單克隆抗體與基因工程抗體的制備

第四章

單克隆抗體與基因工程抗體的制備第一節(jié)雜交瘤技術(shù)的基本原理一、雜交瘤技術(shù)二、陽性雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)與凍存第二節(jié)單克隆抗體的制備一、單克隆抗體的產(chǎn)生二、單克隆抗體的純化三、單克隆抗體的性質(zhì)鑒定四、單克隆抗體的特性第三節(jié)基因工程抗體制備一、人源化抗體二、小分子抗體三、抗體融合蛋白四、雙特異性抗體五、噬菌體抗體庫技術(shù)第四節(jié)單克隆抗體的應(yīng)用一、檢驗醫(yī)學(xué)診斷試劑二、蛋白質(zhì)的提純?nèi)⑿》肿涌贵w的應(yīng)用四、抗體融合蛋白的應(yīng)用五、雙特異抗體的應(yīng)用六、抗體庫技術(shù)的應(yīng)用和前景思考題小結(jié)第一節(jié)雜交瘤技術(shù)的基本原理雜交瘤技術(shù)原理：聚乙二醇（PEG）：細胞融合劑，使免疫的小鼠脾細

胞與小鼠骨髓瘤細胞融合HAT培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)：反復(fù)的免疫學(xué)檢測篩選克隆化增殖的雜交瘤

細胞系單克隆抗體生成：接種雜交瘤

細胞于小鼠腹腔，腹水中即可得到高效價的單克隆抗體抗體種類：第一代抗體多克隆抗體（polyclonalantibody)第二代抗體單克隆抗體（monoclonalantibody)第三代抗體基因工程抗體（geneticengineeringantibody)B淋巴細胞:壽命短,分泌特異系性抗體骨髓瘤細胞：壽命長雜交瘤細胞：壽命長，單克隆抗體流程一、雜交瘤技術(shù)不產(chǎn)生Ig的重鏈和輕鏈HGPRT-;TK-與提供淋巴細胞的動物品系相同（一）小鼠骨髓瘤細胞動物：BALB/c小鼠7～12周齡20g～25g體重（二）免疫脾細胞細胞性抗原：（1~2）×107/只，不加佐劑，2~3周重復(fù)一次可溶性抗原：首次，完全福氏佐劑+100微克抗原，3~6周100~200微克抗原，融合前3天，加強免疫免疫小鼠。淋巴細細胞。淋巴細細胞發(fā)發(fā)育。漿細細胞胞?？乖咏臃N種培養(yǎng)養(yǎng)液液：：RPM1640培培養(yǎng)養(yǎng)液液DMEM培培養(yǎng)養(yǎng)液液（三三））細細胞胞融融合合細胞胞融融合合劑劑：：PEG:分子子量量4000的的PEG是是最最常常用用的的細細胞胞融融合合劑劑作用用機機理理：：誘導(dǎo)導(dǎo)細細胞胞膜膜上上脂脂類類物物質(zhì)質(zhì)結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)重重排排，，使使細細胞胞膜膜易易打打開開而而有有助助于于細細胞胞融融合合作用用特特點點：：隨機機發(fā)發(fā)生生的的，，不不同同廠廠商商、、批批號號、、分分子子量量的的PEG，，其其純純度度與與毒毒性性有有所所不不同同培養(yǎng)養(yǎng)骨骨髓髓瘤瘤細細胞胞：：選擇擇對對數(shù)數(shù)生生長長期期的的細細胞胞進進行行傳傳代代培培養(yǎng)養(yǎng)細胞胞形形態(tài)態(tài)：：渾渾圓圓、、透透亮亮、、均均一一、、排排列列整整齊齊避免免細細胞胞返返祖祖：：定定期期用用8-AG處處理理細細胞胞注意意事事項項：：切切忌忌過過多多傳傳代代培培養(yǎng)養(yǎng)，，可可將將細細胞胞分分裝裝凍凍存存于于-80℃℃或或液液氮氮及及干干冰冰中中免疫疫脾脾細細胞胞的的制制備備：：1××108的淋巴巴細細胞胞無無菌菌手手術(shù)術(shù)飼養(yǎng)養(yǎng)細細胞胞：：細胞胞密密度度過過低低不不利利于于細細胞胞生生長長繁繁殖殖常用用小小鼠鼠腹腹腔腔細細胞胞作作飼飼養(yǎng)養(yǎng)細細胞胞其中中MQ還還有有清清除除死死亡亡細細胞胞的的作作用用飼養(yǎng)養(yǎng)存存活活一一般般不不超超過過2周周，，不不影影響響雜雜交交瘤瘤細細胞胞的的純純化化。