抗感染中藥作用機(jī)理研究方法概況

抗感染中藥作用機(jī)理研究方法概況內(nèi)容摘要】目的：為了對(duì)中藥抗感染機(jī)制研究方法有一個(gè)系統(tǒng)了解，以便更好指點(diǎn)臨床前新藥研發(fā)。方法：綜述近年來(lái)抗感染中藥在臨床應(yīng)用和作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)方面的文獻(xiàn)研究。結(jié)果：當(dāng)前對(duì)抗感染中藥的研究重要從整體動(dòng)物模型、體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞模型、細(xì)胞因子和蛋白基因等多條理進(jìn)行，并證明抗感染中藥重要通過(guò)對(duì)免疫系統(tǒng)、炎癥介質(zhì)以及相關(guān)蛋白、基因的影響而發(fā)揮其抗感染作用。結(jié)論：選用適宜的研究方法能夠揭示中藥抗感染機(jī)制，研究開(kāi)發(fā)具有抗感染作用的中藥將產(chǎn)生良好的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值?！颈疚年P(guān)鍵詞語(yǔ)】抗感染；中藥；作用機(jī)理；綜述感染性疾病(infectiousdiseases)是由病毒、支原體、衣原體、立克次體、細(xì)菌、真菌、分支桿菌、寄生蟲(chóng)等所引起的疾病，是臨床幾大疾病之一，嚴(yán)重危害著人類的生命與健康?？股氐某霈F(xiàn)與應(yīng)用在預(yù)防和治療感染性疾病方面發(fā)揮了宏大作用，但同時(shí)抗生素的濫用也帶來(lái)了更為嚴(yán)重的問(wèn)題。藥是一個(gè)偉大的寶庫(kù)，很多中藥制劑與抗生素類藥物相比，臨床療效好，毒副作用小。在人類面臨細(xì)菌耐藥性和抗生素不良反應(yīng)不斷增長(zhǎng)的嚴(yán)峻形勢(shì)下，抗感染中藥制劑的應(yīng)用大大豐富了現(xiàn)代感染性疾病治療學(xué)的內(nèi)容，對(duì)抗感染中藥制劑的研究與探尋求索顯得愈加主要與迫切。當(dāng)前，抗感染中藥制劑在臨床上已經(jīng)得到了較廣泛的應(yīng)用，不僅品種繁多、劑型多樣，而且對(duì)特定的感染具有多方面綜合作用，療效甚佳。在抗感染中藥的實(shí)驗(yàn)研究方面，已進(jìn)行了多角度、多條理的研究。現(xiàn)從研究方法角度對(duì)抗感染中藥的研究狀態(tài)綜述如下。1從整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度，廣泛對(duì)抗感染中藥的作用機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)的研究動(dòng)物模型是研究疾病和藥物的主要工具，整體動(dòng)物模型能夠比較真實(shí)、全面反映疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸特點(diǎn)?？垢腥局兴幍难芯恐写罅渴褂昧烁腥緞?dòng)物模型，并用之來(lái)客觀評(píng)價(jià)此類藥物的藥效以及藥理作用機(jī)制。馬忠麗等[1]復(fù)制金黃色葡萄球菌感染引起的豚鼠皮膚瘡瘍模型，研究斂瘍散對(duì)模型的作用。顯示模型動(dòng)物瘡瘍部分的紅腫、分泌物、瘡口得到良好的改善，膿液中溶菌酶的水平治療后也的明顯的提升。吳捷等[2]討論八正合劑治療泌尿系統(tǒng)感染性疾病的藥理學(xué)作用基礎(chǔ)，八正合劑治療泌尿系統(tǒng)感染性疾病的作用機(jī)制重要與其去除尿路細(xì)菌、抑制細(xì)菌經(jīng)尿路上行引起感染，減輕腫脹、發(fā)熱、疼痛等炎性反應(yīng)癥狀有關(guān)。