檢驗(yàn)科PCR室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

PCR文件編號(hào)：ABCD-3-PR-01~31第A生效日期：20XXXXABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科編制說(shuō)明本分冊(cè)文件可以作為單獨(dú)申請(qǐng)衛(wèi)生部PCRISO15189PCR200688目 錄序號(hào) 主題內(nèi)容PCRPCRPCRPCRPCRPCRPCRPCR基因擴(kuò)增檢測(cè)及結(jié)果分析臨床標(biāo)本的保存操作程序標(biāo)本的采集運(yùn)送接收程序PCRPCRPCRPCRPCRPCRPCRPCRPCR核酸擴(kuò)增熒光儀操作維護(hù)規(guī)程干式恒溫器操作維護(hù)規(guī)程離心機(jī)操作維護(hù)規(guī)程冰箱操作維護(hù)規(guī)程

代 頁(yè)ABCD-3-PR-0 7ABCD-3-PR-0 8ABCD-3-PR-0 9ABCD-3-PR-0 10ABCD-3-PR-0 12ABCD-3-PR-0 13ABCD-3-PR-0 14ABCD-3-PR-0 17ABCD-3-PR-0 18ABCD-3-PR-1 21ABCD-3-PR-1 22ABCD-3-PR-1 24ABCD-3-PR-1 25ABCD-3-PR-1 26ABCD-3-PR-1 28ABCD-3-PR-1 30ABCD-3-PR-1 31ABCD-3-PR-1 33ABCD-3-PR-1 35ABCD-3-PR-2 36ABCD-3-PR-2 37ABCD-3-PR-2 43ABCD-3-PR-2 45ABCD-3-PR-2 47生物安全柜操作維護(hù)規(guī)程移液器操作維護(hù)規(guī)程沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)結(jié)核桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)高速冷凍離心機(jī)操作維護(hù)規(guī)附錄 表格檢驗(yàn)科基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室平面圖實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表PCR拒收標(biāo)本記錄本PCR試劑購(gòu)買記錄表試劑驗(yàn)收記錄表PCR普通耗材驗(yàn)收記錄表室間質(zhì)評(píng)記錄表PCR室內(nèi)質(zhì)控圖PCR冰箱溫度質(zhì)控圖儀器使用記錄表儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表紫外消毒車消毒記錄表應(yīng)急處理登記表

ABCD-3-PR-2 49ABCD-3-PR-2 51ABCD-3-PR-2 54ABCD-3-PR-2 56ABCD-3-PR-2 58ABCD-3-PR-3 60ABCD-3-PR-3 62ABCD/001ABCD/002ABCD/003ABCD/004ABCD/005ABCD/006ABCD/007ABCD/008ABCD/009ABCD/010ABCD/011ABCD/012ABCD/013ABCD/014ABCD/015ABCD/016ABCD/017ABCD/018ABCD/019PCR垃圾處理記錄表PCR耗材進(jìn)購(gòu)記錄表試劑耗材供應(yīng)商一覽表

ABCD/020ABCD/021ABCD/022ABCD/023ABCD/024ABCD/025修訂頁(yè)序號(hào)文件編號(hào)頁(yè)碼需更改的內(nèi)容更改內(nèi)容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期1234567891011121314151617181920PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理目的：可靠性。適用范圍：本程序適用于分子診斷室的設(shè)置、工作流程和日常管理等。負(fù)責(zé)人：細(xì)則：相關(guān)科研工作。本實(shí)驗(yàn)室采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、標(biāo)本處理區(qū)（第二區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)（三區(qū)。每一工作區(qū)配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標(biāo)識(shí)。各區(qū)標(biāo)簽顏色：紅色（第一區(qū)、白（第二區(qū)（第三區(qū)（第一區(qū)（第二區(qū)、藍(lán)色（第三區(qū)。標(biāo)本的接收則在檢驗(yàn)科標(biāo)本接收處進(jìn)行。不可混用。各工作區(qū)配置、功能和內(nèi)務(wù)管理見(jiàn)各相關(guān)SOP不得逆向進(jìn)入前一工作區(qū)。非本實(shí)驗(yàn)室工作人員，未經(jīng)許可不得入內(nèi)；進(jìn)修、實(shí)習(xí)或其他科室人員因科研活動(dòng)需要，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)域（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)）需首先熟悉本程序的各項(xiàng)規(guī)定并嚴(yán)格遵守執(zhí)行，在本實(shí)驗(yàn)室人員監(jiān)督指導(dǎo)下進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)完畢后做好清潔消毒工作。1.實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)平面圖PCR實(shí)驗(yàn)室工作制度目的：防止差錯(cuò)、事故及糾紛的發(fā)生。適用范圍：所有本實(shí)驗(yàn)室人員。負(fù)責(zé)人：細(xì)則：本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)工作各區(qū)的用品不得混用。試劑準(zhǔn)備區(qū)只能進(jìn)行試劑的貯存及配制等相關(guān)操作（見(jiàn)相關(guān)SOP。 應(yīng)管和測(cè)定RNAcDNA（見(jiàn)相關(guān)SOP。DNAcDNAPCR（見(jiàn)相關(guān)SOP。力求準(zhǔn)確、可靠。實(shí)驗(yàn)完畢，做好清潔、整理及分析統(tǒng)計(jì)等工作。定期進(jìn)行保養(yǎng)與維修。愛(ài)護(hù)醫(yī)院財(cái)產(chǎn)，注意安全；離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)關(guān)好門窗，檢查水、電等。PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度目的：保證實(shí)驗(yàn)室日常內(nèi)務(wù)管理及清潔工作順利進(jìn)行。適用范圍：實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員及醫(yī)院相關(guān)清潔工人。負(fù)責(zé)人：細(xì)則：非本室工作人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。各區(qū)的用品不得混用。實(shí)驗(yàn)人員要有強(qiáng)烈的時(shí)間觀念，按時(shí)上下班，不遲到、早退。向走動(dòng)。所有儀器（PCR）驗(yàn)人員必須熟悉儀器性能后方允許操作，并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。帶出本實(shí)驗(yàn)室。合格使用。行處理。注意保持實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生整潔，嚴(yán)禁在室內(nèi)抽煙、吃零食，非實(shí)驗(yàn)操作4.10負(fù)責(zé)檢查實(shí)驗(yàn)室的儀器、設(shè)備。PCR實(shí)驗(yàn)室人員的配置及管理目的：?jiǎn)T。適用范圍：適用于實(shí)驗(yàn)室人員配置、管理、培訓(xùn)及考核。負(fù)責(zé)人：細(xì)則：人員要求以上技術(shù)職稱或?qū)？埔陨蠈W(xué)歷。實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)參加衛(wèi)生部或省臨檢中心舉辦的PCR訓(xùn)，并取得合格證。對(duì)于新進(jìn)入本室的人員，如尚未取得PCR在實(shí)驗(yàn)室有培訓(xùn)合格證的上級(jí)技術(shù)人員的指導(dǎo)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)工作人員配置21展需要，會(huì)適當(dāng)增加工作人員。各級(jí)技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)。人員培訓(xùn)及考核實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或負(fù)責(zé)人指定人員參加每年衛(wèi)生部PCR結(jié)會(huì)。1～21次PCR級(jí)繼續(xù)教育項(xiàng)目，參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會(huì)議。安排未取得上崗培訓(xùn)合格證的工作人員在合適的時(shí)間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)?？剖也欢ㄆ诮M織實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部實(shí)驗(yàn)人員學(xué)習(xí)、更新核酸擴(kuò)增方面的a)日常工作質(zhì)量b)c)d)在抱怨處理中的表現(xiàn)a)b)有科研能力,并有一定數(shù)量和質(zhì)量的論文發(fā)表c)有獨(dú)創(chuàng)性工作成果,經(jīng)鑒定認(rèn)可者d)受到有關(guān)部門或群眾嘉獎(jiǎng)?wù)哂邢铝星闆r者將受到懲處:a)工作質(zhì)量問(wèn)題較多，質(zhì)控測(cè)評(píng)成績(jī)不合格；b)不遵守規(guī)章制度并造成一定影響；c)不求上進(jìn)。及有關(guān)部門批準(zhǔn)后執(zhí)行。人員管理表論文、研究成果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件。1檔案隨時(shí)更新。本文涉及以下表格實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表PCR培訓(xùn)記錄表人員檔案卡PCR實(shí)驗(yàn)室清潔程序目的：保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的整潔，防止污染。潔消毒工作。負(fù)責(zé)人： 操作人：細(xì)則：礙。低的物品放置到儲(chǔ)存處，常用的物品要容易尋找到。抽屜、柜子、文件類物品要作好標(biāo)記，以方便識(shí)別。2%7517515實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用2%上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用移動(dòng)紫外燈消毒。開(kāi)啟30～60待紫外燈消毒時(shí)間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄?；煊茫⒁獍凑諉我环较蛄鞒痰脑瓌t來(lái)進(jìn)行清潔。處理好各區(qū)廢棄物，交醫(yī)院集中處理。本文涉及以下表格實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表垃圾處理記錄表PCR標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)規(guī)則目的：保證標(biāo)本編號(hào)的唯一性，也是準(zhǔn)確發(fā)放報(bào)告的基礎(chǔ)。適用范圍：病毒、丙型肝炎病毒、結(jié)核桿菌、沙眼衣原體。負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：按檢測(cè)日期分類標(biāo)記根據(jù)標(biāo)本送檢的日期，每天的標(biāo)本對(duì)應(yīng)標(biāo)記一種唯一的代號(hào)。如當(dāng)天為200531050301。按檢測(cè)類型分類標(biāo)記病毒標(biāo)記為B，丙型肝炎病毒標(biāo)記為HC，結(jié)核桿菌標(biāo)記為TC。按驗(yàn)單接收順序編號(hào)B01B02，第三個(gè)檢測(cè)結(jié)核的驗(yàn)單編為B03特殊標(biāo)本的編號(hào)其它醫(yī)院送來(lái)的單和本醫(yī)院的單要區(qū)分開(kāi)等。編號(hào)步驟目對(duì)應(yīng)一個(gè)唯一的編號(hào)（如050301T0。用筆在每張檢驗(yàn)申請(qǐng)單和對(duì)應(yīng)的樣品管上作好相同的標(biāo)記。醫(yī)院、科室、送檢醫(yī)生、患者姓名、性別、年齡、標(biāo)本類別、標(biāo)本狀態(tài)、送標(biāo)本者、接收人、檢驗(yàn)單號(hào)、標(biāo)本唯一統(tǒng)編號(hào)等。處理好樣品、點(diǎn)樣后，將反應(yīng)管放入擴(kuò)增儀上開(kāi)始擴(kuò)增。f）果填入相應(yīng)申請(qǐng)單。g）發(fā)放檢驗(yàn)報(bào)告單。本文涉及以下圖表：PCRPCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求目的：規(guī)定在各區(qū)內(nèi)所進(jìn)行的工作及其操作。適用范圍：所有在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行的工作。負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：實(shí)驗(yàn)室分四區(qū):標(biāo)本接收區(qū)；試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)；標(biāo)本制備區(qū)；擴(kuò)增區(qū)。進(jìn)入各區(qū)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)——標(biāo)本接收區(qū)——標(biāo)本制備區(qū)——擴(kuò)增區(qū)。各區(qū)及其設(shè)備、物品必須有明確的標(biāo)記，嚴(yán)禁混用。進(jìn)入PCR（含衛(wèi)生員PCRPCR本室。尤其不得為找人，而逆向誤入PCR總則PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物檢驗(yàn)基本知識(shí)PCRPCR（筆等，不得混用，須貼上標(biāo)簽予以區(qū)別。實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR儀器使用和廢棄物處理等。（鞋，勤換洗工作服，以及遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向的規(guī)定，嚴(yán)禁反向流動(dòng)。進(jìn)入PCRPCR煤氣和門窗。定期校準(zhǔn)和維修PCR備。標(biāo)本接收區(qū)性手套。的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫工整詳細(xì)。垃圾袋，將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)及地面打開(kāi)紫外燈消毒30記錄紫外燈使用情況。試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)細(xì)。準(zhǔn)備好的試劑送入下一區(qū)，還原實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，將本區(qū)所有廢棄帶出實(shí)驗(yàn)室。白色工作服留在本區(qū)。本區(qū)維持相對(duì)正壓狀態(tài)（開(kāi)啟緩沖區(qū)的排氣扇30標(biāo)本制備區(qū)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。情況。細(xì)。臺(tái)內(nèi)加樣，記錄標(biāo)本的處理過(guò)程。記錄儀器使用時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。10％84驗(yàn)結(jié)束后方丟入垃圾袋，患者樣品應(yīng)按有生物傳染性危險(xiǎn)品對(duì)待。的垃圾袋，將垃圾帶出本區(qū)。將藍(lán)色工作服留在本區(qū)。30擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)區(qū)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專用粉色工作服及拖鞋。記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。細(xì)。將傳入本區(qū)加樣后的試劑上機(jī)擴(kuò)增。時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。的垃圾袋，然后將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。將粉色工作服留在本室再離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁本區(qū)物品帶至其他區(qū)，該區(qū)需維持負(fù)壓狀態(tài)，排氣扇24錄紫外燈使用情況。本文涉及以下表格PCR冰箱溫度質(zhì)控圖實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表垃圾處理記錄表紫外消毒車消毒記錄表PCR廢棄物的處理程序目的：保證實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員和外部環(huán)境的安全。核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用化學(xué)試劑EDTA乙醇、生理鹽水等、實(shí)驗(yàn)室廢棄物的處理；負(fù)責(zé)人： 操作人：細(xì)則：斷傳播途徑中的重要性，并要求嚴(yán)格執(zhí)行。（黑色）及生物污染垃圾袋（黃色102～4一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡2～4小時(shí)后，放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。廢棄標(biāo)本如血、尿、胸水、腹水、腦脊液、唾液、胃液、腸液、關(guān)節(jié)腔液等用10%的84液浸泡2～4小時(shí)后，交醫(yī)院集中處理。盛標(biāo)本的容器，若為一次性使用的紙質(zhì)容器及其外面包被的廢紙，15102～4壓力蒸汽滅菌后備用。廢棄標(biāo)本及其容器裝入黃色垃圾袋內(nèi)、封閉，交醫(yī)院污物處理中心處理。日常生活垃圾如紙屑等按一般垃圾交醫(yī)院處理。本文涉及以下表格PCR基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及結(jié)果分析1、目的：保證擴(kuò)增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。適用范圍：適用于本室使用的普通離心機(jī)。負(fù)責(zé)人：肖靜操作人：胡可存蔣藝勤4、標(biāo)準(zhǔn)程序：基因擴(kuò)增檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)程序：擴(kuò)增反應(yīng)前須先在樣本輸入模板上按照性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、室內(nèi)質(zhì)控品各一份，一組陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品08106105104。打開(kāi)電腦電源開(kāi)關(guān)，進(jìn)入WindowsNT接著打開(kāi)PCR5雙擊電腦桌面的ABIPrism5700SDSSoftware設(shè)置界面。單擊“文件”菜單中的（“新建”按扭OK。應(yīng)用檢測(cè)管理程序，并將其添加到樣品板文檔中。檢測(cè)反應(yīng)管，：應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：全部曲線——陰性對(duì)照——陽(yáng)性對(duì)照——陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品——陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品——逐個(gè)分析（標(biāo)出陽(yáng)性標(biāo)本和可疑標(biāo)本）——發(fā)報(bào)告。整體曲線的觀察：將所有曲線選中進(jìn)行整體觀察1）觀察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染意大量曲線在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。2）線。陰性對(duì)照的分析陰性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室和前處理過(guò)程中是否存在污染。陽(yáng)性對(duì)照的分析陽(yáng)性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陽(yáng)性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裾z出陽(yáng)性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。室內(nèi)質(zhì)控品的分析質(zhì)控品。作用：用以監(jiān)控日常實(shí)驗(yàn)的精密度。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的分析1）陽(yáng)模稀釋可能存在問(wèn)題，提示實(shí)驗(yàn)中存在較大人為誤差。2）觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置。1：若出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而各曲線Ct斷是否為試劑擴(kuò)增效率下降（如試劑過(guò)期或保存條件不合格。2：出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線Ct提示可能存在低拷貝陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。104104出現(xiàn)Ct1（25Ct）2～8（是否有三期特征DeltaRn、CtNumberRn這三種擴(kuò)增圖形式下分析數(shù)據(jù)。低而顯示的假陰性。