人參種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程

T/CSMAXXXX－2018人參種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了人參[Panax

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C.A.Mey.]種子超低溫保存過程中的術(shù)語和定義、種子的選擇、種子前處理、種子保存量、種子冷凍方式、恢復(fù)培養(yǎng)等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于人參種子的超低溫長期貯藏。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543.6農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程水分測定GB/T3543.7農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程其他項目檢驗術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。人參Panax

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C.A.Mey.為五加科（Araliaceae）人參屬（PanaxLinn.）多年生草本植物，中藥名亦為人參，以根莖葉入藥。人參的肉質(zhì)根為著名強(qiáng)壯滋補(bǔ)藥，適用于調(diào)整血壓、恢復(fù)心臟功能、神經(jīng)衰弱及身體虛弱等癥，也有祛痰、健胃、利尿、興奮等功效。收載于《中國藥典（2015）》。人參果實Panax

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C.A.Mey.fruits果實扁球形，鮮紅色，長4~5mm，寬6~7mm。人參種子Panax

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C.A.Mey.seeds人參的播種材料為完整種子，貯藏特性判斷為中間性種子。種子乳白色，腎形，直徑4~5mm。種子超低溫保存seedofcryopreservation指將經(jīng)過前處理的人參種子置于液氮（-196℃）中保存。種子的選擇果實采收6至9月，待果實種皮變成深紅色時，即可采收，去除外種皮，取出種子。種子選擇挑選發(fā)育飽滿、成熟、健康的種子，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫ù娣艜r間不超過3個月）。種子前處理生活力檢測參照GB/T3543.7中的2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）法檢測種子生活力。隨機(jī)抽取30粒種子，沿種脊小心將種子分成2瓣，放培養(yǎng)皿內(nèi)，內(nèi)側(cè)面向下，滴入TTC溶液浸沒種子，室溫（25℃）避光放置4h后觀察染色結(jié)果。生活力計算直接用肉眼對染色結(jié)果進(jìn)行觀察鑒定。凡胚及胚乳全部染成有XX的鮮紅色，且組織狀態(tài)正常的，為有活力的種子；否則為無生活力的種子。計算：生活力=有活力的種子數(shù)/總的種子數(shù)×100%待保存的人參種子生活力應(yīng)≥80%。含水量范圍用尼龍網(wǎng)袋包裹人參種子，置于盛有變色硅膠的干燥器內(nèi)，硅膠與種子的體積比為19000:1，室溫條件下干燥處理0~20h，在干燥過程中定期測定種子含水量，將種子含水量由8%~12%降至7%~10%。參照GB/T3543.6中的高恒溫烘干法（130℃烘干1h）測定種子含水量（W0），W0=（鮮重-絕干重）/鮮重×100%。種子保存量人參種子保存量不少于300粒，以便后期的活力檢測使用。種子冷凍方式人參種子超低溫保存的冷凍方式為直接冷凍法，即將待保存的人參種子放入5mL凍存管（每管50粒種子）中，迅速投入液氮中保存。恢復(fù)培養(yǎng)種子解凍處理液氮中至少凍存24h后，取出1個凍存管，立即放入40℃水浴中快速解凍2min。凍后種子生活力檢測取出25粒解凍后的種子，參照5.1~5.2生活力檢測方法，進(jìn)行超低溫保存后的初始生活力檢測。當(dāng)種子生活力≥75%時視為保存成功?；謴?fù)培養(yǎng)將剩下25粒解凍后的人參種子，播種到帶有無菌濾紙的帶蓋發(fā)芽盒中，溫度25℃~30℃，濕度70%~85%條件下培養(yǎng)。附錄TTC的配置和保存方法精密稱取TTC1.00g，溶于100mL磷酸鹽緩沖液中，制成濃度為1%的TTC溶液，調(diào)pH至6.5~7.5，置棕色瓶內(nèi)4℃冰箱備用。磷酸緩沖液配置方法：溶液I：9.08g磷酸二氫鉀溶于1L無菌水中；溶液II：35.81g磷酸二氫鈉溶于1L無菌水中；I:II=2:3的比例混合制成磷酸鹽緩沖液）參考文獻(xiàn)[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].XX，中國醫(yī)藥科技出版社，2015，9[2]中國科學(xué)院中國植物志委員會.中國植物志.第54卷[M].科學(xué)出版社，1987：180[3]ShangChih-bei.PorterP.LowryII.Araliaceae[M]//FloraOfChinaBeijing:SciencePress/St.Louis:MissouriBotanicalGardenPress.2007.13:489-491.[4]傅家瑞，宋松泉.頑拗