微生物學(xué)實驗教案-新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院理論課教案首頁

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院教案首頁課程名稱：紙金物考授課教師姓名及職稱：*總旅教授一、授課題目實艙一佃育的南津?包和革呈氏集包二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的操作技術(shù)；2、掌握細(xì)菌單染色和革蘭氏染色的方法；3、初步掌握無菌操作技術(shù)；4、掌握革蘭氏染色反應(yīng)原理、操作步驟和意義。3課時四、授課重點1、微生物涂片、染色的基本技術(shù)；2、無菌操作技術(shù)五、授課難點1、微生物涂片、染色的基本技術(shù)；2、無菌操作技術(shù)六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與參考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編?！段⑸飳W(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題.你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？.當(dāng)你對一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠？

課程名稱：做金曲等任課教師：中恿根及裁課程名稱：做金曲等任課教師：中恿根及裁基本內(nèi)容教學(xué)手段和教學(xué)

基本內(nèi)容細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色一、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的操作技術(shù)：2、掌握細(xì)菌單染色和革蘭氏染色的方法；3、初步掌握無菌操作技術(shù)：4、掌握革蘭氏染色反應(yīng)原理、操作步驟和意義。二、實驗內(nèi)容和原理細(xì)菌的涂片和染色是微生物學(xué)實驗中的一項基本技術(shù)。細(xì)菌個體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對比，以便在顯微鏡下進(jìn)行觀察。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類。堿性染料的離子帶正電荷，能和帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。因細(xì)菌蛋白質(zhì)等電點較低，當(dāng)它生長于中性、堿性或弱酸性的溶液中時常帶負(fù)電荷，所以通常采用堿性染料（如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅或孔雀綠等）使其著色。酸性染料的離子帶負(fù)電荷，能與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合。當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH下降時，細(xì)菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料著色。中性染料是前兩者的結(jié)合物又稱復(fù)合染料，如伊紅美藍(lán)、伊紅天青等。根據(jù)實驗?zāi)康牟煌煞譃楹唵稳旧?、鑒別染色法和特殊染色法等，本實驗主要做前面兩種。（-）簡單染色法原理：這是最基本的染色法，由于細(xì)菌在中性環(huán)境下一般帶負(fù)電荷，所以通常采用一種堿性染料如美藍(lán)、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫進(jìn)行染色。簡單染色法是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)，簡單染色不能辨別細(xì)菌細(xì)胞的構(gòu)造。（二）革蘭氏染色法原理革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家C.Gram所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法，因為通過此法染色，可將細(xì)菌鑒別為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G）兩大類。革蘭氏染色過程所用四種不同溶液和作用：強調(diào)實驗課的要求和規(guī)則簡單復(fù)習(xí)理論知識過渡到本實驗?zāi)康慕Y(jié)合理論知識講解實驗原理

1、堿性染料：這在簡單染色中已討論過，此處用結(jié)晶紫。2、媒染劑：其作用是增強染料與細(xì)菌的親和力，更好地加強染料與細(xì)胞的結(jié)合。常用的媒染劑是碘液。3、脫色劑：幫助染料從被染色的細(xì)胞中脫色。利用細(xì)菌對染料脫色的難易程度不同，而將細(xì)菌加以區(qū)分。革蘭氏陽性細(xì)菌不易被脫色劑脫色，而革蘭氏陰性細(xì)菌則易被脫色。常用的脫色劑是丙酮或乙醇，這里所用的是95%的乙醇。4、復(fù)染液：也是一種堿性染料，目的是使脫色的細(xì)菌重新染上另一種顏色，以便與未脫色菌進(jìn)行比較。這里用的是蕃紅花紅溶液。近年來由于對細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)有了較深入的了解，對革蘭氏染色的機制提出不同的看法。一般認(rèn)為革蘭氏陽性細(xì)菌的肽聚糖層較厚，經(jīng)乙醇處理后使之發(fā)生脫水作用而使孔徑縮小，結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物保留在細(xì)胞內(nèi)而不被脫色；而革蘭氏陰性細(xì)菌的肽聚糖層很薄，脂肪含量高，經(jīng)乙醇處理后部份細(xì)胞壁可能被溶解并改變其組織狀態(tài)，細(xì)胞壁孔徑大，不能阻止溶劑透入，因而將結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物洗去而被脫色。雖然如此，革蘭氏染色的差異并不能完全認(rèn)為是化學(xué)的差別，也有物理結(jié)構(gòu)不同的結(jié)果，因為酵母菌細(xì)胞壁的成份完全和細(xì)菌不同，但具有革蘭氏染色陽性反應(yīng)。三、實驗器材1、活材料：培養(yǎng)12-16h的枯草桿菌(Bacillussubtilis),培養(yǎng)24小時的大腸桿菌(Escherichiacoli)2、染色液和試劑：草酸鍍結(jié)晶紫染液、盧哥氏碘液、95%酒精、蕃紅染液、復(fù)紅、乙醛酒精溶液、香柏油、無菌水3、器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。四、實驗方法1、簡單染色：(1)涂片：取干凈載玻片一塊，在載玻片的左、右各加一滴無菌水，按無菌操作法從菌種斜面挑取少量菌體與水滴充分混勻，并涂成薄膜，涂布面積約1?1.5cm2,左邊涂枯草桿菌，右邊涂大簡單介紹本次實驗所用器材重點介紹制片方法，強調(diào)無菌操作

腸桿菌。注意取菌不要太多，圖片要均勻。(2)干燥：讓涂片自然晾干。(3)固定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定。在火上固定時，用手摸涂片反面，以不燙手為宜。不能將載片在火上烤，否則細(xì)菌形態(tài)毀壞。(染色前必須固定細(xì)菌。其目的有二：一是殺死細(xì)菌并使菌體粘附于玻片上；二是增加其對染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。固定時盡量維持細(xì)胞原有的形態(tài)。)(4)染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加草酸核結(jié)晶紫染液l-2min。(5)水洗：傾去染色液，斜置載片，用自來水的細(xì)水流由載片上端流下，不得直接沖在涂菌處，直洗至從載片上流下的水中無染色液的顏色為止。(6)干燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸干。(7)鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂?將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察細(xì)菌的形態(tài)。2、革蘭氏染色：(1)涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同。(2)晾干：與簡單染色法相同。(3)固定：與簡單染色法相同。(4)結(jié)晶紫染色：將玻片置于廢液缸玻片擱架上，加適量(以蓋滿細(xì)菌涂面)的結(jié)晶紫染色液染色1分鐘。(5)水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗。(6)媒染：滴加盧哥氏碘液，媒染Imin。(7)水洗：用水洗去碘液。(8)脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙醇脫色20-25S至流出液無色，立即水洗。(9)復(fù)染：滴加蕃紅復(fù)染2min。(10)水洗：用水洗去涂片上的蕃紅染色液。(11)晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干。(12)鏡檢：鏡檢時先用低倍，再用高倍，最后用油鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應(yīng)性。邊講解邊演示，并強調(diào)實驗注意事項通過提出問題加強學(xué)生對實驗原理的理解(13)邊講解邊演示，并強調(diào)實驗注意事項通過提出問題加強學(xué)生對實驗原理的理解①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈：a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去；b.用擦鏡紙沾少許乙酸酒精溶液將鏡頭擦2-3次；c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2-3次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭。強調(diào)實驗后處理的重②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。五、注意事項1.載玻片要潔凈無油跡，否則菌液涂不開。涂片時，滴水不要過多，挑菌量宜少，涂片要均勻，菌膜宜薄。要性.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定。.染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。.選用幼齡的細(xì)菌。G+iW培養(yǎng)12h-16h,E.co/i培養(yǎng)24h。若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)。六、實驗作業(yè)（一）繪圖繪出Bacillussubtilis和Escherichiacoli革蘭氏染色視野圖。（二）問題和思考通過正反兩方面再次強調(diào)實驗注意事項1.你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最布置本次實驗報告和關(guān)犍的環(huán)節(jié)是什么？2.當(dāng)你對一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠？思考題新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁課程名稱：松金曲號授課教帥姓名及職稱：*總根碑一、授課題目 實蹌工佃育的穿他和吳豚臬包

二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、繼續(xù)學(xué)習(xí)微生物標(biāo)本的制作方法；2、掌握芽抱、莢膜染色的基本原理及方法；3、鞏固無菌操作技術(shù)。3課時四、授課重點1、微生物標(biāo)本的制作方法；2、芽抱、莢膜染色的方法及注意事項五、授課難點1、微生物標(biāo)本的制作方法；2、芽抱、莢膜染色的方法及注意事項六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與分考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編?！段⑸飳W(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題.若涂片中觀察到的只是大量游離芽狗，很少看到芽抱囊及營養(yǎng)細(xì)胞，你認(rèn)為這是什么原因？.組成莢膜的成分是什么？涂片一般用什么固定方法，為什么？十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日新多醫(yī)學(xué)院實驗課教案靡名稱：松金物等授曲帥姓名及職稱：豐總也做基本內(nèi)容教學(xué)手段和基本內(nèi)容教學(xué)組織

