【公開課】高三生物一輪復(fù)習(xí)課件：微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

一輪復(fù)習(xí)

微生物的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)發(fā)酵工程的重要基礎(chǔ)防止雜菌污染獲得純凈的微生物培養(yǎng)物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的條件為人們需要的微生物提供合適的營養(yǎng)確保其他微生物無法混入為人們需要的微生物提供合適的環(huán)境條件將需要的微生物分離出來培養(yǎng)基無菌技術(shù)分離技術(shù)培養(yǎng)環(huán)境1.培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。按物理性質(zhì)劃分：按化學(xué)成分劃分：按用途劃分：培養(yǎng)基類型：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物后液體培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：培養(yǎng)基類型：分離、計(jì)數(shù)、鑒定、菌種保存等有無凝固劑如瓊脂

微生物在瓊脂固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)形成肉眼可見的菌落用于擴(kuò)大微生物種群數(shù)量培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的基本成分：水碳

源無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-。葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②說明微生物的同化作用類型作用：碳

源無機(jī)鹽氮

源凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)。來源于動(dòng)物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏、蛋白胨：培養(yǎng)基的基本成分：無機(jī)鹽氮

源NH4＋、NO3-、NH3等。牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：Zn、Cu、Mn、Co、Mo等大量元素：微量元素：Ca、K、Mg等為什么培養(yǎng)基需要氮源？是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的其他條件生長(zhǎng)因子常見的生長(zhǎng)因子：作用：微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。一般情況下，不添加氮源培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)_____微生物固氮①

含C、H、O、N有機(jī)物可作為異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。②

自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基的主要差別在于碳源。自養(yǎng)型微生物所需的碳源來自無機(jī)碳源，異養(yǎng)型微生物所需的碳源來自有機(jī)碳源，因此可以根據(jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型。③

氮源主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝產(chǎn)物等。無機(jī)氮源不但能給自養(yǎng)型微生物提供氮源，也能作為能源物質(zhì)，如NH3既作為硝化細(xì)菌的氮源，也作為能源（NH3氧化釋放的化學(xué)能）。④

無機(jī)鹽除了可以調(diào)節(jié)酸堿平衡、維持一定的滲透壓之外，提供無機(jī)營養(yǎng)，有些無機(jī)鹽離子可以作為化能合成菌的能源（如鐵細(xì)菌）。⑤水的功能：良好的溶劑，維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。

其他條件還需滿足不同微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、氧氣及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求培養(yǎng)的微生物需要滿足的其他要求乳酸桿菌培養(yǎng)基中添加維生素霉菌將pH調(diào)至酸性細(xì)菌將pH調(diào)至中性或微堿性厭氧微生物需要提供無氧條件表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成組分含量牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至1000ml提供的主要營養(yǎng)碳源、磷酸鹽和維生素等氮源和維生素等無機(jī)鹽水請(qǐng)判斷下列說法的正確性1.同一種物質(zhì)不能既做碳源，有做氮源。

（

）2.碳源都能提供能量。

（

）3.NA2CO3只能提供碳源。

（

）4.除水以外的無機(jī)物只能提供無機(jī)鹽。

（

）5.無機(jī)氮源也能提供能量。

（

）××××√二、無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，避免雜菌污染的方法。獲得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵主要包括____和____。消毒滅菌

問題：無菌技術(shù)除用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？還能有效避免操作者被微生物感染。（1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的____、操作者的________，進(jìn)行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養(yǎng)的____、________和______等進(jìn)行滅菌?？臻g衣著和手器皿接種用具培養(yǎng)基關(guān)于培養(yǎng)基的配制說法不正確的是(

)A．在配制培養(yǎng)乳酸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，需加入維生素B．微生物的適應(yīng)性強(qiáng)，配制培養(yǎng)基時(shí)可以不考慮pHC．雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽D．配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例2．幽門螺桿菌(能產(chǎn)生脲酶)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素，嚴(yán)重者則發(fā)展為胃癌。我國的共餐制是導(dǎo)致幽門螺桿菌高發(fā)的重要原因。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后進(jìn)行培養(yǎng)。下列敘述正確的是(

)A．對(duì)幽門螺桿菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)可用平板劃線法B．分離純化幽門螺桿菌時(shí)應(yīng)使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基C．進(jìn)行幽門螺桿菌培養(yǎng)需要提供95%空氣和5%CO2、高濕度的環(huán)境D．培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對(duì)幽門螺桿菌的生長(zhǎng)越有利1.培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。2．培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的確定方法不同種類的微生物代謝特點(diǎn)不同，因此對(duì)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的需求也不同。如：(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機(jī)鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機(jī)鹽提供。(2)異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物，碳源必須由含碳有機(jī)物提供，氮源也主要是由有機(jī)物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機(jī)氮源。消

