植物組織培養(yǎng)學(xué)課件

第二章植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備和一般技術(shù)三峽大學(xué)1編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0第二章植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備三峽大學(xué)1編寫(xiě)與制作李【主要內(nèi)容】

一、組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿三、植物組織培養(yǎng)的一般技術(shù)三峽大學(xué)2編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0【主要內(nèi)容】三峽大學(xué)2編寫(xiě)與制作李【學(xué)習(xí)目的與要求】

了解植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及基本設(shè)備，學(xué)習(xí)基本儀器設(shè)備的使用原理與方法，掌握植物組織培養(yǎng)的一些基本技術(shù)。三峽大學(xué)3編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0【學(xué)習(xí)目的與要求】了解植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置一、組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置1.化學(xué)實(shí)驗(yàn)室主要進(jìn)行器具的洗滌、干燥和保存;藥品的稱量、溶解及配制;培養(yǎng)基的分裝、包扎和滅菌;植物材料的預(yù)處理,培養(yǎng)材料的觀察分析等。2.接種室主要進(jìn)行植物材料的接種.培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移.試管苗的繼代等.3.無(wú)菌培養(yǎng)室是人工條件下培養(yǎng)接種物及試管苗的場(chǎng)所.4.洗滌室若需成批生產(chǎn)時(shí),需要一間單獨(dú)的洗滌室.三峽大學(xué)4編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0一、組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置三峽大學(xué)4編寫(xiě)與制作李曉玲Co組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置

5.觀察室放置顯微鏡.解剖鏡或照相設(shè)備,便于對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行認(rèn)真觀察、分析和照相。6.儲(chǔ)存室暫時(shí)不用的器皿.用具的存放,也可用作種質(zhì)保存。7.溫室用于試管苗的煉苗、移栽;植物材料的預(yù)培養(yǎng)等。三峽大學(xué)5編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置三峽大學(xué)5編寫(xiě)與制作李曉玲C藥品的稱量、溶解和保存注意事項(xiàng)：第一，藥品稱取要精確，大量元素用于托盤天平稱，其他用分析天平。第二，稱好的藥品分別放于小燒杯中，先用少量蒸餾水完全溶解，最后倒入容量瓶，定容到規(guī)定的體積；鐵鹽應(yīng)先溶EDTA鈉鹽，再用該溶液去溶解硫酸亞鐵，定容到規(guī)定的體積，以免發(fā)生氧化。第三，容量瓶中的母液應(yīng)倒入棕色試劑瓶。貼上標(biāo)簽，放入冰箱保存。母液應(yīng)勤配快用，若放置日久，發(fā)現(xiàn)渾濁、絮狀沉淀，則失效不能再使用。1.化學(xué)實(shí)驗(yàn)室三峽大學(xué)6編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0藥品的稱量、溶解和保存注意事項(xiàng)：1.化學(xué)實(shí)驗(yàn)室三峽大學(xué)6編

２.接種室接種室也叫無(wú)菌操作室，是進(jìn)行試管苗接種繼代的場(chǎng)所，是試管苗生產(chǎn)中最關(guān)鍵的地方，它關(guān)系到試管苗的污染率、接種工作效率等。接種室要干爽、清潔、明亮，在進(jìn)口處應(yīng)有緩沖間，用于進(jìn)入接種室前更衣?lián)Q鞋。緩沖間要安裝紫外燈用于空氣滅菌。接種操作在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行。三峽大學(xué)7編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0２.接種室三峽大學(xué)7編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright三峽大學(xué)8編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0三峽大學(xué)8編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0２.接種室超凈工作臺(tái)的工作原理是，鼓風(fēng)機(jī)將外界空氣從低效過(guò)濾器粗濾塵埃，再將空氣通過(guò)特制的微孔泡沫塑料片層疊組成的高效過(guò)濾器過(guò)濾消毒，它能除去直徑0.3微米的塵埃、細(xì)菌和真菌孢子，吹出的氣體形成連續(xù)不斷的無(wú)塵無(wú)菌的空氣層流，以0.35-0.55米／秒的流速送到操作臺(tái)面。超凈工作臺(tái)使用前應(yīng)用紫外燈照射30－40分鐘。三峽大學(xué)9編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0２.接種室超凈工作臺(tái)的工作原理是，鼓風(fēng)機(jī)將外界空氣從低效過(guò)濾