細(xì)菌的芽狗和莢膜染色法一、實驗?zāi)康?、繼續(xù)學(xué)習(xí)微生物標(biāo)本的制作方法：2、掌握芽抱、莢膜染色的基本原理及方法；3、鞏固無菌操作技術(shù)。二、實驗內(nèi)容和原理芽胞、莢膜染色法都是利用細(xì)菌各部位（分）的構(gòu)造不同，它們對染料的親和力也不同。因此，可以采用各種特殊染色方法，使細(xì)菌細(xì)胞的不同構(gòu)造能在顯微鏡下顯示出來，便于觀察和區(qū)別。（-）芽抱染色法：芽抱又稱內(nèi)生抱子（endospore）,是某些細(xì)菌（革蘭氏染色陽性桿菌）生長到一定時間（對數(shù)期后期），在細(xì)胞內(nèi)形成一個圓形、橢圓形或圓柱形的結(jié)構(gòu)。芽抱有的長在中央或近中央，圓形或橢圓形，芽抱的大小，位置，在分類鑒定上有一定的意義，它僅僅是芽狗細(xì)菌生活史的一個環(huán)節(jié)，它還是檢驗培養(yǎng)基滅菌徹底不徹底的依據(jù)。芽抱壁厚、透性低，著色和脫色均較困難，當(dāng)用弱堿性染料（孔雀綠）在加熱的情況下進(jìn)行染色時，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽抱內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，當(dāng)用對比度大的復(fù)染色劑（蕃紅液）染色后，芽抱仍保留初染劑的顏色，是芽抱和菌體更易區(qū)分。菌體呈紅色而芽抱呈綠色。（二）莢膜染色法莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一層粘液狀或膠狀物質(zhì)，其成分為多糖、糖蛋白或多肽。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可以溶于水，易在用水沖洗時被除去。莢膜雖不是細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)，但它是細(xì)胞外碳源和能源性貯藏物質(zhì)，并能保護細(xì)胞免受干燥的影響，同時能增加某些病原菌的致病能力，使之抵御宿主吞噬細(xì)胞的吞噬。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可以溶于水，易在用水沖洗時被除去。通常用負(fù)染色法染色，使細(xì)菌和背景著色，背景與菌體之間形成一透明區(qū)即莢膜，便于觀察，由于莢膜很薄，容易變形，在制片是一般不用加熱固定。先點評上次實驗作業(yè)結(jié)合理論知識講解實驗原理

三、實驗器材1、菌種：蠟樣芽抱桿菌約2d營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物；褐球固氮菌（Azotobacterchroococ^2d無氮營養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)物。2、染色液和試劑：5%孔雀綠水溶液、0.5%蕃紅溶液、碳素墨水、甲醇、生理鹽水等3、器材：試管夾、酒精燈、接種針、載玻片、顯微鏡、香柏油、乙酸酒精、擦鏡紙等。四、實驗方法1、芽抱染色：（1）制片：按常規(guī)涂片、干燥、固定：（2）染色：用試管夾夾住玻片的一端，在涂片上滴加孔雀綠3-4滴，維持5min；（3）水洗：待玻片冷卻、用細(xì)水流沖洗至流出的水為無色；（4）復(fù)染：蕃紅溶液復(fù)染2-3min,水洗；（5）鏡檢：干后，先低倍鏡觀察，再高倍鏡觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察。2、莢膜染色（濕墨水法）：（1）制備菌和墨水混合液：加一滴墨水于潔凈的載玻片上，然后挑取少量褐球固氮菌與之充分混合均勻：（2）加蓋玻片：將一潔凈蓋波片蓋在混合液上，然后在蓋波片上放一張濾紙，輕輕按壓以吸去多余的混合液；（3）鏡檢：用低倍鏡和高倍鏡觀察。五、注意事項1、供芽抱染色用的菌種應(yīng)控制菌齡，使大部分芽抱仍保留在菌體上為宜。2、染色加熱過程要及時補充染液，切勿讓涂片干涸。3、莢膜染色涂片不要用加熱固定，以免莢膜皺縮變形。4、涂片不要用力過猛，不要滴加水，以防破壞其莢膜原形。六、實驗作業(yè)（一）繪圖.繪出表示芽抱桿菌的形態(tài)特征，注意芽抱的形狀、著生位置及芽泡囊的形態(tài)特征。.繪圖說明你所觀察到的細(xì)菌的菌體和莢膜的形態(tài)。（二）問題和思考1.若涂片中觀察到的只是大量游離芽抱，很少看到芽抱囊及營養(yǎng)細(xì)胞，簡單介紹本次實驗所用器材再次介紹制片方法，強調(diào)無菌操作邊講解邊演示，并強調(diào)實驗注意事項再次強調(diào)實驗注意事項布置本次實驗報告和思考題你認(rèn)為這是什么原因？2.組成莢膜的成分是什么？涂片一般用什么固定方法，為什么？

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁蝴名稱：欲士物等授課教師姓名及職稱：郭偉代講師一、授課題目賣齡三數(shù)錢育的彭忠乩*二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法；2、初步了解放線菌帶形態(tài)特征。3課時四、授課重點1、放線菌的制片方法及其注意事項五、授課難點1、放線菌的制片方法及其注意事項六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與參考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編?！段⑸飳W(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題.試比較三種培養(yǎng)和觀察放線菌方法的優(yōu)缺點。.鏡檢時，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案課程名稱：微生物學(xué)實驗授課教師姓名及職稱：郭偉云講師基本內(nèi)容教學(xué)手段和教學(xué)組織一、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法；先點評上次實2、初步了解放線菌帶形態(tài)特征。二、實驗內(nèi)容和原理驗作業(yè)放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體帶一類革蘭氏陽性細(xì)菌。結(jié)合理論知識常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長帶叫基和圖片講解實內(nèi)菌絲（簡稱“基絲”），基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲（簡稱，，氣絲，，），并進(jìn)一步分化產(chǎn)生抱子絲及布子。放線菌的抱子絲形狀和抱子排列情況是放線菌分類的重要依據(jù)，為了不打亂抱子的排列情況，常用印片染色法和膠帶紙粘菌染色法進(jìn)行制片觀察。為了觀察放線菌的形態(tài)特征，人們設(shè)計了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長條件下的形態(tài)特征，本實驗介紹其中幾種常用的方法。（1）桿片法將放線菌接種在瓊脂平板上，桿上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上，觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可以觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于不同生長期的形態(tài)。（2）玻璃紙法玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面，然后將放線菌接種于玻璃紙上，經(jīng)培養(yǎng)，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢。這種方法既能保持放線菌的自然生長，也便于觀察不同生長期的形態(tài)特征。（3）印片法驗原理

將要觀察帶放線菌帶菌落或菌苔，先印在載玻片上，經(jīng)染色后觀察。這種方法主要用于觀察抱子絲帶形態(tài)、抱子帶排列及其形狀等。該方法簡便、但形態(tài)特征可能有所改變。我們本次實驗主要采用印片法來觀察放線菌的基本形態(tài)。三、實驗器材.菌種：細(xì)黃鏈霉菌(.“repfawycs，"2〃叨。丫〃5)又稱5406或青色鏈霉菌(Sglaucus),弗氏鏈霉菌(S.fradiae)；.染色液：石炭酸復(fù)紅染色液；.器材：載玻片，玻璃紙，小刀，接種環(huán)，吸水紙，擦鏡紙，酒精燈，香柏油，乙酸-乙醇混合液，顯微鏡。四、實驗方法(1)印片：用解剖刀取放線菌培養(yǎng)體一塊，將菌面朝上放在一載玻片上，另取一潔凈載玻片置于火焰上微熱后，蓋在菌苔上，輕輕按壓，使培養(yǎng)物(氣絲、抱子絲或抱子)粘附(“印”)在后一塊載玻片的中央，有印跡的一面朝上，通過火焰2-3次固定;(2)染色：用碳酸復(fù)紅覆蓋印跡，染色約Imin后水洗；(3)鏡檢：干后先用低倍鏡后用高倍鏡，最后用油鏡觀察抱子絲、抱子的形態(tài)及抱子排列情況。五、注意事項1、鏟菌苔時注意不要將瓊脂鏟得太厚，以免影響壓片；2、玻片不要太熱，以免瓊脂融化，干擾放線菌的附著；3、制片過程中切不可涂片，以免破壞菌絲形態(tài)；4、印片完畢后注意將印有放線菌的一面朝上進(jìn)行固定，印片不要用力過大壓壞瓊脂培養(yǎng)基，也不要挪動，以免改變放線菌的自然形態(tài)：5、觀察時宜采用略暗的光線。六、實驗作業(yè)(一)繪圖繪出說明你所觀察到的放線菌的主要形態(tài)特征。(二)問題和思考.試比較三種培養(yǎng)和觀察放線菌方法的優(yōu)缺點。.鏡檢時，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示印片方法，并強調(diào)實驗注意事項再次強調(diào)實驗注意事項布置本次實驗報告和思考題

