中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)課件

藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)

第二講中藥藥理研究的基本知識（2）第三節(jié)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)1主要內(nèi)容五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理一、基本原則二、實(shí)驗(yàn)對象

三、效應(yīng)指標(biāo)四、劑量設(shè)計(jì)主要內(nèi)容五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理一、基本原則二、實(shí)驗(yàn)對象三、效應(yīng)2一基本原則

對照原則隨機(jī)原則重復(fù)原則一基本原則

對照原則3（一）、對照原則常用的對照形式：（1）組間對照（2）自身對照（3）配對對照（一）、對照原則常用的對照形式：4（1）組間對照①正常對照組（空白對照、陰性對照、溶媒對照）；假手術(shù)對照組②模型對照組③陽性對照組陽性對照意義：①檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)體系是否可靠②粗略估計(jì)受試藥與對照藥相比，作用強(qiáng)度與特點(diǎn)上有哪些差異。

（1）組間對照5（2）自身對照

觀察同一個體給藥前、后的區(qū)別。被檢藥物和陽性藥在同一個體上的作用比較。（3）配對對照

差異最小的兩個個體配成一對，一個給予受試藥，一個給予對照藥。（2）自身對照6（二）、隨機(jī)原則

目的：（1）避免非研究因素影響。（2）除研究因素外，提高各比較組的其他因素的均衡性、可比性。（二）、隨機(jī)原則7隨機(jī)分組的方法：（1）抽簽隨機(jī)法：

例：30只小鼠，要求隨機(jī)分為3組：可先將30只小鼠按1至30編號，做1-30號簽，充分混合號簽后，隨機(jī)各取10枚為一組。

隨機(jī)分組的方法：8（2）隨機(jī)數(shù)字表法（或隨機(jī)排列表法）：

15只小鼠，要求隨機(jī)分為3組.在隨機(jī)數(shù)字表中確定某個數(shù)字開始，隨機(jī)選取數(shù)字方向，得到一組隨機(jī)數(shù)字，除以組數(shù)，得到余數(shù)，根據(jù)余數(shù)編組：（2）隨機(jī)數(shù)字表法（或隨機(jī)排列表法）：9順序號:A組：1，9，12，13，15B組:2，3，5，7，10，11C組：4，6，8，14按原隨機(jī)數(shù)字順序繼續(xù)抄一隨機(jī)號:08除以6余數(shù):2,將B組第二只，即3號小鼠編入C組。調(diào)整后各組的編號:A組：1，9，12，13，15B組：2，5，7，10，11C組:3，4，6，8，14

順序號:10練習(xí)：

20個小鼠，根據(jù)下例隨機(jī)數(shù)順序，將其隨機(jī)分成4組。取隨機(jī)數(shù)字表中隨機(jī)號：22176865816895239235870222575161094395065824820347練習(xí)：11鼠號：12345678910隨機(jī)號：22176865816895239235除以4余數(shù)：2101103303鼠號：11121314151617181920隨機(jī)號：87022257516109439506除以4余數(shù)：3221311332隨機(jī)號（備用）：5824820347鼠號：12345612根據(jù)余數(shù)分組鼠號：A組（余數(shù)1）：245141617B組（余數(shù)2）：1121320C組（余數(shù)3）：781011151819D組（余數(shù)0）：369隨機(jī)號（備用）：582482034758/6余數(shù)為4，即A組第4個動物（14號）編入B組。根據(jù)余數(shù)分組鼠號：13根據(jù)余數(shù)分組鼠號：A組：2451617B組：112132014C組：781011151819D組：369隨機(jī)號（備用）：582482034724/7余數(shù)為3，即C組第3個動物（10號）編入D組。根據(jù)余數(shù)分組鼠號：14根據(jù)余數(shù)分組鼠號：A組：2451617B組：112132014C組：7811151819D組：36910隨機(jī)號（備用）：582482034782/6余數(shù)為4，即C組第4個動物（15號）編入D組。根據(jù)余數(shù)分組鼠號：15調(diào)整后隨機(jī)分組的結(jié)果為（按動物號）：A組：2451617B組：112132014C組：78111819D組：3691015調(diào)整后隨機(jī)分組的結(jié)果為（按動物號）：16學(xué)生練習(xí)題一30個小鼠，根據(jù)下例隨機(jī)數(shù)順序，將其隨機(jī)分成5組。取隨機(jī)數(shù)字：3756081809775384464731911895582416741153101385576165616866274739198483700748學(xué)生練習(xí)題一30個小鼠，根據(jù)下例隨機(jī)數(shù)順序，將其隨機(jī)分成17（3）分層隨機(jī)先將需嚴(yán)格控制的主要因素，如性別、體重等分為不同類別，或?qū)哟?；在每一類別或?qū)哟沃蟹謩e隨機(jī)分成一定組。將每一類別或?qū)哟坞S機(jī)分成的組,組次相同的分別合并。（3）分層隨機(jī)先將需嚴(yán)格控制的主要因素，如性別、體重等分為不18（三）、重復(fù)原則目的：驗(yàn)證在類似的條件是否可獲得結(jié)果的重現(xiàn)以及結(jié)果的變異情況。要點(diǎn)：A.確定適當(dāng)?shù)臉颖緮?shù)。B.各組動物數(shù)目盡量相同。按動物類型確定樣本數(shù)：（1）小動物：計(jì)量≥10例;計(jì)數(shù)≥20-30例（2）中等動物：計(jì)量≥8例;計(jì)數(shù)≥20例（3）大動物：5-6≥例（三）、重復(fù)原則19二、實(shí)驗(yàn)對象

