中藥配方顆粒共性關鍵制劑技術研究資料

PAGE—PAGE111—中藥配方顆粒共性關鍵制劑技術及其產業(yè)化的研究研究資料2010年3月

中藥配方顆粒共性關鍵制劑技術及其產業(yè)化的研究研究資料中藥配方顆粒的研制是在遵循中醫(yī)藥理論的基礎上，運用現(xiàn)代科學知識和技術手段對中藥飲片進行改革，因此制備工藝原則上根據傳統(tǒng)湯劑的制備特點，以水為溶媒進行加熱提取，最大限度地保留其有效成分。由于中藥材的原料不同，植物藥按藥用部位分為根及根莖類、種子果實類、草類、葉類、花類、皮類、藤木類、樹脂類、動物類、礦物類、加工類、其他類；按所含化學成分的不同分為糖類、苷類、木脂素類、揮發(fā)油類、生物堿類、鞣質及多元酚類、甾類、氨基酸、多肽、蛋白質和酶類、有機酸類、無機鹽類、脂類及其他類。因此在提取、濃縮、噴霧干燥和制粒等制備工藝上不可能統(tǒng)一。為了進一步提高產品質量，使生產工藝更趨合理，從已生產的700余種中藥配方顆粒中選有代表性的16種中藥（化橘紅、廣藿香、佛手、高良姜、砂仁、陳皮、黃芪、大黃、何首烏、決明子、黃芩、菊花、葛根、羚羊角、血竭、天麻），根據所含化學成分進行分類，在原有研究基礎上，針對各品種生產中存在問題，按所含成分的不同，分類進行制備工藝路線的篩選和工藝參數的優(yōu)選，從中找出相同類成分在制備方法和工藝上的共性，研究方法基本按照國家藥品監(jiān)督局頒布的中藥新藥制備工藝研究的有關技術要求進行。由于研究對象、內容較多，除16個配方顆粒標準外，我們僅選取含苷類成分的中藥配方顆粒共性關鍵制劑技術研究為代表，匯報本項目該領域研究思路與研究內容。第一部分含揮發(fā)性成分的中藥配方顆粒制備工藝共性關鍵技術研究（一）質量標準研究1.1化橘紅質量標準制定1.1.1化橘紅配方顆粒HuajuhongPeifangkeli【來源】本品為蕓香科植物化州柚Citrusgrandis‘Tomentosa’的未成熟或近成熟的干燥外層果皮制成的配方顆粒?！九谥啤繎现袊幍?005年版一部第51頁化橘紅【炮制】項下有關的規(guī)定?！局品ā咳』偌t飲片8570g，加15倍水煎煮三次，每次煎煮1.0小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.05～1.07（50℃）的清膏，噴霧干燥，加入適量糊精，混勻，制粒，干燥，制成1000g【性狀】本品為棕色顆粒；氣芳香，味苦，微辛?！捐b別】取本品粉末1g，加甲醇10ml，加熱回流20分鐘，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。另取柚皮苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-水（10:2:3）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點?！緳z查】本品應符合中國藥典2005年版一部附錄IC顆粒劑項下有關的各項規(guī)定?！窘鑫铩空沾既苄越鑫餃y定法項下的熱浸法測定，用65%乙醇作溶劑，不得少于10.0%?！竞繙y定】照高效液相色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VID）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-醋酸-水（35:4:61）為流動相；流速1.0ml/min；檢測波長：283nm；柱溫：40℃對照品溶液的制備精密稱取在110℃干燥至恒重的柚皮苷對照品20mg，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含柚皮苷60μ供試品溶液的制備取本品粉末約0.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）80ml，置水浴上加熱回流3小時，棄去石油醚，藥渣揮盡石油醚，加甲醇80ml，再置水浴上加熱回流3小時至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量甲醇分數次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品以干燥品計算，每袋含柚皮苷（C27H32O14）不得少于40.0mg。【功能與主治】散寒，燥濕，利氣，消痰。用于風寒咳嗽，喉癢痰多，食積傷酒，嘔惡痞悶?！居梅ㄅc用量】供配方用，遵醫(yī)囑?！疽?guī)格】每袋裝0.7g，相當于飲片6g?！举A藏】密封，置陰涼干燥處?！居行凇咳?。