發(fā)放報(bào)告：及時(shí)登記檢測(cè)結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報(bào)告。實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)下述四種情況中的任何一種或多種，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可發(fā)，查找原因，重做實(shí)驗(yàn)。陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增。陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增。大批甚至所有的標(biāo)本都擴(kuò)增了。見(jiàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：達(dá)到下列要求后，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)有效，可以發(fā)放結(jié)果。陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增。數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果處于在控狀態(tài)，具體標(biāo)準(zhǔn)詳見(jiàn)5.本文涉及以下表格室間質(zhì)評(píng)記錄表PCR室內(nèi)質(zhì)控圖臨床標(biāo)本的保存操作程序目的：臨床標(biāo)本正確保存，以便必要時(shí)復(fù)查。適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：處理前的標(biāo)本保存aHB4（24h內(nèi)（血漿-20℃下。HCV1200μl，20uRnasin-20盡可能快的提取RNA。TBTB4℃下-20℃下。CT：標(biāo)本短期（24h）420℃下。報(bào)告發(fā)出后的標(biāo)本保存：4-20告發(fā)出后第二天丟棄。/-20℃11/負(fù)責(zé)管理。特殊標(biāo)本的處理：對(duì)暫不檢測(cè)的項(xiàng)目和規(guī)定時(shí)間外收到的零散樣本，要隨時(shí)登記和交班，以免漏檢，遺失和延誤檢驗(yàn)。對(duì)特殊樣本或特殊病人的樣本，實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，所謂特殊樣本是指難于采集的樣本，以及特殊病人的樣本一律實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，無(wú)論那位工作人員，一旦收到樣本后，均須負(fù)其責(zé)任，不得以任何借口推托，及時(shí)和正確保管和轉(zhuǎn)送樣本到有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或有關(guān)人員，同時(shí)作交班記錄和雙簽名。對(duì)于做長(zhǎng)期病情動(dòng)態(tài)考察的病人標(biāo)本一律置于-20℃下長(zhǎng)期保存，使用時(shí)再按需取出檢測(cè)。本文涉及以下圖表：PCR拒收標(biāo)本記錄本標(biāo)本超低溫保存記錄表臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收程序目的：規(guī)范臨床待檢標(biāo)本的正確采集、送檢和處理。適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：標(biāo)本的采集知識(shí)培訓(xùn)的醫(yī)護(hù)人員采集并送至實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本采集要求a）血液標(biāo)本：用2ml2（HCV采用EDTA（檢驗(yàn)單與標(biāo)本一道）后用一次性吸管吸取血清或血漿加入經(jīng)消毒的的離心管中，編號(hào)。b）（對(duì)于45℃100g/LNaCl標(biāo)本在室溫下保存不能超過(guò)24小時(shí)。c）生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專用取樣拭子（滅菌，一次性采集樣本，及時(shí)送檢。采集生殖道拭子標(biāo)本，要求男性病人在采樣前22～3cm，轉(zhuǎn)動(dòng)一周以獲得上皮細(xì)胞。d）尿液：由病人自留尿液于無(wú)菌封閉的杯中送檢。e）注意：所有上述用于臨床標(biāo)本采集的容器如試管或離心管，均應(yīng)使用前高壓滅菌和密封。標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本采集后，密閉、標(biāo)（貼）姓名，應(yīng)盡可能快的送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，如運(yùn)送時(shí)間需2小時(shí)以上，必須用冰盒送至實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本中如加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，如用于RNA測(cè)定加入4mol/L異硫氰酸胍鹽（GITC）的血清（漿）DNAEDTA運(yùn)送或郵寄。接收不符合要求的樣本一律退回，并有書(shū)面記錄。分類驗(yàn)證一般內(nèi)容聯(lián)號(hào)，住院號(hào)，病區(qū)床號(hào)，項(xiàng)目等。對(duì)不符合要求者應(yīng)作記錄，并及時(shí)通知采樣科室，正確及時(shí)地補(bǔ)采樣，以免延誤病人的檢測(cè)結(jié)果報(bào)告。對(duì)書(shū)寫不清楚的申請(qǐng)單，當(dāng)事者要及時(shí)與病房聯(lián)系(可電話)，明確受檢者按檢測(cè)項(xiàng)目驗(yàn)證標(biāo)本a）HBV凝劑，用EDTA-K存。

，不可使用肝素。標(biāo)本為全血時(shí)應(yīng)及時(shí)分離出血漿保2b）HCV：同上，但標(biāo)本為血清時(shí)，要在1小時(shí)內(nèi)分離出血清用于檢測(cè)。c）TB：晨起第一口深部痰(不能為唾液)、胸腹水、腦脊液、膿液或穿刺液。d）CT：尿道或陰道分泌物。拒收標(biāo)本，登記并告知相關(guān)科室。類別1拒收原因未正確使用抗凝劑的標(biāo)本造成凝血的標(biāo)本2嚴(yán)重溶血3嚴(yán)重脂血4采血量不足（血清＜200uL、全血＜1mL）5檢測(cè)項(xiàng)目TB的標(biāo)本是唾液而不是晨痰6標(biāo)本容器破裂，標(biāo)本被污染7標(biāo)本的病人姓名、年齡、性別等與檢驗(yàn)單不相符8RNA檢測(cè)，采樣時(shí)間超過(guò)2小時(shí)9其他可能嚴(yán)重影響檢驗(yàn)結(jié)果的原因4．5．2．4拒收程序a）對(duì)拒收的不合格標(biāo)本應(yīng)在拒收標(biāo)本記錄本上登記。b）c）必要時(shí)電話告之相關(guān)科室醫(yī)生或護(hù)士。PCRPCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表PCR生物安全防護(hù)措施目的：預(yù)防工作人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被感染或污染。適用范圍：適用于本室所有工作人員。負(fù)責(zé)人： 操作人：細(xì)則：立起強(qiáng)烈的生物防護(hù)意識(shí)。22%戊二醛溶液用量為廢液缸內(nèi)總液量的五分之一左右。配置消毒液時(shí)，正確量取足量的消毒劑（保證濃度，水的用量也要正確，缸體密封性良好。75%的酒精擦拭。30～60運(yùn)輸過(guò)程中，標(biāo)本容器應(yīng)完好無(wú)泄漏。皮膚沾上血液或體液標(biāo)本以及試劑，應(yīng)立即沖洗干凈。有下列情況之一者，需另外消毒：手接觸有傳染性的微生物，水龍頭、水池肥皂可能被消毒液。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，病人標(biāo)本（血液、體液）用清水洗。時(shí)，應(yīng)立即脫下手套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)防補(bǔ)救措施。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中病人標(biāo)本（血液、體液）2%上，濾紙或紗布蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用紫外燈消毒。實(shí)驗(yàn)完畢離開(kāi)時(shí)，應(yīng)脫下所有該實(shí)驗(yàn)區(qū)個(gè)人防護(hù)裝備。實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外消毒。行預(yù)防性治療，并進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察，嚴(yán)重者應(yīng)報(bào)告院技術(shù)負(fù)責(zé)人。本文涉及以下表格PCR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配制程序目的：保證實(shí)驗(yàn)中用到的各種溶液符合實(shí)驗(yàn)要求。適用范圍：75劑（2%戊二醛溶液等。負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：化學(xué)試劑的配制：250ml2000ml配制步驟：4%NaOH4NaOH250ml100mlNaOHc）搖蕩三角燒瓶使NaOHd）然后緩緩傾倒入100ml塑料試劑瓶中密封保存?zhèn)溆谩?00mg/L作用。消毒劑為粉狀20/袋，如配制一升的消毒劑溶液，則取5001000ml如需加大消毒力度，則有效氯濃度加大。7575%酒精由醫(yī)院藥劑科提供。RNA75%酒精的配制，試劑盒提供DEPC配制220ml1000mlb）980ml1000ml2000ml用。14PCR實(shí)驗(yàn)室記錄管理制度1、目的：確保檢驗(yàn)資料的記錄、保存狀態(tài)在控2、適用范圍：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)、文本資料的記錄3．負(fù)責(zé)人： 操作人：4、工作程序：書(shū)面記錄文件的管理：本實(shí)驗(yàn)室的書(shū)面記錄包括：001ABCDABCD/001002ABCD/002003PCRABCD/003004PCRABCD/004005拒收標(biāo)本記錄本 編號(hào)ABCD/005006ABCD/006007PCR試劑購(gòu)買記錄編號(hào)ABCD/007008試劑驗(yàn)收記錄表 編號(hào)ABCD/008009PCRABCD/009010ABCD/010011室間質(zhì)評(píng)記錄表 編號(hào)ABCD/011012PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄編號(hào)ABCD/012013室內(nèi)質(zhì)控編號(hào)ABCD/013014PCRABCD/014冰箱溫度質(zhì)控圖儀器使用記錄表