(一)、受試動物1、按要求選擇不同級別符合醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的動物一級：普通動物（亦稱常規(guī)動物或無疾病的動物）；二級：清潔動物（飼養(yǎng)在溫度恒定，普通設(shè)施中的動物，飼料、墊料，用具均經(jīng)過高壓消毒）；二、實(shí)驗(yàn)對象(一)、受試動物20三級：無特殊病原體動物（specific-pathogenfree,簡稱SPF動物）；在清潔級基礎(chǔ)上還需不帶干擾實(shí)驗(yàn)的微生物，在隔離室或?qū)恿魇绎曫B(yǎng)。四級：無菌動物（機(jī)體內(nèi)外均無任何寄生蟲的動物，一般是臨產(chǎn)前按無菌手術(shù)剖腹取出胎仔，在無菌條件下用無菌飼料繁養(yǎng)獲得的動物）。三級：無特殊病原體動物（specific-pathogen212、根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇敏感種系（不同種屬動物對藥物敏感性、藥物代謝動力學(xué)不同）原則:選擇對藥物的反應(yīng)與人體相近的種系。

熱源實(shí)驗(yàn)：家兔，對熱敏感性高。測定膽汁流量：大鼠，無膽囊，可以膽管插管。心血管系統(tǒng):大鼠、貓、犬等。嘔吐實(shí)驗(yàn)：鴿、貓或狗等?？鼓[瘤實(shí)驗(yàn)：裸鼠，免疫功能缺陷。

過敏試驗(yàn)：豚鼠敏感。

2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇敏感種系22組織胺：可引起豚鼠哮喘的發(fā)生，但對家兔引起的是血管的收縮和右心室功能的衰竭。苯：家兔：白細(xì)胞減少及造血器官發(fā)育不全；犬：白細(xì)胞增多，脾臟和淋巴結(jié)增生。組織胺：可引起豚鼠哮喘的發(fā)生，但對家兔引起的是血管的收縮和右233、性別：根據(jù)要求選擇

用一種性別比兩種性別兼用所得結(jié)果離散度較小。通常優(yōu)選雄性或雌雄各半。

4、年齡體重

每批動物的體重，年齡越接近越好

通常：小鼠:18-22g，大鼠:200±25g，豚鼠:250-300g，兔、貓:1.5-2Kg,犬:10-15kg。大鼠、小鼠:6-8周齡

3、性別：根據(jù)要求選擇245、數(shù)量

計(jì)量研究：小鼠每組≥10只大鼠每組≥8只豚鼠或兔每組≥6只豬或犬≥5只計(jì)數(shù)研究：大、小鼠每組≥20-30只6、習(xí)性:

小鼠、大鼠均為群居動物，不宜單獨(dú)飼養(yǎng)。

5、數(shù)量6、習(xí)性:257實(shí)驗(yàn)條件控制

時辰：動物生理活動有其晝夜節(jié)律，如小鼠夜間活動增加，白天活動減少。最好每批實(shí)驗(yàn)在每天相同的時間測定。環(huán)境溫度：室溫穩(wěn)定、適宜。飲食：有些實(shí)驗(yàn)需對動物禁食。適應(yīng)：3－7天。7實(shí)驗(yàn)條件控制時辰：動物生理活動有其晝夜節(jié)律，如小鼠夜間26（二）受試藥