1.2廣藿香質量標準制定1.2[名稱]廣藿香配方顆粒拼音名：Guanghuoxiangpeifangkeli英文名：HERBAPOGOSTEMONISPrescriptionGranules[來源]本品為唇形科植物廣藿香Pogostemoncablin(Blanco)Benth．的干燥地上部分制成的配方顆粒。[炮制]應符合中國藥典2005年版一部第31頁廣藿香(炮制)項下有關的規(guī)定[制法]取廣藿香飲片，用水蒸汽蒸餾提取揮發(fā)油；藥渣加水煎煮二次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.07-1.10(50℃[性狀]本品為棕色顆粒；氣香特異，味辛、微苦。[鑒別]取本品粉末1g，加乙醚20ml，冷浸過夜，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取廣藿香對照藥材3g，同法制成對照藥材溶液。再取百秋李醇對照品，加醋酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各2～5μl,分別點于同一硅膠Ｇ薄層板上，以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯－甲酸=10：1：0.05為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛濃硫酸溶液,加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色[指紋圖譜]（1）薄層色譜鑒別：取樣品粗粉約5g，置30mL具塞三角燒瓶中，加石油醚20mL，密閉，超聲10min，濾過，棄去石油醚液，藥渣加甲醇5mL，超聲15min，密閉，濾過，甲醇液作為供試品溶液。另取廣藿香對照藥材，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各10~20μl,分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚－乙酸乙酯－甲醇－甲酸=7.5：1.8：1：0.125為展開劑，二次上行展開，每次展距9cm，取出，晾干，噴以5％三氯化鋁乙醇液顯色，于365nm下觀察，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的顏色斑點。（2）高效液相色譜法鑒別：照高效液相色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥD）測定。色譜條件：柱：agilentC8柱（4.6×150mm，5μm），流動相：甲醇－1％的冰醋酸水溶液（梯度洗脫），柱溫：25℃，檢測波長：254nm，分析時間50min，流速：1mL/min，進樣量：5μ表1-116廣藿香藥材HPLC指紋圖譜流動相梯度時間（min）A（％）B（％）1585451000501000供試品溶液的制備：精密稱取樣品，先加石油醚80mL，索氏提取2h，至無色，棄去石油醚液，藥渣再加甲醇80mL，索氏提取4h，至無色，濾過，濃縮，甲醇定容為每ml約含原藥材量1g。用0.22μm微孔濾膜濾過，密封備用。對照藥材溶液的制備：取藥材適量，水提濃縮至干膏后按供試品溶液的制備方法同法制成每ml約含原藥材量1g的溶液，作為對照藥材溶液。測定法分別精密吸取對照藥材溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀，所得供試品圖譜與對照藥材圖譜進行比較分析。（3）氣質聯(lián)用鑒別：揮發(fā)油對照品溶液的制備：取揮發(fā)油，加適量乙醚稀釋10倍，加適量無水硫酸鈉進行脫水，作為對照品溶液。供試品溶液的制備：取廣藿香配方顆粒2g，加乙醚9mL，密閉，超聲2分鐘，取上清夜，加適量無水硫酸鈉進行脫水，作為供試品溶液。分析條件：HP-5MSCapilary30.0m×250μm×0.25μm(Agilent)；進樣口溫度250℃，接口溫度280℃；載氣為氦氣，流速1.3mL/min；分流比60:1；MS:EI源(70ev)，雙燈絲；掃描范圍40-400m/z，掃描間歇1.0second；升溫程序：柱溫60℃，5分析：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μl,注入氣質聯(lián)用色譜儀，所得供試品圖譜與對照品圖譜進行比較分析。[檢查]（重金屬、砷鹽和農藥殘留量等）本晶應符合中國藥典2005年版一部附錄工C顆粒劑項下有關的各項規(guī)定。[浸出物]照醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法(中國藥典2005年版一部附錄XA)測定，用70％乙醇作溶劑，不得少于35.0％。[功能與主治]芳香化濁，開胃止嘔，發(fā)表解暑。用于濕濁中阻，脘痞嘔吐，暑濕倦怠，胸悶不舒，寒濕閉暑，腹痛吐瀉，鼻淵頭痛。[用法與用量]供配方用，遵醫(yī)囑。[注意][規(guī)格]每袋裝1g，相當于飲片7g。[貯藏]密封，置陰涼干燥處。[有效期]1.2.2[名稱、漢語拼音]本品是《中國藥典》中收載的唇形科植物廣藿香Pogostemoncablin(Blanco)Benth．的干燥地上部分制成的配方顆粒，故根據劑型特點，命名為廣藿香配方顆粒。拼音名為GuanghuoxiangPeifangkeli[來源]本品為廣藿香干燥地上部分根據提取工藝制成的配方顆粒。[性狀]根據配方顆粒的實際情況描述。[鑒別]主要鑒別揮發(fā)油中的百秋李醇成分，能夠被5％香草醛濃硫酸溶液顯色。[指紋圖譜](1)薄層色譜：同藥材入選標準，采用超聲法更快捷簡便。(2)高效液相色譜鑒別:同藥材入選標準。(3)氣質聯(lián)用：同藥材入選標準。(4)紅外光譜：因供試品批次不夠，暫不列入標準。(4).1儀器條件與試劑Nicolet6700傅立葉變換紅外光譜儀（美國）；Ez0MNIC8.0軟件；YP-2壓片機（上海）；光譜純KBr粉末（英國BDH）；廣藿香配方顆粒（廣東一方制藥有限公司）。(4).2樣品制備將取2mg新開封的廣藿香配方顆粒與200mg溴化鉀混合研磨均勻，壓片測定。(4).3測定方法將供試品的KBr壓片置于FTIR儀的測定窗口固定位置，光譜范圍4000～400cm-1,分辨率4cm-1，掃描次數為32次。通過DTGS檢測器檢測樣品的光吸收強度,繪制出相應樣品的紅外光譜圖。(4).4實驗結果廣藿香中所含的化學成分主要有揮發(fā)油類、黃酮類、香豆素類和多糖。用FTIR法測出的紅外光譜體現(xiàn)了各種成分的紅外吸收。圖1-40顯示，雖然各供試品的批號不同，它們的紅外光譜圖極為相似,這說明廣藿香配方顆粒所含的主要化學成分是相似的。各批號廣藿香配方顆粒紅外光譜圖的波數靈敏度在86%的透過率見表9、圖1-49、50。圖1-50廣藿香配方顆粒紅外光譜特征吸收圖圖1-50廣藿香配方顆粒紅外光譜特征吸收圖圖1-49廣藿香配方顆粒紅外光譜疊加圖表1-117廣藿香配方顆粒紅外光譜透過率波數cm-13390.892929.051622.391516.281406.021237.781153.051079.321023.93透過率%24.93041.80739.57652.76636.71343.06026.23922.07617.602波數cm-1937.83861.28762.13706.79610.63576.37526.75444.12415.14透過率%48.39855.95051.88449.77542.40641.17743.20949.33849.933[檢查]根據中國藥典2005年版一部附錄工C顆粒劑項下有關的各項規(guī)定進行。