２.接種室超凈臺(tái)使用時(shí)間長(zhǎng)了過(guò)濾器會(huì)堵塞，一般低效過(guò)濾器每半年清洗一次，高效過(guò)濾器視情況3--4年更新一次。每周開(kāi)紫外燈2小時(shí)殺菌一次三峽大學(xué)10編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0２.接種室超凈臺(tái)使用時(shí)間長(zhǎng)了過(guò)濾器會(huì)堵塞，一般低效過(guò)濾器每

３.無(wú)菌培養(yǎng)室

無(wú)菌培養(yǎng)室最重要的是要恒溫、恒濕、無(wú)塵且空氣流通。溫度應(yīng)維持在25度左右，相對(duì)濕度應(yīng)在50%-60%。培養(yǎng)室內(nèi)有規(guī)律的安放培養(yǎng)架或搖窗。培養(yǎng)架可以是鋁合金、三角鐵、不銹鋼或木制框架，整個(gè)架子的高度可根據(jù)房間的高度確定，以充分利用空間，每個(gè)架子分為若干層，每層的層高應(yīng)在40CM左右，太高浪費(fèi)空間，太低則上下層溫度影響較大。架寬應(yīng)在45CM左右，每層安裝2支40W日光燈。三峽大學(xué)11編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0

３.無(wú)菌培養(yǎng)室三峽大學(xué)11編寫(xiě)與制作李曉玲Cop三峽大學(xué)12編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0三峽大學(xué)12編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0３.無(wú)菌培養(yǎng)室

培養(yǎng)室內(nèi)所有光照和黑暗時(shí)間由定時(shí)器自動(dòng)控制。整個(gè)培養(yǎng)室內(nèi)還應(yīng)裝有多個(gè)紫外線燈，以便能定時(shí)對(duì)整個(gè)房間進(jìn)行殺菌處理，特別是在夏天潮濕、霉雨季節(jié)，最好每天在晚上用紫外線燈殺菌30分鐘以上。三峽大學(xué)13編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0３.無(wú)菌培養(yǎng)室三峽大學(xué)13編寫(xiě)與制作李曉玲Copyrig３.無(wú)菌培養(yǎng)室無(wú)菌室應(yīng)定期用70%酒精或0.5%苯酚噴霧降塵和消毒，用2%新潔爾滅抹拭臺(tái)面和用具(70%酒精也可)，用福爾馬林(40%甲醛)加少量高錳酸鉀定期密閉熏蒸，配合紫外線滅菌燈(每次開(kāi)啟15分鐘以上)等等消毒滅菌手段，以使無(wú)菌室經(jīng)常保持高度的無(wú)菌狀態(tài)。三峽大學(xué)14編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0３.無(wú)菌培養(yǎng)室無(wú)菌室應(yīng)定期用70%酒精或0.5%苯酚噴霧降塵３.無(wú)菌培養(yǎng)室接種箱內(nèi)部也應(yīng)裝有紫外線燈，使用前開(kāi)燈15分鐘以上照射滅菌，但凡是照射不到之處仍是有菌的。在紫外線燈開(kāi)啟時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，可激發(fā)空氣中的氧分子締合成臭氧分子，這種氣體成分有很強(qiáng)的殺菌作用，可以對(duì)紫外線沒(méi)有直接照到的角落產(chǎn)生滅菌效果。由于臭氧有礙健康，在進(jìn)入操作之前應(yīng)先關(guān)掉紫外線燈，關(guān)后十多分鐘即可入內(nèi)。三峽大學(xué)15編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0３.無(wú)菌培養(yǎng)室接種箱內(nèi)部也應(yīng)裝有紫外線燈，使用前開(kāi)燈15分鐘二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿

常用儀器設(shè)備：1.電子天平精度高，稱量快，但價(jià)高。DT－200精度0.1gMax200g用于稱取蔗糖和瓊脂等FA1004精度0.1mgMax100g用于稱取微量元素和植物激素及微量附加物２.高壓蒸汽滅菌鍋是最基本的設(shè)備，用于培養(yǎng)基.器械等的滅菌．上海申安LDZX-40BI立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌鍋三峽大學(xué)16編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿3.烘箱洗凈后的玻璃器皿，如需迅速干燥，可放在烘箱內(nèi)烘干，溫度以80-100℃為宜。若需干熱滅菌，溫度升高至150-160℃,持續(xù)1-3小時(shí)即可。4.冰箱某些試劑．藥品和母液需低溫保存，有些材料需低溫處理，需要使用冰箱。5.酸度計(jì)培養(yǎng)基中的PH值十分重要,因此配制培養(yǎng)基時(shí),需要用酸度計(jì)來(lái)測(cè)定和調(diào)整.一般用小型酸度測(cè)定儀,即可在配制培養(yǎng)基時(shí)使用,也可測(cè)定培養(yǎng)過(guò)程中PH值的變化.若不做研究,僅用于生產(chǎn),也可用PH值為4-7的精密試紙來(lái)代替.測(cè)定培養(yǎng)基PH值時(shí),應(yīng)注意攪拌均勻后再測(cè).三峽大學(xué)17編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿3.烘箱洗凈后的玻璃6.超凈工作臺(tái)最常用.最普及的無(wú)菌操作裝置。7.光照培養(yǎng)箱及生化培養(yǎng)箱用于植物材料的特定培養(yǎng)。8.顯微鏡一般用雙筒實(shí)體顯微鏡較多,用于剝?nèi)∏o尖.以及隔瓶觀察內(nèi)部植物組織生長(zhǎng)情況.也還要有生物顯微鏡.最好配有數(shù)碼照相機(jī).9.蒸餾水器水中常含有無(wú)機(jī)和有機(jī)雜質(zhì),如不除去,勢(shì)必影響培養(yǎng)效果.植物組織培養(yǎng)中常使用蒸餾水或無(wú)離子水.10.空調(diào)機(jī)夏季。11.振蕩培養(yǎng)機(jī)和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)機(jī)植物組織培養(yǎng)中有時(shí)需要液體培養(yǎng),液體培養(yǎng)可分為液體靜置培養(yǎng)和液體振蕩培養(yǎng).后兩種培養(yǎng)方式需要有振蕩培養(yǎng)機(jī)和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)機(jī).12.培養(yǎng)架。13.微波爐配制藥品。二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿三峽大學(xué)18編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.06.超凈工作臺(tái)最常用.最普及的無(wú)菌操作裝置。二、組培實(shí)驗(yàn)室二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿必要的器皿：㈠.玻璃器皿㈡金屬器械1．鑷子類包括小型尖頭鑷子。16cm-25cm長(zhǎng)的槍狀鑷子等。2．剪刀類常用的有眼科剪、手術(shù)剪、彎頭剪等。3．分離器械植物材料的分離、切割、和嫁接，要使用解剖刀和芽接刀。前者可用眼科刀和菱形刀代替。刀具液可用雙面刀片，舊剛鋸條等自制。4．過(guò)濾器械5．接種針用來(lái)轉(zhuǎn)移細(xì)胞和愈傷組織。三峽大學(xué)19編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿必要的器皿：三峽大學(xué)1三、植物培養(yǎng)技術(shù)中的一些一般技術(shù)

㈠器皿的清洗植物組織培養(yǎng)最重要的，也是最基本的要求，就是各項(xiàng)操作都應(yīng)從無(wú)毒害、無(wú)污染的培養(yǎng)環(huán)境來(lái)考慮。培養(yǎng)過(guò)程中最經(jīng)常、最大量的工作之一，是洗滌培養(yǎng)瓶及其它常用器皿。三峽大學(xué)20編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0三、植物培養(yǎng)技術(shù)中的一些一般技術(shù)