1.制備情況（1）新藥受試藥要求：用處方固定，質(zhì)量穩(wěn)定、工藝、質(zhì)控指標(biāo)恒定后的中試產(chǎn)品。（2）一般受試中藥：生藥經(jīng)鑒定，科屬種清楚；提取制備工藝明確，含量確定。（3）單體：化學(xué)結(jié)構(gòu)式清楚。（4）在注射給藥或離體試驗(yàn)時應(yīng)注意藥物中雜質(zhì)、不溶物質(zhì)、無機(jī)離子及酸堿度等因素對實(shí)驗(yàn)的干擾。（二）受試藥1.制備情況272、給藥途徑

實(shí)驗(yàn)的給藥途徑與臨床擬使用的途徑一致。

中藥粗制劑一般不用注射給藥或體外實(shí)驗(yàn)的方法檢測藥物效應(yīng)。2、給藥途徑實(shí)驗(yàn)的給藥途徑與臨床擬使用的途徑一致。283、給藥時間及次數(shù)最好每日固定同一個時間給藥。急性實(shí)驗(yàn)通常也需連續(xù)給藥3-5天以上。預(yù)防性給藥：治療給藥：3、給藥時間及次數(shù)最好每日固定同一個時間給藥。294對照藥

①合法性：《中國藥典》收載或符合部頒標(biāo)準(zhǔn)，或新批準(zhǔn)合法生產(chǎn)的藥物。②可比性：其功用、主治、劑型（給藥途徑）與受試藥相似。特殊情況下，在合理范圍內(nèi)可適當(dāng)靈活掌握。③擇優(yōu)選用：有多種同類藥可供選用時，應(yīng)擇優(yōu)選用公認(rèn)療效較好的藥物。4對照藥①合法性：《中國藥典》收載或符合部頒標(biāo)準(zhǔn)，30三、效應(yīng)指標(biāo)

觀測指標(biāo)應(yīng)選用特異性強(qiáng)、敏感性高、重現(xiàn)性好，客觀、定量或半定量的指標(biāo)進(jìn)行觀測。

三、效應(yīng)指標(biāo)

觀測指標(biāo)應(yīng)選用特異性強(qiáng)、敏感性高、31四、劑量設(shè)計(jì)劑量的表示方法：g/kg,mg/kg,ml/kg,（中藥）g生藥/kg例如：1、取50g遠(yuǎn)志，水提濃縮后為50ml。灌胃給予小鼠，給藥容量為0.2ml/10g體重，計(jì)算遠(yuǎn)志的給藥劑量。2、100%大黃水煎液，灌胃給予大鼠，給藥容量1ml/100g體重，計(jì)算大黃的給藥劑量。四、劑量設(shè)計(jì)劑量的表示方法：g/kg,mg/kg,ml/32劑量組數(shù)：新藥研究至少設(shè)3個劑量組。三者最好成等比，能反應(yīng)量效關(guān)系。給藥容量相等，濃度不等。

合理選擇劑量：（1）參考LD50：在LD50的1/10、1/20、1/40等范圍內(nèi)設(shè)置高、中、低劑量組。（2）根據(jù)臨床用藥等效量計(jì)算

劑量組數(shù)：新藥研究至少設(shè)3個劑量組。33不同種類動物等效用藥量的計(jì)算p191

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠400g兔1.5kg貓2.0kg猴4.0kg狗12.0kg人70.0kg小白鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9大白鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0豚鼠400g0.080.571.02.252.45.210.231.5兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2貓2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1人70.0kg0.00250.0180.0310.070.0780.160.321.0不同種類動物等效用藥量的計(jì)算p191

小白鼠20g大白鼠2034應(yīng)用舉例：①某復(fù)方的總藥量是70g/劑，每天1劑。按實(shí)驗(yàn)動物與人用藥量折算表計(jì)算，200g重大鼠等效量是多少？答：200g重大鼠等效量為：70g×0.018=1.26g/只

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠400g兔1.5kg貓2.0kg猴4.0kg狗12.0kg人70.0kg小白鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9大白鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0豚鼠400g0.080.571.02.252.45.210.231.5兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2貓2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1人70.0kg0.00250.0180.0310.070.0780.160.321.0應(yīng)用舉例：①某復(fù)方的總藥量是70g/劑，每天1劑。按實(shí)驗(yàn)動物35人的每公斤體重給藥量為：70g÷70=1g/kg。大鼠每公斤的給藥量是：1.26g×1000/200=6.3g/kg按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，大鼠的劑量應(yīng)為人用劑量的6.3g/kg÷1g/kg=6.3（倍）。

