肺癌基因檢測-賴仁勝？課件

肺癌分子靶向標志基因檢測江蘇省中西醫(yī)結(jié)合腫瘤研究中心APEC-KRAS中國區(qū)中心實驗室2010ASCO:肺癌生物標志BestofASCOChina吳一龍：關(guān)鍵是生物標志篩選患者

二線晚期NSCLC：BR.21研究：厄羅替尼有效率僅8.9%,篩選mEGFR后，OS,疾病控制率高達89.8%（Rosell）INTEREST研究：吉非替尼有效率僅9.7%，PFS僅2個月，OS僅7個月。IPASS研究：生物標志篩選mEGFR，吉非替尼治療RR，PFS,OS均顯著改善NSCLCEGFR-TKI:未選治療：RR30%左右臨床指標選擇(皮疹，優(yōu)勢人群)：RR50%左右生物指標選擇（EGFR）：RR70-80%左右（K-RAS,T790M）：89-95%左右吳一龍中國醫(yī)學(xué)論壇報B疊2010.7.22EGFR-TKI療效雙刃劍IPASS研究:mEGFR吉非替尼治療，優(yōu)于化療wEGFR吉非替尼治療，劣于化療“我們不能對患者不加選擇用TKI實驗治療無效再換”---吳一龍，中國醫(yī)學(xué)論壇報B疊2010722

TKI抑制劑和EGFR近年相關(guān)研究

EGFR突變（2010.3上海會議）EGFR基因-1906點突變,18缺失30外顯子,TKI區(qū)(17-32)66點突變,13種缺失,新突變---直接測序,重復(fù)性好,敏感性10%,特異性99%18-21顯子,已知29種突變和缺失---ARMS,多重PCR?18-21外顯子,已知11種突變和缺失--PYSEQN,23bp?18-21外顯子,已知多種突變,缺失---DHLPC,內(nèi)參對照?其他,敏感性好,特異性差,重復(fù)性差SATURN研究易瑞沙mEGFR改善PFS優(yōu)于化療，無種族，無病理差異wEGFRPT化療，加大死亡風(fēng)險（HR=2.8）wEGFRPFS低于化療，中位OS6.4mIPASS,INTEREST2009Paz～Ares匯總分析NSCLCII/III線聯(lián)合治療：EGFR-TKI無論w/m型均有一定獲益I線治療EGFR-TKI金標準：mEGFR外周血mEGFR檢測率較低：RADIANT↑注：本院2005年測序血液20例突變均（-）2005-2010測序腫瘤379例突變率32%mEGFR挑戰(zhàn)：腫瘤標本獲取，富集，部位，方法，途徑，質(zhì)量。Shepherd研究NSCLC復(fù)治，無突變研究死亡風(fēng)險比：厄羅替尼與培美曲塞2010NCCNv.2(MS6)：EGFR方法：突變，拷貝量，表達水平mEGFR10-15%，Caucasian，30-40%Asian預(yù)后：Tsao:隨機對照，二線易瑞沙和安慰劑40/177(%),20(50%)E19del或L858R化療+易瑞沙：OS突變組>20月野生組10月預(yù)測：初期，突變者對易瑞沙的反應(yīng)近90%細支氣管肺癌ORR:80%,中位PFS13月北美NSCLCORR:55%,中位PFS9.2月化療+特羅凱：最近，突變者對特羅凱的反應(yīng)EGFR共識—吳一龍mEGFR是吉非替尼和厄羅替尼療效預(yù)測因子，推薦對初治晚期患者檢測后決定治療策略早期和局部晚期患者不確定mEGFR作為療效預(yù)測因子推薦以直接測序法作為mEGFR常規(guī)方法直接測序法檢測mEGFR效能優(yōu)于EGFR基因拷貝數(shù)，EGFR基因表（免疫組化）不能作為療效預(yù)測因子中國醫(yī)學(xué)論壇報B疊2010.7.22

