及限量計(jì)算方法。.熟悉藥物中一般雜質(zhì)檢查的目的和意義。二、基本原理葡萄糖是用淀粉以無機(jī)酸水解或在酶催化下經(jīng)過水解得稀葡萄糖液，再經(jīng)脫色、濃縮結(jié)晶制得。.國(guó)內(nèi)生產(chǎn)方法有以下幾種：⑴酸水解法：以無機(jī)酸將淀粉水解為葡萄糖。⑵雙酶水解法：以生物酶為催化劑將淀粉水解為葡萄糖。⑶酸酶水解法：以鹽酸為液化劑，糖化酶為催化劑，將淀粉水解為葡萄糖。根據(jù)葡萄糖生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，應(yīng)進(jìn)行氯化物、重金屬、砷鹽等一般雜質(zhì)檢查，進(jìn)行蛋白質(zhì)、可溶性淀粉等特殊雜質(zhì)檢查。.各種雜質(zhì)檢查原理如下：⑴氯化物檢查法氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液和硝酸銀在同樣條件下處理生成的氯化銀渾濁相比較，測(cè)定供試品中氯化物的限量。C1-+Ag AgClI⑵硫酸鹽檢查法藥物中微量硫酸鹽與氯化鋇在酸性溶液中作用，生成硫酸鋇微粒而顯白色渾濁液，同一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液與氯化鋇在同樣條件下，用同法處理生成的渾濁比較，判斷藥物中含硫酸鹽的限量。SO42-十Ba2+-->BaS041⑶鐵鹽檢查法三價(jià)鐵鹽在硝酸酸性溶液中與硫氰酸鹽生成紅色可溶性硫氰酸鐵絡(luò)離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后進(jìn)行比色。Fe3++6SCN--->[Fe(SCN)]3- 紅色進(jìn)行葡萄糖的鐵鹽檢查時(shí)，需在顯色前加硝酸3滴，煮沸5min,使Fe2+氧化為Fe3+。由于硝酸中可能含有亞硝酸，亞硝酸也能與硫氰酸根離子反應(yīng)生成紅色的亞硝酰硫氰化物，影響比色，因此加入顯色劑之前加熱煮沸有助于除去氧化氮，以消除氧化氮生產(chǎn)的亞硝酸干擾。⑷重金屬檢查法重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下，能與S2-作用生成硫化物而顯色的金屬雜質(zhì)，如，銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、砷、銻、錫、鋅、鉆、鎳等。在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛在體內(nèi)易積蓄中毒，故檢查時(shí)以鉛為代表。硫代乙酰胺(thioacetamide)在弱酸性(pH約溶液中水解，產(chǎn)生硫化氫，可與重金屬離子結(jié)合生成有色硫化物的均勻沉淀，可與對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)液同法處理比較。本方法的適宜目視比色范圍為27mL溶液中含鉛10?20g,相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液1?2mL,檢查中根據(jù)規(guī)定含重金屬的限量確定供試品的取用量。CHCSNH+HO-->CHCONH+HS3Pb2++HS2—->PbSI+2H+22⑸砷鹽檢查法《中國(guó)藥典》主要采用古蔡氏（Gutzeit）法檢查砷鹽。其原理是利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽作用生成具揮發(fā)性的砷化氫，遇澳化汞（或氯化汞）試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，可判定藥物中含砷鹽的限量。其反應(yīng)如下：AsO3-+3Zn+9H+-->AsHt+3Zn2++3HOAsH+2HgBr-->2HBr+AsH（HgBr）（黃色）AsH3+3HgB2r-->3HBr+As（HgBr）2（棕色）五價(jià)砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫：但生成砷化氫的速度較三價(jià)砷慢，故在反應(yīng)液中加入碘化鉀及酸性氯化亞錫將五價(jià)碑還原為三價(jià)碑，碘化鉀被氧化生成的碘又可被氯化亞錫還原為碘離子。AsO3-+2I-+2H >AsO3-+I+HOAsO3-+Sn2++2H >AsO[+Sn4++Ho4 I+Sn2 >2I-3+Sn4+ 2溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成配合物，使生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。+Zn2+>[ZnI]2-4氯化亞錫與碘化鉀存在，可抑制銻化氫的生成，因銻化氫也能與澳化汞試紙作用生成銻斑，在實(shí)驗(yàn)條件下100g銻存在不會(huì)干擾測(cè)定。氯化亞錫又可與鋅作用，在鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，從而使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生。⑹干燥失重測(cè)定法干燥失重是指藥物在規(guī)定條件下經(jīng)干燥后所減失的重量，根據(jù)所減失的重量和取樣量計(jì)算供試品干燥失重的百分率。干燥失重檢查法主要控制藥物中的水分，也包括其他揮發(fā)性物質(zhì)如乙醇等。⑺熾灼殘?jiān)鼨z查法熾灼殘?jiān)抵赣袡C(jī)藥物經(jīng)加熱炭化后再被硫酸破壞，于高溫（700℃?800℃）熾灼，有機(jī)物質(zhì)被破壞分解為揮發(fā)性物質(zhì)逸出，殘留的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)（多為金屬的氧化物或鹽類）成為硫酸鹽，稱為熾灼殘?jiān)Ｈ鐭胱茪堅(jiān)枇糇髦亟饘贆z查，則控制熾灼溫度在500℃?600℃。三、儀器與試劑電熱恒溫干燥箱，高溫電爐（馬福爐），普通電爐，水浴鍋，50mL比色管，量筒，50mL燒杯；葡萄糖，硝酸銀，硝酸，硫酸，氯化鋇，硫氰酸銨，硫代乙酰胺，甘油，氫氧化鈉，澳化鉀，碘化鉀，20目無砷鋅粒，氯化亞錫，醋酸鉛，澳化汞，磺基水楊酸。