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁蝴名稱：於金曲考 授課教帥姓名及職稱：郭脩表講師一、授課題目賣艙8母多育的影思也見法他能的妻，|二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、觀察酵母菌的細(xì)胞形態(tài)及出芽生殖方式；2、學(xué)習(xí)掌握區(qū)分酵母菌死、活細(xì)胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細(xì)菌的區(qū)別。3課時四、授課重點1、酵母菌的形態(tài)特征2、酵母菌死活細(xì)胞鑒別的原理五、授課難點1、酵母菌的形態(tài)特征2、酵母菌死活細(xì)胞鑒別的原理六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與參考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編?！段⑸飳W(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題1、呂氏堿性美藍(lán)染液濃度和作用時間的不同，對酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原因。2、在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細(xì)菌？十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案課程名稱：微生物學(xué)實驗 授課教師姓名及職稱：郭偉云講師基本內(nèi)容教學(xué)手段和教學(xué)組織一、實驗?zāi)康?、觀察酵母菌的細(xì)胞形態(tài)及出芽生殖方式；先點評上次實2、學(xué)習(xí)掌握區(qū)分酵母菌死、活細(xì)胞的染色方法；驗作業(yè)3、掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細(xì)菌的區(qū)別。二、實驗內(nèi)容和原理酵母菌是多形的、不運動的單細(xì)胞微生物，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)已有明顯的分化，結(jié)合理論知識菌體比細(xì)菌大。繁殖方式也較復(fù)雜，無性繁殖主要是出芽生殖，僅裂殖酵母屬是和圖片講解實以分裂方式繁殖；有性繁殖是通過接合產(chǎn)生子囊抱子。驗原理本實驗通過用美藍(lán)染色浸片來觀察生活的酵母形態(tài)和出芽生殖方式。美藍(lán)是一種無毒性染料，它的氧化型是藍(lán)色的，而還原型是無色的，用它來對酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色。由于細(xì)胞中新陳代謝的作用，使細(xì)胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，所以酵母的活細(xì)胞無色，而對于死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，用美藍(lán)水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細(xì)胞。三、實驗器材1、菌種：釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）培養(yǎng)約2d的麥芽汁斜面培簡單介紹本次養(yǎng)物：2、染色液和試劑：0.05%和0.1%呂氏堿性美藍(lán)染液；實驗所用器材3、器材：廢液缸、載玻片、蓋玻片、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。四、實驗方法（1）在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍(lán)染色液，用接種環(huán)挑取少量酵邊講解邊演示母菌苔放入上述液滴里，混合均勻；實驗方法，并強（2）用銀子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下調(diào)實驗注意事使其蓋在菌液上；項（3）將制片放置約3min,先低倍鏡后高倍鏡觀察酵母形態(tài)和出芽情況，并優(yōu)秀教案根據(jù)顏色區(qū)別死活細(xì)胞。(4)染色30min后再次觀察，注意死活細(xì)胞數(shù)量的變化;(5)用0.05%的呂氏堿性美藍(lán)染色液重復(fù)上述操作。五、注意事項1,加染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液會溢出或出現(xiàn)大量氣泡而影響觀察；2、蓋玻片不宜平著放下，以免產(chǎn)生氣泡影響觀察。六、實驗作業(yè)(一)繪圖繪圖說明你所觀察到的酵母菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及出芽生殖方式。(二)問題和思考1、呂氏堿性美藍(lán)染液濃度和作用時間的不同，對酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影再次強調(diào)實驗注意事項布置本次實驗報告和思考題響？試分析其原因。2、在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細(xì)菌？新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁蝴名稱：欲士物等授課教帥姓名及職稱：列儡法副盆赧一、授課題目實艙八播某某的刷卷星火備二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、明確培養(yǎng)基的配制原則；2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；3、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍；4、掌握高壓蒸汽滅菌技術(shù)，了解幾種常用滅菌方法。6課時四、授課重點1、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；2、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍；五、授課難點掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與參考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編?！段⑸飳W(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題為什么微生物培養(yǎng)需要不同的培養(yǎng)基？十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案課程名稱：松士物考實齡 授課教師姓名及取稱：利浦濤副栽栽基岑向客一，實除目的1、明確培養(yǎng)基的配制原則；2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；3、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍；4、掌握高壓蒸汽滅菌技術(shù)，了解幾種常用滅菌方法。二，宴除原理培養(yǎng)基是按照微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的一種基質(zhì)。它包括碳源、氮源、能源、生長因子、無機鹽和水六類營養(yǎng)要素。由于不同微生物細(xì)胞組成不同，因而所需營養(yǎng)基質(zhì)不同，為了分離、培養(yǎng)和鑒定不同的微生物，必須根據(jù)其需要，配制合適的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的種類繁多，根據(jù)培養(yǎng)基的成分、物理性狀不同，可分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。滅菌是指應(yīng)用物理或化學(xué)的方法，殺滅物體表面和內(nèi)部一切微生物營養(yǎng)體、芽胞和抱子。滅菌方法很多，可分為加熱、過濾、照射和化學(xué)藥品法等。常用加熱滅菌法：1、干熱滅菌：這種滅菌法是利用熱空氣使物體升溫，而導(dǎo)致物體上所帶的微生物由于干熱脫水而死亡。常用于空玻璃器皿、金屬用具等的滅菌，對于帶膠皮的物品、液體及固體培養(yǎng)基等不能使用此法滅菌。2、高壓蒸汽滅菌法此種滅菌方法的原理是在一密閉容器中，煮沸時形成的蒸汽不能擴散到容器外面去，而堆積在密閉的容器內(nèi)，使蒸汽壓力升高；隨著水的煮沸，溫度也就相應(yīng)增高。利用過熱的蒸汽來使細(xì)菌及其耐熱芽抱蛋白質(zhì)凝固變性，以致失去生命力，從而達(dá)到徹底滅菌的效果。高壓蒸汽滅菌是最有效的滅菌方法。一般在1.05kg/cm2（15磅/英寸2）,121.30C保持15—30分鐘進(jìn)行滅菌，就可殺死一切微生物細(xì)胞及其芽抱或抱子。進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的儀器叫高壓蒸汽滅菌鍋。滅菌對象是培養(yǎng)基、玻璃器皿和各種不因高溫處理而變質(zhì)的物品材料。但對一些不耐高溫、高壓的溶液或培養(yǎng)基不宜用此種方法。三、看材和用品.1000ml刻度分裝搪瓷缸、200ml燒杯、角匙、天平、稱量紙或小燒杯、pH試紙、500ml三角瓶，18mmxl80mm試管、紗布、棉花、10ml移液管等。.牛肉膏、蛋白陳、NaCl、10%NaOH溶液、10%鹽酸溶液。教學(xué)手段和教學(xué)組織先點評上次實驗作業(yè)結(jié)合理論知識講解實驗原理簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示，

0、方依和步球.培養(yǎng)基配方：牛肉膏5.0g,蛋白陳10.0g,NaC15.0g,瓊脂20.0g,蒸儲水1000ml,pH7.0...操作步驟（1）用稱量紙分別稱取牛肉膏5.0g、蛋白陳10.0g,把牛肉膏連同稱量紙與蛋白陳一起放入200ml的燒杯中，然后加入100ml水，置電爐上加熱攪拌至其完全溶解。用玻璃棒把稱量紙?zhí)舫鰶_凈（用洗瓶洗，沖洗液流入燒杯）。（2）將溶解的混合液倒入1000ml搪瓷缸中，稱取5.0gNaCl加入，洗滌燒杯2?3次，洗液倒入缸中，補足自來水到1000ml（液體培養(yǎng)基制成，即可分裝），攪拌加熱煮沸。（3）稱取20g瓊脂，放入煮沸的溶解液中，繼續(xù)加熱至瓊脂完全溶解，加熱過程中要不斷攪拌以防瓊脂沉淀糊底或溢出杯外。（4）待瓊脂完全融化后，再補足自來水，趁熱用玻璃棒蘸少許液體點在pH試紙上測定酸堿度并用NaOH或HC1溶液調(diào)整pH值至7.2?7.4。（5）趁熱分裝入15mmX150mm試管中，每管5ml（斜面用）。18mmX180mm試管，每管分裝15ml（平板用）。（6）將余下的分裝在500ml三角瓶中（每瓶約300ml）.（7）將上述分裝在各種容器中的培養(yǎng)基，塞好棉塞，捆扎好。O.IMPa高壓蒸汽滅菌30分鐘。（9）擺斜面滅菌后，需做斜面的試管，應(yīng)待培養(yǎng)基冷卻至50?60℃（溫度不能過高，以防斜面上冷凝水太多）后，擺成斜面。斜面的斜度要適當(dāng)，斜面的長度不超過試管長度的二分之一。擺放時注意不要使培養(yǎng)基沾污棉塞，冷凝過程中不要移動試管，待斜面完全凝固后，再收起使用或貯藏。整金有旗1、稱取藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙稱一種藥品：2、蛋白陳極易吸濕，稱取時動作要迅速；3、配制固體培養(yǎng)基時，先將其他藥品加熱溶解到快沸時，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至瓊脂完全熔化，此過程要不斷攪拌，以免瓊脂糊底，并控制火力，防止沸騰外溢：4、分裝量根據(jù)試管大小和實際需要而定，固體培養(yǎng)基裝量約為管高的1/5,液體培養(yǎng)基的裝量約為管高的1/4,三角瓶的裝量不超過瓶體的1/2；5、分裝過程中注意不要將培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。并強調(diào)實驗注意事項強調(diào)注意事項