K-ras基因-NSCLC：預(yù)后與預(yù)測K-ras突變，生存預(yù)后差K-ras突變，CIS+長春瑞濱輔助化療不獲益預(yù)測因子K-ras突變，TKI類靶向治療不敏感預(yù)測因子（META:mK-ras，RR3%wK-ras，26%）尚存爭議2010NCCNV.2個體性化療標志物ERCC1:1.IALT隨機對照研究：高表達鉑類耐藥預(yù)測因子NEJM2006低表達鉑類化療獲益預(yù)測因子RR53%2.早期NSCLC復(fù)發(fā)低風(fēng)險預(yù)后因子ERCC1+RRM1同時高表達復(fù)發(fā)低風(fēng)險預(yù)后因子NEJM2007

共識：qPCRmRNA高表達鉑類耐藥認可，不足以在治療方案中推薦2010NCCNV.2個體性化療標志物TS:肺腺癌TSqPCRmRNA表達水平較低，培美曲塞/伊羅澤療效預(yù)測好肺鱗癌，肺小細胞癌的TSqPCRmRNA表達水平較高培美曲塞/伊羅澤療效預(yù)測差TSqPCRmRNA表達對抗微管類藥物預(yù)測高表達是敏感性預(yù)測因子。但不足以臨床推薦NSCLC:新的預(yù)測預(yù)后標志EML4-AKL融合基因-NSCLCEML4-ALKpositive:medianTTP9monthsmedianOS17monthsEML4-ALKnegative：medianTTP6.2monthsmedianOS11months

G.Altavillaetal.EML4-ALKfusiongeneinlungadenocarcinoma:Aretrospectiveanalysisoftheoutcomeofcisplatinpluspemetrexedtreatedpatients.2010ASCOAnnualMeeting.AbstractNo:7610

MariaPaolaMartellietal.TheAmericanJournalofPathology,2009,174(2):661-670.

RT-PCR:5.８%variant1(E13;A20)１.７%variant3(E6;A20)0variant2(E20;A20)

PCRsequencing:comformRT-PCRresultsFISH:onlyaminorityofcellsharboredtheEML4-ALKgeneWesternblot

：failedtodetectImmunoprecipitation：failedtodetect我科EML4-ALK實例Results:

RT-PCR:5.８%variant1(E13;A20)１.７%variant3(E6;A20)0variant2(E20;A20)

PCRsequencing:comformRT-PCRresultsFISH:onlyaminorityofcellsharboredtheEML4-ALKgeneWesternblot

：failedtodetectImmunoprecipitation：failedtodetect我科EML4-ALK實例-variant1我科EML4-ALK實例-variant3我科EML4-ALK實例BRCA1/b-TUBULIN微管類抑制劑療效相關(guān)：BRCA1mRNA高表達b-TUBULINmRNA低表達我院約300例NSCLC石蠟標本檢測SCLC-肺小細胞癌生物標志：2010ASCO,小細胞癌不是遺忘的角落旨在新藥，靶療和治療模式的轉(zhuǎn)化研究和探索SPEAR研究：新型化療藥物Picoplating，ERCC1聯(lián)合BSC:單用BSCMTS21周：20周OS18周：14周PFS,TTP無差異ABT-263:bcl-2小分子抑制劑bcl-2重排，bcl-2融合基因qPCR表達ASCO：氨柔比星+托泊替康毒性增大，TOPOII擴增

SCLC-肺小細胞癌生物標志：EGFR突變ASCO報道：受外科手術(shù)標本的限制有一定的EGFR突變率本院病例：G06-196SCLC,肺穿刺活檢直接測序:EGFRdel(2235-2246)19exonIRESSA口服，緩解