主要檢查重金屬、砷鹽和農藥殘留量等。[浸出物]照醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法(中國藥典2005年版一部附錄XA)測定。[功能與主治]同原藥典標準。[用法與用量]根據配方顆粒的用途。[注意][規(guī)格]根據配方顆粒的折算量。[貯藏]根據配方顆粒的穩(wěn)定性要求。[有效期]根據配方顆粒的穩(wěn)定性要求。1.3廣佛手配方顆粒質量標準研究1.3.7【名稱】廣佛手配方顆粒GuangfoshouPeifangkeli【來源】本品為蕓香科植物佛手CitrusmedicalL.var.sarcodactylisSwingle的干燥成熟果實制成的配方顆粒。符合廣佛手藥材質量標準項下的有關規(guī)定?！咎幏健繌V佛手4000g制成1000g【制法】廣佛手飲片4000g，加12倍量水煎煮兩次，每次2h，，合并濾液，離心除雜（3000r/min,30min）,濃縮至0.3g/mL，加乙醇調至含醇量50％，攪勻，靜置24h，離心分離出上清液，回收乙醇，濃縮到至密度1.10（60℃），加入藥材量15％的糊精，混勻，噴霧干燥，干壓制粒，制成1000g【性狀】本品為黃棕色顆粒，氣香，味微甜后苦。【鑒別】1薄層鑒別取本品粉末0.5g，無水乙醇10mL，超生處理20min，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取佛手對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。取對照品1mg，用1mL乙酸乙酯溶解制成對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－丙酮－氯仿（5：3：1）展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。在與對照品、對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。2HPLC指紋圖譜鑒別照《中華人民共和國藥典》2005年版一部高效液相色譜法（附錄ⅥD）測定。色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈：0.5％醋酸水梯度洗脫；檢測波長為290nm。供試品溶液的制備取本品1g，研細，加甲醇35mL，超聲15min，濾過，共3次，合并濾液，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10mL。測定法精密吸取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，測定，即得?！緳z查】應符合《中國藥典》2005版一部附錄顆粒劑項下的有關規(guī)定。【浸出物】照醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法（《中華人民共和國藥典》2005版一部附錄=10\*ROMANXA）測定，以70％乙醇作溶劑，不得少于40.0％【含量測定】照《中華人民共和國藥典》2005年版一部高效液相色譜法（附錄ⅥD）測定。色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇：水（65：35）為流動相；檢測波長為326nm。對照品溶液的制備精密稱取檸檬內酯對照品加甲醇制成每mL含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備取本品粉末1g，精密稱定，置三角瓶中，超聲10min使完全溶解，用乙酸乙酯萃取3次，每次15mL，合并乙酸乙酯層，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解定容至5mL。測定分別吸取對照品溶液與供試品溶液10μL，注入HPLC色譜儀，測定，即得。本品含檸檬內酯不得少于0.65mg/g。【功能主治】舒肝理氣，合胃止痛。用于肝胃氣滯，胸脅漲痛，胃脘痞滿，食少嘔吐?！居梅ㄓ昧俊抗┡浞接?，遵醫(yī)囑?！疽?guī)格】每袋4g，相當于飲片10g?！举A藏】密封，置陰涼干燥處?！居行凇咳?。1.4高良姜配方顆粒質量標準研究1.4.1【名稱】高良姜配方顆粒漢語拼音：GaoiangjiangPeifangkeli【來源】本品本品為姜科植物高良姜AlpiniaofficinarumHance的干燥根莖經加工制成的配方顆粒。飲片來源，廣東湛江?！九谥啤砍ルs質，洗凈，潤透，切薄片，曬干。。【制法】取高良姜飲片，提取揮發(fā)油，備用。藥渣加飲用水提取，濾過，濾液減壓濃縮，濃縮液加輔料適量，噴霧干燥，得干浸膏粉，加入揮發(fā)油，混勻，制粒，分裝，即得。【性狀】本品為淺紅色至淺棕紅色顆粒；氣微香，味辛?！捐b別】取本品粉末2g，加乙醚30ml，水浴回流30分鐘，濾過，濾液自然揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取高良姜對照藥材1g，加乙醚30ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-醋酸乙酯（10:4）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點?！緳z查】粒度照粒度測定法（中國藥典2005年版一部附錄ⅪB第二法，雙篩分法）測定，不能通過一號篩與能通過五號篩的總和，不得過15％。水分照水分測定法（中國藥典2005年版一部附錄ⅨH，第一法）測定，不得過6.0％。溶化性照（中國藥典2005年版一部附錄ⅠC項下有關規(guī)定）檢查，應全部溶化，允許有輕微渾濁，不得有焦屑。裝量差異照（中國藥典2005年版一部附錄ⅠC項下有關規(guī)定）檢查，應符合規(guī)定。標示裝量：0.5g；裝量差異限度：±10%（0.450g～0.550g）。微生物限度照微生物限度檢查法（中國藥典2005年版一部附錄XⅢC）檢查，應符合規(guī)定。細菌數應≤1000CFU/g霉菌、酵母菌總數應≤100CFU/g（控制菌）大腸埃希菌不得檢出/g【浸出物】照醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法（中國藥典2000年版一部附錄XA）測定，用70%乙醇作溶劑，不得少于17.0%?！竞繙y定】照高效液相色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄VID）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.4%磷酸（58：42）為流動相；流速：1.0ml/min；檢測波長：360nm；柱溫：常溫；理論板數按天麻素峰計算應不低于1500。對照品溶液的制備精密稱取高良姜素對照品一定量，加入甲醇，使成每1ml含高良姜素0.0522mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取良姜配方顆粒0.5g，精密稱定，加甲醇約60ml，索氏提取4個小時，收集甲醇液，容器用甲醇洗滌2次，洗脫液并入甲醇液中，蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45μl濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。測定法分別精密吸取制備的對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計算，每袋含高良姜素（C15H10O5）不得少于0.4mg?！