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁蝴名稱：於金曲等授課教帥姓名及職稱：龍啟焉講帥一、授課題目實艙自檢金物的令喜與電也二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、了解微生物分離和純化的原理2、掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化接種培養(yǎng)的基本操作技術(shù)，掌握微生物的無菌操作技術(shù)。6課時四、授課重點微生物分離和純化的基本原理五、授課難點微生物分離和純化的基本原理六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與參考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編?！段⑸飳W(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題.在你所實驗的三種培養(yǎng)基平板上長出的菌落屬于哪個類群？簡述它們的菌落形態(tài)特征。.稀釋分離時，為什么要將已融化的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45?50C左右才能傾入到裝有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)？.劃線分離時，為什么每次都要將接種環(huán)上多余的菌體燒掉？劃線為何不能重疊？十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案課程名稱：微生物學(xué)實驗 授課教師姓名及職稱：高啟禹講師基岑向客教學(xué)手段和教學(xué)組織一，實除目的先點評上次實1、了解微生物分離和純化的原理2、掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化接種培養(yǎng)的基本操作技術(shù)，掌握微生物的無菌操作技術(shù)。驗作業(yè)二，賣除承理結(jié)合理論知識在自然界中，不同種類的微生物絕大多數(shù)都是混雜生活在一起的，為了生產(chǎn)和科學(xué)研究的需要，當(dāng)我們希望獲得某一種微生物時，就必須從混雜的微生物類群中分離出它，以得到只含有這一種微生物的純培養(yǎng)物，這種獲得純培養(yǎng)物的方法稱為微生物的分離與純化。為了獲得純種的微生物，一般根據(jù)該微生物營養(yǎng)或培養(yǎng)特點，或?qū)δ撤N抑制劑的耐受性不同，或?qū)δ撤N環(huán)境條件要求不同，從而制作或設(shè)置一些選擇性培養(yǎng)基，或選擇性培養(yǎng)條件，再用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或劃線法分離，純化該微生物，直至得到該純種菌株。土壤是微生物生活的大本營，在這里生活的微生物數(shù)量和種類都極其豐富，因此，土壤是我們開發(fā)利用微生物資源的重要來源，可以從其中分離純化到許多有用的菌株。講解實驗原理簡單介紹本次三、者材和用品實驗所用器材.樣品土樣.培養(yǎng)基牛肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、豆芽汁培養(yǎng)基。.其它盛9nli無菌水的試管、盛90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶、無菌玻璃涂棒、無菌吸管、接種環(huán)、無菌培養(yǎng)皿。0、方汝和步乘（一）、稀釋混合平板法.細(xì)菌的分離土壤稀釋液的制備①稱取土樣10g,放入盛90ml無菌水三角瓶中，振蕩15?20分鐘，使微生物細(xì)胞分散，靜置約20?30秒，即成10」的土壤懸液。②另取裝有9ml無菌水的試管，編號為1。2、10-3、10一4、10-5、10一6及10-7,用無菌吸管吸取10」土壤懸液1mL加入編號10-2的無菌試管中，吹吸三次，使之混合均勻，即成10.2的土壤稀釋液。再用另一支吸管吸取10-2試管中的土壤稀釋液1ml,加入編號10a的無菌試管中，輕輕搖動，使之混合均勻，即成10.3的土壤稀釋液，一定要每次更換一支無菌吸管（連續(xù)稀釋）。同法依次分別稀釋成10-4,104和10.6等一系列稀釋度菌懸液（見圖1）?邊講解邊演示，并強調(diào)實驗注意事項（2）平板制作將無菌培養(yǎng)皿編上104、10-5、10一6號碼，每一號碼設(shè)三個重復(fù)，用1ml無菌吸管按無菌操作要求吸10《稀釋液各1mL分別放入編號104的三個培養(yǎng)皿中。同法吸取10-5稀釋液各1mL分別放入編號10-5的三個培養(yǎng)皿中。再吸取10.4稀釋液各1ml,分別放入編號10.4的三個培養(yǎng)皿中。然后在9個培養(yǎng)皿中分別倒入15ml已融化并且冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基，加蓋后輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，整個操作過程應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作（見實驗1）。圖1從土壤中分離微生物操作過程（3）培養(yǎng)與移植待平板完全冷凝后，將平板倒置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24?48小時，檢查分離結(jié)果。將培養(yǎng)后長出的單個菌落分別挑取接種到牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基的斜面上，然后置于37C恒溫箱中培養(yǎng)，待菌苔長出后，檢查菌苔是否單純，也可用顯微鏡涂片染色檢查是否是單一的微生物，若有其它雜菌混雜，就可再一次進(jìn)行分離、純化，直至獲得純培養(yǎng)。.放線菌的分離由于放線菌在培養(yǎng)基上蔓延生長不如真菌快，其繁殖速度又比細(xì)菌慢，故分離這類微生物時要特別注意防止細(xì)菌和霉菌的蔓延，以免妨礙放線菌的生長。為了保證放線菌的優(yōu)勢生長，可對樣品做如下處理：（1）為了除去部分細(xì)菌，可先將土壤進(jìn)行風(fēng)干。因為細(xì)菌營養(yǎng)體遇干燥環(huán)境容易死亡，而放線菌比細(xì)菌的抗干燥能力強。風(fēng)干的土壤與少量CaCO,混合，于28℃培養(yǎng)數(shù)天，更能進(jìn)一步減少細(xì)菌和增加放線菌的數(shù)量。（2）選用的土壤稀釋度要根據(jù)放線菌的多少來決定，可用1。3、104或其它稀釋度。在所選用的稀釋液中加入100g/L酚10滴，充分混勻，可進(jìn)一步減少細(xì)菌和霉菌的生長。一般放線菌生長的適宜溫度為25?28C,培養(yǎng)5?7天，培養(yǎng)基為高氏一號培養(yǎng)基。具體操作過程見“細(xì)菌的分離”。.霉菌的分離大多數(shù)霉菌為好氧微生物，必須有充足的氧氣才能很好地生長。霉菌能耐受較酸性環(huán)境，所以一般分離霉菌時取偏酸性、含有機質(zhì)較豐富的接近表層的土壤，特別是森林土壤中含有較多霉菌。如果用特定的材料為培養(yǎng)基分離霉菌，經(jīng)培養(yǎng)后，長出的菌種可能較為單一。比如用新鮮的桔皮保溫培養(yǎng)，容易長出青霉。分離方法具體操作過程見“細(xì)菌分離”，只是將稀釋度向前移2位數(shù)。采用馬丁氏（Martin）瓊脂培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加1/3000的孟加拉紅水溶液，使用時每10ml培養(yǎng)基再加0.03%鏈霉素溶液1ml（含鏈霉素30ug/ml）,用28?30℃下培養(yǎng)3?5天，待菌落長出后，檢查結(jié)果。（-）稀釋涂布平板法此法與稀釋混合平板法基本相同，無菌操 /入作也一樣，所不同的是先將牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基，高氏一號培養(yǎng)基，馬丁氏培養(yǎng)基融化，在火焰旁注入培養(yǎng)皿，搖勻后制成平板，然后用 幽也忽少三支1ml無菌吸管分別由10*、10.5、10.6三管土壤稀釋液中各吸取0.2ml對號放入已寫好稀釋度的平板中，用無菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面 11輕輕地涂布均勻，然后分別倒置于28C和37℃ -^2/溫箱中培養(yǎng)后，再挑取單個菌落，直至獲得純培養(yǎng)。（三）平板劃線分離法 圖2平板劃線操作圖.將各種固體培養(yǎng)基融化后制成平板，并用記號筆標(biāo)明培養(yǎng)基名稱。.劃線在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取上述10-1的土壤稀釋液一環(huán)在平板上劃線（如圖2）,劃線方法很多，但無論哪種方法劃線，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使形成單個菌落。常用劃線方法有下列三種：（1）交叉劃線法用接種環(huán)以無菌操作挑取土壤懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3?4條，再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70°角，并將接種環(huán)上的殘菌燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線（如圖3）,劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫箱培養(yǎng)。（2）連續(xù)劃線法用接種環(huán)挑取樣品在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線（如圖14-3b）,劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置溫箱培養(yǎng)。圖3劃線分離圖左為交叉劃線法 右為連續(xù)劃線法（3）挑菌同稀釋平板法，一直到菌分純?yōu)橹?。A,作業(yè)?在你所實驗的三種培養(yǎng)基平板上長出的菌落屬于哪個類群？簡述它們的菌落形態(tài)特征..稀釋分離時，為什么要將已融化的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45~50。（:左右才能傾入到裝有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)？.劃線分離時，為什么每次都要將接種環(huán)上多余的菌體燒掉？劃線為何不能重疊？.培養(yǎng)時為什么要將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁課程名稱：松金物考授課敕帥姓名及職稱：康幫助教一、授課題目賣險上般士曲出步的削窕：二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、了解顯微鏡計數(shù)的原理；2、學(xué)習(xí)并掌握使用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物直接計數(shù)的方法3課時四、授課重點用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物直接計數(shù)的方法五、授課難點用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物直接計數(shù)的方法六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與參考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編。《微生物學(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題計數(shù)時，格線上的菌體如何計數(shù)？

十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案課程名稱：微生物學(xué)實驗 授課教師姓名及職稱：康靜助教教學(xué)手段和