㈠器皿的清洗三峽大學(xué)21.操作人員須換經(jīng)滅菌的工作服，戴口罩。進(jìn)入接種室前，工作人員的雙手必須進(jìn)行滅菌，用肥皂水洗滌能達(dá)到良好的效果，進(jìn)行操作前再用70％的酒精擦洗雙手。2.操作期間經(jīng)常用70％的酒精擦拭雙手和臺(tái)面。特別注意防止“雙重傳遞”的污染，例如器械被手污染后又污染培養(yǎng)基等。3.在打開(kāi)培養(yǎng)瓶、三角瓶或試管時(shí)，最大的污染危險(xiǎn)是管口邊沿沾染的微生物落入管內(nèi)。解決這個(gè)問(wèn)題，可在打開(kāi)前用火焰燒瓶口。如果培養(yǎng)液接觸了瓶口，則瓶口要燒到足夠的熱度，以殺死存在的細(xì)菌。為避免灰塵污染瓶口，可用紙包扎瓶口和塞子，以遮蓋瓶子頸部和試管口，相對(duì)地減少污染機(jī)會(huì)。㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒三峽大學(xué)21編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒三峽大學(xué)21編寫(xiě)與制作李曉玲㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒4.工具用后及時(shí)滅菌，避免交叉污染。5.工作人員的呼吸也是污染的主要途徑。通常在平靜呼吸時(shí)菌是很少的，但是談話或咳嗽時(shí)細(xì)菌便增多，因此操作過(guò)程應(yīng)禁止不必要的談話，并戴上口罩。6.由于空氣中有灰塵，因此在操作時(shí)，仍要注意避免灰塵的落入。盡量把蓋子蓋好，當(dāng)打開(kāi)瓶子或試管時(shí)，應(yīng)拿成斜角，以免灰塵落入瓶中。刀、剪、鑷子等用具，一般在使用前浸泡在75％酒精中，用時(shí)在火焰上滅菌，待冷卻后使用。每次使用前均需進(jìn)行用具滅菌。三峽大學(xué)22編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒4.工具用后及時(shí)滅菌，避免交叉㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒如果實(shí)驗(yàn)需要并且條件允許，可以對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行高壓滅菌。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸氣不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.11MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達(dá)到0.11MPa時(shí)，開(kāi)始計(jì)時(shí)，維持壓力0.1～0.15MPa，20min。三峽大學(xué)23編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒三峽大學(xué)23編寫(xiě)與制作李曉玲㈢外植體滅菌消毒外植體在接種之前，須經(jīng)嚴(yán)格地滅菌。由于滅菌劑的種類不同，殺菌力不同，因此選擇消毒劑，既要考慮具有良好的消毒殺菌作用，同時(shí)又易被蒸餾水沖洗掉或能自行分解的物質(zhì)，且不會(huì)損傷或只輕微損傷組織材料而不影響生長(zhǎng)。在使用不同的藥劑時(shí)，需要考慮使用濃度和處理時(shí)間。三峽大學(xué)24編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植體滅菌消毒外植體在接種之前，須經(jīng)嚴(yán)格地滅菌。由于滅菌劑㈢外植體滅菌消毒表1.常用的消毒劑三峽大學(xué)25編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植體滅菌消毒表1.常用的消毒劑三峽大學(xué)25編寫(xiě)與制作㈢外植體滅菌消毒污染的發(fā)生與培養(yǎng)植物的基因型、外植體來(lái)源、分離季節(jié)、組織大小及操作人員的技術(shù)水平等有關(guān)。取材組織越大越易污染，夏季取材比冬季取材帶菌多，不同年份的污染情況也有所差異。組織培養(yǎng)中要獲得無(wú)菌材料，在綜合上述情況的基礎(chǔ)上，還要選擇適宜的消毒劑。由于不同植物及同一植物不同部位，有其不同的特點(diǎn)，它們對(duì)不同種類及其濃度的消毒劑敏感反應(yīng)也不同，所以開(kāi)始要預(yù)備實(shí)驗(yàn)，以達(dá)到最佳的消毒效果。三峽大學(xué)26編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植體滅菌消毒污染的發(fā)生與培養(yǎng)植物的基因型、外植體來(lái)源、分㈢外植體滅菌消毒外植體滅菌消毒的一般步驟三峽大學(xué)27編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植體滅菌消毒外植體滅菌消毒的一般步驟三峽大學(xué)27編寫(xiě)與制㈢外植體滅菌消毒外植體滅菌消毒注意事項(xiàng)：一般情況下，如果外植體較大而且硬，可直接用消毒劑處理，如果實(shí)、葉片、莖段、種子等的消毒；如果是幼嫩的莖尖，一般先取較大的莖尖，表面消毒后，再在無(wú)菌條件下借助解剖顯微鏡取出需要的莖尖大小培養(yǎng)；如果是未成熟胚、胚珠、胚乳、花藥等，一般先把子房或胚珠、花蕾表面消毒，再在無(wú)菌條件下剝出需要的外植體；如果是細(xì)胞，應(yīng)按培養(yǎng)目的，選擇合適的起始材料進(jìn)行相應(yīng)的外植體消毒。三峽大學(xué)28編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植體滅菌消毒外植體滅菌消毒注意事項(xiàng)：三峽大學(xué)28編寫(xiě)與制㈢外植體滅菌消毒外植體的接種：是把經(jīng)過(guò)表面滅菌后的植物材料切碎或分離出器官、組織、細(xì)胞，轉(zhuǎn)放到無(wú)菌培養(yǎng)基上的全部操作過(guò)程。整個(gè)接種過(guò)程均需無(wú)菌操作。三峽大學(xué)29編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植體滅菌消毒外植體的接種：三峽大學(xué)29編寫(xiě)與制作李曉玲三峽大學(xué)30編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0三峽大學(xué)30編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0【思考題】1.常用的外植體滅菌消毒劑有哪些？2.高壓滅菌的原理是什么？三峽大學(xué)31編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0【思考題】1.常用的外植體滅菌消毒劑有哪些？三峽大學(xué)31編寫(xiě)天平三峽大學(xué)32編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0天平三峽大學(xué)32編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1壓力蒸汽消毒器三峽大學(xué)33編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0壓力蒸汽消毒器三峽大學(xué)33編寫(xiě)與制作李曉玲Copyrig電熱干燥箱三峽大學(xué)34編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0電熱干燥箱三峽大學(xué)34編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright冰箱三峽大學(xué)35編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0冰箱三峽大學(xué)35編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.培養(yǎng)箱三峽大學(xué)36編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0培養(yǎng)箱三峽大學(xué)36編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1倒置顯微鏡三峽大學(xué)37編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0倒置顯微鏡三峽大學(xué)37編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright自動(dòng)三重純水蒸餾器三峽大學(xué)38編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0自動(dòng)三重純水蒸餾器三峽大學(xué)38編寫(xiě)與制作李曉玲Copyr超純水裝置系統(tǒng)三峽大學(xué)39編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0超純水裝置系統(tǒng)三峽大學(xué)39編寫(xiě)與制作李曉玲Copyrig搖床三峽大學(xué)40編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0搖床三峽大學(xué)40編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.培養(yǎng)瓶三峽大學(xué)41編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0培養(yǎng)瓶三峽大學(xué)41編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1第二章植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備和一般技術(shù)三峽大學(xué)42編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0第二章植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備三峽大學(xué)1編寫(xiě)與制作李【主要內(nèi)容】