拘晕杜c歸經】辛，熱。歸脾、胃經?！竟δ芘c主治】溫胃散寒，消食止痛。用于脘腹冷痛，胃寒嘔吐，噯氣吞酸?！居梅ㄅc用量】供配方用，遵醫(yī)囑。【規(guī)格】每袋裝0.5g，相當于6g飲片。【貯藏】密封，防潮?！居行凇咳?。1.5砂仁配方顆粒質量標準研究1.5.1SharenPeifangkeli【來源】本品為姜科植物陽春砂AmomumvillosumLour.的干燥成熟果實制成的配方顆粒?！九谥啤繎现袊幍?000年版一部第206頁砂仁【炮制】項下有關的規(guī)定。【制法】取砂仁飲片4280g，用超臨界二氧化碳萃取法提取揮發(fā)油；藥渣加水量8倍，煎煮1小時，煎煮3次，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.05～1.07（50℃）的清膏，噴霧干燥，加入適量糊精，混勻，制粒，干燥，噴入揮發(fā)油，混勻，制成1000g【性狀】本品為棕褐色顆粒；氣香，味辛涼、微苦。【鑒別】取本品粉末1g，置具塞試管中，加乙醚30ml，振搖，放置過夜，濾過，低溫揮干乙醚，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取砂仁對照藥材3g，加乙醚30ml，同法制成對照藥材溶液。再取醋酸龍腦酯對照品，加乙醇制成每1ml含10μl的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-醋酸乙酯（22:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點?！緳z查】本品應符合中國藥典2000年版一部附錄IC顆粒劑項下有關的各項規(guī)定?！窘鑫铩空沾既苄越鑫餃y定法項下的熱浸法（中國藥典2000年版一部附錄XA）測定，用70%乙醇作溶劑，不得少于34.0%。【功能與主治】化濕開胃，溫脾止瀉，理氣安胎。用于濕濁中阻，脘痞不饑，脾胃虛寒，嘔吐泄瀉，妊娠惡阻，胎動不安。【用法與用量】供配方用，遵醫(yī)囑?！疽?guī)格】每袋裝0.7g，相當于飲片3g?！举A藏】密封，置陰涼干燥處。【有效期】三年。1.6陳皮配方顆粒質量標準研究1.6.1【名稱】陳皮配方顆粒漢語拼音：ChenpiPeifangkeli【來源】本品本品為蕓香科植物橘CitrusreticulateBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮經加工制成的配方顆粒。飲片來源，廣東新會?！九谥啤砍ルs質，篩去灰屑。【制法】取陳皮飲片，提取揮發(fā)油，備用。藥渣加飲用水提取，濾過，濾液減壓濃縮，濃縮液加輔料適量，噴霧干燥，得干浸膏粉，加入揮發(fā)油，混勻，制粒，分裝，即得?！拘誀睢勘酒窞辄S白色顆粒；氣微，味辛、苦?！捐b別】取本品粉末0.3g，加甲醇10ml，加熱回流20分鐘，濾過，取濾液5ml，濃縮至約1ml，作為供試品溶液。另取陳皮對照藥材4g，加水50ml，煮沸30min，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加甲醇10ml，同法制成對照藥材溶液，再取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一用0.5％氫氧化鈉溶液制備的硅膠Ｇ薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)為展開劑，展開約3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上層溶液為展開劑，展至約8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點?！緳z查】粒度照粒度測定法（《中國藥典》2005年版一部附錄XIB第二法，雙篩分法）測定，不能通過一號篩與能通過五號篩的總和，不得過15%。水分照水分測定法（《中國藥典》2005年版一部附錄IXH第一法）測定，不得過6.0%。溶化性照（《中國藥典》2005年版一部附錄IC項下有關規(guī)定）檢查，應全部溶化，允許有輕微渾濁，不得有焦屑等異物。裝量差異照（《中國藥典》2005年版一部附錄IC項下有關規(guī)定）檢查，應符合規(guī)定。標示裝量1.0g裝量差異限度：±10%（0.900g~1.100g）。微生物限度照微生物限度檢查法（《中國藥典》2005年版一部附錄XIIIC）檢查，應符合規(guī)定。細菌數應≤1000CFU/g霉菌、酵母菌數應≤100CFU/g（控制菌）大腸埃希菌不得檢出/g【含量測定】照高效液相色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄VID）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇－醋酸－水（35：4：61）為流動相；流速：1.0ml/min；檢測波長：238nm；柱溫：常溫；理論板數按橙皮苷峰計算應不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末（過一號篩）約1.0g，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇80ml，超聲處理30min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液取續(xù)濾液，過0.45μm微孔濾膜，即得。測定法吸取制備的對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計算，每袋含橙皮苷（C28H34O15）不得少于6.8mg?！拘晕稓w經】苦、辛，溫。歸肺、脾經?！竟δ芘c主治】理氣健脾，燥濕化痰。用于胸脘脹滿，食少吐瀉，咳嗽痰多?！居梅ㄅc用量】供配方用，遵醫(yī)囑?！疽?guī)格】每袋裝1.0g，相當于飲片6g。【貯藏】密封，防潮?！居行凇咳辍＃ǘ?、研究結論首次建立了含揮發(fā)性成分為主的藥材配方顆粒制備工藝共性研究的模式，制備工藝也有質的提高。本課題是基本按照“中藥配方顆粒共性關鍵制劑技術及其產業(yè)化的研究實施方案”中的有關要求進行規(guī)范研究。完成了含揮發(fā)性成分為主的中藥配方顆粒的提取工藝和制備工藝研究、中試工藝研究以及制劑初步穩(wěn)定性研究，初擬了揮發(fā)性成分為主的中藥配方顆粒相關的共性制備工藝，提高了產品的質量，配方顆粒和藥材之間具有良好的相似性。研究結果具有一定的可行性。（三）、存在問題和分析藥材入選：本課題依據《中國藥典》2005年版一部相關品種項下藥材的基源規(guī)定，對兩個以上基源的藥典品種，結合藥材薄層色譜圖和市場流通情況，選擇符合相關規(guī)定的藥材作為試驗藥材的入選標準。工藝提?。簱]發(fā)油提取，以水蒸氣蒸餾法提??；水提取，以12倍量水、煎煮1小時、共3次。配方顆粒研究按照實施方案中要求：溶媒為水。但經進一步深入研究發(fā)現(xiàn)：藥材經水提取后藥渣里還存在部分低極性成分（為非揮發(fā)性成分），該成分是否有效有待進一步研究，若藥材醇提可將該部分成分提出，再水提，將兩部分提取物合并所得浸膏更接近藥材。但這會因增加醇提而帶來更大的投入和人力物力，增加了成本。值得深思。揮發(fā)油：采用N-LOK變性淀粉為囊材，對揮發(fā)油進行包合，制成微囊后在制粒后直接加入，以減少成分變化和損失。雖然，藥材受采收季節(jié)、貯藏時間等因素影響，其揮發(fā)油含量存在較大的差異，對于一些含揮發(fā)性成分含量較低的品種如何確定標準，揮發(fā)性成分量的多少對配方顆粒藥效作用的影響有待進一步研究。