毒

指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死

物體表面或內(nèi)部一部分微生物。（1）概念：（2）常用的消毒方法100℃煮沸5～6min，可以殺死微生物的營養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑消毒法紫外線消毒法62～65℃下消毒30min或80～90℃處理30s～1min適合一些不耐高溫的液體，如牛奶?？梢詺⑺琅Ｄ讨械慕^大多數(shù)微生物，并且不破壞牛奶的營養(yǎng)成分。用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。

接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)在使用前可用紫外線照30min?？蓺⑺牢矬w表面和空氣中的微生物。在照射前，適量噴灑石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果。滅

菌（1）概念：

指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。（2）常用的滅菌方法濕熱滅菌干熱滅菌灼燒滅菌芽孢：某些細(xì)菌在其生長(zhǎng)發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成的一個(gè)園或橢圓形、厚壁、含水量低、抗逆性強(qiáng)的休眠構(gòu)造。芽孢萌發(fā)可形成細(xì)菌體。孢子:脫離親本后能直接或間接發(fā)育成新個(gè)體的生殖細(xì)胞。它是有絲分裂或減數(shù)分裂的產(chǎn)物。

濕熱滅菌利用沸水流通蒸汽高壓蒸汽高壓蒸汽滅菌效果最好100KPa121℃15--30min工具為高壓蒸汽滅菌鍋，常用于培養(yǎng)基、無菌水等的滅菌。注：使用后的培養(yǎng)基必須滅菌后才能丟棄，以免污染環(huán)境。干熱滅菌將滅菌物品放入密閉容器如干熱滅菌箱，在160～170℃的熱空氣中維持2～3h。耐高溫，需保持干燥的物品，適用于

玻璃器皿(如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器)

金屬器具(如針頭、鑷子、剪刀等)的滅菌灼燒滅菌將滅菌對(duì)象直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，使微生物燃燒，可以迅速地徹底地滅菌。滅菌對(duì)象：適用于微生物的接種工具，如涂布器、接種環(huán)、接種針或其它金屬用具，試管口、瓶口等容易被污染的部位類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時(shí)用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺(tái)三、微生物的純培養(yǎng)培養(yǎng)物純培養(yǎng)物純培養(yǎng)將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物。由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體獲得純培養(yǎng)物的過程配制培養(yǎng)基滅菌接種分離培養(yǎng)微生物群分散或稀釋單個(gè)細(xì)胞單個(gè)菌落繁殖菌落1.概念：2.特征：

分散的微生物(單一個(gè)體)在適宜的

表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的

。

固體培養(yǎng)基子細(xì)胞群體形狀、大小、光澤度、顏色、透明度等。—是鑒定菌種的重要依據(jù)3.獲得單菌落的方法：①平板劃線法②稀釋涂布平板法毛霉酵母菌純培養(yǎng)方法步驟接種分離酵母菌培養(yǎng)酵母菌制備培養(yǎng)基1.制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基滅菌倒平板配制培養(yǎng)基滅菌（1）配制培養(yǎng)基馬鈴薯200g切成小塊加水1000ml，煮沸至馬鈴薯軟爛過濾，加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。（2）滅菌錐形瓶包器材培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌酵母菌培養(yǎng)基包上牛皮紙轉(zhuǎn)移加棉塞干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃滅菌2h。滅菌15-30min用皮筋勒緊高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下培養(yǎng)皿干熱滅菌（3）倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。冷凝后平板為什么倒置①拔出錐形瓶的棉塞②將瓶口迅速通過火焰③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒轉(zhuǎn)過來放置2.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。

防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。3.怎么確定所倒平板未被雜菌污染？1.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，將平板倒置可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。思考討論2.接種和分離酵母菌平板劃線法平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。單個(gè)細(xì)胞微生物群?jiǎn)蝹€(gè)菌落連續(xù)劃線分散或稀釋生長(zhǎng)繁殖平板劃線過程①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞③試管口通過火焰④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞⑥將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋平板劃線過程⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。平板劃線過程注意：1.不要將最后一次的劃線與第一次劃線相連。2.劃3個(gè)平板（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）1個(gè)不劃線（空白對(duì)照）3.一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；4.存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落第1區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第2區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第3區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌分區(qū)劃線法12345①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次.②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌④劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法1.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。2.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。思考與討論3.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？灼燒時(shí)期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個(gè)細(xì)胞殺死接種環(huán)上原有微生物3.培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-28h。作對(duì)照，該培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染既可以防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染思考：1.在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)？如果有，說明了什么？