人的每公斤體重給藥量為：70g÷70=1g/kg。36不同種類動物等效用藥量的計(jì)算

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠400g兔1.5kg貓2.0kg猴4.0kg狗12.0kg人70.0kg小白鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9大白鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0豚鼠400g0.080.571.02.252.45.210.231.5兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2貓2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1人70.0kg0.00250.0180.0310.070.0780.160.321.0不同種類動物等效用藥量的計(jì)算

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠37②如同一復(fù)方要用小鼠實(shí)驗(yàn)，小鼠每只的給藥量為：70×0.0025＝0.175g/只；0.175÷20/1000=8.75g/kg；按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，小鼠的劑量應(yīng)為人用劑量的8.75g/kg÷1g/kg=8.75（倍）。②如同一復(fù)方要用小鼠實(shí)驗(yàn)，小鼠每只的給藥量為：38③豚鼠應(yīng)用量為70×0.031=2.17g/只；2.17÷400/1000=5.425g/kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，豚鼠的劑量為人用量的5.425÷1＝5.425（倍）。③豚鼠應(yīng)用量為70×0.031=2.17g/只；39④兔：70×0.07＝4.9g/只；4.9÷1.5＝3.27g/kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，兔的劑量應(yīng)為人用量的3.27÷1＝3.27（倍）。④兔：70×0.07＝4.9g/只；40⑤狗用量為70g×0.32＝22.4g/只；22.4÷12=1.87g/kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，狗的給藥量應(yīng)為人的1.87÷1＝1.87（倍）⑤狗用量為70g×0.32＝22.4g/只；22.4÷12=41中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)課件42中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)課件43不同種類動物間用藥劑量換算表

（轉(zhuǎn)換因子計(jì)算法）某利尿中藥,250g重大鼠的有效量為250mg/kg，試計(jì)算15kg犬的等效實(shí)驗(yàn)劑量？犬的等效實(shí)驗(yàn)劑量＝250mg/kg×6.9÷22=78.4mg/kg不同種類動物間用藥劑量換算表

（轉(zhuǎn)換因子計(jì)算法）某利尿中藥44（3）根據(jù)文獻(xiàn)估計(jì)劑量如有相關(guān)的藥物，相似的復(fù)方，其使用劑量可作為參考。（4）通過預(yù)試估計(jì)劑量（3）根據(jù)文獻(xiàn)估計(jì)劑量455．給藥容量：小鼠口服和腹腔注射：0.1-0.3ml/10g，皮下和靜脈注射通常0.1-0.2ml/10g，肌肉注射每條腿不宜超過0.1ml。大鼠口服：1.0-1.5ml/100g,腹腔注射通常0.5-1ml/100g,皮下和靜脈注射一般為0.3-0.5ml/100g。5．給藥容量：46藥物溶液配置例：戊巴比妥鈉對小鼠腹腔注射的有效麻醉劑量為40mg/kg。現(xiàn)有體重為20g左右的30只小鼠要麻醉。試問要稱量多少克的戊巴比妥鈉，設(shè)計(jì)的給藥容量為多少，配成怎樣濃度？藥物溶液配置例：戊巴比妥鈉對小鼠腹腔注射的有效麻醉劑量為4047藥物溶液配置答：稱量戊巴比妥鈉30mg，加生理鹽水至7.5ml,使?jié)舛葹?mg/ml,小鼠腹腔注射0.1ml/10g(即10ml/kg)?；颍悍Q量戊巴比妥鈉40mg，加生理鹽水至10ml,使?jié)舛葹?mg/ml,小鼠腹腔注射0.1ml/10g(即10ml/kg)。藥物溶液配置答：稱量戊巴比妥鈉30mg，加生理鹽水至7.5m48五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理