四、實(shí)驗(yàn)方法.酸度取本品，加水20mL溶解后，加酚酞指示液（取酚酞1g,加乙醇100mL使溶解，即得。）3滴與氫氧化鈉滴定液（L）,應(yīng)顯粉紅色。.溶液的澄清度與顏色取本品，加熱水溶解后，放冷，用水稀釋至10mL,溶液應(yīng)澄清無色；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更濃；如顯色，與對(duì)照液（取比色用氯化鉆液、比色用鉻酸鉀液與比色用硫酸銅液，加水稀釋成50mL）加水稀釋至10mL比較，不得更深。⑴濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備稱取于105℃干燥至恒重的硫酸肼，置100mL量瓶中，加水適量使溶解，必要時(shí)可在40℃的水浴中溫?zé)崛芙?，并用水稀釋至刻度，搖勻，放置4?6h；取此溶液與等容量的10%烏洛托品溶液混合，搖勻，于25℃避光靜置24h,即得。本液置冷處避光保存，可在兩個(gè)月內(nèi)使用，用前搖勻。⑵濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的制備取濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液，置1000mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取適量，置1cm吸收池中，照紫外-可見分光光度法，在550nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，其吸光度應(yīng)在?范圍內(nèi)。本液應(yīng)在48h內(nèi)使用，用前搖勻。⑶濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備（1號(hào)） 取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液加水，搖勻，即得。.乙醇溶液的澄清度取本品，加90%乙醇30mL,置水浴上加熱回流約10min,溶液應(yīng)澄清。.氯化物取本品，加水溶解使成25mL（如溶液呈堿性，可滴加硝酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng)），再加稀硝酸（取105mL硫酸加水稀釋至1000mL，即得。）10mL,溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50mL納氏比色管中，加水使成約40mL,搖勻，即得供試液。另取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液置50mL納氏比色管中，加稀硝酸10mL,用水稀釋使成約40mL,搖勻，即得對(duì)照液。向供試液與對(duì)照液中分別加硝酸銀試液L）,用水稀釋使成50mL,搖勻，暗處放置5min,同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，如發(fā)生渾濁，樣品管不得比對(duì)照管更濃％）。標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液的制備：稱取氯化鈉，置1000mL量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量貯備液10mL,置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于10Hg）.硫酸鹽取本品，加水溶解使成約40mL（如溶液顯堿性，可滴加鹽酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng)）；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50mL納氏比色管中，加稀鹽酸（取234mL硫酸加水稀釋至1000mL,即得。）2mL,25%氯化鋇溶液5mL,加水稀釋使成50mL,搖勻，放置10min,如發(fā)生渾濁，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液同法制成的對(duì)照液比較，不得更濃%）。標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液的制備：稱取硫酸鉀，置1000mL量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于100Hg的SO4）.亞硫酸鹽與可溶性淀粉取本品，加水10mL溶解后，加碘試液L）1滴，應(yīng)即顯黃色。.干燥失重取本品約，然后在105℃干燥至恒重，減失重量不得過％。.熾灼殘?jiān)”酒?置已熾灼至恒重的瓷坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸?1mL潤(rùn)濕，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡，在700℃?800℃熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷，精密稱定后，再在700℃?800℃熾灼至恒重，所得熾灼殘?jiān)坏贸^％。.蛋白質(zhì)取本品，加水10mL溶解后，加磺基水楊酸溶液（1-5）3mL,不得發(fā)生沉淀。.鐵鹽取本品，加水20mL溶解后，加硝酸3滴，緩緩煮沸5min,放冷，加水稀釋使成45mL,加硫氰酸銨溶液（30f100）3mL,搖勻，如顯色，與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同一方法制成的對(duì)照液比較，不得更深％）。標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液的制備：稱取硫酸鐵銨（FeNH（SO）-12HO）,置1000mL量瓶中，加水溶解后，加硫酸，用水稀釋至刻度4,搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10mL,置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于10Hg的Fe）.