第二部分含苷類成分的中藥配方顆粒共性關鍵制劑技術研究（一）飲片入選標準研究本課題收集大黃、何首烏、決明子、黃芪藥材飲片，經廣州中醫(yī)藥大學中藥學院黃海波副教授鑒定均為正品。依據2005年版《中國藥典》標準，對大黃、何首烏、決明子、黃芪飲片進行質量評價。以此為主要依據，結合國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《配方顆粒質量標準研究的技術要求》，完成大黃、何首烏、決明子、黃芪飲片入選標準的實驗研究。1大黃飲片入選標準實驗研究1.1儀器與試劑島津LC-10AT高效液相色譜儀；天美LC-2130高效液相色譜儀；WatersXtrraRPC18（4.6×250mm，5.0μm）色譜柱。1.2定性鑒別按《中國藥典》（2005年版Ⅰ部）大黃薄層鑒別項下要求對四川、甘肅、西藏三地大黃進行薄層鑒別，結果如見圖1-1：圖2-1大黃藥材TLC圖譜（展開劑：石油醚(30～60℃)—甲酸乙醋—(15：5：l)的上層溶液）（1～2西藏大黃3～4四川大黃5～6甘肅大黃7大黃酸對照品8大黃對照藥材）結論：四川大黃、西藏大黃、甘肅大黃等三個藥材供試品溶液與大黃酸對照品、大黃對照藥材溶液于365nm紫外燈下檢視在相應位置相同顏色的斑點，氨熏后斑點變?yōu)榧t色，西藏大黃比四川大黃及甘肅大黃斑點顏色略淺，四川大黃顏色最深斑點最明顯。1.3土大黃苷檢查按2005版《中國藥典》（Ⅰ部）大黃鑒別項下要求對四川、甘肅、西藏三個產地大黃進行紙色譜鑒別，結果如圖2-2。圖2-2土大黃苷檢查TLC圖（展開劑：45%乙醇）（1、3四川大黃；2、4甘肅大黃；3、6：西藏大黃）結論：于365nm紫外燈下觀察，四川大黃、甘肅大黃均無持久亮紫色熒光，未檢出土大黃苷，西藏產大黃顯持久亮紫色熒光，檢出土大黃苷，有能為偽品。1.4干燥失重取四川大黃、甘肅大黃、西藏大黃于105℃干燥6小時，其減失重量依次為：13.32％、13.84％、11.38％，符合2005版藥典要求（≤1.5浸出物按水溶性浸出物測定法項下的熱浸法(附錄XA)測定，四川大黃、甘肅大黃、西藏大黃水浸出物含量依次為39.01％、41.72％、46.50％，均達到2005版藥典水浸出物含量不得低于25.0％的要求。1.6含量測定按2005版中國藥典大黃含量測定項下要求對四川大黃、甘肅大黃、西藏大黃進行含量測定，所得5種蒽醌總含量依次為：2.85％、2.63％、1.71％，均達到藥典總量不少于1.5％的要求，四川大黃含量較高，且西藏大黃疑似偽品，故選擇四川大黃作為實驗藥材。2．何首烏飲片入選標準實驗研究2.1儀器與試劑何首烏飲片（廣州致信藥業(yè)有限公司）2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（中國藥品生物制品檢定所，批號110844-200606）；何首烏對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號120934-200608）；乙腈、甲醇為色譜純(Merck)；高效液相色譜儀:島津LC-10AT；檢測器:SPD-10Av；色譜柱:AgilentTC-C18(4.6mm×250mm5μm)；2.2薄層鑒別取何首烏藥材粉末0.25g，加乙醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液濃縮至約3ml，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材0.25g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上使成條狀，以苯－乙醇（2:1）為展開劑，展至約3.5cm，取出，晾干，再以苯－乙醇（4:1）為展開劑，展至約7cm，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光條斑；再噴以磷鉬酸硫酸溶液（取磷鉬酸2g，加水20ml使溶解，再緩緩加入硫酸30ml，搖勻），稍加熱，立即置紫外光燈（365nm）下檢視，結果見圖1-3，1-4。12341234圖2-3（1，3：供試品2，4對照藥材）圖2-4（1，3：供試品2，4對照藥材）結論：實驗所用何首烏藥材符合05版藥典鑒別項要求2.3含量測定二苯乙烯苷對照品及供試品HPLC圖見圖2-5，2-6。圖2-5對照品HPLC圖譜2圖2-6供試品HPLC圖譜結論：測得何首烏藥材中二苯乙烯苷的平均含量(n=3)為2.2%，符合2005版《中國藥典》標準要求。3．決明子飲片入選標準實驗研究按照《中華人民共和國藥典》2005版“藥材及飲片”項下“決明子”的要求進行了決明子生藥的顯色、TLC鑒別（大黃素和大黃酚）和HPLC測定決明子生藥中大黃酚的含量。3.1顯色鑒別顯色鑒別結果見圖2-7。圖2-7.決明子的顯色反應鑒別3.2薄層色譜鑒別薄層鑒別結果見圖1-8，1-9。1234567圖2-8決明子TLC圖譜（1，2，5，7決明子供試品3，4，6大黃素和大黃酚對照品（上為大黃酚，下為大黃素）1234567圖2-9決明子TLC圖譜（1，2，5，7為供試品，3，4，6為大黃素和大黃酚對照品（上為大黃酚，下為大黃素））3.3含量測定HPLC測定決明子生藥中大黃酚的含量大黃酚對照品的HPLC圖和決明子藥材的HPLC圖見圖2-10。圖2-10大黃酚對照品HPLC圖大黃酚大黃酚圖2-11決明子藥材（070820）HPLC圖大黃酚大黃酚圖2-12決明子藥材（071220）HPLC圖含量測定結果見表2-1，2-2。表2-1決明子(070820)中大黃酚的含量測定結果藥材W(g)供試品中大黃酚平均峰面積(Vs)大黃酚對照品平均峰面積(Vs)大黃酚含量（%）0.5049249339315996820.121%0.5079263219015996820.127%大黃酚含量平均值（%）0.124%表2-2.決明子(071220)中大黃酚的含量測定結果藥材W(g)供試品中大黃酚平均峰面積(Vs)大黃酚對照品平均峰面積(Vs)大黃酚含量（%）0.5036450836415996820.219%0.5042462078615996820.225%大黃酚含量平均值（%）0.222%結論：兩批決明子藥材中的大黃酚含量均大于藥典規(guī)定的0.080%的下限值，符合要求。4．黃芪飲片入選標準實驗研究4.1儀器與試藥CS-900薄層掃描儀(SHIMADZU)，紫外-可見分光光度計(SPECTRNICGENESY2)，黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110781-200613），葡萄糖（中國藥品生物制品檢定所，批號110833-200503），其余試劑均為分析純，D101型大孔樹脂（天津海光化工有限公司，批號080610），4.2黃芪薄層鑒別：取本品粉末3g，加甲醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液置于中性氧化鋁柱（100～120目，5g，內徑10～15nm）上，用40%甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次用量20ml；合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。照《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄ⅤⅠB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13：7：2）的下層溶液為展開溶劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105OC加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點；紫外光燈（365nm）下顯相同的橙黃色熒光斑點。取本品粉末2g，加乙醇30ml，加熱回流20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.3%氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調節(jié)PH值到5—6，用乙酸乙酯15ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有適量無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干。殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜發(fā)（附錄VIB）試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（10：1）作為展開溶劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。鑒別結果見圖2-13，2-14，2-15。12341234圖2-13日光，10％硫酸乙醇加熱顯色圖2-14366nm熒光5678圖2-15366nm熒光1～3黃芪供試品4黃芪甲苷對照品5～7黃芪供試品8黃芪對照藥材4.3水溶性浸出物測定取黃芪粗粉約4g，精密稱定，置250ml的錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6小時內時時振搖，再靜置18小時，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃表2-3水溶性浸出物測定結果樣品編號樣品重（g）浸出物重（g）含量（％）13.99401.440136.4524.09731.499635.8734.01031.444836.0343.98791.428035.8154.06111.442835.5364.03221.537636.65結論：水溶性浸出物平均含量為36.06％（RSD=1.1%）。4.4黃芪甲苷的含量測定取本品中粉約4g，精稱，置圓底燒瓶中，加甲醇40ml，冷浸過夜，加熱回流4h，提取液、回收溶劑等濃縮至干，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，30ml/次，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，放冷，通過D-101型大孔吸附樹脂柱（內徑1.5cm，長12cm），以水70ml洗脫，棄去水液，再用70%乙醇80ml洗脫收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得。測定結果見表1-4。表2-4含量測定結果樣品編號12345黃芪甲苷含量（mg/g）0.580.560.530.540.56結論：黃芪甲苷平均含量為0.55mg/g,RSD為3.5％。黃芪甲苷的含量測定方法有薄層掃描法（TLCS）和高效液相色譜法(HPLC)。高效液相色譜法測黃芪甲苷的含量所用的檢測器有紫外檢測器和蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)，黃芪甲苷最大吸收波長在205nm左右，用紫外檢測器檢測時干擾較大，所得圖譜基線易飄移，重現(xiàn)性差，蒸發(fā)光散射檢測器為《中國藥典》2005年版一部收載的黃芪甲苷含量測定方法所用，但是蒸發(fā)光散射檢測器價格昂貴，使用成本較高，在企業(yè)應用還不普遍，考慮成本及企業(yè)要求，本研究選擇薄層掃描法測定黃芪原料藥材中黃芪甲苷的含量。本研究對薄層掃描法及高效液相色譜法（見圖譜）進行了比較，結果是兩方法對供試品溶液中的黃芪甲苷都有較好的分離度，可以用作定量分析，準確測定黃芪甲苷的含量。黃芪藥材中，黃芪總皂苷和多糖的通常難以同時有較高的含量，生長年限較短的黃芪所含皂苷含量會較低而多糖含量較高，隨年限增長，其皂苷類成分會積累，含量會逐漸增大，而多糖經一定年限含量會有所減少。《中國藥典》2005年版一部規(guī)定黃芪的含量檢測項目為黃芪甲苷，本實驗對所用黃芪飲片進行的質量檢查即參照藥典的規(guī)定進行。圖2-16黃芪甲苷對照品（進樣量10μl）圖2-17黃芪甲苷對照品（進樣量20μl）圖2-18黃芪供試品溶液（進樣量20μl）（二）提取工藝研究1．大黃提取工藝研究1.1大黃水提正交試驗取大黃藥材,按上述表格，加水適量,浸泡一定時間,加熱煎煮數次,沸后保持微沸一定時間,過濾,合并煎出液,減壓濃縮至一定量,于80℃烘箱中烘干至恒重,取出,置干燥器中過夜,稱量,計算干膏率,并對其進行HPLC含量分析（蘆薈大黃素，大黃酸，大黃素，大黃酚，大黃素甲醚）。分別取各干膏約為0.1g表2-5大黃水提正交試驗因素水平表因素水平A加水量/倍B回流時間／hC浸泡時間／hD提取次數／次18101210212312323以總蒽醌含量為評價指標，正交試驗直觀分析結果見表2-6，方差分析結果見表2-3。表2-6直觀分析表（以總蒽醌提取量為評價指標）試驗號ABCDy11y12y13總蒽醌含量