張國(guó)紅等[3]研究百草圣打針液抗感染作用：將大腸桿菌注入小鼠的膀胱后觀察藥物對(duì)細(xì)菌上行感染腎臟的抑制造用；家兔靜脈打針大腸桿菌內(nèi)毒素后觀察藥物對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素引起機(jī)體發(fā)熱的影響；采取大鼠足趾炎性腫脹模型觀察藥物對(duì)炎性腫脹及機(jī)械壓迫足趾疼痛的抑制造用。結(jié)果百草圣打針液治療動(dòng)物感染性疾病的作用機(jī)制重要與其去除體內(nèi)細(xì)菌感染和減輕發(fā)熱、腫脹、疼痛等炎癥反應(yīng)有關(guān)。李萍等[4]研究陳氏“黑藥膏〞抗感染作用。選用雄性c57bl小鼠，分別腹腔打針2ml黑藥膏和蒸餾水，翌日反復(fù)打針，隔日采集小鼠眼眶血及腹腔液，做血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)換率、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)測(cè)定。結(jié)果顯示黑藥膏能激活小鼠腹腔游走巨噬細(xì)胞，提升其吞噬能力，其抗菌機(jī)理可能是，促進(jìn)創(chuàng)面膿液的滲出，膿液中溶菌酶含量增高，巨噬細(xì)胞的增殖，被激活的巨噬細(xì)胞能處理抗原，又能直接殺傷細(xì)菌和抑制細(xì)菌生長(zhǎng)；機(jī)體的防御機(jī)體加強(qiáng)，進(jìn)而到達(dá)抗感染作用。2體內(nèi)外抑菌實(shí)驗(yàn)的采取，為抗感染中藥抗菌靶標(biāo)和抗菌譜的的定位奠定了基礎(chǔ)抑菌實(shí)驗(yàn)是直接用來(lái)評(píng)價(jià)抗感染藥物抗炎、抗菌作用性能的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法，根據(jù)不同作用環(huán)境分為體內(nèi)和體外抑菌實(shí)驗(yàn)。抑菌實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛘鎸?shí)地反映抗感染中藥對(duì)細(xì)菌、病毒的抑制〔ed50、抗菌率〕、殺滅能力〔ld50〕，以及具體表現(xiàn)出細(xì)菌對(duì)藥物的耐藥率等指標(biāo)。段琚華等[5]采取體內(nèi)外抑菌實(shí)驗(yàn)討論肺炎沖劑治療小兒支氣管肺炎的療效及機(jī)理。結(jié)果顯示體外抗菌試驗(yàn)對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、肺炎克雷伯桿菌、流感嗜血桿菌、溶血性鏈球菌、綠膿桿菌均有抑制造用；體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)對(duì)肺炎球菌、肺炎克雷伯桿菌感染小鼠的ed50測(cè)定分別為3.3306和3.5768g。李蔚林等[6]對(duì)中藥加味五味消毒飲治療皮膚細(xì)菌惑染的機(jī)理，從抗菌活性和對(duì)人體免疫功能的影響等方面作了討論。該方煎液對(duì)金葡菌、溶鏈菌、四聯(lián)球菌、大腸、綠膿桿菌普遍具有抗菌作用，其總有效抗菌率81.25％，耐藥率18.75％。肖冰等[7]對(duì)以章亮厚主任醫(yī)師治療慢性支氣管炎的經(jīng)歷體驗(yàn)方制造而成的顆粒劑速咳寧進(jìn)行抑菌、抗感染實(shí)驗(yàn)研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示清楚:速咳寧可抑制金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、甲型鏈球菌的生長(zhǎng)及對(duì)抗炎性鼠耳的腫脹,可減少患者痰液上皮脫落細(xì)胞與炎癥細(xì)胞的數(shù)量及降低痰液dna含量、提升siga水平。有研究表示清楚[8]，黃連解毒湯有較慢的抗菌作用，對(duì)革蘭氏陰性(g-)和革蘭氏陽(yáng)性(g+)球菌、桿菌和阿米巴原蟲(chóng)等均有抑制造用，且不會(huì)產(chǎn)生耐藥性。