編號(hào)編號(hào)017ABCD/017018ABCD/018019應(yīng)急處理登記表 編號(hào)ABCD/019020PCRABCD/020021垃圾處理記錄編號(hào)ABCD/021022ABCD/022PCR檢驗(yàn)報(bào)告編號(hào)ABCD/023耗材進(jìn)購(gòu)記錄編號(hào)ABCD/024025ABCD/025驗(yàn)記錄表嚴(yán)格專用，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)不得混用。20035200305SYJG、200305SJXH200305SLZK，分別放于檔案柜的不同25定期對(duì)保存的記錄進(jìn)行分析總結(jié)，形成總結(jié)報(bào)告，以便改進(jìn)工作。有實(shí)驗(yàn)室職責(zé)、經(jīng)手人、借閱人的簽名方可。電腦上記錄文件的管理記錄文件必須保存在非系統(tǒng)分區(qū)中，如D找。里，如“200312Jan01”、“Feb02”，每天的實(shí)驗(yàn)結(jié)果就保存在當(dāng)月文件夾里。實(shí)驗(yàn)文件保存時(shí)以當(dāng)天日期命名，若某天進(jìn)行了多次實(shí)驗(yàn)，命名時(shí)在后面abc20035820030508ab。）PCPCR應(yīng)急處理程序驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、及時(shí)，應(yīng)正確采取應(yīng)急措施，最大程度上避免或減輕不利影響。適用于滿足核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)需要并可能對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果負(fù)責(zé)人：細(xì)則： 關(guān)設(shè)備的性能、要求、維護(hù)和保養(yǎng)、常見(jiàn)故障的排除、尤其要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。 和試劑盒的異常情況。責(zé)在第一時(shí)間檢查核實(shí)應(yīng)急措施的有效性。儀器設(shè)備故障誤、誤操作、偶發(fā)現(xiàn)象或確屬不能立即排除的故障。用紅牌故障標(biāo)志標(biāo)示故障儀器，以防被錯(cuò)誤使用。有滿足要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備（準(zhǔn)用儀器儀器設(shè)備時(shí)，及時(shí)聯(lián)系借用并核實(shí)該設(shè)備的使用狀態(tài)。替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同時(shí)，必須同時(shí)滿足實(shí)驗(yàn)室管理措施（特別是防污染）的要求。通知供應(yīng)方。供應(yīng)方技術(shù)支持人員將在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)隨身攜帶備用設(shè)備到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)。新啟用。取下紅色故障標(biāo)示（暫停使用，換上藍(lán)色正常標(biāo)示（正常使用。室主任須檢查并隨時(shí)跟蹤所采取措施的有效性。聯(lián)系附近的其他已得到衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)證的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，以滿足病人和臨床或科研需求。 使用前需先作質(zhì)量檢測(cè)，合格后方可使用。 儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問(wèn)題不能得到解決，預(yù)期將會(huì)影響到檢測(cè)報(bào)告的影響到檢測(cè)報(bào)告發(fā)出的情況，應(yīng)在應(yīng)急處理記錄表作記錄。應(yīng)急處理記錄表試劑的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的：保證每批用于臨床實(shí)驗(yàn)的試劑的質(zhì)量良好，符合要求。各種用于臨床實(shí)驗(yàn)的核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑HBHCTBCT。負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：收到試劑后，目測(cè)試劑是否處在凍存狀態(tài)。核對(duì)試劑品種和數(shù)量并檢查包裝：外包裝（；內(nèi)包裝（等。及時(shí)將試劑轉(zhuǎn)入－20℃冰箱保存。將上述檢測(cè)核對(duì)情況在記錄本上登記。 進(jìn)行效驗(yàn)實(shí)驗(yàn)。效驗(yàn)實(shí)驗(yàn)：品梯度104、105106108。出現(xiàn)如下情況中任何一種的，判斷為試劑不合格，不能用于臨床檢測(cè)：CT重復(fù)新舊提取液陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，確定提取液失效問(wèn)題。更換提取液后該批試劑方可使用。在污染可能。單獨(dú)用提取液點(diǎn)樣上機(jī)，出現(xiàn)擴(kuò)增，需更換提取液后方可使用該批試劑。陽(yáng)性對(duì)照檢出，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品未檢出或擴(kuò)增曲線明顯系統(tǒng)性CT5曲線之斜率（－～－、截距（2634、相關(guān)性（﹤－）均在使用范圍內(nèi)，表明該批試劑良好，可以投入臨床使用。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果歸入記錄。本文涉及以下圖表PCR試劑驗(yàn)收記錄表PCR消耗品進(jìn)購(gòu)、質(zhì)檢、貯存程序1、目的：保證實(shí)驗(yàn)消耗品的質(zhì)量、合理配用及存放2、范圍：離心管、離心管、帶濾芯的吸頭3．負(fù)責(zé)人： 操作人：4、程序：實(shí)驗(yàn)人員按需提出所購(gòu)耗材的品名、規(guī)格、數(shù)量，交科主任審核，報(bào)相關(guān)部門訂貨及購(gòu)買。消耗品進(jìn)購(gòu)后經(jīng)質(zhì)檢合格方可入倉(cāng)，填寫消耗品進(jìn)購(gòu)、質(zhì)檢記錄表。無(wú)菌處理前的消耗品貯存于試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)，定期領(lǐng)取消毒并作用量記錄，消毒過(guò)的消耗品送標(biāo)本制備區(qū)備用。消耗品在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題（如畸形、離心管密閉性不好等主任，科主任報(bào)相關(guān)部門，辦理退、換貨手續(xù)。5、質(zhì)檢、離心管目測(cè):檢查離心管有無(wú)畸形、破損、不能閉蓋的情況。：5020為該批離心管不符合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)要求，作退貨處理。50206檢測(cè)帶濾芯的吸頭目測(cè)：檢查吸頭有無(wú)畸形、破損，是否帶有濾芯。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)：50適量液體，檢查有無(wú)吸孔堵塞、漏氣現(xiàn)象發(fā)生，在排除移液器因素后，如有異常發(fā)現(xiàn)，即認(rèn)為該批吸頭不符合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)要求，作退貨處理。10經(jīng)上述檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)不合格情況后，即啟用該批耗材。6.本文涉及以下圖表耗材進(jìn)購(gòu)記錄表PCR普通耗材驗(yàn)收記錄表PCR室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的：隨時(shí)了解并控制實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的精密度變化。適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：血清質(zhì)量控制品制備及操作質(zhì)控品制備：DNA裝于的離心管中，每支11μ，編號(hào)后（如Qb0201--20℃保存。操作：每次檢測(cè)過(guò)程中將此分裝的室內(nèi)質(zhì)控品與樣本同時(shí)檢測(cè)，記錄此標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果；計(jì)算前10次檢測(cè)結(jié)果的平均值作為本批質(zhì)控品的靶值。4．１．２要求執(zhí)行。室內(nèi)質(zhì)控圖的使用方法描點(diǎn)圖中XX±2sX±3s月的實(shí)際起止日期即可。每天將該批號(hào)質(zhì)控血清按有關(guān)規(guī)定程序復(fù)融隨同病人的標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)。畫(huà)出圖上的對(duì)應(yīng)點(diǎn)，用直線將該點(diǎn)與前一天的點(diǎn)連接。月底計(jì)算當(dāng)月全部質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果的Xs和圖形分析如果在X±3s線以外，則為失控，應(yīng)立即報(bào)告有關(guān)負(fù)責(zé)人，迅速查找原因。必要時(shí)復(fù)測(cè)標(biāo)本，然后方可發(fā)出報(bào)告，并將失控情況、查找過(guò)程及處理結(jié)果等詳細(xì)記錄。如果在X±2s6通過(guò)觀察圖形的規(guī)律性變化進(jìn)行誤差分析，消除誤差來(lái)源a）c）連續(xù)多點(diǎn)分布在靶值一側(cè)：目前，一般認(rèn)為質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果連續(xù)6天以上66d）（周期性等）通過(guò)圖形的資料對(duì)比進(jìn)行誤差分析，消除誤差來(lái)源每個(gè)月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果的X和sX和sX發(fā)生了變化，說(shuō)明準(zhǔn)確度發(fā)生了變化提示有非隨機(jī)誤差存在。如果當(dāng)月sCTX和sX逐月上升，應(yīng)考慮保存不當(dāng)造成的試劑效價(jià)降低或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，則主要提示常規(guī)工作的精密度下降，應(yīng)重點(diǎn)從操作、管理上找原因。CV回顧及趨勢(shì)分析。本文涉及以下圖表：PCR室內(nèi)質(zhì)控圖PCR室間質(zhì)量控制操作程序室間質(zhì)評(píng)是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制體系中重要部分，是保證患者檢驗(yàn)結(jié)適用范圍：衛(wèi)生部或省臨檢中心下發(fā)的PCR負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗(yàn)收：收到質(zhì)控血清后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)說(shuō)明對(duì)血清的數(shù)量、批號(hào)、包裝進(jìn)行驗(yàn)收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求置-20℃保存于標(biāo)本制備區(qū)。質(zhì)控標(biāo)本的檢測(cè)按常規(guī)臨床標(biāo)本對(duì)待，若需要，檢測(cè)前先根據(jù)說(shuō)明對(duì)質(zhì)控物進(jìn)行復(fù)溶。