（一）原始數(shù)據(jù)記錄、整理（二）統(tǒng)計(jì)分析（三）討論分析五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理（一）原始數(shù)據(jù)記錄、整理49（一）原始數(shù)據(jù)記錄、處理P1921、原始記錄基本要求：真實(shí)，及時，直接，清楚，準(zhǔn)確，完整、防止隨意涂改、不易消除等。主要內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)名稱、研究目的、研究機(jī)構(gòu)名稱、實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)環(huán)境、方法、實(shí)驗(yàn)過程、結(jié)果及分析、實(shí)驗(yàn)人員、日期等。注意事項(xiàng)：（一）原始數(shù)據(jù)記錄、處理P192502、數(shù)據(jù)表達(dá)和精確度：一般應(yīng)至少有3位有效數(shù)字，標(biāo)準(zhǔn)差至少有2位有效數(shù)字，均數(shù)的小數(shù)位數(shù)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)差相同，出示的結(jié)果應(yīng)包括均數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)差，例數(shù)，P值情況（大于、小于0.05或具體P值）數(shù)字的精確度要與測量儀器所能達(dá)到的精確度一致。2、數(shù)據(jù)表達(dá)和精確度：513、極端數(shù)據(jù)的處理：盡量避免差錯形成極端數(shù)據(jù)。（1）對可疑數(shù)據(jù)及時復(fù)測或復(fù)核,及時糾正差錯。（2）對于無法復(fù)測，但是可以肯定是處于差錯，可以刪除。3、極端數(shù)據(jù)的處理：52（3）在一組屬于正態(tài)分布的數(shù)據(jù)中，超出（均數(shù)±3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差）之外的數(shù)據(jù)，可考慮舍棄。一組數(shù)據(jù)按正態(tài)分布時：

x±s內(nèi)的數(shù)據(jù)占68.27%x±1.96s內(nèi)的數(shù)據(jù)占95.0%x±2.58s內(nèi)的數(shù)據(jù)占99.0%（3）在一組屬于正態(tài)分布的數(shù)據(jù)中，超出（均數(shù)±3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差）53（二）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析（1）兩組間實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較常用t檢驗(yàn)（unpairedttest）。（2）多組間比較：方差分析（正態(tài)分布）（3）非正態(tài)分布：秩和檢驗(yàn)，序值法（4）樣本率比較：X2檢驗(yàn)

中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)課件54T值計(jì)算公式（通式）T值計(jì)算公式（通式）55EXCEL軟件T檢驗(yàn)過程：

選中fx→TTEST→顯示填寫框：Array1A1:A9Array2B1:B9Tails2Type

Array1

為第一個數(shù)據(jù)集。Array2

為第二個數(shù)據(jù)集。Tails

指示分布曲線的尾數(shù)。如果tails=1，函數(shù)TTEST使用單尾分布。如果tails=2，函數(shù)TTEST使用雙尾分布。EXCEL軟件T檢驗(yàn)過程：

選中fx→TTEST→56Type

為t檢驗(yàn)的類型。1：成對檢驗(yàn)2：等方差雙樣本檢驗(yàn)3：異方差雙樣本檢驗(yàn)Type

為t檢驗(yàn)的類型。57

（三）實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論分析

除了分析起是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，還應(yīng)從專業(yè)知識的角度分析是否有生物學(xué)意義。（三）實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論分析58

藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)

第二講中藥藥理研究的基本知識（2）第三節(jié)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)59主要內(nèi)容五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理一、基本原則二、實(shí)驗(yàn)對象

三、效應(yīng)指標(biāo)四、劑量設(shè)計(jì)主要內(nèi)容五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理一、基本原則二、實(shí)驗(yàn)對象三、效應(yīng)60一基本原則

對照原則隨機(jī)原則重復(fù)原則一基本原則

對照原則61（一）、對照原則常用的對照形式：（1）組間對照（2）自身對照（3）配對對照（一）、對照原則常用的對照形式：62（1）組間對照①正常對照組（空白對照、陰性對照、溶媒對照）；假手術(shù)對照組②模型對照組③陽性對照組陽性對照意義：①檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)體系是否可靠②粗略估計(jì)受試藥與對照藥相比，作用強(qiáng)度與特點(diǎn)上有哪些差異。

（1）組間對照63（2）自身對照

觀察同一個體給藥前、后的區(qū)別。被檢藥物和陽性藥在同一個體上的作用比較。（3）配對對照

差異最小的兩個個體配成一對，一個給予受試藥，一個給予對照藥。（2）自身對照64（二）、隨機(jī)原則

目的：（1）避免非研究因素影響。（2）除研究因素外，提高各比較組的其他因素的均衡性、可比性。（二）、隨機(jī)原則65隨機(jī)分組的方法：（1）抽簽隨機(jī)法：