飼養(yǎng)養(yǎng)細細胞胞骨髓髓瘤瘤細細胞胞與與淋淋巴巴細細胞胞(1:3)50%PEG1min內(nèi)內(nèi)加加完完;2min內(nèi)內(nèi)加加10ml培培養(yǎng)養(yǎng)液液融合合方方法法SP2/0細細胞胞與與脾脾細細胞胞的的比比例例為為1：：2～～51ml50%的的PEG（（無無菌菌，，預(yù)預(yù)溫溫37℃℃））在在1分分鐘鐘內(nèi)內(nèi)滴滴完完,靜靜置置90秒秒,時時間間一一到到,將將事事先先準(zhǔn)準(zhǔn)備備的的培培養(yǎng)養(yǎng)液液一一滴滴一一滴滴加加入入,停停止止PEG作作用用根據(jù)據(jù)細細胞胞數(shù)數(shù)量量加加入入HAT培培養(yǎng)養(yǎng)基基，，使使之之分分加加到到96孔孔板板中中時時每每孔孔細細胞胞數(shù)數(shù)為為（（0.5～～1.5））××105個。。融融合合后后7天天，，換換用用HT培培養(yǎng)養(yǎng)液液細胞胞融融合合10～～20天天出出現(xiàn)現(xiàn)克克隆隆HAT篩選選挑克克隆隆融合合細細胞胞的的早早期期培培養(yǎng)養(yǎng)HGPRT酶與與TK酶酶：：次黃黃嘌嘌呤呤磷磷酸酸核核糖糖轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化酶酶胸腺腺嘧嘧啶啶核核苷苷激激酶酶（四四））雜雜交交瘤瘤細細胞胞的的選選擇擇性性培培養(yǎng)養(yǎng)應(yīng)用用液液：：8-雜雜氮氮鳥鳥嘌嘌呤呤聚聚乙乙二二醇醇HAT培培養(yǎng)養(yǎng)基基：：H（（Hypoxanthine））:次黃黃嘌嘌呤呤A（（Aminopterin））：：氨基基喋喋呤呤；；葉葉酸酸拮拮抗抗物物，，阻阻斷斷DNA合合成成主主要要途途徑徑T(Thymidine)：：胸腺嘧嘧啶啶核核苷苷；；““核核苷苷酸酸前前體體””，，供供細細胞胞通通過過替替代代途途徑徑合合成成DNAHAT選選擇擇作作用用：：淋巴巴細細胞胞：：不能能生生長長，，5~7天天死死亡亡；；DNA合合成成的的主主要要途途徑徑被被A阻阻斷斷骨髓髓瘤瘤細細胞胞：：不能生生長，，5~7天死死亡；；HGPRT缺缺乏，，DNA合合成的的替代代途徑徑受阻阻SP2/O:HGPRT-，，TK-;長長命脾細胞胞:HGPRT+，，TK+;短命(7天天)雜交瘤瘤細胞胞:HGPRT+，，TK+;長命骨髓瘤瘤細胞胞、脾脾細胞胞與雜交瘤瘤細胞胞雜交瘤瘤細胞胞：長期生生長繁繁殖利用淋淋巴細細胞的的HGPRT，，將H合成成為嘌嘌呤堿堿并最最終與與T一一起合合成DNA從淋巴巴細胞胞獲得得產(chǎn)生生某種種抗體體的遺遺傳信信息從骨髓髓瘤細細胞獲獲得不不斷繁繁殖的的能力力有限稀稀釋法法(limitingdilution)顯微操操作法法(micromanipulation)FACS法法（fluorescenceactivatedcellsorter）軟瓊脂脂平板板法(softagarmethod)二、陽陽性雜雜交瘤瘤細胞胞的克克隆化化培養(yǎng)養(yǎng)與凍凍存特點：：不需任任何特特殊設(shè)設(shè)備克隆出出現(xiàn)效效率高高實驗室室常用用方法法方法：：細胞懸懸液通通過系系列稀稀釋每個培培養(yǎng)孔孔含0.5～1個細細胞有限稀稀釋法法效率最最高價格昂昂貴FACS配制方方案：：雜交瘤瘤細胞胞（（（1～～5））x106