AbstractNo:7514R.Rosell,Outcometoerlotinibinnon-smallcelllungcancer(NSCLC)patients(p)accordingtothepresenceoftheEGFRT790MmutationandBRCA1mRNAexpressionlevelsinpretreatmentbiopsies.Conclusions:Thehighfrequencyofpretreatmentdoublemutationsconcurswithapreviousreport(Mah

eswaranetal.NEJM2008).ThestronginfluenceofT790MandBRCA1levelsonerlotiniboutcomecanleadtonovelpersonalizedtreatmentstrategies.AbstractNo:7615131patientswithstageIIIB(wet)andIVNSCLC.qRT-PCRwasusedtoanalyzethetumoralexpressionResults:ThemRNAlevelsofTXR1-TSP1wereinverselycorrelated(Spearman'stest:-0.37;p=0.001).LowTXR1mRNAlevelswereassociatedwithhigherresponserate(RR;p=0.018),longermedianprogressionfreesurvival(PFS;p=0.029)andmedianoverallsurvival(mOSp=0.003),whilehighTSP1expressionwasalso,correlatedwithhigherRR(p=0.035),longerPFS(p<0.0001)andmOS(p<0.0001).Inaddition,patientswhoseprimarytumorspresentedhigherBRCA1mRNAexpressionexperiencedhigherRR(p=0.028)andincreasedPFS(p=0.021),butnotmOS(p=0.4)incomparisonwiththosewithlowBRCA1

tumoralexpression.chemotherapyresistanceinpatientswithadvanced/metastaticnon-smallcelllungcancer---C.Papadaki.AbstractNo:e18051

C.Zhou;TherelationshipofEGFRintron1(CA)andmicrosatellitepolymorphismandtheefficacyofEGFR-TKIinadvancedNSCLCpatients70patientssequencedinanABI3100Conclusions:EGFR(CA)nrepeatsmaybeanotherbiomarkertopredicttheeffectofEGFR-TKI,patientswithalownumberofEGFreceptorCArepeats(anyallele≤17CA)aremorelikelytohaveabetterclinicaloutcomethanpatientswithahighnumberofCArepeats(bothalleles>17CA)duringtargetedtherapywithEGFR-TKI.benefited

morefromanti-tubulincontainingregimenplatinum-containingregimengemcitabine-containingregimen85patients:OS-13months(range10.8-15.2);

TTP-6.1months(range5.5-6.7).lowRRM1expressionhighBRCA1expressionlowERCC1expressionOS

(Medianoverallsurvival)ERCC1-LvsERCC1-H16.5monthsvs.10.0months

p=0.045ERCC1-L/ERCC1-H:6.5vs.5.1months,p=0.001BRCA1-L/BRCA1-H:5.2vs.6.5months,p=0.019TTP:(Timetoprogression)AbstractNo:e18045

ERCC1,RRM1andBRCA1arepromisingpredictiveandprognosticbiomarkersinadvancednon-smallcelllungcancer.ERCC1,RRM1,andBRCA1mRNA

expressionlevelsandclinicaloutcomeofadvancednon-smallcelllungcancer.Project Test腺癌（無腦轉(zhuǎn)移)：Avasting+雙藥

VEGFRmRNA腺癌（腦轉(zhuǎn)移）

：力必泰+卡鉑

TS/ERCC1mRNA

C225+雙藥

EGFR(copy)EGFR(w)+FISH(+):

TKI+雙藥

EGFR測序+FISH

EGFR(w)+FISH(-):

雙藥

EGFR測序+FISH

肺癌：FrombestofASCO2009鱗癌以外的NSCLC

力必泰+鉑類：TS，ERCC1mRNA鱗癌

標準化療：

RRM1,ERCC1,BRCA1,TS亞洲人用Avastin+GP方案更好

OS：17.4m（亞洲）；10.9m（歐美）亞洲人低劑量Avastin比歐美人低劑量更好

OS：28.2m（亞洲）；13.6m（歐美）說明：人種基因在個體性化療中存在差異。檢測基因表達：VEGFR/VEGF,RRm1,ERCC1。肺癌Ⅲ期：C225對OS未發(fā)現(xiàn)基因和免疫組化標志