室間質(zhì)評(píng)樣本必須按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作進(jìn)行，由進(jìn)行常規(guī)工作的人員測(cè)試，工作人員必須使用實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)方法和試劑，不得特殊對(duì)待。檢測(cè)結(jié)果須在截止日期前上報(bào)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)EQA（1。4.5 EQA必須在截止日期前，通過(guò)E-mail室間質(zhì)評(píng)的檢測(cè)結(jié)果和反饋結(jié)果均記錄于室間質(zhì)評(píng)記錄表，根據(jù)反饋結(jié)果分析室間質(zhì)評(píng)的狀態(tài)，如有出控應(yīng)查找原因，并采取相應(yīng)的措施。嚴(yán)禁與其它實(shí)驗(yàn)室交流室間質(zhì)評(píng)的檢測(cè)結(jié)果。室間質(zhì)評(píng)記錄表溫度校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序1、目的：保證實(shí)驗(yàn)時(shí)溫度的準(zhǔn)確2、范圍：基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室所有溫控的儀器3．負(fù)責(zé)人： 操作人：4、程序溫度計(jì)校準(zhǔn)程序：由設(shè)備科人員送質(zhì)檢局對(duì)溫度計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)。每年進(jìn)行1水浴箱溫度校準(zhǔn)程序：將水浴箱調(diào)至所設(shè)置的溫度，等水溫穩(wěn)定以后，進(jìn)行測(cè)量。取出一只已經(jīng)技術(shù)監(jiān)督局校準(zhǔn)后的溫度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。計(jì)下讀數(shù)，重復(fù)在不同溫度下測(cè)量。經(jīng)測(cè)量的溫度和水浴箱顯示溫度進(jìn)行比較，計(jì)算出誤差。將水浴箱調(diào)至校準(zhǔn)后的溫度。每次試驗(yàn)前都必須進(jìn)行此項(xiàng)工作。（4℃冰箱和—20℃冰箱）每次實(shí)驗(yàn)前都需對(duì)冰箱溫度進(jìn)行記錄，繪置冰箱溫度的質(zhì)控圖。讀數(shù)。擴(kuò)增儀溫度的校準(zhǔn)將擴(kuò)增儀打開(kāi)并設(shè)至一溫度。持術(shù)監(jiān)督局校準(zhǔn)過(guò)和溫度計(jì)插入反應(yīng)管中進(jìn)行測(cè)量溫度并記錄。在不同溫度點(diǎn)進(jìn)行重復(fù)測(cè)量，取均值，并與擴(kuò)增儀的顯示溫度進(jìn)行比較。由于儀器較精密，溫度相差太大則需請(qǐng)廠家前來(lái)校準(zhǔn)并調(diào)試。經(jīng)調(diào)試后貼上綠色標(biāo)簽，標(biāo)明時(shí)間儀器的性能狀態(tài)。5.本文涉及以下圖表PCR冰箱溫度質(zhì)控圖PE5700型核酸擴(kuò)增熒光儀操作維護(hù)程序目的：使PE5700結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。適用范圍：PE5700負(fù)責(zé)人： 操作人：性能參數(shù):見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。操作程序：PE5700SDS進(jìn)行設(shè)置。每次實(shí)驗(yàn)除了待檢標(biāo)本，還要包括一個(gè)陰性對(duì)照、一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照、一個(gè)陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品、一組陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品4個(gè)梯度10410、106、10。依次打開(kāi)電腦顯示器和電腦主機(jī)的電源開(kāi)關(guān)，進(jìn)入WindowsNT接著打開(kāi)光源檢測(cè)器和PCR5點(diǎn)擊PE5700SDS在NewplateApplication5700/SYBRGreen，然后單擊打開(kāi)一空白設(shè)置面板。在Setup在TypeUNKN－未知樣品，NTC－陰性對(duì)照，Notinuse－未使用再在NamePPR1SYBRQ準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)量。點(diǎn)擊Instrument選定任務(wù)欄FileSaveFileName輸入一組數(shù)字和（或）字母組成的文件名，選Save。檢查設(shè)置正確與否，運(yùn)行程序在設(shè)置完程序文件的InstrumentRUN反應(yīng)結(jié)束后，選任務(wù)欄FileSave關(guān)閉PE5700結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)程序：5700觀察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染線在同一Ct觀察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動(dòng)等機(jī)器原因形成的異常曲線。陰性對(duì)照的分析陰性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室和前處理過(guò)程中是否存在污染。陽(yáng)性對(duì)照的分析陽(yáng)性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陽(yáng)性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裾z出陽(yáng)性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品的分析陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知或未知濃度的陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控血清。作用：用以監(jiān)控日常實(shí)驗(yàn)的精密度。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的分析各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開(kāi)，則表明陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品稀釋可能存在問(wèn)題，提示實(shí)驗(yàn)中存在較大人為誤差。b)觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置：1：若出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而各曲線Ct試劑擴(kuò)增效率下降（如試劑過(guò)期或保存條件不合格。2：出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線Ct存在低拷貝陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。c)102標(biāo)準(zhǔn)品，用作以下三方面監(jiān)控：102二是否存在稀釋后的梯度放置過(guò)久，低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品降解的情況；CtAB靈敏度下降。單個(gè)曲線的判斷逐個(gè)分析每條曲線，判斷曲線的陰陽(yáng)性或?qū)倏梢汕€（可疑標(biāo)本是指曲線在27個(gè)Ct）2～8Rn（是否有三期特征0～0時(shí)觀察Rn得出定量結(jié)果調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽(yáng)性結(jié)果值。此時(shí)應(yīng)排除某些陰性標(biāo)本因熒光曲線假性上揚(yáng)而得出的假陽(yáng)性結(jié)果和某些弱陽(yáng)性標(biāo)本因終末熒光值過(guò)低而顯示的假陰性。發(fā)放報(bào)告及時(shí)登記檢測(cè)結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報(bào)告。.維護(hù)和校準(zhǔn)程序：微軟WindowsNT29NortonUtilities類似軟件。具體步驟：放入NortonUtilities從MyComputer打開(kāi)NortonUtilities軟件光盤。c）啟動(dòng)清理碎片/優(yōu)化程序。d）運(yùn)行完成后，檢查以確信無(wú)嚴(yán)重錯(cuò)誤記錄，退出NortonUtilitiese）取出NortonUtilitiesPCR樣品槽的清潔樣品槽每月進(jìn)行一次清潔，如出現(xiàn)樣品槽污染情況則隨時(shí)清潔。操作方法：a）25℃HOLD10b）從樣品槽移去樣品架。c）在樣品槽中加入少量濃度≥95%乙醇，用尼龍棉簽或塑料桿擦洗反應(yīng)孔。d）用干棉簽吸干乙醇。e）PE5700PCR50℃10熱蓋的清潔熱蓋每月進(jìn)行一次清潔，如有需要隨時(shí)進(jìn)行。a）25℃HOLD10PE5700PE5700滑軌距離的大約1/3處。PE5700PE5700測(cè)器，小心側(cè)放于儀器頂蓋上。不要從儀器取走熱蓋。將PE5700PE5700調(diào)準(zhǔn)ROI調(diào)準(zhǔn)ROI得由一般實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行該項(xiàng)操作。PCR將PE5700c）從StartPE5700SDSd）512msROIe）逐漸增加積分時(shí)間，直到可以看到至少四個(gè)塊（約4096m。f）調(diào)整最左側(cè)位置調(diào)整點(diǎn)。g）1024ms，調(diào)整上方與底部的位置調(diào)整點(diǎn)。h）減少積分時(shí)間以便最右側(cè)塊可見(jiàn)但未飽和（約512m置調(diào)整點(diǎn)。如有需要用右上角拖動(dòng)點(diǎn)調(diào)整圖像的傾斜度（心旋轉(zhuǎn)。i）調(diào)節(jié)后的參照條寬度必須在ROI參照塊間有小空隙。校正ROIROIa）在PCRb）將PE5700c）從StartPE5700SDSd）點(diǎn)選ShowROI復(fù)選框。每個(gè)樣品孔周圍出現(xiàn)一藍(lán)色橢圓圈。e）點(diǎn)選ShowSaturation復(fù)選框。1024ms；打開(kāi)鹵素?zé)艉凸忾l。LIVE飽和圖像（無(wú)紅色圖像。EditCalibrateROIsROI968ROI96ROI89檢查PCR檢查PCRa）開(kāi)啟PE5700b）從StartPE5700SDSc）從樣品槽中移去反應(yīng)板。d）將PE5700e）256ms；打開(kāi)鹵素?zé)艉凸忾l。點(diǎn)擊LIVE96h）按照樣品槽的清潔程序清洗樣品槽。更換鹵素?zé)魞x器使用大約2000小時(shí)后應(yīng)更換鹵素?zé)?但具體要視鹵素?zé)魧?shí)際情況而定。a）關(guān)閉PE570015b）移去PE5700光源檢測(cè)器頂蓋。c）移去鹵素?zé)繇斏w。動(dòng)燈泡時(shí)要輕輕抬起燈以避開(kāi)裝配螺絲釘。重新裝上燈頂蓋和PE5700開(kāi)啟PE5700PE5700SDSg）通過(guò)軟件控制鹵素?zé)糸_(kāi)關(guān)，確認(rèn)燈隨開(kāi)關(guān)開(kāi)閉。