/ml)+細細胞胞凍存存液(30%～～40%牛牛血血清，，50%～～60%RPMI-1640培培養(yǎng)液液，10%DMSO)“慢凍凍”：：分步冷冷凍，，30℃→→-70℃℃→液液氮“快融融”：：取出立立即浸浸入37℃℃～40℃℃水浴浴中，，使其其迅速速融化化、復(fù)復(fù)蘇雜交瘤瘤細胞胞的凍凍存與與復(fù)蘇蘇防止污污染避免染染色體體丟失失防止非非分泌泌細胞胞的過過度生生長防止細細胞密密度過過高而而死亡亡細胞冷冷凍的的意義義第二節(jié)節(jié)單單克隆隆抗體體的制制備經(jīng)過反反復(fù)克克隆化化獲得得的抗抗體陽陽性雜雜交瘤瘤細胞胞株應(yīng)應(yīng)立即即擴大大培養(yǎng)養(yǎng)（除除及時時凍存存的細細胞外外）。。因多多次傳傳代易易引起起染色色體逐逐漸丟丟失而而使細細胞產(chǎn)產(chǎn)生抗抗體能能力逐逐漸減減弱甚甚至消消失，，還應(yīng)應(yīng)盡早早使用用獲得得的抗抗體陽陽性雜雜交瘤瘤細胞胞株制制備單單克隆隆抗體體。一、單單克隆隆抗體體的產(chǎn)產(chǎn)生動物體體內(nèi)誘誘生方方法：：每次用用BALB/c或F1代代小鼠鼠，（（5～～10）××105/只體外培培養(yǎng)法法：中空纖纖維培培養(yǎng)系系統(tǒng)單抗含含量不不高，，牛血血清Ab難難以去去除腹腔注注射法法前5天天進行行,預(yù)預(yù)先腹腹腔注注射pristane（1～～5））×106細胞1～3w形成成腹水水高滴度度腹水水可溶性性抗原原：ELISA抗體體捕獲獲法細胞、、亞細細胞結(jié)結(jié)構(gòu)上上的抗抗原：：免疫熒熒光法法（用用丙酮酮和甲甲醇按按1:1比比例固固定細細胞））二、單單克克隆抗抗體的的純化化ELISAELISA多頭加加樣槍槍。免疫熒熒光法法鹽析沉沉淀親和層層析離子交交換層層析McAb的的純化化Ig類類型、、亞類類測定定：雙擴法法或ELISA法特異性性測定定：抗原類類似物物的交交叉反反應(yīng)效價測測定：：用腹水水或培培養(yǎng)液液的稀稀釋度度表示示表位測測定：：幾株單單抗是是否為為不同同表位位特異異的,用競競爭爭抑制制法，，相加加指數(shù)數(shù)法及及微機機集群群分析析親和性性測定定：測定親親和常常數(shù)K雜交瘤瘤細胞胞染色色體：：秋水仙仙素裂裂解法法，小小鼠B細胞胞染色色體40條條，SP2/0細胞胞68條，，雜交交瘤細細胞一一般100多條條McAb靶靶抗原原分子子量：：常用westernblot三、單單克克隆抗抗體的的性質(zhì)質(zhì)鑒定定四、單單克隆隆抗體體的特特性高度特特異性性高度的的均一一性和和可重重復(fù)性性弱凝集集反應(yīng)應(yīng)和不不呈現(xiàn)現(xiàn)沉淀淀反應(yīng)應(yīng)對環(huán)境境敏感感性（一））單克克隆抗抗體的的特性性優(yōu)點：：在體外外“永永久””地存存活并并傳代代用相對對不純純的抗抗原，，獲得得大量量高度度特異異的、、均一一的抗抗體。。適用用于以以標(biāo)記記抗體體為特特點的的免疫疫學(xué)分分析方方法可用于于體內(nèi)內(nèi)的放放射免免疫顯顯像和和免疫疫導(dǎo)向向治療療（二））單克克隆抗抗體的的優(yōu)點點與局局限性性局限性性：：固有的的親和和性和和局限限的生生物活活性限限制了了它的的應(yīng)用用范圍圍反應(yīng)應(yīng)強度度不如如多克克隆抗抗體制備技技術(shù)復(fù)復(fù)雜、、費時時費工工、價價格較較高McAbPcAb抗原要要求可以不不純純純度高高得量高低低特異性性高低低穩(wěn)定低高高沉淀反反應(yīng)無有有成本高低低McAb與與PcAb的比較較McAbandPcAb第三節(jié)節(jié)基基因工工程抗抗體制制備基因工工程抗抗體(Geneticengineeringantibody)根據(jù)研研究者者的意意圖，，采用用基因因工程程方法法，在在基因因水平平，對對免疫疫球蛋蛋白基基因進進行切切割、、拼接接或修修飾后后導(dǎo)入入受體體細胞胞進行行表達達，產(chǎn)產(chǎn)生新新型抗抗體。。