（mg/ml）111112.355681.479071.583045.42212222.651922.084212.681077.41313331.952273.961963.229899.14421233.354623.635373.8869910.88522312.066962.248622.464976.78623121.456451.052972.844055.35731323.984743.570473.6955411.25833211.69522.075631.632615.40932131.686581.285782.433675.40K1121.979127.545516.177317.6018G=67.05034K1223.01119.603823.697624.0214CT=166.5092K1322.060219.90127.175425.4271SS總＝21.0919K11^2483.081758.756261.705309.823f總=26K12^2529.506384.308561.577577.028SS總1＝15.46692K13^2486.654396.051738.504646.54f總1=8R11499.241539.121561.791533.39SSe2=5.624984SS10.073164.503627.022573.86756fe2=18表2-7方差分析（以總蒽醌提取量為評價指標）方差來源離差平方和自由度方差F值P值A0.073220.03660.1171P>0.05B4.503622.25187.2058P<0.01C7.022623.511311.2361P<0.01D3.867621.93386.1881P<0.01誤差SSe25.625180.3125F0.05(2.18)=3.55F0.01(2.18)=6.01以干膏量為評價指標，正交試驗直觀分析結果見表2-8，方差分析結果見表2-9。表2-8直觀分析表（以干膏量為評價指標）試驗號ABCDy21y22y23得膏率（％）1111133.439336.737633.0668103.24372122249.580849.469251.5572150.60723133352.38365.639255.5782173.60054212356.548156.221556.9201169.68975223135.451232.093834.0071101.55216231252.241255.169356.873164.28357313249.437248.511949.895147.84418332151.426453.098153.0186157.54319321339.200934.692440.3389114.2321K21427.451420.778381.759362.339G=1282.596K22435.525366.391477.84462.735CT=60927.86K23419.619495.427422.997457.522SS總＝2316.969K21^2182715177054145740131289f總=26K22^2189682134243228331214123SS總1＝2172.826K23^2176080245448178926209327f總1=8R2548477556744552997554740SSe2=144.1429SS214.0566932.615516.288709.866fe2=18表2-9方差分析表（以干膏量為評價指標）方差來源離差平方和自由度方差F值P值A14.056627.02830.8777P>0.05B932.6152466.307558.2306P<0.01C516.28792258.143932.236P<0.01D誤差SSe2709.8664144.1429218354.93328.007944.3227P<0.01F0.05(2.18)=3.55F0.01(2.18)=6.01從方差分析來看，以蒽醌量為指標可知，以蒽醌總量為指標B、C、D對蒽醌總量有顯著差異，影響大小為C>B>D>A；以干膏量為指標B、C、D對干膏量有顯著差異，影響大小為B>D>C>A，故綜合蒽醌量和干膏量分析，則最佳提取工藝為A2B1C3D3從直觀分析來看，加水量以10倍較好，回流時間以1小時較好；浸泡時間以2小時較好；提取次數以3次較好。和方差分析結果一樣。從整個實驗的結果來看，回流的時間還可以再考察10分鐘，20分鐘，30分鐘，40分鐘和50分鐘，煎煮的時間短，大黃中蒽醌類成分會保留的更多。方差分析及直觀分析結果表明，大黃藥材的最佳水提工藝為加10倍量水浸泡藥材2小時，加熱回流提取3次，每次1小時。驗證實驗取同一批次四川大黃藥材，按照最佳提取工藝（10倍量水、浸泡2小時、回流1h、提取3次）平行提取5份，過濾，合并煎出液，水浴濃縮至干，于60℃～80℃烘箱中烘干至恒重，取出，置干燥器中冷卻，稱量，計算干膏率，按上述供試品制備方法制成供試品溶液，進行HPLC測定干膏中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量。所得總蒽醌平均含量為5.7299mg/g，干膏率平均為43.05221.2乙醇提取正交實驗1.2.1單因素考察取10目的大黃粉末約5g，精密稱定，加入60％乙醇10倍藥材量，分別于水浴50℃、60℃、70℃、80℃、100℃取10目、20目、60目、80目、100目、200目的大黃粉末約5g，精密稱定，加入60％乙醇10倍藥材量，于水浴100℃加熱回流1h，濾過，濾液蒸干，于烘箱中60～80℃取10目的大黃粉末約5g，精密稱定，加入10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％乙醇各10倍藥材量，回流提取1h，濾過，濾液蒸干，于烘箱中60～80℃烘至恒重，取出，置干燥器中冷卻，稱量，得干膏，UV法測定總蒽醌，。結論：試驗結果表明，取粒度為10目的大黃粉末，在100℃條件下提取，總蒽醌及結合型蒽醌的含量較大，故提取溫度定為100圖2-19提取溫度考察圖2-20粒度考察圖2-21濃度考察1.2.2正交試驗考察取大黃藥材,按上述表格，加不同濃度乙醇適量，加熱回流2次，沸后保持微沸一定時間，過濾，合并煎出液，水浴濃縮至干，于60℃～80℃烘箱中烘干至恒重，取出，置干燥器中冷卻，稱量，計算干膏率，按紫外及高效液相供試品制備方法制成相應供試品溶液，進行HPLC及UV測定干膏中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量及總蒽醌、游離蒽醌、結合蒽醌含量。試驗結果以有重復試驗的方差分析方法分析。