教學(xué)組織驗作業(yè)先點評上次實驗作業(yè)單細(xì)胞微生物個體生長時間很短，很快進(jìn)入繁殖階段，生長和繁殖難以分開，個體生長很難測定，而且實際應(yīng)用意義不大。因此，它們的生長不是依據(jù)細(xì)胞大小，而是以群體的生長作為單細(xì)胞微生物生長的指標(biāo)。測定微生物生長的方法很多，但不外乎是總菌計數(shù)和活菌計數(shù)兩大類。常用計數(shù)板作微生物的鏡檢直接計數(shù)，其計得的是死菌和活菌的總和，故稱總菌計數(shù)法。而平板菌落計數(shù)法因能計測樣品中的活菌數(shù)，故稱活菌計數(shù)法。一，賣除可的結(jié)合理論知識講解實驗原理1、了解顯微鏡計數(shù)的原理：結(jié)合理論知識講解實驗原理2、學(xué)習(xí)并掌握使用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物直接計數(shù)的方法二.賣艙麻理顯微鏡直接計數(shù)法適合于含單細(xì)胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如果有雜菌或雜質(zhì)常不易分辨,菌體較大的酵母菌或霉菌抱子可采用血球計數(shù)板計數(shù);一般細(xì)菌則采用細(xì)菌計數(shù)板。二者的原理和部件均相同，只是細(xì)菌計數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，故細(xì)菌不易看清。

圖15T血球計數(shù)板平面圖（中間平臺分為兩半，各刻有一個方格網(wǎng)）而圖（中間平臺與蓋玻片之間有高度為0」的間隙）血球計數(shù)板是一塊特制的厚載玻片，載玻片上有4條槽構(gòu)成的3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半,每個半邊上面各有一個方格網(wǎng)（圖15-1）,每個方格網(wǎng)共分9個大格，每格的邊長為1mm,其中間的一大格（又稱為計數(shù)室）常被用作微生物的計數(shù)。計數(shù)室的刻度有兩種：一種是大方格分為16個中方格，而每個中方格又分成a25個小方格；另一種是一個大方格b分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格。但兩種計數(shù)室都有一個共同的特點，每個大方格都由400個小格組成，即圖15T血球計數(shù)板平面圖（中間平臺分為兩半，各刻有一個方格網(wǎng)）而圖（中間平臺與蓋玻片之間有高度為0」的間隙）在計數(shù)時，通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方格的平均值，再乘上16或25,就得出一個大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。如果設(shè)五個中方格的總菌數(shù)為A,菌液稀釋倍數(shù)為B,那么，一個大方格中的總菌數(shù)即（0.1mm3中的總菌數(shù)）為A/5X16（或25）XB。所以1ml菌液中的總菌數(shù)=A/5X16（或25）XIOXIOOOXBo三舞材和用扁.菌種釀酒酵母（Saccharomycescerevisla菌懸液。.器具顯微鏡、血球計數(shù)板、酒精燈、接種環(huán)、無菌水、吸管、蓋玻片、計數(shù)器。簡單介紹本次實驗所用器材0、方位和步藤.稀釋將釀酒酵母菌懸液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，菌液如不濃，可不必稀釋。.鏡檢計數(shù)室在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進(jìn)行計數(shù)。.加樣品將清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的細(xì)口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴（不宜過多）讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自行進(jìn)入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。.顯微鏡計數(shù)靜止5分鐘后，將血球計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計數(shù)，在計數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5?10個菌體為宜。每個計數(shù)室選5個中格（可選4個角和中央的中格）中的菌體進(jìn)行計數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時，即可作為兩個菌體計數(shù)。計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的值來計算樣品的平均含菌量。.清洗血球計數(shù)板使用完畢后，將血球計數(shù)板在水龍頭上用水柱沖洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重新洗滌至干凈為止。邊講解邊演示，并強調(diào)實驗注意事項A,作業(yè)將所計的5個中方格中的菌數(shù)填入下表

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁雕名稱：極士物學(xué)授課教師姓名及職稱：閨般助教一、授課題目實般，?棘垃條件對於或物金機的彩響二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1了解溫度對微生物生長的影響2了解pH值對微生物生長的影響3課時四、授課重點環(huán)境條件對微生物生長的影響五、授課難點溫度、pH對微生物生長的影響規(guī)律六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案

八、教材與參考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編。《微生物學(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題環(huán)境因素是如何對微生物生長產(chǎn)生影響的？十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案課程名稱：微生物學(xué)實驗 授課教師姓名及職稱：閆欣助教基本內(nèi)容教學(xué)手段和教學(xué)組織實驗?zāi)康南赛c評上次實1、了解溫度、pH值對微生物生長的影響；2、區(qū)別微生物的最適生長溫度、pH與最適代謝溫度、pH.驗作業(yè)一、溫度對微生物生長的影響微生物生長繁殖要有一定的溫度條件，不同的微生物要求不同的生長溫度范圍。在生長范圍內(nèi)又可分為最高，最適和最低三種生長溫度。如溫度超過最高或最低溫度時，微生物均不能生長，或處于休眠狀態(tài)，甚至死亡。按照微生物要求的生長溫度范圍，可將其分為高溫性，中溫性和低溫性三個結(jié)合理論知識類型，大多數(shù)微生物是中溫性的，它們的適宜生長溫度在25?37℃之間，故實驗室中培養(yǎng)微生物常用此溫度范圍。通過本次實驗了解各類微生物生長的溫度范圍，并掌握測定溫度對微生物生長的影響的方法。講解實驗原理

(-)器材和用品.菌種牛肉膏蛋白膝斜面上培養(yǎng)48小時的枯草桿菌(B.subtilis')或大腸桿菌(E.coli)。.培養(yǎng)基牛肉膏蛋白陳瓊脂斜面。.器具酒精燈，接種針，冰箱，恒溫箱。(-)方法和步驟.接菌按無菌操作方法進(jìn)行。(1)在5支牛肉膏瓊脂斜面培養(yǎng)基上都接種上枯草桿菌，接種時劃曲線或直線。(2)在另5支牛肉膏瓊脂斜面上都接種上大腸桿菌，接種時劃直線或曲線。.培養(yǎng)與觀察(1)培養(yǎng)將上述接好的菌種，分別放入0℃、15℃、30℃,37℃、50℃五種溫度下培養(yǎng)。(2)觀察48小時后觀察，記錄實驗結(jié)果。簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示，并簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示，并強調(diào)實驗注意事項菌種0℃15℃30℃37℃枯草桿菌大腸桿菌50℃結(jié)合理論知識講解實驗原理簡單介紹本次結(jié)合理論知識講解實驗原理簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示，并強調(diào)實驗注意事項.記載實驗結(jié)果，填入下表。注：生長情況記載可采用：不生長(-)；生長一般(+)；生長良好(++I.高溫和低溫對微生物生長各有何影響？為什么？二、氫離子濃度(pH值)對微生物生長的影響微生物的生長繁殖，需要一定的pH值范圍，即環(huán)境中的氫離子濃度對微生物的生長繁殖有直接的影響，大多數(shù)細(xì)菌和放線菌適于中性或微堿性環(huán)境，酵母菌和霉菌則適于在弱酸性或酸性環(huán)境中生長，當(dāng)環(huán)境的pH值超過其適于生長的范圍時，微生物的生長則受到明顯的阻抑或不能生長。(一)器材和用品.菌種在牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時的大腸桿菌。.培養(yǎng)液準(zhǔn)確分裝為8ml的牛肉膏蛋白族培養(yǎng)液8支，高壓蒸汽滅菌。.試劑無菌水、0.2MK2Hp。八0.1M檸檬酸、0.2M硼酸、OZMNaOH。.器具酒精燈、1ml無菌吸管、接種環(huán)。(-)方法步驟1.調(diào)pH值取足量分裝為8ml的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)液7支，分別按下表所列容量加入各種溶液，調(diào)成不同pH值的培養(yǎng)液(ml)

管序號0.2MK,HPO,0.1M檸檬酸0.2M硼酸0.2MNaOH牛肉膏液體培養(yǎng)基總量調(diào)整后pH值).010.31.7一一8102.620.91.1一一8104.431.30.7一—8106.041.50.5一一8106.851.90.1——8107.66一一1.30.78109.27——1.01.081010.0.按無菌操作方法，分別于各管中各接種大腸桿菌0.2ml,分別標(biāo)明試管序號。.另取8ml的牛肉膏蛋白陳液二支，按無菌操作的方法用無菌吸管移入無菌水2.2mL使其體積也為10.2mL作為對照。.將上述接種好的培養(yǎng)物置于37℃下培養(yǎng)。48小時后觀察記載實驗結(jié)果。（三）作業(yè)1.記載結(jié)果，填入下表：值菌名、、、2.64.46.06.87.69.21大腸桿菌注:根據(jù)混濁程度，確定生長情況：不生長（-）;稍生長（+）;生長一般（++）;生長良好（+++12.氫離子濃度對微生物生長有何影響？新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁賺名稱：於金物考授課敕師姓名及職稱：郭偉看講帥一、授課題目實除九獻(xiàn)金曲的安理上他反虐二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、學(xué)習(xí)幾種主要微生物的生理代謝試驗及檢驗方法；2、認(rèn)識微生物代謝類型的多樣性；3、了解這些生化試驗的原理。3課時

四、授課重點1、微生物生理代謝的檢驗方法五、授課難點1,微生物生理代謝的檢驗方法六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與實考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編?！段⑸飳W(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題1、以上生理生化反應(yīng)能用于鑒別細(xì)菌，其原理是什么？2、糖發(fā)酵試驗中為什么要設(shè)對照？十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案課程名稱：微生物學(xué)實驗授課教師姓名及職稱：郭偉。講帥基本內(nèi)容教學(xué)手段和教學(xué)組織