一、組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿三、植物組織培養(yǎng)的一般技術(shù)三峽大學(xué)43編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0【主要內(nèi)容】三峽大學(xué)2編寫(xiě)與制作李【學(xué)習(xí)目的與要求】

了解植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及基本設(shè)備，學(xué)習(xí)基本儀器設(shè)備的使用原理與方法，掌握植物組織培養(yǎng)的一些基本技術(shù)。三峽大學(xué)44編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0【學(xué)習(xí)目的與要求】了解植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置一、組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置1.化學(xué)實(shí)驗(yàn)室主要進(jìn)行器具的洗滌、干燥和保存;藥品的稱量、溶解及配制;培養(yǎng)基的分裝、包扎和滅菌;植物材料的預(yù)處理,培養(yǎng)材料的觀察分析等。2.接種室主要進(jìn)行植物材料的接種.培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移.試管苗的繼代等.3.無(wú)菌培養(yǎng)室是人工條件下培養(yǎng)接種物及試管苗的場(chǎng)所.4.洗滌室若需成批生產(chǎn)時(shí),需要一間單獨(dú)的洗滌室.三峽大學(xué)45編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0一、組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置三峽大學(xué)4編寫(xiě)與制作李曉玲Co組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置

5.觀察室放置顯微鏡.解剖鏡或照相設(shè)備,便于對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行認(rèn)真觀察、分析和照相。6.儲(chǔ)存室暫時(shí)不用的器皿.用具的存放,也可用作種質(zhì)保存。7.溫室用于試管苗的煉苗、移栽;植物材料的預(yù)培養(yǎng)等。三峽大學(xué)46編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0組培實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置三峽大學(xué)5編寫(xiě)與制作李曉玲C藥品的稱量、溶解和保存注意事項(xiàng)：第一，藥品稱取要精確，大量元素用于托盤天平稱，其他用分析天平。第二，稱好的藥品分別放于小燒杯中，先用少量蒸餾水完全溶解，最后倒入容量瓶，定容到規(guī)定的體積；鐵鹽應(yīng)先溶EDTA鈉鹽，再用該溶液去溶解硫酸亞鐵，定容到規(guī)定的體積，以免發(fā)生氧化。第三，容量瓶中的母液應(yīng)倒入棕色試劑瓶。貼上標(biāo)簽，放入冰箱保存。母液應(yīng)勤配快用，若放置日久，發(fā)現(xiàn)渾濁、絮狀沉淀，則失效不能再使用。1.化學(xué)實(shí)驗(yàn)室三峽大學(xué)47編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0藥品的稱量、溶解和保存注意事項(xiàng)：1.化學(xué)實(shí)驗(yàn)室三峽大學(xué)6編