以每克藥材含有的五種蒽醌總量的毫克數為指標，每個試驗號平行2份，總自由度v總=2×表2-10大黃顆粒醇提取正交試驗因素水平表因素水平A乙醇濃度(％)B回流時間(h)C浸泡時間(h)D加醇量(倍5112370228以總蒽醌含量為評價指標，醇提正交試驗直觀分析結果見表2-11，方差分析結果見表2-12。表2-11正交試驗總蒽醌測定結果試驗號A乙醇B回流C浸泡D加醇a總蒽醌b游離蒽醌c結合蒽d干膏濃度(%)時間(h)時間(h)量(倍)(mg/g)(mg/g)醌(mg/g)得率(%)1111124.1516.617.5567.992122228.2416.4011.8466.353133323.1717.275.9069.414212326.3216.949.3871.705223132.8824.598.2967.426231230.7925.285.5168.947313232.7915.6117.1770.538321334.5622.1012.4564.829332129.8221.987.8463.25Ka175.5683.2689.5086.86Ka277.7395.6884.3891.81Ka382.3783.7888.8384.04Ra6.8012.425.117.77Kb150.2749.1563.9963.17Kb266.8063.0955.3157.29Kb359.6964.5257.4656.31Rb16.5315.378.686.87Kc125.2934.2025.5023.68Kc227.1332.5929.0734.52Kc323.5819.2531.3727.74Rc3.5514.855.8610.84Kd1203.75210.22201.75198.65Kd2207.47198.59201.30205.82Kd3208.53201.60201.65205.94Rd4.783.010.497.29*總蒽醌量、游離蒽醌量、結合蒽醌量、干膏得率均為兩次之和。表2-12大黃總蒽醌方差分析方差來源離差平方和自由度方差F值P值顯著性A744.972372.49237.08P<0.01**B16.4528.225.23P<0.05*C2.5821.290.82P>0.05D5.1522.581.64P>0.05誤差14.1491.57表2-12大黃游離蒽醌方差分析方差來源 離差平方和 自由度 方差 F值 P值 顯著性A 22.92 2 11.46 5.38 P<0.05 *B 24.03 2 12.015.64 P<0.05 *C 6.81 2 3.41 1.60 P>0.05 D 4.60 2 2.301.08 P>0.05 誤差E 19.17 9 2.13 表2-14結合蒽醌方差分析方差來源 離差平方和 自由度 方差 F值 P值 顯著性A 88.42 2 44.21 11.96 P<0.05 *B 22.25 2 11.13 3.01 P>0.05 C 2.91 2 1.45 0.39P>0.05 D 10.00 2 5.001.35 P>0.05 誤差E 33.28 9 3.70 表2-15干膏得率方差分析方差來源 離差平方和 自由度 方差 F值 P值 顯著性A 640.86 2 320.43 60.39 P<0.01 **B 12.15 2 6.08 1.15 P>0.05 C 385.19 2 192.60 36.30 P<0.01 **D 5.81 2 2.91 0.55 P>0.05 誤差E 47.75 9 5.31 F0.01(2.9)=8.02,F0.05(2.9)=4.26,F0.10(2.9)=3.01結論：根據紫外分析結果，結合總蒽醌、結合蒽醌、游離蒽醌及干膏得率四個指標數據顯示最佳醇提工藝為以提取次數為2次的前提下，加入12倍藥材量體積60％乙醇，不浸泡，加熱回流0.5小時，提取次數3次比2次所得蒽醌量要大，但3次以后蒽醌量變換不明顯，在最佳工藝中選擇提取次數為3次較好。1.2.3高效液相測定結果分析表2-16大黃乙醇提取工藝試驗與結果試驗號ABCD試驗指標乙醇濃度(％)回流時間(h)浸泡時間(h)加醇量（倍）總蒽醌(mg/g)*1111126.742122230.423133327.194212330.965223133.606231234.967313232.658321331.369332130.52K184.3490.3593.0690.86K299.5195.3791.9098.02K394.5392.6793.4389.51R15.175.031.548.52表2-17總蒽醌方差分析方差來源 離差平方和 自由度 方差 F值 P值 顯著性A 19.92 2 9.96 41.89 P<0.01 **B 2.112 1.05 4.44 P<0.05 *C 0.21 2 0.11 0.45 P>0.05D 6.99 2 3.49 14.69 P<0.01 **誤差E 2.14 9 0.24F0.01(2.9)=8.02,F0.05(2.9)=4.26,F0.10(2.9)=3.01結論：從方差分析與直觀分析看，高效液相測定醇提正交最佳工藝以提取2次為前提是12倍藥材量體積60％乙醇，回流提取0.5個小時，浸泡2小時。從直觀分析看浸泡2小時與無浸泡所得蒽醌總量差別不大，且方差分析表明C因素浸泡對蒽醌總量提取無顯著性差異。綜合紫外與高效液相測定結果，則醇提最佳工藝為12倍藥材量體積60％乙醇，回流提取0.5個小時，無浸泡，提取次數為2次。1.2.4提取次數考察取過10目的大黃藥材粉末各5g，按最佳醇提工藝要求，如下進行試驗：表2-18提取次數考察提取次數總蒽醌量(mg/g）五種蒽醌總量(mg/g)醇提2次18.5916.53醇提3次26.3024.17醇提2次水提2次23.7119.48根據所得結果醇提3次蒽醌提取率較高，故選擇提取3次做為最佳提取工藝的提取次數。1.2.5驗證試驗取大黃藥材適量，按最佳提取工藝提取3次，平行5份，所得總蒽醌量為20.65mg/g、21.09mg/g、20.87mg/g、21.24mg/g、21.63mg/g；平均含量為21.10mg/g，RSD為1.8%。圖2-22大黃蒽醌對照品高效液相色譜圖（A蘆薈大黃素B大黃素C大黃酸D大黃酚E大黃素甲醚）圖2-23大黃最佳工藝高效液相色譜圖（A蘆薈大黃素B大黃素C大黃酸D大黃酚E大黃素甲醚）2．何首烏提取工藝研究2.1水提、醇提正交試驗根據預試驗結果，采用L9(34)正交表進行實驗。正交因素水平表見表2-14，2-15。表2-19水提因素水平表水平A加水倍量B回流時間C浸泡時間D提取次數18101210212312323表2-20醇提因素水平表水平A乙醇濃度(%)B回流時間(h)C加醇量(倍)D提取次數(次)1201812501.51023802123水提、醇提正交試驗結果見表2-21,色譜圖見圖2-24。表2-21正交各實驗出膏率，二苯乙烯苷轉移率結果表水提醇提No.二苯乙烯苷