微生物的生理生化反應(yīng)一、實驗?zāi)康南赛c評上次實1、學(xué)習(xí)幾種主要微生物的生理代謝試驗及檢驗方法；2、認(rèn)識微生物代謝類型的多樣性；3、了解這些生化試驗的原理。驗作業(yè)二、實驗內(nèi)容和原理結(jié)合理論知識講解實驗原理微生物代謝重要特征之一，就是代謝類型的多樣性。即使同屬化能異養(yǎng)菌中的不同微生物，它們分解生物大分子的能力，分解利用含碳化合物、含氮化合物的途徑和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物也各不相同等等。此外，微生物代謝類型多樣性具體表現(xiàn)在生化反應(yīng)的多樣性，因此人們在微生物的分類鑒定工作中，常利用其生化反應(yīng)作為重要依據(jù)。1、大分子物質(zhì)的水解試驗不同微生物分解利用生物大分子能力各有不同。只有那些能夠產(chǎn)生并分泌跑外酶的微生物才能利用大分子有機物。如：油脂水解（脂肪酶）、淀粉水解（淀粉酶）、明膠液化（蛋白酶）等。大分子物質(zhì)的水解過程可以通過觀察細(xì)菌菌落周圍的物質(zhì)變化來證實。淀粉水解試驗原理：淀粉遇碘液會產(chǎn)生藍(lán)色，但細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測定不再產(chǎn)生藍(lán)色，表明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶。2、糖類發(fā)酵試驗原理細(xì)菌具有分解某些糖類的特定酶，可根據(jù)細(xì)菌分解利用糖能力的差異，表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。是否產(chǎn)酸，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中加入指示劑澳甲酚紫（即B.C.P指示劑，其pH在5.2以下呈黃色，pH在6.8以上呈紫色），經(jīng)培養(yǎng)后根據(jù)指示劑的顏色變化來判斷。是否產(chǎn)氣，可從培養(yǎng)基中的杜氏小管中是否有氣泡觀測。三、實驗器材1、菌種：大腸桿菌（E.coli）、枯草芽抱桿菌、金黃色葡萄球菌、普通簡單介紹本次變形桿菌：2、培養(yǎng)基和試劑：固體淀粉培養(yǎng)基、葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基、蔗糖發(fā)酵培養(yǎng)基和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管各3支（內(nèi)裝有倒置的德漢氏小管）等。3、器材：試管架、接種環(huán)、酒精燈等。四、實驗方法實驗所用器材

1、淀粉水解試驗邊講解邊演示(1)無菌操作制固體淀粉培養(yǎng)基平板；實驗方法，并強(2)用記號筆在平板底部化成3部分，將大腸桿菌、枯草芽泡桿菌、金調(diào)實驗注意事黃色葡萄球菌分別在不同部分劃線接種，在平板的反面分別寫上菌名；(3)37℃恒溫倒置培養(yǎng)24h；項(4)觀察各種細(xì)菌的生長情況，將平板打開蓋子，滴入少量Lugol's碘液于平皿中，輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘液均勻鋪面整個平板；(5)判斷結(jié)果。如菌苔周圍出現(xiàn)無色透明菌，說明淀粉已被水解，為陽性。透明圈的大小課初步半段該菌水解淀粉能力的強弱，即產(chǎn)生胞外淀粉酶活力的高低。2、糖發(fā)酵試驗(1)試管標(biāo)記：在試管外壁標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和接種細(xì)菌菌名。(2)接種：取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接種大腸桿菌、枯草桿菌，第三支不接做對照；取蔗糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接種大腸桿菌、枯草桿菌，第三支不接做對照。(3)培養(yǎng)：將接種的和做對照的6支試管放置置37℃恒溫箱中培養(yǎng)，24h后觀察結(jié)果；(4)觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡。與對照管比較，若糖發(fā)酵管保持原有顏色，其反應(yīng)結(jié)果為陰性，表明該菌不能利用該種糖，記錄用“一”表示；如呈黃色，反應(yīng)結(jié)果為陽性，表明該菌能分解該種糖產(chǎn)酸，記錄用"+”表示。培養(yǎng)基中有氣泡為陽性反應(yīng)，表明該菌分解糖能產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，記錄用“十”表示；沒有氣泡為陰性反應(yīng)，記錄用“一”表示。五、注意事項再次強調(diào)實驗1、淀粉水解試驗中加碘液時淀粉要鋪滿整個平板；注意事項2、糖發(fā)酵試驗要注意杜氏小管的置入方法；3,在接種后，輕緩搖動試管，使其均勻，防止倒置的小管進(jìn)入氣泡。六、實驗作業(yè)(一)填表布置本次實驗繪圖說明你所觀察到的酵母菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及出芽生殖方式。報告和思考題分別將淀粉水解試驗("+”表示陽性，表示陰性)和糖發(fā)酵試驗(“+”表示產(chǎn)酸或產(chǎn)氣，表示不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣)結(jié)果填入下表：菌名 大腸桿菌枯草芽抱桿菌 金黃色葡萄球菌淀粉水解能力糖類發(fā)酵大腸桿菌普通變形桿菌對照葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵（二）問題和思考1、以上生理生化反應(yīng)能用于鑒別細(xì)菌，其原理是什么？2、糖發(fā)酹試驗中為什么要設(shè)對照？新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案首頁蝴名稱：欲士物等授課教師姓名及職稱：郭偉代講師一、授課題目實齡十備耕保莪二、授課對象2005級生物技術(shù)專業(yè)本科生三、實驗教學(xué)目標(biāo)與課時分配1、學(xué)習(xí)和掌握菌種保藏的基本原理；2、了解各種保藏方法的優(yōu)缺點及其適用的目標(biāo)微生物；3、學(xué)習(xí)并掌握幾種常用的微生物菌種保藏方法。3課時四、授課重點1、菌種保藏的基本原理2、常用菌種保藏方法五、授課難點1、菌種保藏的基本原理2、常用菌種保藏方法六、授課形式實驗課講授七、授課方法與課前準(zhǔn)備授課方法：啟發(fā)式教學(xué)，討論式教學(xué)；課前準(zhǔn)備：做預(yù)實驗，準(zhǔn)備示教材料，寫教案八、教材與參考文獻(xiàn)沈萍、范秀榮、李廣武主編?！段⑸飳W(xué)實驗（第三版）》，高等教育出版社。九、思考題根據(jù)你自己的實驗，談?wù)?~2種菌種保藏方法的利弊？十、教研室主任及課程負(fù)責(zé)人簽字教研室主任（簽字） 課程負(fù)責(zé)人（簽字）年月 日 年 月 日

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗課教案課程名稱：微生物學(xué)實驗 授課教師姓名及職稱：郭偉云講師基本內(nèi)容教學(xué)手段和教學(xué)組織dtt-r.l,/rj菌種保藏一、實驗?zāi)康南赛c評上次實1、學(xué)習(xí)和掌握菌種保藏的基本原理；2、了解各種保藏方法的優(yōu)缺點及其適用的目標(biāo)微生物；3、學(xué)習(xí)并掌握幾種常用的微生物菌種保藏方法。二、實驗內(nèi)容和原理驗作業(yè)保藏微生物菌種的目的不僅要保存菌株的生命本身，而且還必須要盡可結(jié)合理論知識能地使菌株的遺傳性狀保持不變，同時保證其在整個保存過程中不被他種微生物污染。因此，選擇一種能夠長期有效且穩(wěn)定的保藏微生物菌種的方法事關(guān)重要。由于微生物種類繁多，且保存方法的難易程度不同，所以微生物菌種的保藏方法亦有許多。但是不管有多少種菌種保藏方法，其基本原理都要求使微生物的代謝作用降至最低程度，從而使其處于不活潑的狀態(tài)，即休眠狀態(tài)。就微生物本身而言，保藏就是要利用它們處于休眠狀態(tài)的抱子或芽抱而進(jìn)行；而從環(huán)境條件來說，就是要選用低溫、干燥和缺氧等三個條件。保藏方法大致可分為以下幾種：講解實驗原理1.傳代培養(yǎng)保藏法介紹每種保藏有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時，會很快死亡，因此在這種情況方法的使用及下，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產(chǎn)菌種的保存。傳代保存時，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。一般地，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5C為好，像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進(jìn)行保存，而蕈類等大型食用菌的菌其優(yōu)缺點種則可以室溫直接保存。傳代培養(yǎng)保存法雖然簡便，但其缺點也很明顯，如：①菌種管棉塞經(jīng)常容易發(fā)霉；②菌株的遺傳性狀容易發(fā)生變異；③反復(fù)傳代時，菌株的病原性、形成生理活性物質(zhì)的能力以及形成抱子的能力等均有降低；④需要定期轉(zhuǎn)種，工作量大；⑤雜菌的污染機會較多。又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。2、懸液保存法：即使微生物混懸于適當(dāng)溶液中進(jìn)行保存的方法。常用的有，①蒸儲水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸儲水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。3.載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。常用的有方法包括以下幾種，如①土壤保存法：主要用于能形成抱子或抱囊的微生物菌種的保藏。方法是在滅菌的土壤中加入菌液，立即在室溫下進(jìn)行干燥或使菌體繁殖后再干燥，然后冷藏或在室溫下密封保存。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜，土壤需風(fēng)干、粉碎、過篩和滅菌。使微生物在土壤中繁殖后進(jìn)行干燥保存的方法是：取適量土壤（5克）置于塞有棉塞的試管中，加水或加入充分稀釋的液體培養(yǎng)基（以含水量為土壤最大持水量的60%為宜），然后高壓滅菌。再將需保存的微生物進(jìn)行大量接種，培養(yǎng)至菌絲能用肉眼確認(rèn)的程度為止，移入干燥器中經(jīng)短時間干燥或風(fēng)干后密封，冷藏或室溫保存。②砂土保存法：取清潔的砂，過60目篩去掉大砂粒，并用磁鐵吸去砂中鐵屑，再用NaOH溶液、10%HC1溶液和水交替清洗數(shù)次，干燥后，置于