２.接種室接種室也叫無(wú)菌操作室，是進(jìn)行試管苗接種繼代的場(chǎng)所，是試管苗生產(chǎn)中最關(guān)鍵的地方，它關(guān)系到試管苗的污染率、接種工作效率等。接種室要干爽、清潔、明亮，在進(jìn)口處應(yīng)有緩沖間，用于進(jìn)入接種室前更衣?lián)Q鞋。緩沖間要安裝紫外燈用于空氣滅菌。接種操作在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行。三峽大學(xué)48編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0２.接種室三峽大學(xué)7編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright三峽大學(xué)49編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0三峽大學(xué)8編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0２.接種室超凈工作臺(tái)的工作原理是，鼓風(fēng)機(jī)將外界空氣從低效過(guò)濾器粗濾塵埃，再將空氣通過(guò)特制的微孔泡沫塑料片層疊組成的高效過(guò)濾器過(guò)濾消毒，它能除去直徑0.3微米的塵埃、細(xì)菌和真菌孢子，吹出的氣體形成連續(xù)不斷的無(wú)塵無(wú)菌的空氣層流，以0.35-0.55米／秒的流速送到操作臺(tái)面。超凈工作臺(tái)使用前應(yīng)用紫外燈照射30－40分鐘。三峽大學(xué)50編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0２.接種室超凈工作臺(tái)的工作原理是，鼓風(fēng)機(jī)將外界空氣從低效過(guò)濾

２.接種室超凈臺(tái)使用時(shí)間長(zhǎng)了過(guò)濾器會(huì)堵塞，一般低效過(guò)濾器每半年清洗一次，高效過(guò)濾器視情況3--4年更新一次。每周開(kāi)紫外燈2小時(shí)殺菌一次三峽大學(xué)51編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0２.接種室超凈臺(tái)使用時(shí)間長(zhǎng)了過(guò)濾器會(huì)堵塞，一般低效過(guò)濾器每

３.無(wú)菌培養(yǎng)室

無(wú)菌培養(yǎng)室最重要的是要恒溫、恒濕、無(wú)塵且空氣流通。溫度應(yīng)維持在25度左右，相對(duì)濕度應(yīng)在50%-60%。培養(yǎng)室內(nèi)有規(guī)律的安放培養(yǎng)架或搖窗。培養(yǎng)架可以是鋁合金、三角鐵、不銹鋼或木制框架，整個(gè)架子的高度可根據(jù)房間的高度確定，以充分利用空間，每個(gè)架子分為若干層，每層的層高應(yīng)在40CM左右，太高浪費(fèi)空間，太低則上下層溫度影響較大。架寬應(yīng)在45CM左右，每層安裝2支40W日光燈。三峽大學(xué)52編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0

３.無(wú)菌培養(yǎng)室三峽大學(xué)11編寫(xiě)與制作李曉玲Cop三峽大學(xué)53編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0三峽大學(xué)12編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0３.無(wú)菌培養(yǎng)室

培養(yǎng)室內(nèi)所有光照和黑暗時(shí)間由定時(shí)器自動(dòng)控制。整個(gè)培養(yǎng)室內(nèi)還應(yīng)裝有多個(gè)紫外線燈，以便能定時(shí)對(duì)整個(gè)房間進(jìn)行殺菌處理，特別是在夏天潮濕、霉雨季節(jié)，最好每天在晚上用紫外線燈殺菌30分鐘以上。三峽大學(xué)54編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0３.無(wú)菌培養(yǎng)室三峽大學(xué)13編寫(xiě)與制作李曉玲Copyrig３.無(wú)菌培養(yǎng)室無(wú)菌室應(yīng)定期用70%酒精或0.5%苯酚噴霧降塵和消毒，用2%新潔爾滅抹拭臺(tái)面和用具(70%酒精也可)，用福爾馬林(40%甲醛)加少量高錳酸鉀定期密閉熏蒸，配合紫外線滅菌燈(每次開(kāi)啟15分鐘以上)等等消毒滅菌手段，以使無(wú)菌室經(jīng)常保持高度的無(wú)菌狀態(tài)。三峽大學(xué)55編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0３.無(wú)菌培養(yǎng)室無(wú)菌室應(yīng)定期用70%酒精或0.5%苯酚噴霧降塵３.無(wú)菌培養(yǎng)室接種箱內(nèi)部也應(yīng)裝有紫外線燈，使用前開(kāi)燈15分鐘以上照射滅菌，但凡是照射不到之處仍是有菌的。在紫外線燈開(kāi)啟時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，可激發(fā)空氣中的氧分子締合成臭氧分子，這種氣體成分有很強(qiáng)的殺菌作用，可以對(duì)紫外線沒(méi)有直接照到的角落產(chǎn)生滅菌效果。由于臭氧有礙健康，在進(jìn)入操作之前應(yīng)先關(guān)掉紫外線燈，關(guān)后十多分鐘即可入內(nèi)。三峽大學(xué)56編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0３.無(wú)菌培養(yǎng)室接種箱內(nèi)部也應(yīng)裝有紫外線燈，使用前開(kāi)燈15分鐘二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿

常用儀器設(shè)備：1.電子天平精度高，稱量快，但價(jià)高。DT－200精度0.1gMax200g用于稱取蔗糖和瓊脂等FA1004精度0.1mgMax100g用于稱取微量元素和植物激素及微量附加物２.高壓蒸汽滅菌鍋是最基本的設(shè)備，用于培養(yǎng)基.器械等的滅菌．上海申安LDZX-40BI立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌鍋三峽大學(xué)57編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿3.烘箱洗凈后的玻璃器皿，如需迅速干燥，可放在烘箱內(nèi)烘干，溫度以80-100℃為宜。若需干熱滅菌，溫度升高至150-160℃,持續(xù)1-3小時(shí)即可。4.冰箱某些試劑．藥品和母液需低溫保存，有些材料需低溫處理，需要使用冰箱。5.酸度計(jì)培養(yǎng)基中的PH值十分重要,因此配制培養(yǎng)基時(shí),需要用酸度計(jì)來(lái)測(cè)定和調(diào)整.一般用小型酸度測(cè)定儀,即可在配制培養(yǎng)基時(shí)使用,也可測(cè)定培養(yǎng)過(guò)程中PH值的變化.若不做研究,僅用于生產(chǎn),也可用PH值為4-7的精密試紙來(lái)代替.測(cè)定培養(yǎng)基PH值時(shí),應(yīng)注意攪拌均勻后再測(cè).三峽大學(xué)58編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿3.烘箱洗凈后的玻璃6.超凈工作臺(tái)最常用.最普及的無(wú)菌操作裝置。7.光照培養(yǎng)箱及生化培養(yǎng)箱用于植物材料的特定培養(yǎng)。8.顯微鏡一般用雙筒實(shí)體顯微鏡較多,用于剝?nèi)∏o尖.以及隔瓶觀察內(nèi)部植物組織生長(zhǎng)情況.也還要有生物顯微鏡.最好配有數(shù)碼照相機(jī).9.蒸餾水器水中常含有無(wú)機(jī)和有機(jī)雜質(zhì),如不除去,勢(shì)必影響培養(yǎng)效果.植物組織培養(yǎng)中常使用蒸餾水或無(wú)離子水.10.空調(diào)機(jī)夏季。11.振蕩培養(yǎng)機(jī)和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)機(jī)植物組織培養(yǎng)中有時(shí)需要液體培養(yǎng),液體培養(yǎng)可分為液體靜置培養(yǎng)和液體振蕩培養(yǎng).后兩種培養(yǎng)方式需要有振蕩培養(yǎng)機(jī)和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)機(jī).12.培養(yǎng)架。13.微波爐配制藥品。二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿三峽大學(xué)59編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.06.超凈工作臺(tái)最常用.最普及的無(wú)菌操作裝置。二、組培實(shí)驗(yàn)室二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿必要的器皿：㈠.玻璃器皿㈡金屬器械1．鑷子類包括小型尖頭鑷子。16cm-25cm長(zhǎng)的槍狀鑷子等。2．剪刀類常用的有眼科剪、手術(shù)剪、彎頭剪等。3．分離器械植物材料的分離、切割、和嫁接，要使用解剖刀和芽接刀。前者可用眼科刀和菱形刀代替。刀具液可用雙面刀片，舊剛鋸條等自制。4．過(guò)濾器械5．接種針用來(lái)轉(zhuǎn)移細(xì)胞和愈傷組織。三峽大學(xué)60編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0二、組培實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備及必要的器皿必要的器皿：三峽大學(xué)1三、植物培養(yǎng)技術(shù)中的一些一般技術(shù)

㈠器皿的清洗植物組織培養(yǎng)最重要的，也是最基本的要求，就是各項(xiàng)操作都應(yīng)從無(wú)毒害、無(wú)污染的培養(yǎng)環(huán)境來(lái)考慮。培養(yǎng)過(guò)程中最經(jīng)常、最大量的工作之一，是洗滌培養(yǎng)瓶及其它常用器皿。三峽大學(xué)61編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0三、植物培養(yǎng)技術(shù)中的一些一般技術(shù)