進(jìn)一步研究揭示，黃連解毒湯可使各種細(xì)菌產(chǎn)生細(xì)胞質(zhì)水腫和細(xì)胞壁溶解等變性作用。李偉芳等[9]觀察三金膠囊的抑菌作用，結(jié)果三金膠囊對(duì)體內(nèi)感染金葡菌、甲型鏈球菌等小鼠有保衛(wèi)作用，體外對(duì)金葡菌等9種細(xì)菌有明顯抑菌作用，灌胃后尿液則試具有抑菌作用。3細(xì)胞模型的采取，將抗感染中藥作用機(jī)理的討論引入了細(xì)胞水平領(lǐng)域細(xì)胞模型是從細(xì)胞層面研究藥物的作用以及作用機(jī)制，它能夠從細(xì)胞的生理病理改變的角度具體表現(xiàn)出藥物的直接作用?？垢腥舅庍x用的細(xì)胞模型較多，既有正常生理性細(xì)胞模型，也有病理性的疾病細(xì)胞模型，研究的條理有單純細(xì)胞宏觀變化，亦有從細(xì)胞rna改變角度進(jìn)行。陸原等[10]采取細(xì)胞模型探尋求索中藥復(fù)方尿路清對(duì)解脲支原體〔uu〕感染非淋球菌性尿道炎〔ngu〕的作用機(jī)理,為中醫(yī)藥治療本病提供抑菌根據(jù)。結(jié)果顯示尿路清對(duì)63株uu的最小抑菌濃度(mic)臨床株的最小抑菌濃度(mic)范圍為0.48mg/ml～15.63mg/ml,mic50≤1.95mg/ml,mic90≤3.91mg/ml，14種和未定型uu血清型別中，除11型、1型、2型、3型對(duì)尿路清的敏感性均較高(mic≤3.91mg/ml)?？梢?jiàn)，中藥尿路清對(duì)63株不同血清型、耐藥(四環(huán)素、紅霉素)菌株uu顯示出了較強(qiáng)的體外抑菌作用。王毅等[11]以培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，討論中藥黃岑抗細(xì)菌感染及其毒血癥作用的可能機(jī)制，結(jié)果顯示黃岑甙能減輕內(nèi)毒素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞膜構(gòu)造約損傷作用，尤其對(duì)細(xì)胞連接的保衛(wèi)作用較為明顯。同時(shí)發(fā)現(xiàn)黃岑甙能抑制內(nèi)毒素所致的細(xì)胞蛋白分泌功能加強(qiáng)，蛋白水解酶的釋放以及氧自在基的產(chǎn)生等。陰宏[12]以絲裂霉素〔mimc〕生成骨髓抑制模型，研究補(bǔ)中益氣湯的抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(mrsa)作用，結(jié)果顯示補(bǔ)中益氣湯使外周血白細(xì)胞數(shù)恢復(fù)至正常值的65％，可恢復(fù)巨噬細(xì)胞的吞噬殺菌功能和分泌白介素－1(il－1)β功能；促進(jìn)ifn－γ的產(chǎn)生；抑制mrsa感染小鼠體內(nèi)感染，16h感染小鼠體內(nèi)細(xì)菌的增殖；延長(zhǎng)mrsa感染小鼠的存活期。鄺棗園等[13]研究鞘氨醇激酶(sk)在肺炎衣原體感染血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響以及黃芩苷對(duì)其的干涉，采取體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ecv304細(xì)胞,待長(zhǎng)成單層后參加肺炎衣原體(cpn)為模型組,參加cpn與黃芩苷，肺炎衣原體感染能夠刺激skmrna表達(dá)增長(zhǎng),中藥黃芩苷對(duì)skmrna的表達(dá)有一定抑制造用。4細(xì)胞因子、蛋白組學(xué)以及基因技術(shù)的引入，對(duì)中藥抗感染機(jī)理的研究愈加深切進(jìn)入細(xì)胞因子是由機(jī)體活化的免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞合成和分泌的一類非抗體、非補(bǔ)體的可溶性小分子的多肽活性物質(zhì)，以白介素為代表的一類細(xì)胞因子在感染性疾病中飾演側(cè)重要的角色。