重金屬取本品置于25mL納氏比色管中，加23mL水溶解后，加醋酸鹽緩沖液2mL,加硫代乙酰胺試液2mL,放置2min后，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（10g/mLPB+）2mL用同一方法制成的對(duì)照液同置白紙上自上向下比較，不得更深（百萬分之五）。醋酸鹽緩沖液（pH=:取醋酸銨25g,加水25mL溶解后,加7mol/L鹽酸溶液38mL,用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH至（電位法指示），用水稀釋至100mL,即得。硫代乙酰胺試液配制：取硫代乙酰胺4g,加水使溶解成100mL，置于冰箱中保存。臨用前取混合液［由氫氧化鈉液（1mol/L）15mL,水及甘油20mL組成］，加上述硫代乙酰胺溶液，置水浴上加熱20s,冷卻，立即使用。標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的制備：稱取硝酸鉛，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL與水50mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10mL,置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于10Hg的Pb）。配制與貯存的玻璃容器均不得含鉛。.砷鹽取本品，置檢砷瓶中，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL與澳化鉀-澳試液（取澳30g,與澳化鉀30g,加水使溶解成100mL）,置水浴上加熱約20min,使保持稍過量的澳存在，必要時(shí)，再補(bǔ)加澳化鉀澳試液適量，并隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)的水分，放冷，加鹽酸5mL與水適量使成28mL,加碘化鉀試液5mL及酸性氯化亞錫試液（取氯化亞錫，加水10mL與少量的鹽酸使溶解，即得。本液應(yīng)臨用新配）5滴，在室溫放置10min后，加鋅粒2g,迅速將瓶塞塞緊（瓶塞上已安放好裝有醋酸鉛棉及澳化汞試紙的導(dǎo)氣管），保持反應(yīng)溫度在25℃?40℃（視反應(yīng)快慢而定，但不應(yīng)超過40℃）,反應(yīng)45min后，取出澳化汞試紙，將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液一定量制成的標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，顏色不得更深（%）。標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的制備：稱取三氧化二砷，置1000mL量瓶中，力口20%氫氧化鈉溶液5mL溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10mL,用水稀釋至刻度,搖勻,作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10mL,置1000mL量瓶中，加稀硫酸10mL,用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于1Hg的As）。標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2mL置另一檢砷瓶中，加鹽酸5mL與水2^^自“再加碘化鉀試液5mL及……”起，依法操作即可。五、操作注意事項(xiàng).納氏比色管的選擇與洗滌比色或比濁操作，一般均在納氏比色管中進(jìn)行，因此在選用比色管時(shí)，必須注意使樣品與標(biāo)準(zhǔn)管的體積相等，玻璃色質(zhì)一致，最好不帶任何顏色，管上的刻度均勻，如有差別，不得大于2mm。納氏比色管用后應(yīng)立即沖洗，比色管洗滌時(shí)避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁劃出條痕影響比色或比濁。.平行操作原則進(jìn)行比色、比濁、砷鹽檢查時(shí)，樣品液與對(duì)照液的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)盡可能一致，嚴(yán)格按照操作步驟平行操作，按規(guī)定順序加入試劑。比色、比濁前可利用手腕轉(zhuǎn)動(dòng)360o的旋搖使比色管內(nèi)試劑充分混勻。比色方法一般是將兩管同置于白色背景上，從側(cè)面觀察；比濁方法是將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下地觀察。.實(shí)驗(yàn)中應(yīng)準(zhǔn)確選用量具，雜質(zhì)檢查中允許的誤差為±10%,量筒的絕對(duì)誤差為1mL,刻度吸管的絕對(duì)誤差為?，在實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)根據(jù)樣品、標(biāo)準(zhǔn)液的取用量正確選用量器。例如，取標(biāo)準(zhǔn)液2mL應(yīng)選擇刻度吸管或移液管吸取標(biāo)準(zhǔn)液。取樣品2g,允許的誤差為，可選用稱量精度為的普通天平。.進(jìn)行鐵鹽檢查時(shí)，采用硝酸將Fe2+氧化為Fe3+,標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)與樣品液同法操作。樣品液加硝酸煮沸時(shí)，應(yīng)注意防止暴沸，必要時(shí)補(bǔ)充適量水。.砷鹽檢查時(shí)采用濕法破壞葡萄糖，在酸性溶液中用澳進(jìn)行有機(jī)破壞使礎(chǔ)游離。有機(jī)破壞可在檢碎瓶中進(jìn)行，20min內(nèi)要保持過量的澳存在，隨時(shí)補(bǔ)充消耗的澳化鉀澳試液和水分，使溶液呈黃色，20min后必須將多余的澳除盡，使溶液五色，否則澳將