h）開(kāi)啟光閘，確認(rèn)光閘可打開(kāi)。i）設(shè)定積分時(shí)間為1024ms，點(diǎn)擊LIVE。保證可以采集一幅數(shù)據(jù)圖像。j）若新鹵素?zé)舨还ぷ?，PE5700電源保險(xiǎn)管可能有問(wèn)題。校準(zhǔn)PE5700進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與儀器廠家達(dá)成協(xié)議，定期（一般每年一次）校準(zhǔn)儀器。平時(shí)通過(guò)對(duì)室內(nèi)質(zhì)控圖的分析，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)系統(tǒng)誤差后，又經(jīng)過(guò)分析排除了試劑和人員誤差，應(yīng)懷疑是否儀器出現(xiàn)了檢測(cè)偏差從而需要校準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)室人員根據(jù)上述“光路系統(tǒng)的維護(hù)”部分的內(nèi)容調(diào)節(jié)光路，可初步確定儀器是否光路原因引起的檢測(cè)偏差，通過(guò)光路調(diào)節(jié)解決問(wèn)題。若問(wèn)題不出在光路系統(tǒng)，則應(yīng)聯(lián)系儀器廠家派技術(shù)人員來(lái)進(jìn)行校準(zhǔn)。注意事項(xiàng)：好的接地線。2360％c）儀器應(yīng)每月底清潔維護(hù)。d）儀器使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守上述使用步驟。期間核查PE-5700PE-5700因擴(kuò)增儀執(zhí)行衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的指定校準(zhǔn)。ICSH值。7.相關(guān)記錄儀器使用登記表儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表儀器設(shè)備檢定周期表儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表儀器報(bào)廢（停用）單儀器設(shè)備使用授權(quán)表儀器設(shè)備檔案卡儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表儀器設(shè)備總表干式恒溫器操作維護(hù)規(guī)程目的：正確使用、維護(hù)和校準(zhǔn)干式恒溫器。適用范圍：干式恒溫器。負(fù)責(zé)人： 操作人：技術(shù)參數(shù):5．程序：干式恒溫器應(yīng)置于堅(jiān)固的水平臺(tái)上，電源電壓須匹配。打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，設(shè)定溫度時(shí)間至所需溫度。設(shè)定恒溫時(shí)間至所需時(shí)間。度時(shí)，指示燈亮，開(kāi)始加熱，如此反復(fù)，溫度可保持穩(wěn)定。每年校正溫度一次。/–1℃以內(nèi)。溫度誤差校準(zhǔn)存在偏差，可按以下方法修正溫度誤差；40℃兩點(diǎn)溫度同步線性校準(zhǔn)法。經(jīng)兩點(diǎn)溫度線性校準(zhǔn)后，系統(tǒng)保證其它溫度點(diǎn)的溫度準(zhǔn)確度≤±℃。校準(zhǔn)溫度時(shí)環(huán)境溫度和模塊的溫度必須低于30℃。具體操作方法如下：35℃35℃，35℃后，按以下方法操作。（要求溫度計(jì)精度為℃，溫度計(jì)感溫包必須完全浸入于錐形孔內(nèi)部用隔熱材料于環(huán)境隔離。見(jiàn)下圖a.同時(shí)按下▲和鍵，進(jìn)入溫度校準(zhǔn)界面，此時(shí)，時(shí)間顯示窗顯示為ADL窗顯示為即時(shí)溫度，并自動(dòng)開(kāi)始升溫至℃40℃20注意！為保證溫度校準(zhǔn)精度，建議用戶于恒溫20分鐘后讀取實(shí)測(cè)溫度！若溫度計(jì)讀取的數(shù)值為39.6℃,則按“TEMP”和▲或鍵于溫度顯示窗內(nèi)輸入，按“R/S”鍵確認(rèn)輸入值。10010020注意！為保證溫度校準(zhǔn)精度，建議用戶于恒溫20分鐘后讀取實(shí)測(cè)溫度！若溫度計(jì)讀取的數(shù)值為101.5℃，則按“TEMP”和▲或鍵于溫度顯示窗內(nèi)輸入，按“R/S”鍵確認(rèn)輸入值。等待界面。的溫度值無(wú)效！干式恒溫器內(nèi)外應(yīng)保持清潔，外殼忌用腐蝕性溶液擦拭。儀器長(zhǎng)期不用時(shí)，需防潮防塵保存。儀器維護(hù)要求。嚴(yán)格按照儀器的開(kāi)關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。期間核查干式恒溫器的定標(biāo)不需要特別的周期間隔。每年必須校正溫度一次。相關(guān)記錄：儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表儀器設(shè)備檢定周期表儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表儀器報(bào)廢（停用）單儀器設(shè)備使用授權(quán)表儀器設(shè)備檔案卡儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表儀器設(shè)備總表離心機(jī)操作維護(hù)程序目的：保證離心機(jī)的正常使用。適用范圍：適用于本室使用的普通離心機(jī)。負(fù)責(zé)人： 操作人：性能參數(shù):5．程序：離心時(shí)造成儀器振蕩。求。離心完畢后，將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)回零位，關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)。室進(jìn)行清潔處理。對(duì)離心室清潔，應(yīng)先打開(kāi)離心機(jī)蓋，撥掉電源線，用專用設(shè)備將離心機(jī)轉(zhuǎn)子旋下，再用中性去污劑（70%的異丙醇/水混合物或乙醇去污染）清潔離心室；離心室內(nèi)的橡膠密封圈經(jīng)去污劑處理后，用水沖洗，再用甘油潤(rùn)滑。此應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)子每月進(jìn)行清潔維護(hù)。每月用中性的清潔劑清潔轉(zhuǎn)子一次，并在儀器維護(hù)記錄本上作好記錄，以延長(zhǎng)轉(zhuǎn)子的壽命。儀器維護(hù)更換.n:n=nmax*6mm要求。嚴(yán)格按照儀器的開(kāi)關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。期間核查本儀器不需要特別的周期間隔。校準(zhǔn)物均為與ICSH值。相關(guān)記錄儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表儀器設(shè)備檢定周期表儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表儀器報(bào)廢（停用）單儀器設(shè)備使用授權(quán)表儀器設(shè)備檔案卡儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表儀器設(shè)備總表冰箱操作維護(hù)規(guī)程目的：對(duì)冰箱進(jìn)行適當(dāng)?shù)木S護(hù)，以確保冰箱的正常使用。適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室使用的各種品牌、型號(hào)的冰箱。負(fù)責(zé)人： 操作人：性能參數(shù):5．程序：冷凍室溫度開(kāi)關(guān)置于并要求有良好的接地線。冰箱內(nèi)禁止存放與本實(shí)驗(yàn)室無(wú)關(guān)的物品。放入冰箱內(nèi)的所有試劑、樣品、質(zhì)控品等必須密封保存。潔時(shí)切斷電源，用軟布蘸水擦拭冰箱內(nèi)外，必要時(shí)可用中性洗滌劑。每日觀察冰箱內(nèi)溫度并記錄于冰箱的質(zhì)控圖上。若溫度超出規(guī)定范圍，調(diào)節(jié)溫控使其回到正常范圍，并進(jìn)行記錄。用。儀器維護(hù)注意事項(xiàng)”要求廢液瓶是否漏氣，防止低真空出現(xiàn)。當(dāng)出現(xiàn)堵孔時(shí)，按自動(dòng)沖洗鍵沖洗管道。嚴(yán)格按照儀器的關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。期間核查(1冰箱不需要特別的周期間隔。(2)ICSH值。.相關(guān)記錄儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表儀器設(shè)備檢定周期表儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表儀器報(bào)廢（停用）單儀器設(shè)備使用授權(quán)表儀器設(shè)備檔案卡儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表儀器設(shè)備總表生物安全柜操作維護(hù)規(guī)程目的：正確使用生物安全柜。適用范圍：本SOP負(fù)責(zé)人： 操作人：性能參數(shù):5．程序：5．215～30機(jī)、照明均由指示燈指示其工作狀態(tài)。工作臺(tái)面上禁止存放不必要的物品，以保持工作區(qū)的潔凈氣流不受干擾。在預(yù)過(guò)濾進(jìn)風(fēng)口部位放置物品，以免擋住進(jìn)風(fēng)口造成進(jìn)風(fēng)量減少，降低凈化能力。使用結(jié)束后，用消毒液清理工作臺(tái)面后打開(kāi)紫外燈，15～30分鐘后關(guān)閉紫外燈，關(guān)閉生物安全柜電源。每次使用生物安全柜后，均需對(duì)其進(jìn)行清潔。個(gè)月。定期（1）計(jì)測(cè)工作區(qū)風(fēng)速，如發(fā)現(xiàn)不符合技術(shù)參數(shù)要求，則可調(diào)大風(fēng)機(jī)供電電壓。當(dāng)風(fēng)機(jī)組電壓調(diào)到最大時(shí)，工作區(qū)風(fēng)速仍達(dá)不到0.3m/s，則必須更換高效空氣過(guò)濾器（由廠家或院儀器維修人員進(jìn)行長(zhǎng)期不使用的生物安全柜撥下電源插頭。儀器維護(hù)注意事項(xiàng)”要求廢液瓶滿要及時(shí)倒掉廢液，切勿強(qiáng)行扯動(dòng)紅黃兩根管來(lái)打開(kāi)瓶蓋，檢查廢液瓶是否漏氣，防止低真空出現(xiàn)。當(dāng)出現(xiàn)堵孔時(shí)，按自動(dòng)沖洗鍵沖洗管道。嚴(yán)格按照儀器的關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。期間核查PE-5700PE-5700因擴(kuò)增儀執(zhí)行衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的指定校準(zhǔn)。ICSH值。相關(guān)記錄儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表儀器設(shè)備檢定周期表儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表儀器報(bào)廢（停用）單儀器設(shè)備使用授權(quán)表儀器設(shè)備檔案卡儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表儀器設(shè)備總表移液器操作維護(hù)規(guī)程目的：確保移液的精確性，正確使用移液器。