而近年興起的蛋白組學(xué)與基因技術(shù)也被逐步運(yùn)用于抗感染藥物的研究，能更微觀地解釋此類藥物的作用機(jī)制。張瑞等[14]研究“抗支口服液〞對(duì)大鼠肺炎支原體(mp)模型的作用及其作用機(jī)理，證明抗支口服液的機(jī)理可能是通過(guò)降低tnfa含量，削弱或阻斷了對(duì)中性粒細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞外表粘附受體的激活，進(jìn)而抑制了肺組織產(chǎn)生過(guò)度的炎癥反應(yīng)；同時(shí)，由于減弱了tnfa與il1協(xié)同反應(yīng),減輕了感染反應(yīng)，減小了ck介導(dǎo)的炎癥作用，進(jìn)而抑制肝細(xì)胞分泌急性反應(yīng)蛋白(akp)以參與炎癥急性期反應(yīng)。張豪杰等[15]討論芩連合劑對(duì)幽門螺桿菌(hp)延緩乙酸性胃潰瘍愈合的治療作用及其作用機(jī)制,中藥組與hp+乙酸組相比潰瘍底部及四周胞漿中bfgfmrna表達(dá)明顯加強(qiáng)，并能顯著提升胃黏膜pcna標(biāo)記指數(shù)的陽(yáng)性率?？梢?jiàn)芩連合劑能有效拮抗nctc11637株hp對(duì)慢性胃潰瘍的延緩愈合，其加速潰瘍愈合的重要機(jī)理與促進(jìn)潰瘍四周血管生成因子bfgf表達(dá)和促進(jìn)胃黏膜細(xì)胞增殖等有關(guān)。趙楊等[16]討論中藥金葉敗毒制劑拮抗人巨細(xì)胞病毒(hcmv)感染的機(jī)理，結(jié)果顯示金葉敗毒制劑可有效抑制感染細(xì)胞內(nèi)hcmvdna復(fù)制及病毒自受染細(xì)胞內(nèi)釋放，并能促進(jìn)tnfa、il－6蛋白分泌，調(diào)節(jié)免疫功能，發(fā)揮拮抗hcmv感染、保衛(wèi)細(xì)胞的效用。熊天琴[17]采取圖象分析技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附、免疫組織化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)等現(xiàn)代研究手段,初次從細(xì)胞水安然平靜分子水平上對(duì)辛夷揮發(fā)油(vombp)治療過(guò)敏性鼻炎的藥效和機(jī)理作了較系統(tǒng)的研究。結(jié)果證明辛夷揮發(fā)油可能通過(guò)降低th2細(xì)胞因子il4的水平，調(diào)整th1/th2平衡的失調(diào)，從變應(yīng)性鼻炎發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)抑制疾病的發(fā)生、發(fā)展而到達(dá)治療的目的；阻攔細(xì)胞間粘附分子icam1在炎癥部位血管內(nèi)皮細(xì)胞外表的高表達(dá)，抑制了血管內(nèi)皮細(xì)胞與嗜酸性粒細(xì)胞的粘附經(jīng)過(guò)，進(jìn)而抑制了嗜酸性粒細(xì)胞向炎癥部位浸潤(rùn),發(fā)揮抗過(guò)敏作用。張代娟等[18]采取rtpcr及westernblot分析stlr4mrna及蛋白水平的改變,用elisa方法檢測(cè)tnfα分泌的變化討論中藥成分青心酮對(duì)raw264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)時(shí)可溶性toll樣受體4mrna、蛋白表達(dá)及tnfα分泌的影響,經(jīng)青心酮處理后在炎癥反應(yīng)時(shí),stlr4mrna及蛋白表達(dá)均上調(diào)。5結(jié)束語(yǔ)和瞻望綜上所述，抗感染中藥的藥理作用研究方法較多，條理清楚。當(dāng)然，在詳細(xì)的研究中單獨(dú)采取某一方法、某一條理的情況不多，往往是多種方法的綜合使用、多條理的綜合研究。