測定結果(mg/g)二苯乙烯苷轉移率（％）平均出膏率(%)二苯乙烯苷

測定結果(mg/g)二苯乙烯苷轉移率/%平均出膏率(%)15.1623.623.25.5625.414.9210.2446.834.615.7672.024.4311.0150.348.816.7676.627.5413.1760.238.018.7785.825.558.7139.827.110.5248.119.6614.4466.041.312.3356.423.8714.4065.831.011.2051.220.1815.3270.044.98.9841.122.8911.6853.432.19.2842.417.4213213圖2-241.對照品HPLC圖譜2.水提供試品HPLC圖譜3.醇提供試品HPLC圖譜水提正交工藝直觀及方差分析結果分別見表2-22，2-23。表2-21直觀分析表（水提工藝）指標

A

B

C

D出膏率

均值1

35.533

30.733

36.467

27.467

均值2

35.467

35.533

34.900

35.633

均值3

36.000

40.733

35.633

43.900

直觀

0.533

10.000

1.5670

16.433轉移率

均值1

40.233

49.867

53.200

38.933

均值2

55.333

52.200

53.467

59.533

均值3

63.067

56.567

51.967

60.167

直觀

22.834

6.700

1.500

21.234表2-22方差分析表（水提工藝）指標方差來源SS自由度

F比P出膏率

A

0.4762

1.000P>0.05

B

150.9802

317.185P<0.05

C

3.6392

7.645P>0.05

D

406.2372

853.439P<0.05轉移率A809.1762210.613P<0.05B69.402218.064P>0.05C3.84221.000P>0.05D875.6162227.906P<0.05水提工藝正交實驗數據直觀分析結果表明：各因素對何首烏水提出膏率影響大小依次為D>B>C>A，對二苯乙烯苷轉移率的影響大小依次為A>D>B>C。方差分析結果表明：因素B、D對出膏率存在顯著性差異，因素A、D對二苯乙烯苷轉移率存在顯著性差異。結合直觀分析及方差分析結果，何首烏最佳水提工藝應為A3B3C1D3，即，加12倍量水提取3次，每次3小時（藥材不用浸泡）。醇提正交工藝直觀及方差分析結果分別見表2-23，2-24。表2-23醇提正交試驗直觀分析表（醇提工藝）指標ABCD出膏率均值10.2230.2020.2060.173均值20.2310.2230.2240.229均值30.2010.2300.2240.253直觀0.0300.0280.0180.080轉移率均值10.5800.5410.4090.386均值20.6340.5370.6670.598均值30.4490.5840.5860.678直觀0.1850.0470.2580.292表2-24醇提正交試驗方差分析表（醇提工藝）指標方差來源SS自由度F比P出膏率A14.13622.141P>0.1B12.97621.965P>0.1C6.60221.000P>0.1D100.216215.180P<0.1轉移率A543.020213.329P>0.05B40.74021.000P>0.05C1044.540225.639P<0.05D1366.080233.532P<0.05醇提工藝正交實驗數據直觀分析結果表明：各因素對出膏率的影響依次為D>A>B>C，對二苯乙烯苷轉移率的影響依次為D>C>A>B。方差分析結果表明：因素D對出膏率有顯著性影響，因素C、D對二苯乙烯苷轉移率有顯著性影響。何首烏中的有效成分主要為二苯乙烯苷，其轉移率的高低直接反映提取效果，因此確定何首烏的最佳醇提工藝為A1B1C2D3，即加10倍量20％的醇，提取3次,每次1小時。水提驗證實驗平均得膏率為32.73%，二苯乙烯苷平均轉移率為80.67%。醇提驗證實驗驗平均出膏率為25.08%，二苯乙烯苷轉移率分別為91.19%。證明所優(yōu)選的水提、醇提工藝提取效果較好。2.2不同水提工藝對何首烏蒽醌含量的影響取何首烏粗粉5g，精密稱定。按正交表（表2-25）安排試驗。所得提取液經200目濾布抽濾。濾液置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿，置水浴上濃縮至干。置60℃烘箱烘干至恒重，即得。分別取各干膏約為0.1g表2-25水提正交試驗因素水平表水平A加水倍量B回流時間C浸泡時間D提取次數181012102123123232.2.1總蒽醌前處理方法取相當于0.5g何首烏藥材的干膏，加水25ml，超聲處理15min使溶解，加乙醚30ml超聲處理10min，放置15分鐘，分液，乙醚層待用。水層加2.5mol硫酸30ml及乙醚30ml回流提取1小時，分液，取乙醚層，酸液層用乙醚洗3次，每次20ml，合并乙醚層，減壓回流至干，加0.5％醋酸鎂甲醇溶解，定容至50ml，取2ml定容至25毫升，于520nm測定其吸