主要要包括括嵌合合抗體體、單單鏈抗抗體、、人源源化抗抗體、、雙價價抗體體和雙雙特異異性抗抗體。。將小鼠鼠Ig基因因敲除除，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染人人Ig基因因，在在小鼠鼠體內(nèi)內(nèi)產(chǎn)生生人Ab，，再經(jīng)經(jīng)雜交交瘤技技術(shù)，，產(chǎn)生生大量量完全全人源源化抗抗體一、人源源化抗體體方法：從雜交瘤瘤細胞分分離出功功能性可可變區(qū)基基因，與與人Ig恒定區(qū)區(qū)基因連連接，插插入適當(dāng)當(dāng)表達載載體，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染宿主主細胞，，表達人人-鼠嵌嵌合抗體體特點：減少了鼠鼠源性抗抗體的免免疫原性性保留了親親本抗體體特異性性結(jié)合抗抗原的能能力（一）嵌嵌合抗體體嵌合抗體體定義：指利用基基因工程程技術(shù)，，將人抗抗體可變變區(qū)（V）中互互補決定定簇（CDR））序列改改換成鼠鼠源單抗抗CDR序列。。重構(gòu)成成既具有有鼠源性性單抗的的特異性性又保持持抗體親親和力的的人源化化抗體。。RAb亦叫““重構(gòu)型型抗體””，因其其主要涉涉及CDR的““移植””，又可可稱為““CDR移植抗抗體意義：多種特異異的鼠源源單抗有有可能應(yīng)應(yīng)用于臨臨床治療療（二）改改型抗體體Fab：：抗原結(jié)合合片斷Fv：可變區(qū)片片段ScFv：單鏈可變變區(qū)片段段SdAb：單區(qū)抗體體二、小分分子抗體體小分子抗抗體其它生物物活性蛋蛋白融合合三、抗體體融合蛋蛋白許多抗原原抗體反反應(yīng)要求求雙價的的抗原結(jié)結(jié)合位點點，使抗抗原分子子上的兩兩個表位位交聯(lián)或或使兩個個抗原分分子連接接。將識識別腫瘤瘤抗原的的抗體和和識別細細胞毒性性免疫效效應(yīng)細胞胞表面分分子的抗抗體連結(jié)結(jié)在一起起，可使使效應(yīng)細細胞更容容易與腫腫瘤細胞胞結(jié)合識識別，取取得殺傷傷腫瘤細細胞的作作用。四、雙特特異性抗抗體分別分離離純化兩兩種不同同的McAb，，使各抗抗體解離離為單價價抗體，，再使兩兩種不同同抗原特特異性的的單價抗抗體通過過化學(xué)試試劑交聯(lián)聯(lián)起來，，然后分分離出目目的組分分。此法法缺點是是容易導(dǎo)導(dǎo)致抗體體失去活活性，產(chǎn)產(chǎn)物均一一性不佳佳。化學(xué)交聯(lián)聯(lián)BsAb將兩種分分泌不同同特異性性單抗的的雜交瘤瘤細胞進進行再次次融合，，產(chǎn)生四四源雜交交瘤(quadroma)。但二次雜雜交瘤細細胞株分分泌的是是兩套重重鏈，輕輕鏈的隨隨機組合合物。BsAb在其中中的比例例可為10%～～50%不等。。多倍雜雜交瘤細細胞的穩(wěn)穩(wěn)定性差差，BsAb的的產(chǎn)量少少且活性性低，費費時費力力，臨床床應(yīng)用時時存在人人抗鼠抗抗體免疫疫反應(yīng)(HAMA)，因此此不適用用于臨床床。細胞工程程BsAb多采用抗抗體分子子片段,如Fab，F(xiàn)v或ScFv,經(jīng)基基因操作作修飾后后,或體體外組裝裝為BsAb,或直接接表達分分泌型的的BsAb?