例：30只小鼠，要求隨機(jī)分為3組：可先將30只小鼠按1至30編號，做1-30號簽，充分混合號簽后，隨機(jī)各取10枚為一組。

隨機(jī)分組的方法：66（2）隨機(jī)數(shù)字表法（或隨機(jī)排列表法）：

15只小鼠，要求隨機(jī)分為3組.在隨機(jī)數(shù)字表中確定某個數(shù)字開始，隨機(jī)選取數(shù)字方向，得到一組隨機(jī)數(shù)字，除以組數(shù)，得到余數(shù)，根據(jù)余數(shù)編組：（2）隨機(jī)數(shù)字表法（或隨機(jī)排列表法）：67順序號:A組：1，9，12，13，15B組:2，3，5，7，10，11C組：4，6，8，14按原隨機(jī)數(shù)字順序繼續(xù)抄一隨機(jī)號:08除以6余數(shù):2,將B組第二只，即3號小鼠編入C組。調(diào)整后各組的編號:A組：1，9，12，13，15B組：2，5，7，10，11C組:3，4，6，8，14

順序號:68練習(xí)：

20個小鼠，根據(jù)下例隨機(jī)數(shù)順序，將其隨機(jī)分成4組。取隨機(jī)數(shù)字表中隨機(jī)號：22176865816895239235870222575161094395065824820347練習(xí)：69鼠號：12345678910隨機(jī)號：22176865816895239235除以4余數(shù)：2101103303鼠號：11121314151617181920隨機(jī)號：87022257516109439506除以4余數(shù)：3221311332隨機(jī)號（備用）：5824820347鼠號：12345670根據(jù)余數(shù)分組鼠號：A組（余數(shù)1）：245141617B組（余數(shù)2）：1121320C組（余數(shù)3）：781011151819D組（余數(shù)0）：369隨機(jī)號（備用）：582482034758/6余數(shù)為4，即A組第4個動物（14號）編入B組。根據(jù)余數(shù)分組鼠號：71根據(jù)余數(shù)分組鼠號：A組：2451617B組：112132014C組：781011151819D組：369隨機(jī)號（備用）：582482034724/7余數(shù)為3，即C組第3個動物（10號）編入D組。根據(jù)余數(shù)分組鼠號：72根據(jù)余數(shù)分組鼠號：A組：2451617B組：112132014C組：7811151819D組：36910隨機(jī)號（備用）：582482034782/6余數(shù)為4，即C組第4個動物（15號）編入D組。根據(jù)余數(shù)分組鼠號：73調(diào)整后隨機(jī)分組的結(jié)果為（按動物號）：A組：2451617B組：112132014C組：78111819D組：3691015調(diào)整后隨機(jī)分組的結(jié)果為（按動物號）：74學(xué)生練習(xí)題一30個小鼠，根據(jù)下例隨機(jī)數(shù)順序，將其隨機(jī)分成5組。取隨機(jī)數(shù)字：3756081809775384464731911895582416741153101385576165616866274739198483700748學(xué)生練習(xí)題一30個小鼠，根據(jù)下例隨機(jī)數(shù)順序，將其隨機(jī)分成75（3）分層隨機(jī)先將需嚴(yán)格控制的主要因素，如性別、體重等分為不同類別，或?qū)哟?；在每一類別或?qū)哟沃蟹謩e隨機(jī)分成一定組。將每一類別或?qū)哟坞S機(jī)分成的組,組次相同的分別合并。（3）分層隨機(jī)先將需嚴(yán)格控制的主要因素，如性別、體重等分為不76（三）、重復(fù)原則目的：驗(yàn)證在類似的條件是否可獲得結(jié)果的重現(xiàn)以及結(jié)果的變異情況。要點(diǎn)：A.確定適當(dāng)?shù)臉颖緮?shù)。B.各組動物數(shù)目盡量相同。按動物類型確定樣本數(shù)：（1）小動物：計(jì)量≥10例;計(jì)數(shù)≥20-30例（2）中等動物：計(jì)量≥8例;計(jì)數(shù)≥20例（3）大動物：5-6≥例（三）、重復(fù)原則77二、實(shí)驗(yàn)對象

(一)、受試動物1、按要求選擇不同級別符合醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的動物一級：普通動物（亦稱常規(guī)動物或無疾病的動物）；二級：清潔動物（飼養(yǎng)在溫度恒定，普通設(shè)施中的動物，飼料、墊料，用具均經(jīng)過高壓消毒）；二、實(shí)驗(yàn)對象(一)、受試動物78三級：無特殊病原體動物（specific-pathogenfree,簡稱SPF動物）；在清潔級基礎(chǔ)上還需不帶干擾實(shí)驗(yàn)的微生物，在隔離室或?qū)恿魇绎曫B(yǎng)。四級：無菌動物（機(jī)體內(nèi)外均無任何寄生蟲的動物，一般是臨產(chǎn)前按無菌手術(shù)剖腹取出胎仔，在無菌條件下用無菌飼料繁養(yǎng)獲得的動物）。三級：無特殊病原體動物（specific-pathogen792、根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇敏感種系（不同種屬動物對藥物敏感性、藥物代謝動力學(xué)不同）原則:選擇對藥物的反應(yīng)與人體相近的種系。