㈠器皿的清洗三峽大學(xué)21.操作人員須換經(jīng)滅菌的工作服，戴口罩。進(jìn)入接種室前，工作人員的雙手必須進(jìn)行滅菌，用肥皂水洗滌能達(dá)到良好的效果，進(jìn)行操作前再用70％的酒精擦洗雙手。2.操作期間經(jīng)常用70％的酒精擦拭雙手和臺(tái)面。特別注意防止“雙重傳遞”的污染，例如器械被手污染后又污染培養(yǎng)基等。3.在打開(kāi)培養(yǎng)瓶、三角瓶或試管時(shí)，最大的污染危險(xiǎn)是管口邊沿沾染的微生物落入管內(nèi)。解決這個(gè)問(wèn)題，可在打開(kāi)前用火焰燒瓶口。如果培養(yǎng)液接觸了瓶口，則瓶口要燒到足夠的熱度，以殺死存在的細(xì)菌。為避免灰塵污染瓶口，可用紙包扎瓶口和塞子，以遮蓋瓶子頸部和試管口，相對(duì)地減少污染機(jī)會(huì)。㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒三峽大學(xué)62編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒三峽大學(xué)21編寫(xiě)與制作李曉玲㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒4.工具用后及時(shí)滅菌，避免交叉污染。5.工作人員的呼吸也是污染的主要途徑。通常在平靜呼吸時(shí)菌是很少的，但是談話或咳嗽時(shí)細(xì)菌便增多，因此操作過(guò)程應(yīng)禁止不必要的談話，并戴上口罩。6.由于空氣中有灰塵，因此在操作時(shí)，仍要注意避免灰塵的落入。盡量把蓋子蓋好，當(dāng)打開(kāi)瓶子或試管時(shí)，應(yīng)拿成斜角，以免灰塵落入瓶中。刀、剪、鑷子等用具，一般在使用前浸泡在75％酒精中，用時(shí)在火焰上滅菌，待冷卻后使用。每次使用前均需進(jìn)行用具滅菌。三峽大學(xué)63編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒4.工具用后及時(shí)滅菌，避免交叉㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒如果實(shí)驗(yàn)需要并且條件允許，可以對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行高壓滅菌。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸氣不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.11MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達(dá)到0.11MPa時(shí)，開(kāi)始計(jì)時(shí)，維持壓力0.1～0.15MPa，20min。三峽大學(xué)64編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈡組培過(guò)程中實(shí)驗(yàn)設(shè)施的滅菌消毒三峽大學(xué)23編寫(xiě)與制作李曉玲㈢外植體滅菌消毒外植體在接種之前，須經(jīng)嚴(yán)格地滅菌。由于滅菌劑的種類不同，殺菌力不同，因此選擇消毒劑，既要考慮具有良好的消毒殺菌作用，同時(shí)又易被蒸餾水沖洗掉或能自行分解的物質(zhì)，且不會(huì)損傷或只輕微損傷組織材料而不影響生長(zhǎng)。在使用不同的藥劑時(shí)，需要考慮使用濃度和處理時(shí)間。三峽大學(xué)65編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植體滅菌消毒外植體在接種之前，須經(jīng)嚴(yán)格地滅菌。由于滅菌劑㈢外植體滅菌消毒表1.常用的消毒劑三峽大學(xué)66編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植體滅菌消毒表1.常用的消毒劑三峽大學(xué)25編寫(xiě)與制作㈢外植體滅菌消毒污染的發(fā)生與培養(yǎng)植物的基因型、外植體來(lái)源、分離季節(jié)、組織大小及操作人員的技術(shù)水平等有關(guān)。取材組織越大越易污染，夏季取材比冬季取材帶菌多，不同年份的污染情況也有所差異。組織培養(yǎng)中要獲得無(wú)菌材料，在綜合上述情況的基礎(chǔ)上，還要選擇適宜的消毒劑。由于不同植物及同一植物不同部位，有其不同的特點(diǎn)，它們對(duì)不同種類及其濃度的消毒劑敏感反應(yīng)也不同，所以開(kāi)始要預(yù)備實(shí)驗(yàn)，以達(dá)到最佳的消毒效果。三峽大學(xué)67編寫(xiě)與制作李曉玲Copyright1.0㈢外植