OS(－):K-ras，EGFRm，EGFRFISH和免疫組化C225對肺癌OS存在陽性意義：C225+CT

皮疹（三周后）OS:8.8(m)→15.6(m)TKI一線選擇女性不抽煙腺癌:安慰劑PFS12:16(m)TKI首要選擇

EGFR突變:化療(CP)PFS20:8(m) RR47.3%:1%EGFR突變是影響TKI療效的獨立因素，性別、人種病理類型無關(guān)。特羅凱、易瑞沙、力比泰未見特別差異。免疫組化（EGFR）,EGFRFISH表達與療效無明顯差異。EGFR突變抗體：單中心報告，需要驗證中國肺癌500例（09-10結(jié)束）EGFR突變：特羅凱單藥(n=143)150mg/day

標準一線(GC)有陽性結(jié)果我院單中心報告：附件70%中國人(CA)n>16，60%歐美人(CA)n<15.江蘇省中醫(yī)院病理科（單中心）五年EGFR突變TKI序貫治療數(shù)據(jù)(附件）116例肺癌石蠟組織，20例肺癌血液對照，45例TKI治療隨訪JRW,RSLai,ASCO2009:116例肺癌EGFR/(CA)n測序和TKI療效（2005-2008）分組NO突變率(%）有效率（CR﹢PR%）控制率（CR﹢PR﹢SD%）觀察組11620（27%）62.5%100%對照組200（0%）14.3%57.1%觀察組(CA)n≤16(CA)n≥17

3820/3818/38575%0%100%33%對照組(CA)n≤16(CA)n≥17

103/107/100%33%50%33%我院6年來EGFR直接測序統(tǒng)計：各種腫瘤檢材：479例，總突變率19.7%肺癌石蠟?zāi)[瘤：277例，總突變率25.6%檢材類型：石蠟切片，穿刺石蠟切片，穿刺涂片，痰涂片，胸水涂片，快速冰凍片，HE染色突變類型：31種：點突變15種，插入/缺失16種(CA)n類型：≥16次重復(fù)184例；＜16次重復(fù)，39例肺癌共338例，突變82例，總突變率24.26%石蠟277例突變71例突變率25.632%痰1例突變0突變率0涂片2例突變1例突變率50%血22例突變1例突變率4.545%新鮮組織5例突變3例突變率60%胸水31例突變6例突變率19.355%EGFR突變情況EGFR外顯子突變例數(shù)（例）比例（%）1811.220194757.317213137.805EGFR突變亞型

EGFR第19外顯子缺失/插入突變：2235-2250，2235-2249，2236-2250，2236-2257，2236-2253，2238-2255，2239-2252，2239-2256，2239-2253，2239-2247，2240-2254，2240-2253，2240-2252，2240-2257，2241-2249；2235插入（CTC）；

EGFR第19外顯子點突變：2237A/T，P741P，E746V，L747PEGFR突變亞型EGFR第21外顯子L833V，H835L，G857G，L858R，L859R，L861Q，870位A/G

其他位置突變：第18外顯子上游第104位T/G第21外顯子上游第39位G/A第21外顯子下游第94位A/GEGFR無突變晚期肺癌(NSCLC一線治療)

OS:31.3:23.7一線標準化療Gem/Cis RRM1,ERCC1三代化療Gem/S/Tarciva序貫 FAST 中國人OS31.3(m)，有EGFR(CA)n種族敏感性因素70%中國人(CA)n>16次，致RR達70%以上－－依據(jù)分子標志物選擇化－－全部分子標志來自PCR實時定量擴增ASCO>80%文獻：ABI7900型、7500型BRCA1mRNA低表達(cutoff?)RRm1mRNA低表達健擇/泰素ORR更獲益RRm2mRNA低表達

---BonkovinaaL.Tumor