適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室使用的可調(diào)式移液器。負(fù)責(zé)人： 操作人：程序：移液器的使用轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕設(shè)定移液量，設(shè)定的移液量不可超出該移液器規(guī)定的范圍。裝上配套的Tip。前進(jìn)移液法a）將按鈕壓至第一停點(diǎn)位置；b）將移液管管嘴浸入液面下2~3mm深處，然后慢慢松開(kāi)按鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體后，將管嘴撤出液面，擦掉管嘴外側(cè)的所有液滴。1鈕向下壓至第二停點(diǎn)位置。待管嘴液體放干凈后，將管嘴貼在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中，撤出管嘴。松開(kāi)按鈕使之回到起點(diǎn)位置。需要時(shí)，可更換管嘴繼續(xù)移液操作。/a）b）2~3mm移入管嘴吸滿液體后，將管嘴撤出液面，擦掉管嘴外側(cè)的所有液滴。c）輕輕壓下操作按鈕至第一停點(diǎn)位置，放出液體。d）液體。將操作按鈕向下壓至第二停點(diǎn)位置。2~3mm管嘴吸滿液體后，將管嘴貼在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中。按鈕停在第一停點(diǎn)位置，不包括在移液量之內(nèi)的少量液體仍留在管嘴內(nèi)，管嘴外的液滴則需包括在移液量之內(nèi)。d）e）重復(fù)步序c）和d）繼續(xù)移液操作，就可重復(fù)轉(zhuǎn)移相同體積液體。移液器的維護(hù)7517515移液器的校準(zhǔn)為確保移液器加樣的精確性和準(zhǔn)確性，正確使用移液器，需定期（一年）對(duì)移液器進(jìn)行校準(zhǔn)校準(zhǔn)環(huán)境和用具要求室溫：20～25℃，測(cè)定中波動(dòng)范圍不大于±℃。保證天平內(nèi)的濕度（相對(duì)濕度6090%，天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10mL蒸餾水的小燒杯。小燒杯：5～10mL體積。20～25℃選定校準(zhǔn)體積：a）擬校準(zhǔn)體積；b）移液器標(biāo)定體積的中間體積。c）最小可調(diào)體積（不小于擬定體積的10。如為固定體校準(zhǔn)步驟a）b）調(diào)節(jié)好天平；c）來(lái)回吸吹蒸餾水3次，以使吸頭濕潤(rùn)，用紗布拭干吸頭；d）2～3mm，緩慢（1～3）餾水e）f）30℃1～3記錄稱量值；h）擦干吸頭外面；i）10取101水Z按校準(zhǔn)結(jié)果調(diào)節(jié)移液器。比較校準(zhǔn)法用電子天平稱量結(jié)果與已校準(zhǔn)移液器稱量結(jié)果進(jìn)行比較，完成校準(zhǔn)。備注：連續(xù)可調(diào)移液器校準(zhǔn)由本市標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量局統(tǒng)一校準(zhǔn)。（1蒸餾水ZhPa(mbar)）溫溫度80085390796010131067（℃）202122222323．52425相關(guān)記錄儀器使用登記表儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表儀器設(shè)備檢定周期表儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表儀器報(bào)廢（停用）單儀器設(shè)備使用授權(quán)表儀器設(shè)備檔案卡儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表儀器設(shè)備總表沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)目的：保證CTDNA適用范圍：CTDNATaqMan負(fù)責(zé)人： 操作人：原理：本試劑盒用一對(duì)沙眼衣原體特異引物和一條沙眼衣原體特異性熒光PCR反應(yīng)液，耐熱DNA聚合酶Taq酶，四種核苷酸單體dNTP）分，再用PCRDNA。性能參數(shù)/ml。標(biāo)本要求：標(biāo)本類型：分泌物。標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)。標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸872保存期6個(gè)月，應(yīng)避免反復(fù)凍融。室溫運(yùn)輸。標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染標(biāo)本不能作測(cè)定。容器和添加劑類型：無(wú)菌離心管和無(wú)菌試管。ABIGeneAmp5700（4-2℃、生物安全柜、紫外燈管（未貼標(biāo)簽管（×108/m50μl管1250μl/管）1校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性：送XXX市計(jì)量檢測(cè)所校準(zhǔn)。程序步驟:：2~4cm，略捻拭子取出分泌（應(yīng)略帶黏膜密閉送檢。女性：陰道—用無(wú)菌生理鹽水棉球洗去宮頸外分泌物，再用無(wú)菌棉拭子插入宮頸內(nèi)，停5秒鐘后旋動(dòng)棉拭采取宮頸分泌物，將棉拭子置入無(wú)菌玻璃管，用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。2cm，略捻拭子取出分泌物（應(yīng)略帶黏膜管塞緊后，密閉送檢。-2060℃冰壺。標(biāo)本及對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的處理標(biāo)本試管中加入1ml無(wú)菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，吸取液體轉(zhuǎn)至離心管中（如分泌物較多，只?。?2000rpm離心5分鐘.沉淀加無(wú)菌生理鹽水1ml打勻,12000rpm550ulDNA(提取液內(nèi)含不溶于水的物質(zhì),取樣時(shí)需用加樣器充分混勻后吸取。如出現(xiàn)因吸頭10（146-812，000rpm22ulPCR50ulDNA10操作取單管單人份PCR反應(yīng)管若干管，直接加入處理后樣品（或陰陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品）2ul，6000rpm離心數(shù)秒。將各反應(yīng)管放入PCR儀，按下列條件擴(kuò)增：ABIGeneAmp570093℃293℃45秒55℃601093℃3055℃4530部完成后保存文件，最后運(yùn)行程序。結(jié)果分析條件的設(shè)定ABIGeneAmp5700圖像調(diào)節(jié)baselinestart(2~4),stop(7~9)以及ThresholdCt30Ct22~24,CtCt質(zhì)量控制程序：陰性質(zhì)控品：全部陰性陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品：全部陽(yáng)性︱r︱≧(correlation~-1);108104/ml。干擾：標(biāo)本污染。生物參考區(qū)間：0/ml?；颊邫z驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間：Ct<40CTDNA（貝數(shù)/ml）=M；Ct=40CTDNA<25/ml。/危急值（當(dāng)適用時(shí)：實(shí)驗(yàn)室解釋：參考依據(jù)?！渡逞垡略w核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》見(jiàn)試劑盒乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)目的：保證HBVDNA適用范圍：HBVDNATaqMan負(fù)責(zé)人： 操作人：原理：本試劑盒用一對(duì)乙型肝炎病毒特異引物和一條乙型肝炎病毒特異性PCR反應(yīng)液，耐熱DNA聚合酶Taq酶，四種核苷酸單體等成分，再用PCRcDNA。性能參數(shù)：檢出低值＜1×103/ml。標(biāo)本要求：標(biāo)本類型：血清。標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)。標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸872保存期6個(gè)月，應(yīng)避免反復(fù)凍融。室溫運(yùn)輸。標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染、嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。容器和添加劑類型：無(wú)菌離心管和無(wú)菌真空管ABIGeneAmp5700（4-2℃、生物安全柜、紫外燈試劑：DNA（500μl/管）2HBV-PCR（未貼標(biāo)簽管管；陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品（1×108基因拷貝/ml50l/管）1品（250μl/管）1校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性：送深圳市計(jì)量檢測(cè)所校準(zhǔn)。程序步驟:：標(biāo)本處理：40μlDNA（物質(zhì)，取樣時(shí)需用加樣器充分混勻后吸取。如出現(xiàn)因吸頭嘴部太細(xì)不能吸取或取10（誤差不超過(guò)1分鐘為保證病毒顆粒充分裂解可轉(zhuǎn)至4℃靜置8~12小時(shí)10000rpm52μlPCR標(biāo)準(zhǔn)品稀釋和處理：將陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品/ml）6000rpm108445μl107~1041085μl1075μl106104-20℃保存；分別吸取稀釋好的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品梯度和陰40μl，加等量DNAHBV-PCR2μl，6000rpm1PCR序設(shè)置陰性質(zhì)控品，陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品梯度以及未知標(biāo)本，并設(shè)置樣品名稱，GeneAmp570093℃→293℃4555℃601093℃3055℃4530結(jié)果分析條件的設(shè)定：ABIGeneAmp5700文件。根據(jù)分析后圖象調(diào)節(jié)baseline的start值2~，stop值7~）以及ThresholdStdcurve（correlation~-1correlation|r|，最后到Reporter分析計(jì)算出的未知標(biāo)本數(shù)值Qt。質(zhì)量控制程序：陰性質(zhì)控品：全部陰性陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品：全部陽(yáng)性︱r︱≧(correlation~-1);108104/ml。干擾（如乳糜血、溶血、膽紅素血）血基本不影響本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定。生物參考區(qū)間：0/ml。<40，實(shí)驗(yàn)樣本的HBVDNA（貝數(shù)/ml）=M；Ct=40HBVDNA<1×103/ml。/危急值（當(dāng)適用時(shí)：實(shí)驗(yàn)室解釋：考依據(jù)?！