在未接種的培養(yǎng)基表面應(yīng)該沒有菌落生長(zhǎng)，如果有，說明培養(yǎng)基被雜菌污染或滅菌不徹底。2.你是如何記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的？

可以在培養(yǎng)12h和24h后，觀察菌落的大小、形狀、顏色。培養(yǎng)24h后，菌落的大小、形狀是否發(fā)生變化，菌落顏色是否加深，光澤度是否增加，等等3.在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小是否一致？如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？

在接種酵母菌的培養(yǎng)基上可觀察到單菌落。如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特點(diǎn)，則說明純化酵母菌的操作成功；如果觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作不規(guī)范等原因引起的。（2018全國Ⅱ，15分）在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染?；卮鹣铝袉栴}：①在實(shí)驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具_(dá)____（填“可以”或“不可以”）放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。②牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法。與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是_______________________________________。③密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能______________。在照射前，適量噴灑_______，可強(qiáng)化消毒效果。④水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過_____（填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”）消毒的。⑤某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的原因是___________________?？梢栽谶_(dá)到消毒目的的同時(shí)，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液氯氣未將鍋內(nèi)冷空氣排盡在科研和生產(chǎn)上，研究和應(yīng)用微生物的前提是防止雜菌污染，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物，無菌操作是防止雜菌污染的關(guān)鍵，下列相關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是(

)A．煮沸消毒可以殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子B．巴氏消毒法消毒牛奶，基本不破壞其中的營養(yǎng)物質(zhì)C．耐高溫的、需要保持干燥的物品，可用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌D．紫外線消毒前，適量噴灑消毒液可以加強(qiáng)消毒效果解析煮沸消毒只可以殺死物體表面或內(nèi)部的一部分微生物，A錯(cuò)誤。下列有關(guān)細(xì)菌純化培養(yǎng)的說法，不正確的是(

)A．實(shí)驗(yàn)操作者接種前要用70%的酒精棉球擦手消毒B．每次劃線后接種環(huán)要在酒精燈火焰上灼燒滅菌C．培養(yǎng)基上的單個(gè)菌落都是一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞的克隆D．菌液梯度稀釋后用涂布法接種，得到單菌落便于計(jì)數(shù)解析無論是平板劃線法或稀釋涂布平板法，均沒有辦法保證觀察到的一個(gè)菌落是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖得來的，因此需要后續(xù)的純化分離，C錯(cuò)誤。(2020·江蘇高考)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是(

)A．倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D．菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色(2021·遼寧丹東開學(xué)考試)如圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化酵母菌過程中的部分操作步驟，下列說法不正確的是(

)A．①步驟使用的培養(yǎng)基是已經(jīng)調(diào)節(jié)過pH并滅菌的培養(yǎng)基B．①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行C．③到④的過程中，接種環(huán)共灼燒了5次D．④步驟操作時(shí)，不能將第1區(qū)和第5區(qū)的劃線相連考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)實(shí)例：尋找耐高溫的DNA聚合酶篩選原因：因?yàn)闊崛母邷貤l件淘汰了絕大多數(shù)微生物，使耐熱的Taq細(xì)菌保留下來。PCR是一種在體外DNA復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。耐高溫的酶耐高溫生物體高溫環(huán)境（熱泉、火山口）一、選擇培養(yǎng)基熱泉中發(fā)現(xiàn)了耐熱的Taq細(xì)菌，并分離到耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）。根據(jù)微生物對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去尋找。啟示：耐寒微生物石油分解菌被石油污染的土壤冰川凍土層實(shí)驗(yàn)室篩選微生物原理：人為提供__________________的條件（包括_____、_____和_____等），同時(shí)_______________________有利于目的菌生長(zhǎng)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)營養(yǎng)溫度pH以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基（1）利用營養(yǎng)條件進(jìn)行選擇培養(yǎng)篩選出能分解尿素的細(xì)菌分離固氮菌分離自養(yǎng)型微生物不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基（2）在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。分離得到酵母菌、霉菌等加入青霉素的培養(yǎng)基分離得到金黃色葡萄球菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基（3）改變微生物的培養(yǎng)條件。厭氧型微生物，兼性厭氧型無氧環(huán)境下培養(yǎng)培養(yǎng)基中加氨芐青霉素具有氨芐青霉素抗性的菌落沒有氨芐青霉素抗性的細(xì)菌培養(yǎng)基應(yīng)有菌落沒有氨芐青霉素抗性的細(xì)菌被淘汰怎樣選擇出抗氨芐青霉素能力的細(xì)菌?實(shí)例;選擇培養(yǎng)基的概念