熱源實(shí)驗(yàn)：家兔，對熱敏感性高。測定膽汁流量：大鼠，無膽囊，可以膽管插管。心血管系統(tǒng):大鼠、貓、犬等。嘔吐實(shí)驗(yàn)：鴿、貓或狗等。抗腫瘤實(shí)驗(yàn)：裸鼠，免疫功能缺陷。

過敏試驗(yàn)：豚鼠敏感。

2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇敏感種系80組織胺：可引起豚鼠哮喘的發(fā)生，但對家兔引起的是血管的收縮和右心室功能的衰竭。苯：家兔：白細(xì)胞減少及造血器官發(fā)育不全；犬：白細(xì)胞增多，脾臟和淋巴結(jié)增生。組織胺：可引起豚鼠哮喘的發(fā)生，但對家兔引起的是血管的收縮和右813、性別：根據(jù)要求選擇

用一種性別比兩種性別兼用所得結(jié)果離散度較小。通常優(yōu)選雄性或雌雄各半。

4、年齡體重

每批動物的體重，年齡越接近越好

通常：小鼠:18-22g，大鼠:200±25g，豚鼠:250-300g，兔、貓:1.5-2Kg,犬:10-15kg。大鼠、小鼠:6-8周齡

3、性別：根據(jù)要求選擇825、數(shù)量

計(jì)量研究：小鼠每組≥10只大鼠每組≥8只豚鼠或兔每組≥6只豬或犬≥5只計(jì)數(shù)研究：大、小鼠每組≥20-30只6、習(xí)性:

小鼠、大鼠均為群居動物，不宜單獨(dú)飼養(yǎng)。

5、數(shù)量6、習(xí)性:837實(shí)驗(yàn)條件控制

時辰：動物生理活動有其晝夜節(jié)律，如小鼠夜間活動增加，白天活動減少。最好每批實(shí)驗(yàn)在每天相同的時間測定。環(huán)境溫度：室溫穩(wěn)定、適宜。飲食：有些實(shí)驗(yàn)需對動物禁食。適應(yīng)：3－7天。7實(shí)驗(yàn)條件控制時辰：動物生理活動有其晝夜節(jié)律，如小鼠夜間84（二）受試藥

1.制備情況（1）新藥受試藥要求：用處方固定，質(zhì)量穩(wěn)定、工藝、質(zhì)控指標(biāo)恒定后的中試產(chǎn)品。（2）一般受試中藥：生藥經(jīng)鑒定，科屬種清楚；提取制備工藝明確，含量確定。（3）單體：化學(xué)結(jié)構(gòu)式清楚。（4）在注射給藥或離體試驗(yàn)時應(yīng)注意藥物中雜質(zhì)、不溶物質(zhì)、無機(jī)離子及酸堿度等因素對實(shí)驗(yàn)的干擾。（二）受試藥1.制備情況852、給藥途徑

實(shí)驗(yàn)的給藥途徑與臨床擬使用的途徑一致。

中藥粗制劑一般不用注射給藥或體外實(shí)驗(yàn)的方法檢測藥物效應(yīng)。2、給藥途徑實(shí)驗(yàn)的給藥途徑與臨床擬使用的途徑一致。863、給藥時間及次數(shù)最好每日固定同一個時間給藥。急性實(shí)驗(yàn)通常也需連續(xù)給藥3-5天以上。預(yù)防性給藥：治療給藥：3、給藥時間及次數(shù)最好每日固定同一個時間給藥。874對照藥

①合法性：《中國藥典》收載或符合部頒標(biāo)準(zhǔn)，或新批準(zhǔn)合法生產(chǎn)的藥物。②可比性：其功用、主治、劑型（給藥途徑）與受試藥相似。特殊情況下，在合理范圍內(nèi)可適當(dāng)靈活掌握。③擇優(yōu)選用：有多種同類藥可供選用時，應(yīng)擇優(yōu)選用公認(rèn)療效較好的藥物。4對照藥①合法性：《中國藥典》收載或符合部頒標(biāo)準(zhǔn)，88三、效應(yīng)指標(biāo)

觀測指標(biāo)應(yīng)選用特異性強(qiáng)、敏感性高、重現(xiàn)性好，客觀、定量或半定量的指標(biāo)進(jìn)行觀測。

三、效應(yīng)指標(biāo)