；蚬こ藼sAb定義：將體外克隆的的抗體基因片片段插入噬菌菌體載體，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染工程細菌菌進行表達，，然后用抗原原篩選即可獲獲得特異的單單克隆噬菌體體抗體。利用用這一技術(shù)可可以得到完全全人源性的抗抗體，在HIV等病毒感感染和腫瘤的的診斷與治療療方面有其獨獨特的優(yōu)越性性五、噬菌體抗抗體庫技術(shù)用PCR擴增增人抗體重鏈鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈鏈可變區(qū)(VL)基因克隆到噬菌體體載體并以融融合蛋白的形形式表達在其其外殼表面用抗原抗體反反應(yīng)篩選出表表達所需要抗抗體的克隆并并擴增。使抗體基因以以分泌的方式式表達，獲得得可溶性的抗抗體片段。抗體庫：組合抗體文庫庫：在建庫過過程中如果將將VH和VL隨機組合人天然抗體庫庫：抗體mRNA來源于于未經(jīng)免疫的的正常人（一）基本原原理和程序噬菌體抗體庫庫從外周血或脾脾、淋巴結(jié)等等組織中分離離B淋巴細胞胞，提取mRNA并逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄為cDNA；應(yīng)用抗體輕鏈鏈和重鏈引物物，根據(jù)建庫庫的需要通過過PCR技術(shù)術(shù)擴增不同的的Ig基因片片段；構(gòu)建噬菌體載載體。噬菌體體抗體庫載體體有λ噬菌體體、絲狀噬菌菌體和噬菌粒粒三種，其中中后二者是目目前構(gòu)建表面面表達的噬菌菌體抗體庫(surfacedisplayantibodylibrary)常用載體；表達載體轉(zhuǎn)化化細菌，構(gòu)建建全套抗體庫庫。通過多輪輪的抗原親合合吸附-洗脫脫-擴增，最最終篩選出抗抗原特異的抗抗體克隆。構(gòu)建噬菌體抗抗體庫模擬天然全套套抗體庫抗體文庫可以以達到或超過過1011庫庫容,能包含含B細胞全部部克隆建庫的外源基基因來自人體體多克隆細胞胞的總mRNA通用引物具有有人的種屬普普遍性抗體的VH和和VL基因的的隨機重組也也增加了抗體體的多樣性（二）噬菌體體抗體庫技術(shù)術(shù)的特點避開了人工免免疫和雜交瘤瘤技術(shù)抗體庫的大容容量抗體庫極高的的篩選效率可獲得高親和和力的人源化化抗體VH和VL基基因的隨機重重組模擬了體體內(nèi)抗體親和和力成熟的過過程所用的抗體基基因又來自人人體第四節(jié)單單克隆抗體的的應(yīng)用檢驗醫(yī)學(xué)診斷斷試劑蛋白質(zhì)的提純純小分子抗體的的應(yīng)用抗體融合蛋白白的應(yīng)用雙特異抗體的的應(yīng)用抗體庫技術(shù)的的應(yīng)用和前景景病原微生物抗抗原、抗體的的檢測腫瘤抗原的檢檢測免疫細胞及其其亞群的的檢檢測激素測定細胞因子的測測定一、檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)診斷試劑病原體測定：：肝炎病毒－HAV,HBV,HCV,HDV,HEVTORCH－－弓形蟲,風(fēng)疹疹病毒,巨細細胞病毒，，單純皰疹病病毒細胞表面CD測定：CD4/CD8:Th/Tc白血病的分型型激素的測定：：內(nèi)分泌疾病的的診斷藥物測定(TDM)：抗排斥藥物抗抗腫瘤藥物地地高辛研究工作中的的探針：越來越多未知知功能cDNA的克隆對復(fù)雜的基因因功能和多肽肽蛋白功能的的研究需求增增加免疫沉淀二、蛋白質(zhì)的的提純單克隆抗體是是親和層析中中重要的配體體。將單克隆隆抗體吸附在在一個惰性的的固相基質(zhì)（（如Speharose2B、4B、6B等等）上，并制制備成層析柱柱。當(dāng)樣品流流經(jīng)層析柱時時，待分離的的抗原可與固固相的單克隆隆抗體發(fā)生特特異性結(jié)合，，其余成分不不能與之結(jié)合合。