在微生物學(xué)中，將允許

生長(zhǎng)，同時(shí)

或

其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。特定種類的微生物抑制阻止思考怎么證明一個(gè)選擇培養(yǎng)基具有選擇性呢？

應(yīng)該設(shè)置基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）或完全培養(yǎng)基

作為對(duì)照基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基問題：如果讓你分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，你應(yīng)該怎么設(shè)計(jì)呢？尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素不能直接被農(nóng)作物吸收，土壤中的細(xì)菌將尿素分解成NH3，再被轉(zhuǎn)化為NO3-、NH4+等被植物吸收。土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕?。CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì)尿素的立體結(jié)構(gòu)1.如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素

的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？設(shè)計(jì)一種選擇培養(yǎng)基,用尿素作為唯一氮源,可以將分解尿素的細(xì)菌分離出來。2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？這種培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比，只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其他營養(yǎng)成分基本相同。選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì)1.從物理性質(zhì)來講，兩者屬于_____培養(yǎng)基，判斷依據(jù)是_______________；該類培養(yǎng)基的主要用途為_______________。2.從用途上來講，培養(yǎng)基二屬于_____培養(yǎng)基，目的是為了獲得_________。3.兩種培養(yǎng)基共有的培養(yǎng)基成分有：_____________________；培養(yǎng)基一的碳源為_______，氮源為_______；培養(yǎng)基二的碳源為_______，氮源為_______。培養(yǎng)基一牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基二KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml固體添加了凝固劑瓊脂分離、鑒定、計(jì)數(shù)選擇能分解尿素的微生物碳源、氮源、無機(jī)鹽、水牛肉膏蛋白胨葡萄糖尿素當(dāng)堂訓(xùn)練稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。稀釋度足夠高時(shí)，能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。（二）微生物的選擇培養(yǎng)

如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌，還需對(duì)土壤菌液進(jìn)行稀釋及科學(xué)的微生物數(shù)量測(cè)定方法---稀釋涂布平板法。

應(yīng)采用_____________；由于土壤細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到特定微生物的純培養(yǎng)物，必須要對(duì)土壤進(jìn)行________，然后再將菌液_____到制備好的__________上；兩個(gè)基本操作：________和________稀釋涂布平板法充分稀釋涂布選擇培養(yǎng)基梯度稀釋涂布平板（二）微生物的選擇培養(yǎng)稀釋度足夠高時(shí)，能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1021ml1031ml1041ml1051ml1061ml107微量移液器稀釋10倍菌液101土壤10g在火焰旁稱取土壤10g，加入90ml無菌水中，搖勻，制成稀釋10倍的土壤菌液。分別取1ml上清液，加入盛有9ml無菌水的試管中，制成不同稀釋倍數(shù)的菌液。取6支試管，分別加入9ml無菌水。樣品梯度的稀釋灼⑤將涂布器在火焰上灼燒，待酒精燃盡后，涂布器冷卻后，進(jìn)行涂布。涂⑥用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。滴③取0.1ml菌液，滴加到培養(yǎng)基表面④將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中浸取樣涂布平板各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照稀釋涂布平板法實(shí)驗(yàn)操作放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)1～2d稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對(duì)照恒溫培養(yǎng)箱觀察與培養(yǎng)1.培養(yǎng)基的制作是否合格未接種培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基制備合格，否則需要重新制備。2.接種操作是否符合無菌操作如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落顏色、形狀、大小基本一致，符合菌落特點(diǎn)，說明操作是符合無菌操作，如果出現(xiàn)其他菌落，說明未達(dá)要求獲得單菌落的方法平板劃線法稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法除可以分離微生物外，也常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目；1.稀釋涂布平板法（1）原理：

當(dāng)樣品的稀釋度足夠___時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)____，來源于__________中的一個(gè)____；通過計(jì)數(shù)平板上的____數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少_____；高菌落樣品稀釋液活菌菌落活菌（2）計(jì)數(shù)原則①選擇菌落數(shù)為_________的平板計(jì)數(shù)30-300②同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)___個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出______；3平均值樣品的