兑倚透窝撞《竞怂釘U(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》見(jiàn)試劑盒丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)目的：保證HCVDNA適用范圍：HCVDNATaqMan負(fù)責(zé)人： 操作人：原理：本試劑盒用一對(duì)丙型肝炎病毒特異引物和一條丙型肝炎病毒特異性PCR反應(yīng)液，耐熱DNA聚合酶Taq酶四種核苷酸單體（dNTPs）RNAcDNAPCRcDNA。性能參數(shù)：檢出低值＜1×103/ml。標(biāo)本要求：標(biāo)本類型：血清。標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)。標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸272保存期6個(gè)月，應(yīng)避免反復(fù)凍融，室溫運(yùn)輸。標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染、嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。容器和添加劑類型：無(wú)菌離心管和無(wú)菌真空管。ABIGeneAmp5700（4-2℃、生物安全柜、紫外燈。試劑：DNA（500μl/管）2HCV-PCR（未貼標(biāo)簽管管；陽(yáng)性定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品（1×108基因拷貝/ml50l/管）1品（250μl/管）1校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性：標(biāo)本采集和運(yùn)送用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血1ml，注入無(wú)菌離心管,于室溫靜置2小時(shí),418000rpm5200ul48小時(shí)以內(nèi)-2060℃冰壺。標(biāo)本及對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的處理向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過(guò)的離心管中加入10ul充分混勻的RNA提取液(RNAA50ul200ul的RNA提取液B。室溫放置56000rpm175%的預(yù)冷乙醇）洗沉淀（75400ul，離心175400ul重復(fù)同上處理65℃干燥沉淀10注：75%DEPC逆轉(zhuǎn)錄

O。2向沉淀管加入18ulHCV反應(yīng)液I以及逆轉(zhuǎn)錄酶系2ul，震蕩均勻，瞬間（3秒）37℃45953）逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物做PCR擴(kuò)增及DA-620儀器熒光檢測(cè)操作取單管單人份PCR（品）2ul，6000rpmPCRABIGeneAmp570093℃293℃451093℃3055℃4530置全部完成后保存文件，最后運(yùn)行程序。結(jié)果分析條件的設(shè)定ABIGeneAmp5700的條件設(shè)置：反應(yīng)結(jié)束后保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件。根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)baselinestart(2~4),stop(7~9)以及ThresholdCt30Ct22~24,CtCt質(zhì)量控制程序：干擾（如乳糜血、溶血、膽紅素血）基本不影響本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定。生物參考區(qū)間：0/ml。<40，實(shí)驗(yàn)樣本的HCVDNA（數(shù)/ml）=M；Ct=40，樣品HCVDNA<1×103/ml。/危急值（當(dāng)適用時(shí)：實(shí)驗(yàn)室解釋：依據(jù)?！侗透窝撞《竞怂釘U(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》見(jiàn)試劑盒結(jié)核桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)目的：保證TBDNA適用范圍：TBDNATaqMan負(fù)責(zé)人： 操作人：本試劑盒用一對(duì)結(jié)核桿菌特異引物和一條結(jié)核桿菌特異性熒光探針，PCR反應(yīng)液，耐熱DNA聚合酶Taq酶，四種核苷酸單體dNTP）用PCRDNA。性能參數(shù)：檢出低值＜1×103/ml。標(biāo)本要求：標(biāo)本類型：血清。標(biāo)本采集：見(jiàn)標(biāo)本采集手冊(cè)。標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸872保存期6個(gè)月，應(yīng)避免反復(fù)凍融。室溫運(yùn)輸。標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染、嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。容器和添加劑類型：無(wú)菌離心管和無(wú)菌真空管。ABIGeneAmp5700（4-2℃、生物安全柜、紫外燈管（未貼標(biāo)簽管（×108/m50μl管1250μl/管）1校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性：送深圳市計(jì)量檢測(cè)所校準(zhǔn)。程序步驟:：標(biāo)本處理：標(biāo)本采集、保存和運(yùn)送5ml抗凝-200標(biāo)本及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品的處理44%NaOH1015000rpm51ml15000rpm5（知液標(biāo)本直用淋巴細(xì)胞分離液分離沉淀）沉淀直接加50ulDNA提取液充分混)沸水浴10分鐘1，轉(zhuǎn)至℃靜置6-8小時(shí)以10，000rpm52ulPCR40ulDNA10擴(kuò)增及DA-620儀器熒光檢測(cè)操作取單管人份PCR離心數(shù)秒。將各反應(yīng)管放入PCR93℃2分鐘預(yù)變性,然后按93℃45秒55℃120秒,反應(yīng)10個(gè)循環(huán)后置33℃保溫,迅速逐個(gè)將反應(yīng)管放入熒光檢測(cè)儀,讀取并記錄讀當(dāng)數(shù)A

。熒光激發(fā)波長(zhǎng)為0487nm，檢測(cè)波長(zhǎng)為525nm。最后按93℃45秒55℃120秒，共做30個(gè)循環(huán)后置33℃使用PE9600，9700，240093℃30秒55℃6093℃45秒55℃120PCR反應(yīng)后熒光檢測(cè)，待各PCR管充分冷卻至33℃后，迅速逐個(gè)將擴(kuò)增后的525nm。ABIGeneAmp5700操作

。熒光激發(fā)波長(zhǎng)為487nm，檢測(cè)波長(zhǎng)為1將各后應(yīng)管放入PCR及未知標(biāo)本，并設(shè)置樣品名稱、標(biāo)記熒光基團(tuán)類和循環(huán)條件：ABIGeneAmp5700293℃4555℃601093℃3055℃4530結(jié)果分析條件的設(shè)定ABIGeneAmp5700像調(diào)節(jié)baselinestart(2~4),stop(7~9)以及Threshold30,臨界陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品Ct22~24,強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品Ct18~20,最后記錄儀器自動(dòng)分析計(jì)算出的Ct質(zhì)量控制程序：陰性質(zhì)控品：全部陰性陽(yáng)性定量標(biāo)準(zhǔn)品：全部陽(yáng)性︱r︱≧(correlation~-1);108104/ml。干擾（如乳糜血、溶血、膽紅素血）血基本不影響本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定。生物參考區(qū)間：0/ml?；颊邫z驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間：Ct<40TBDNA（貝數(shù)/ml）=M；Ct=40TBDNA<1×103/ml。/危急值（當(dāng)適用時(shí)：實(shí)驗(yàn)室解釋：考依據(jù)?！督Y(jié)核分支桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》見(jiàn)試劑盒高速冷凍離心機(jī)使用、維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的：保證高速冷凍離心機(jī)的正常使用。適用范圍：適用于本室使用的高速冷凍離心機(jī)。負(fù)責(zé)人： 操作人：性能參數(shù):5．程序：離心時(shí)造成儀器振蕩。求。離心完畢后，將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)回零位，關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)。室進(jìn)行清潔處理。對(duì)離心室清潔，應(yīng)先打開(kāi)離心機(jī)蓋，撥掉電源線，用專用設(shè)備將離心機(jī)轉(zhuǎn)子旋下，再用中性去污劑（70%的異丙醇/水混合物或乙醇去污染）清潔離心室；離心室內(nèi)的橡膠密封圈經(jīng)去污劑處理后，用水沖洗，再用甘油潤(rùn)滑。此應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)子每月進(jìn)行清潔維護(hù)。每月用中性的清潔劑清潔轉(zhuǎn)子一次，并在儀器維護(hù)記錄本上作好記錄，以延長(zhǎng)轉(zhuǎn)子的壽命。儀器維護(hù)更換.n:n=nmax*6mm要求。嚴(yán)格按照儀器的開(kāi)關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。期間核查本儀器不需要特別的周期間隔。校準(zhǔn)物均為與ICSH值。相關(guān)記錄儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表儀器設(shè)備檢定周期表儀器設(shè)備維修申請(qǐng)表儀器報(bào)廢（停用）單儀器設(shè)備使用授權(quán)表儀器設(shè)備檔案卡儀器設(shè)備領(lǐng)（借）用登記表儀器設(shè)備總表ABCD人民醫(yī)院分子診斷實(shí)驗(yàn)室平面圖265cm 350cm 300cm傳分子診斷室平面布局示意圖水水水?dāng)U增儀傳分子診斷室平面布局示意圖水水水?dāng)U增儀擴(kuò)傳冰標(biāo)增電腦打印檢本超凈臺(tái)傳工 工作 作臺(tái) 臺(tái)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖90cm內(nèi)76cm走廊走廊

水：水池；：排風(fēng)路線； ：墻柱； ：門；水實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表姓 名 性別 出生年月 年齡文化程度 學(xué)位 職位 職稱所學(xué)專業(yè) 畢業(yè)院校 畢業(yè)時(shí)間從事學(xué)歷(學(xué)位)從事學(xué)歷(學(xué)位)職務(wù)職稱所學(xué)專業(yè)畢業(yè)時(shí)間專業(yè)間序號(hào)姓名性別年齡123PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表編 接收號(hào) 本日1

時(shí)間 患者姓

性 年 科住院（門診號(hào)別