在抗感染機(jī)制方面，研究表示清楚中藥既可直接抗菌而治療感染性疾病，又可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能、加強(qiáng)機(jī)體免疫力，而調(diào)動(dòng)本身潛力抗感染，到達(dá)治療疾病的目的。當(dāng)前，這些抗感染機(jī)制研究還是比較粗淺的,對(duì)詳細(xì)的作用經(jīng)過(guò)了解不夠具體,尤其是在細(xì)胞和分子水平的研究還比較少。除此之外，中藥是天然產(chǎn)品,一味藥中包括許多成分,而且存在一味藥中的許多成分均有抗炎作用的現(xiàn)象,對(duì)于這些成分在抗炎經(jīng)過(guò)中能否起協(xié)同作用,其互相之間是怎樣作用的并不清楚,就需要研究者綜合采取各種已有的研究方法，以至是引入最新的科技結(jié)果對(duì)這些方面進(jìn)行深切進(jìn)入研究[19]。中藥資源豐富，中藥復(fù)方制劑、單味中藥、中藥有效部位和有效成分等很少有耐藥性報(bào)道，在耐抗生素菌株越來(lái)越多的今天，研究開(kāi)發(fā)中藥抗感染制劑具有廣泛前景?！疽韵聻閰⒖嘉墨I(xiàn)】1張漢慶，覃劍，等.中藥“斂瘍散"對(duì)慢性皮膚潰瘍的作用機(jī)制研究[j].雜志，2007，15〔4〕：18－23.2吳捷，曹舫，劉傳鎬，等.八正合劑抗感染作用的實(shí)驗(yàn)研究[j].中草藥，2002，33〔6〕：523.3張國(guó)紅，王剛，鄧學(xué)兵,等.百草圣打針液抗感染作用的實(shí)驗(yàn)研究[j].四川畜牧獸醫(yī)，2003，30〔3〕：15.4李萍，朱凌云.“陳氏〞黑藥膏抗感染作用的實(shí)驗(yàn)研究[j].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2004，2o〔l4〕：1396.5段琚華，劉曉萍，羅世杰，等.肺炎沖劑治療小兒支氣管肺炎臨床及實(shí)驗(yàn)研究[j].，2002，11〔1〕：7.6肖冰，何浩，章亮厚.速咳寧抑菌、抗感染的實(shí)驗(yàn)研究[j].新中醫(yī)，1996，28〔12〕：48-50.7李蔚林，劉軍，黃德寅，等.加味五味消毒飲治療皮膚細(xì)菌感染的機(jī)理研究[j].青海醫(yī)藥雜志，1998，28〔8〕：3-4.8金航.關(guān)于漢方藥對(duì)各種細(xì)菌抗藥力的變化及形態(tài)的影響[j].國(guó)外醫(yī)學(xué)·中醫(yī)中藥分冊(cè)，1998，7(1)：15-17.9李偉芳，周軍，李茂，等.三金膠囊抗菌作用的實(shí)驗(yàn)研究[j].，2o03，l0〔2〕：92-93.10陸原，陳達(dá)燦，國(guó)維，等.中藥復(fù)方對(duì)臨床耐藥菌株不同血清型uu的藥敏實(shí)驗(yàn)[j].，2001，17〔6〕：41-43.11王毅，朱佩芳，王正國(guó)，等.黃岑甙對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞保衛(wèi)作用及其生化機(jī)理[j].中國(guó)中醫(yī)急癥，1994，3〔6〕：260-262.12陰宏.補(bǔ)中益氣湯對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染動(dòng)物的抗菌作用[j]．國(guó)外醫(yī)學(xué)·中醫(yī)中藥分冊(cè)，1999，21(3)：37-39.13鄺棗園，吳偉，黃玲，等.鞘氨醇激酶在肺炎衣原體感染中的變化及黃芩苷的干涉[j].浙江中醫(yī)雜志，2006，41〔8〕：477－479.14張瑞，張鵬宇，劉丹，等.抗支口服液對(duì)肺炎支原體感染大鼠tnfa水平的影響[j].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，002，12〔8〕：483-484.15張豪杰，周庚生，顧偉忠，等.芩連合劑對(duì)幽門螺桿菌相關(guān)性慢性胃潰