______將直接影響平板上的菌落數(shù)目；稀釋度微生物的數(shù)量測(cè)定稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對(duì)照注意事項(xiàng)①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在

_________上進(jìn)行計(jì)數(shù)。②為增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)說服力與準(zhǔn)確性，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要涂布_________作為重復(fù)組。（重復(fù)實(shí)驗(yàn)，減少誤差）。③統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_________

。④因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)表示。⑤分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮重復(fù)組結(jié)果_________，如果相差太大，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。30—300的平板至少三個(gè)平板低是否接近因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，繁殖后形成的還是一個(gè)菌落不能區(qū)分死菌與活菌；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；①原理：利用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。②缺點(diǎn)：2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)——直接計(jì)數(shù)法優(yōu)點(diǎn)：快速直觀每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和寥乐蟹纸饽蛩氐募?xì)菌的分離與計(jì)數(shù)（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌（2）統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌2.實(shí)驗(yàn)原理：絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g瓊脂15.0g蒸餾水1000mlKH2PO4和Na2HPO4的作用是：①提供無機(jī)鹽；②調(diào)節(jié)pH。3.研究思路；土壤取樣制備培養(yǎng)基樣品稀釋與取樣涂布微生物的培養(yǎng)與觀察細(xì)菌宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長(zhǎng)，絕大部分分布在距地表3~8cm的土壤層。鏟去表層土3cm左右，取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。（1）土壤取樣取土樣時(shí)用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。（2）配制培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基—————以尿素為唯一氮源完全培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）——作為對(duì)照，

來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用（3）樣品的稀釋將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL無菌水90mL無菌水10g①取0.1mL菌液滴加到培養(yǎng)基表面1×107移液槍②將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中③將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻（4）涂布平板操作細(xì)菌一般選用104、105、106稀釋倍數(shù)的菌液進(jìn)行涂布培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標(biāo)記。例如，在標(biāo)記培養(yǎng)皿時(shí)應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。每個(gè)濃度至少設(shè)置4個(gè)平板1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基（實(shí)驗(yàn)組，三個(gè)重復(fù)），4為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）。不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：以驗(yàn)證培養(yǎng)基中是否含有雜菌，驗(yàn)證是否有選擇作用。恒溫培養(yǎng)箱（5）微生物的培養(yǎng)與觀察①培養(yǎng)條件：

不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。②觀察：

每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。（一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等）。（細(xì)菌一般在30-37℃的溫度下培養(yǎng)1-2d）計(jì)算公式:M代表稀釋倍數(shù)C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)每g樣品中的菌落數(shù)＝

(C÷V)×M例題.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106

的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每g樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B1.10g土樣加入盛有90mL無菌水中后，已稀釋10倍，再計(jì)算時(shí)，不要忽略；2.由于使用的是選擇培養(yǎng)基，所以一般情況下，獲得的單菌落即目的菌，但因?yàn)橛行┪⑸锟梢岳媚康木拇x產(chǎn)物來生長(zhǎng)繁殖，所以還需要進(jìn)一步驗(yàn)證；3.過程中所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行；4.將涂布器從酒精中取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒；不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。注意事項(xiàng)主要方法平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面_________操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。（不能計(jì)數(shù)）將菌液進(jìn)行一系列的_________,稀釋度足夠高時(shí),聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞。（可計(jì)數(shù)）連續(xù)劃線梯度稀釋主要步驟_________操作接種工具_(dá)______平板示意圖

平板劃線涂布器兩種接種方法的比較梯度稀釋和涂布平板操作接種環(huán)1.結(jié)合對(duì)照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。

如果沒有接種的培養(yǎng)基上沒有菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些尿素分解菌。思考2.你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30～300的平板？在這一稀釋度下，是否至少有2個(gè)平板的菌落數(shù)接近？如果得到了兩個(gè)或多個(gè)菌落數(shù)為30~300的平板，說明稀釋度合適，操作比較成功，能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。3.你統(tǒng)計(jì)的每克土樣中能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學(xué)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？如果是用同一土樣進(jìn)行的操作，數(shù)據(jù)應(yīng)該比較接近。如果差異很大，就需要從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。得到的菌落一定是分解尿素的細(xì)菌嗎？不一定，還需要進(jìn)一步的鑒定進(jìn)一步探究——分解尿素細(xì)菌的進(jìn)一步鑒定