將層析柱柱充分洗脫后后，改變洗脫脫液的離子強強度或pH，，欲分離的抗抗原與抗體解解離，收集洗洗脫液便可得得到欲純化的的抗原。MACS定義：分子量較小但但具有抗原結(jié)結(jié)合功能的分分子片段優(yōu)點：分子量小,穿透性強強,抗原性性低不含F(xiàn)c段段，不會與與帶有Fc段受體的的細胞結(jié)合合，不良反反應(yīng)少可在原核系系統(tǒng)表達及及易于基因因工程操作作半衰期短，，有利于及及時中和及及清除毒素素三、小分子子抗體的應(yīng)應(yīng)用應(yīng)用：用于腫瘤的的導(dǎo)向治療療腫瘤的影像像分布基因治療細胞內(nèi)抗體體：在細胞內(nèi)表表達特異性識別別某一基因因產(chǎn)物可干擾該基基因產(chǎn)物的的生物活性性研究基因結(jié)結(jié)構(gòu)與功能能的關(guān)系腫瘤的體內(nèi)內(nèi)顯像診斷斷單鏈抗體排排除速度快快，穿透力力強，在腫腫瘤組織中中的分布指指數(shù)較完整整抗體分子子高放射顯像時時，放射性性核素排除除較快，對對身體危害害程度小，，顯像的本本底較低理想的顯像像定位診斷斷載體病毒的診斷斷和抗病毒毒感染血液性疾病病的診斷白血病的免免疫診斷及及分型四、抗體融融合蛋白的的應(yīng)用在體外免疫疫檢測中的的應(yīng)用自身紅細胞胞凝集試驗驗快速檢測HBV和HIV病原原體等避免化學(xué)交交聯(lián)減低兩兩者的活性性，從而提提高酶免疫疫檢測的敏敏感度用雙特異抗抗體作為二二抗，檢測測限達1ng/ml五、雙特異異抗體的應(yīng)應(yīng)用在體內(nèi)腫瘤瘤放射免疫疫顯像診斷斷中的應(yīng)用用方法：雙特異抗體體的一只臂臂結(jié)合靶抗抗原，一只只臂結(jié)合半半抗原螯合合劑，后者者可選擇性性地與放射射性核素結(jié)結(jié)合，利用用二次導(dǎo)向向系統(tǒng)顯示示特點：更高的的靈靈敏度和清清晰度在體內(nèi)免疫疫治療中的的應(yīng)用抗體分子可可與放射性性核素、細細胞毒藥物物、毒素、、等多種分分子相融合合，這些分分子在抗體體結(jié)合靶分分子后可提提供重要輔輔助功能雙功能抗體體可有效針針對低水平平的腫瘤相相關(guān)抗原，，并將細胞胞毒物質(zhì)輸輸送到腫瘤瘤細胞抗體還可與與攜帶藥物物的脂質(zhì)體體、各種PEG偶聯(lián)聯(lián)，從而增增強體內(nèi)運運輸和藥代代動力學(xué)六、抗體庫庫技術(shù)的應(yīng)應(yīng)用和前景景在腫瘤體外外診斷中的的應(yīng)用在腫瘤診斷斷中的應(yīng)用用在腫瘤治療療中的應(yīng)用用1．雜交瘤瘤技術(shù)是如如何問世的的？其基本本原理是什什么？2．什么是是單克隆抗抗體？其特特性和局限限性如何？？與多克隆隆抗體有何異同同？3．雜交瘤瘤細胞的克克隆方法有有哪些？4．細胞株株凍融的原原則是什么么？5．大量制制備單克隆隆抗體的方方法有哪些些，各有哪哪些優(yōu)缺點點？6．單克隆隆抗體的性性質(zhì)鑒定的的方法有哪哪些？7．?dāng)⑹鰡螁慰寺】贵w體的制備流流程和應(yīng)用用。8．?dāng)⑹龌蚬こ炭箍贵w的概念念和優(yōu)點。。9．基因工工程抗體的的種類和應(yīng)應(yīng)用。10．抗體體庫技術(shù)的的原理和特特性有哪些些？思考題小結(jié)雜交瘤單克克隆抗體制制備技術(shù)的的原理是利利用聚乙二二醇作為細細胞融合劑劑，使免疫疫的小鼠脾脾細