試管或安瓶管中保持2?3cm深，再經(jīng)干熱滅菌后，加入1ml菌種培養(yǎng)液，經(jīng)充分混勻后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗凈的砂（經(jīng)HC1預(yù)處理）和一份貧瘠、過篩的黃土攙和后滅菌，再進(jìn)行菌種保藏。③硅膠保存法：以6?16目的無色硅膠代替砂子，干熱滅菌后，加入菌液。加菌液時，由于硅膠的吸附熱常使溫度升高，因而需設(shè)法加以冷卻。④磁珠保存法：將菌液浸入素?zé)胖椋ɑ蚨嗫撞Ａе椋┖笤龠M(jìn)行干燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠（或無水CaSO4）,上鋪玻璃棉，再放上10?20粒磁珠，經(jīng)干熱滅菌后，接入菌懸液，最后冷藏、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏。本法對酵母菌很有效，特別適用于根瘤菌，可保存長達(dá)兩年半時間。⑤款皮保存法：在熬皮內(nèi)加入60%的水，經(jīng)滅菌后接種培養(yǎng)，最后干燥保藏。@紙片（濾紙）保存法：將滅菌紙片浸入培養(yǎng)液或菌懸液中，常壓或減壓干燥后，置于裝有干燥劑的容器內(nèi)進(jìn)行保存。4.真空干燥保藏法這類方法包括冷凍真空干燥法和L一干燥法。冷凍真空干燥法是將要保藏的微生物樣品先經(jīng)低溫預(yù)凍，然后在低溫狀態(tài)下進(jìn)行減壓干燥。L-干燥法則不需要低溫預(yù)凍樣品，只是使樣品維持在10—20C范圍內(nèi)進(jìn)行真空干燥。5、冷凍保存法適用于抗凍力強的微生物。這些微生物可在其菌體細(xì)胞外遭受凍結(jié)的情況下而不受損傷，而對其它大多數(shù)微生物而言，無論在細(xì)胞外凍結(jié)還是在細(xì)胞內(nèi)凍結(jié)，都會對菌體造成損傷，因此當(dāng)采用這種保藏方法時，應(yīng)注意以下幾點，①要選擇適于冷凍干燥的菌齡細(xì)胞；②要選擇適宜的培養(yǎng)基，因為某些微生物對冷凍的抵抗力，常隨培養(yǎng)基成分的變化而顯示出巨大差異；

③要選擇合適的菌液濃度，通常菌液濃度越高，生存率越高，保存期也越長；（4）最好在菌液內(nèi)不添加電解質(zhì)（如食鹽等）；⑤可在菌液內(nèi)添加甘油等保護劑，以防止在冷凍過程中出現(xiàn)菌體大量死亡的現(xiàn)象。同樣，也可添加各種糖類、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護效果的溶劑，但對有些微生物而言，不加保護劑時更有效。⑥原則上應(yīng)盡快進(jìn)行冷凍處理，但當(dāng)加入保護劑時，可靜置一段時間后再進(jìn)行處理。⑦就動物細(xì)胞而言,應(yīng)在一20C范圍內(nèi)以1'C/min左右的速度緩慢降溫，此后必須盡快降到貯藏溫度；而對絕大多數(shù)微生物而言，則不必如此，如結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的原蟲則可在一35℃范圍內(nèi)進(jìn)行緩慢降溫，而噬菌體則必需采用上述的二階段法進(jìn)行冷凍；⑧若進(jìn)行長期保存，則貯藏溫度越低越好；⑨取用冷凍保存的菌種時，應(yīng)采取速融措施，即在35?40℃溫水中輕輕振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來說，則應(yīng)選擇靜置融化的措施。當(dāng)冷凍菌融化后，應(yīng)盡量避免再次冷凍，否則菌體的存活率將顯著下降.三、實驗器材1、菌種：培養(yǎng)12-16h的大腸桿菌，灰色鏈霉素，釀酒酵母；2,試劑：液體石蠟、河沙、紅土等：3、器材：無菌吸管、安甑管、60目篩子、冰箱等。四、實驗方法1、液體石蠟法（1）礦油滅菌：將液體石蠟分裝包扎，121C滅菌30min后，放在40℃溫箱中使水蒸氣蒸發(fā)備用；（2）菌種培養(yǎng)：將菌種在斜面上培養(yǎng)成熟：（3）灌注礦物油：用無菌吸管吸取無菌的液體石蠟，加入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕；（4）低溫（5℃左右）保藏：將試管直立，置冰箱中保存。2、砂管保藏法（1）制備沙管：河沙60目過篩一去雜質(zhì)漂洗一烘干分裝一滅菌一烘干；簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示實驗方法，并強調(diào)實驗注意事項

（2）準(zhǔn)備菌種：在合適培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得抱子；布置本次實驗報告和思考題（3）接種：干法接種，直接將放線菌、真菌抱子接種于沙管中。濕法接種，先將斜面培養(yǎng)物制成菌懸液，吸取菌懸液于沙管中（每管約10滴）布置本次實驗報告和思考題（4）干燥保藏：將含菌沙管放在含干燥劑的干燥器中吸水干燥。低溫或室溫下干燥處保藏。五、實驗作業(yè)根據(jù)你自己的實驗，談?wù)??2種菌種保藏方法的利弊？武術(shù)教案班級人數(shù)II期課次第1次

課的基本內(nèi)容一、學(xué)習(xí)基本手型、手法、步型、步法等二、學(xué)習(xí)三路長拳第一段1-4動II的任務(wù)1、使學(xué)生初步了解武術(shù)的基本練習(xí)功法，并掌握練習(xí)的技術(shù)要領(lǐng)。2、通過長拳學(xué)習(xí)，了解套路動作結(jié)構(gòu)、路線及特點。3、提高學(xué)生柔韌、乂敏、平衡素質(zhì)“重點難點重點：難點：手型、步型、手法、腿法三路長拳中的虛步亮掌課的部分時間課的內(nèi)容組織教法開始部分5，1、體育委員集合鵬隊，報告人數(shù)2、師生問好3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4、安排見習(xí)生隊形： △△教師xxxxxxxxxxxxxx教法：宣講法準(zhǔn)備部分811,繞山徑場慢跑二圈（2X400m）2,徒手操（4X8拍）（1）頭部運動（2）四肢運動（3）俯背運動（4）弓步運動（5）仆步壓腿（6）正壓腿（7）膝關(guān)節(jié)運動（8）踝、腕關(guān)節(jié)運動組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊，速度適中2、成廣播體操隊形散開教法：教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)。要求：準(zhǔn)備活動充分族本部分36，一、基本手型、手法、步型、步法等1、手型：拳：拳握緊，拳面平、直腕掌：四指并攏伸直，拇指彎屈緊扣于虎口處勾：五指第一指節(jié)捏攏在一起，屈腕步型：弓、馬、仆、虛、歇、丁步，坐盤，插步，蓋步武術(shù)教案組織：集體練習(xí)教法：1、簡介本課程基本功練習(xí)內(nèi)容2、詳細(xì)講解手型、步型等的動作要點及演練技巧并示范, 課的內(nèi)容 組織教法部分間

基本部分32，沖拳：出拳快速有力，寸勁做好擰腰、順肩、急旋前臂的動作架拳：松肩、肘微屈，前臂內(nèi)旋推掌：挺胸、收腹、立腰、出掌快速有力，有寸勁亮掌：抖腕、亮掌與轉(zhuǎn)頭同時完成3,步型：弓、馬、仆、虛、歇、丁、坐盤4、步法：擊步、墊步等二、三路長拳第一段1-4動特點：姿勢挺拔，動作舒展,快速有力3、學(xué)生模仿，教師糾錯4、學(xué)生練習(xí)基本功法，教師指導(dǎo)1、糾正易犯錯誤，繼續(xù)練習(xí)2,學(xué)生再練習(xí)要求：仔細(xì)觀察記憶，認(rèn)真練習(xí)組織：集體練習(xí)教法：1、教師示范并講解練習(xí)要領(lǐng)2,學(xué)生跟練3、學(xué)生自練，教師口令提示4、教師糾錯，學(xué)生再練習(xí)5、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)結(jié)束部分5，I、集合整隊2,師生放松靜力性放松抖動四肢放松3、課后小結(jié)4、師生再見組織：集體練習(xí)教法:1、教師提示并口令指揮1、學(xué)生放松2、教師總結(jié)3、提示課外練習(xí)注意事項要求:積極放松場地布置田徑場器材及設(shè)備課后小結(jié)備注武術(shù)教案班級人數(shù)日期課次第2次