本活動(dòng)只是初步篩選了能分解尿素的細(xì)菌,對(duì)分離的菌種進(jìn)行鑒定還需要借助生物化學(xué)的方法。你可以查閱相關(guān)資料,進(jìn)一步設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來鑒定自己分離的菌種。分解尿素細(xì)菌鑒定原理：

細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，因此可以通過檢測(cè)培養(yǎng)基pH的變化來判斷是否發(fā)生了該化學(xué)反應(yīng)，進(jìn)而判斷該菌是否為尿素分解細(xì)菌。CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶呈堿性，遇酚紅指示劑呈

色。紅

在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將變紅：分解纖維素的細(xì)菌鑒定：

纖維素能與剛果紅形成紅色復(fù)合物，但纖維素水解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖不能與剛果紅形成紅色復(fù)合物。

在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入剛果紅，接種土壤微生物培養(yǎng)，菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明這些細(xì)菌能分解纖維素。透明圈地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸，其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用，這是因?yàn)樗鼈兡軌虍a(chǎn)生纖維素酶。對(duì)這些微生物的研究與應(yīng)用，使人們能夠利用秸稈等生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。已知?jiǎng)偣t是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不與水解后的纖維二糖、葡萄糖等發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物；而當(dāng)纖維素被纖維素分解菌分解后，復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以這些菌為中心的透明圈(如下圖所示)。請(qǐng)回答下列問題。（1）現(xiàn)在從土壤中分離纖維素分解菌，請(qǐng)你給出詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案。用“纖維素為唯一碳源”的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，并在培養(yǎng)基加入剛果紅進(jìn)行鑒別。（2）你打算到什么環(huán)境中去尋找纖維素分解菌？為什么？纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中，采集土樣時(shí)，可以選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹林中多年落葉形成的腐殖土等。（3）有同學(xué)說,可以把濾紙埋在土壤中,經(jīng)過一段時(shí)間后,再從已腐爛的濾紙上篩選纖維素分解菌。請(qǐng)你評(píng)價(jià)這一做法。這是人工設(shè)置適合纖維素分解菌生存的環(huán)境,腐爛的濾紙上很可能有纖維素分解菌。劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分用途

復(fù)習(xí)；培養(yǎng)基的類型及用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基將一定體積的水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放到伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，通過記算得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。測(cè)定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法：濾膜法項(xiàng)目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基原理用途舉例圖示尿素分解菌大腸桿菌加入不影響甚至促進(jìn)目標(biāo)微生物生長(zhǎng)，而抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì)加入某種指示劑或化學(xué)藥品(不影響微生物正常生長(zhǎng))，使微生物的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品發(fā)生反應(yīng)培養(yǎng)、分離出目標(biāo)微生物鑒別目標(biāo)微生物培養(yǎng)酵母菌和霉菌時(shí)，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)；利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)可分解尿素的細(xì)菌可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否含有大腸桿菌(若有，則菌落呈黑色)選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求或一些物理、化學(xué)抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。為選擇酵母菌和硝化細(xì)菌，應(yīng)選用的培養(yǎng)基分別為(

)A．伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基B．含青霉素的培養(yǎng)基、含氨的無機(jī)培養(yǎng)基C．含氨的無機(jī)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基D．含青霉素的培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(2021·山東等級(jí)考)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色。下列說法錯(cuò)誤的是(

)A．甲菌屬于解脂菌B．實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比D．該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力(2019·北京高考)篩選淀粉分解菌需使用以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)后，若細(xì)菌能分解淀粉，培養(yǎng)平板經(jīng)稀碘液處理，會(huì)出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈(如圖)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表。菌種菌落直徑：C(mm)透明圈直徑：H(mm)H/C細(xì)菌Ⅰ5.111.22.2細(xì)菌Ⅱ8.113.01.6有關(guān)本實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是(

)A．培養(yǎng)基除淀粉外還含有氮源等其他營養(yǎng)物質(zhì)B．篩選分解淀粉的細(xì)菌時(shí)，菌液應(yīng)稀釋后涂布C．以上兩種細(xì)菌均不能將淀粉酶分泌至細(xì)胞外D．H/C值反映了兩種細(xì)菌分解淀粉能力的差異10．(2020·全國卷Ⅰ)某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的有機(jī)物)難以降解，會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、水和S，乙的組分為無機(jī)鹽、水、S和Y。(1)實(shí)驗(yàn)時(shí)，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用__________________