胞與與具有在體體外不斷繁繁殖能力的的小鼠骨髓髓瘤細胞融融為一體體，在HAT選擇性性培養(yǎng)基的的作用下，，只讓融合合成功的雜雜交瘤細胞胞生長，經(jīng)經(jīng)過反復(fù)的的免疫學(xué)檢檢測篩選和和單個細胞胞培養(yǎng)（克克隆化）,最終獲得得既能產(chǎn)生生所需單克克隆抗體,又能不斷斷繁殖的雜雜交瘤細細胞系，將將這種細胞胞擴大培養(yǎng)養(yǎng)，接種于于小鼠腹腔腔，在其產(chǎn)產(chǎn)生的腹水水中即可得得到高效價價的單克隆隆抗體。20世世紀(jì)紀(jì)80年年代代誕誕生生了了應(yīng)應(yīng)用用DNA重重組組及及蛋蛋白白工工程程技技術(shù)術(shù)對對編編碼碼抗抗體體基基因因按按不不同同需需要要進進行行改改造造和和裝裝配配，，經(jīng)經(jīng)導(dǎo)導(dǎo)入入適適當(dāng)當(dāng)?shù)牡氖苁荏w體細細胞胞后后重重新新表表達達的的抗抗體體，，稱稱為為基基因因工工程程抗抗體體，，它它具具有有如如下下優(yōu)優(yōu)點點：：①①通通過過基基因因工工程程技技術(shù)術(shù)的的改改造造，，可可以以降降低低甚甚至至消消除除人人體體對對抗抗體體的的排排斥斥反反應(yīng)應(yīng)；；②②基基因因工工程程抗抗體體的的分分子子量量較較小小，，可可以以部部分分降降低低抗抗體體的的鼠鼠源源性性，，更更有有利利于于穿穿透透血血管管壁壁，，進進入入病病灶灶的的核核心心部部位位；；③③根根據(jù)據(jù)治治療療的的需需要要，，制制備備新新型型抗抗體體；；④④可可以以采采用用原原核核細細胞胞、、真真核核細細胞胞和和植植物物等等多多種種表表達達形形式式，，大大量量表表達達抗抗體體分分子子，，大大大大降降低低了了生生產(chǎn)產(chǎn)成成本本。。9、靜夜四無無鄰，荒居居舊業(yè)貧。。。12月-2212月-22Wednesday,December21,202210、雨中黃葉葉樹，燈下下白頭人。。。12:49:0312:49:0312:4912/21/202212:49:03PM11、以我獨沈沈久，愧君君相見頻。。。12月-2212:49:0312:49Dec-2221-Dec-2212、故人江海海別，幾度度隔山川。。。12:49:0312:49:0312:49Wednesday,December21,202213、乍乍見見翻翻疑疑夢夢，，相相悲悲各各問問年年。。。。12月月-2212月月-2212:49:0312:49:03December21,202214、他他鄉(xiāng)鄉(xiāng)生生白白發(fā)發(fā)，，舊舊國國見見青青山山。。。。21十十二二月月202212:49:03下下午午12:49:0312月月-2215、比比不不了了得得就就不不比比，，得得不不到到的的就就不不要要。。。。。十二二月月2212:49下下午午12月月-2212:49December21,202216、行行動動出出成成果果，，工工作作出出財財富富。。。。2022/12/2112:49:0312:49:0321December202217、做前，能能夠環(huán)視四四周；做時時，你只能能或者最好好沿著以腳腳為起點的的射線向前前。。12:49:03下下午12:49下午12:49:0312月-229、沒有失敗敗，只有暫暫時停止成成功！。12月-2212月-22Wednesday,December21,202210、很多事情情努力了未未必有結(jié)果果，但是不不努力卻什什么改變也也沒有。。。12:49:0312:49:0312:4912/21/202212:49:03PM11、成功就是是日復(fù)一日日那一點點點小小努力力的積累。。。12月-2212:49:0312:49Dec-2221-Dec-2212、世世間間成成事事，，不不求求其其絕絕對對圓圓滿滿，，留留一一份份不不足足，，可可得得無無限限完完美美。。。。12:49:0312:49:031