觀測指標(biāo)應(yīng)選用特異性強(qiáng)、敏感性高、89四、劑量設(shè)計(jì)劑量的表示方法：g/kg,mg/kg,ml/kg,（中藥）g生藥/kg例如：1、取50g遠(yuǎn)志，水提濃縮后為50ml。灌胃給予小鼠，給藥容量為0.2ml/10g體重，計(jì)算遠(yuǎn)志的給藥劑量。2、100%大黃水煎液，灌胃給予大鼠，給藥容量1ml/100g體重，計(jì)算大黃的給藥劑量。四、劑量設(shè)計(jì)劑量的表示方法：g/kg,mg/kg,ml/90劑量組數(shù)：新藥研究至少設(shè)3個劑量組。三者最好成等比，能反應(yīng)量效關(guān)系。給藥容量相等，濃度不等。

合理選擇劑量：（1）參考LD50：在LD50的1/10、1/20、1/40等范圍內(nèi)設(shè)置高、中、低劑量組。（2）根據(jù)臨床用藥等效量計(jì)算

劑量組數(shù)：新藥研究至少設(shè)3個劑量組。91不同種類動物等效用藥量的計(jì)算p191

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠400g兔1.5kg貓2.0kg猴4.0kg狗12.0kg人70.0kg小白鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9大白鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0豚鼠400g0.080.571.02.252.45.210.231.5兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2貓2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1人70.0kg0.00250.0180.0310.070.0780.160.321.0不同種類動物等效用藥量的計(jì)算p191

小白鼠20g大白鼠2092應(yīng)用舉例：①某復(fù)方的總藥量是70g/劑，每天1劑。按實(shí)驗(yàn)動物與人用藥量折算表計(jì)算，200g重大鼠等效量是多少？答：200g重大鼠等效量為：70g×0.018=1.26g/只

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠400g兔1.5kg貓2.0kg猴4.0kg狗12.0kg人70.0kg小白鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9大白鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0豚鼠400g0.080.571.02.252.45.210.231.5兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2貓2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1人70.0kg0.00250.0180.0310.070.0780.160.321.0應(yīng)用舉例：①某復(fù)方的總藥量是70g/劑，每天1劑。按實(shí)驗(yàn)動物93人的每公斤體重給藥量為：70g÷70=1g/kg。大鼠每公斤的給藥量是：1.26g×1000/200=6.3g/kg按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，大鼠的劑量應(yīng)為人用劑量的6.3g/kg÷1g/kg=6.3（倍）。

人的每公斤體重給藥量為：70g÷70=1g/kg。94不同種類動物等效用藥量的計(jì)算

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠400g兔1.5kg貓2.0kg猴4.0kg狗12.0kg人70.0kg小白鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9大白鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0豚鼠400g0.080.571.02.252.45.210.231.5兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2貓2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1人70.0kg0.00250.0180.0310.070.0780.160.321.0不同種類動物等效用藥量的計(jì)算

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠95②如同一復(fù)方要用小鼠實(shí)驗(yàn)，小鼠每只的給藥量為：70×0.0025＝0.175g/只；0.175÷20/1000=8.75g/kg；按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，小鼠的劑量應(yīng)為人用劑量的8.75g/kg÷1g/kg=8.75（倍）。②如同一復(fù)方要用小鼠實(shí)驗(yàn)，小鼠每只的給藥量為：96③豚鼠應(yīng)用量為70×0.031=2.17g/只；2.17÷400/1000=5.425g/kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，豚鼠的劑量為人用量的5.425÷1＝5.425（倍）。③豚鼠應(yīng)用量為70×0.031=2.17g/只；97④兔：70×0.07＝4.9g/只；4.9÷1.5＝3.27g/kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，兔的劑量應(yīng)為人用量的3.27÷1＝3.27（倍）。④兔：70×0.07＝4.9g/只；98⑤狗用量為70g×0.32＝22.4g/只；22.4÷12=1.87g/kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，狗的給藥量應(yīng)為人的1.87÷1＝1.87（倍）⑤狗用量為70g×0.32＝22.4g/只；22.4÷12=99中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)課件100中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)課件101不同種類動物間用藥劑量換算表

（轉(zhuǎn)換因子計(jì)算法）某利尿中藥,250g重大鼠的有效量為250mg/kg，試計(jì)算15kg犬的等效實(shí)驗(yàn)劑量？犬的等效實(shí)驗(yàn)劑量＝250mg/kg×6