課的基本內(nèi)容一、正側(cè)壓腿、正側(cè)踢腿、里介腿、外擺腿二、三路長拳5-8動!1的任務(wù)1、讓學(xué)生進(jìn)一步學(xué)習(xí)武術(shù)基本功并掌握腿法練習(xí)的正確方法。2、繼續(xù)學(xué)習(xí)長拳套路動作，并能前后貫穿練習(xí)。量點難點戰(zhàn)點：基本功練習(xí)中的挺胸、五腰或塌腰難點：長拳中的大躍步前穿課的部分時間課的內(nèi)容組織教法開始部分3'1、體育委員集合整隊，報告人數(shù)2、師生問好1、宣布本次課的內(nèi)容及要求2,安排見習(xí)生隊形： △△教師xxxxxxxxxxxxxx準(zhǔn)備部分18'1,繞田徑場慢跑二圈(2X400m)2、徒手操(4X8拍)(1)頭部運動(2)四肢運動(3)俯背運動(4)膝關(guān)節(jié)運動(5)踝、腕關(guān)節(jié)運動3、專門性練習(xí):拉韌帶組織：1、成兩列縱對慢跑.隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2、教師講解壓韌帶要領(lǐng)并示范3、學(xué)生練習(xí)出本部分30，-、正側(cè)壓腿、正側(cè)踢腿、里合腿、外擺腿1、正壓腿要點：直體向前、向下壓振，逐漸加大振幅，逐步提高腿的高度2、側(cè)壓腿要點：同正壓腿組織：集體練習(xí)分組練習(xí)教法：1、簡介基本功練習(xí)內(nèi)容2、教師講解示范，并強調(diào)動作要領(lǐng)學(xué)生練習(xí)，教師指導(dǎo)3、教師領(lǐng)做，學(xué)生跟練武術(shù)教案課的內(nèi)容組織教法課的 時課的內(nèi)容組織教法部分 間

基本部分32，3、正踢要點：抬頭挺胸，身體中正。4、側(cè)踢要點：腳尖向腦后走。5、里合要點；保持上肢中正。6、外擺要點：展胯，動作幅度大。二、三路長拳5-8動5,彈腿沖拳6,大躍步前穿7,弓步擊掌8、馬步架掌4、學(xué)生集體練習(xí)，教師糾錯5、學(xué)生分組練習(xí)，教師糾錯要求1、學(xué)生仔細(xì)觀察，認(rèn)真練習(xí)2、教師啟發(fā)引導(dǎo)學(xué)生完成動作3、反復(fù)練習(xí)，思考動作，體會動作要領(lǐng)組織：集體練習(xí)教法：1、教師講解示范2、師生同步練習(xí)3、學(xué)生練習(xí)，教師口令指揮4、教師糾錯，學(xué)生再練習(xí)5、教師總結(jié)結(jié)束部分5，1、集合整隊2、師生放松(1)伸展性放松(2)抖動四肢放松(3)呼吸調(diào)整放松3、課后小結(jié)4、師生再見組織：集體練習(xí)教法：1、教師提示并口令指揮2、學(xué)生放松3、教師總結(jié)4、提示課外練習(xí)注意事項要求：積極放松場地布置田徑場器材及設(shè)備課后小結(jié)備注武術(shù)教案班級人數(shù)日用課次第3次

課的基本內(nèi)容一、腰功、跳躍、平衡練習(xí)二、三路長拳第二段1-5動三、單足跳、蛙跳等!1的任務(wù)1、進(jìn)一步學(xué)習(xí)武術(shù)法本功，提高腰部的柔韌性和靈活性。2、學(xué)習(xí)三路長拳新動作并復(fù)習(xí)已學(xué)的。3、發(fā)展學(xué)生腿部力量及腰的柔韌性。重點難點重點：套路學(xué)習(xí)的虛步栽拳、提膝穿掌的方向路線難點：基本功練習(xí)腰的靈活性課的部分時間課的內(nèi)容組織教法開始部分5，1、體育委員集合整隊，報告人數(shù)2、師生問好3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4,安排見習(xí)生隊形： △△教師xxxxxxxxxxxxxx準(zhǔn)備部分15'1,繞田徑場慢跑二圈(2X400m)2、徒手操(4X8拍)(1)頭部運動(2)四肢運動(3)俯背運動(4)膝關(guān)節(jié)運動(5)踝、腕關(guān)節(jié)運動(6)拉韌帶3、專門性練習(xí)：基本功、五步拳組織：1、成兩列縱對慢跑.隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師講解基本功要領(lǐng)并示范2、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)3、學(xué)生練習(xí)五步拳，教師指導(dǎo)糾錯基■1、部分20'一、腰功、跳躍、平衡練習(xí)1、前俯腰要點：兩腿挺膝伸直，挺胸、塌腰、收股，并向前折體2、涮腰要點：盡量增大繞環(huán)幅度3、翻腰要點：兩手臂盡量伸宜組織：集體練習(xí)教法：1、教師完整示范2、教師分解教學(xué)3、教師講解示范單個動作4,教師領(lǐng)做，學(xué)生跟練武術(shù)教案課的部分時I'hJ課的內(nèi)容組織教法

基本部分3072014、騰空飛腳要點：踢擺時，腳高須過腰，左腿在擊響的一瞬間，屈膝收控于右腿側(cè)。5、大躍步前穿要點：躍步要遠(yuǎn)，落地要輕，兩臂上擺幅度要大。6、提膝平衡要點：平衡站穩(wěn)，提膝過腰，腳內(nèi)扣7,望月平衡要點：平穩(wěn)站立，扣緊膝窩，腳底朝上二、三路長拳第二段1-5動1、虛步栽拳2、提膝穿掌3、仆步穿掌4、虛步挑掌5、馬步擊掌三、單足跳、蛙跳等5、學(xué)生自練，教師指揮6、教師糾錯，學(xué)生再練習(xí)7,教師強調(diào)重難點，并介紹易犯錯誤及糾正方法8、學(xué)生分組自練，教師巡回指導(dǎo)9、集體練習(xí)，教師指揮10、集體糾錯，學(xué)生再練習(xí)11、教師小結(jié)要求：講解簡明扼要，學(xué)生觀察思考器束部分5，1、集合整隊2、師生放松(1)靜力性放松(2)抖動四肢放松3、課后小結(jié)4,布置課后作業(yè)5、師生再見組織：集體練習(xí)教法：1、教師提示并口令指揮2、學(xué)生放松3、教師總結(jié)4、提示課外練習(xí)注意事項要求：積極放松場地布置田徑場器材及設(shè)備課后小結(jié)備注武術(shù)教案班級人數(shù)!1期課次第4次

課的基本內(nèi)容一、三路長拳第：段6-8動、第三段1-2動二、單足跳、蛙跳11的任務(wù)1、學(xué)習(xí)鞏固三路長拳動作，提高動作的完成質(zhì)量。2,改善學(xué)生的身體狀況，提高學(xué)生的身體素質(zhì)，尤其是腿部力量。重點難點重點：轉(zhuǎn)身踢腿馬步盤肘難點：彈跳力的練習(xí)課的部分時間課的內(nèi)容組織教法開始部分5,1、體育委員集合整隊，報告人數(shù)2、師生問好3、宣布本次課的內(nèi)容及要求4,安排見習(xí)生隊形： △△教師xxxxxxxxxxxxxx教法：支講法準(zhǔn)備部分13，1、繞田彳令場慢跑二圈（2X400m）2、徒手操（4X8拍）（1）頭部運動（2）四肢運動（3）俯背運動（4）膝關(guān)節(jié)運動（5）踝、腕關(guān)節(jié)運動3、專門性練習(xí)：柔韌練習(xí)、基本功組織：1、成兩列縱時慢跑，隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習(xí)由肋木輔助練習(xí)教法：1、教師口令指揮，學(xué)生練習(xí)2,教師指導(dǎo)糾錯3、學(xué)生再練習(xí)基本部分50'初級長拳第:路:第二段6-8動6,叉步雙擺掌要點：兩臂要劃立圓，幅度要大，擺學(xué)與后插步配合一致。7、弓步擊掌要點：左腿后撤一步成右弓步，右掌向下、向后伸直成后勾手，左掌經(jīng)腰成立掌向前擊出。組織:集體練習(xí)一分組練習(xí)一集體練習(xí)教法:1、教師完整示范2、教師分解教學(xué)3、教師講解單個動作要領(lǐng)并示范，學(xué)生模仿練習(xí)4、教師領(lǐng)做，學(xué)生跟練體育教學(xué)（教案）課的內(nèi)容組織教法課的 時課的內(nèi)容組織教法部分 間

本部分17,8、轉(zhuǎn)身踢腿馬步盤肘要點：兩臂掄動時劃立圓，動作連貫，盤肘要快速有力，右肩前傾。第三段1-2動：1、歇步掄砸拳要點：掄臂動作要連貫并劃成立圓，歇步要兩腿交叉全蹲，左腿大小腿靠緊，臀部貼于左小腿外側(cè)，膝關(guān)節(jié)在右小腿外側(cè)，腳跟提起，右腳尖外展，全腳著地。2、仆步亮掌要點：仆步時左腿充分伸直，腳尖內(nèi)扣，全腳掌，右腿全蹲，腳跟不離地，挺胸，塌腰，微左轉(zhuǎn)。二、素質(zhì)訓(xùn)練1、單足跳2、蛙跳5、學(xué)生白練，教師指揮6、教師糾錯，學(xué)生再練習(xí)7,學(xué)生完整練習(xí)8、教師強調(diào)重難點，并介紹易犯錯誤及糾正方法9、學(xué)生分組自練，教師巡回指導(dǎo)1()、集體練習(xí)，教師指揮11、集體糾錯，學(xué)生再練習(xí)，教師小結(jié)要求：講解簡明扼要，學(xué)生觀察思考組織：學(xué)生分組練習(xí)教法